WP1130通过下调β-catenin增强鼻咽癌细胞化疗敏感性

摘 要：［目的］探讨WP1130与顺铂联合用药对鼻咽癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。［方法］ CCK-8法检测鼻咽癌顺铂敏感细胞系HNE1和顺铂耐药细胞系HNE1/DDP的顺铂药物半抑制浓度（IC50）,以及不同浓度WP1130对鼻咽癌细胞活力的影响;选取适当药物浓度处理细胞,两种鼻咽癌细胞系分别分为4组：空白对照组（DMSO）、DDP单药组（6 ?滋mol/L顺铂）、WP1130单药组（1.25 ?滋mol/L WP1130）以及DDP+WP1130联合用药组（6 ?滋mol/L顺铂+1.25 ?滋mol/L WP1130）。MTT法检测鼻咽癌细胞增殖能力;细胞划痕实验检测鼻咽癌细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测鼻咽癌细胞侵袭能力;RT-PCR和Western blot实验检测顺铂耐药HNE1/DDP与亲本HNE1鼻咽癌细胞中β-catenin的表达情况以及不同药物处理对β-catenin的表达的影响。［结果］ 耐药HNE1/DDP细胞比亲本HNE1细胞对顺铂的耐受性提高了近5.7倍（5.17±0.33 vs 29.44±2.62,P＜0.01）。β-catenin在HNE1/DDP细胞中的mRNA表达上调约3.4倍（1.00±0.26 vs 3.44±0.39,P＜0.01）。与空白对照组和单药组相比,顺铂+WP1130联合用药组细胞中β-catenin的表达显著下调（HNE1：1.00±0.06 vs 0.78±0.07 vs 0.32±0.05,P＜0.05;HNE1/DDP：1.01±0.05 vs 0.57±0.07 vs 0.39±0.07,P＜0.05）,顺铂+WP1130联合用药组细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降（P均＜0.01）。［结论］ WP1130与顺铂联合用药可以通过下调β-catenin的表达增强顺铂对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,从而增强鼻咽癌细胞的化疗敏感性。     

Circ_0001946靶向miR-671-5p调控Wnt/β-catenin通路对结直肠癌细胞恶性进展的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001946对结直肠癌细胞恶性进展的影响。［方法］培养结直肠癌HCT116、SW480、Colo320、HT29细胞和正常结直肠CCC-HIE-2细胞,实时定量PCR检测circ_0001946、miR-671-5p表达量。miRcode和双荧光素酶报告实验分析circ_0001946和miR-671-5p的关系。circ_0001946、miR-671-5p在HCT116细胞中的表达量被上调或下调后,分别检测HCT116细胞生长活性、细胞凋亡率及细胞迁移能力。免疫蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。［结果］ HCT116（4.76±0.47）、HT29（2.85±0.57）、SW480（2.75±0.62）、Colo320（3.12±0.68）细胞中circ_0001946表达水平高于CCC-HIE-2细胞（1.24±0.09）（t=7.238、8.129、6.893、6.875,P均<0.05）。下调circ_0001946表达显著降低了HCT116细胞增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.05）,促进了细胞凋亡（P<0.01）; circ_0001946靶向miR-671-5p; circ_0001946表达被上调或miR-671-5p表达被下调后,HCT116细胞增殖和迁移能力显著上升,细胞凋亡率明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被激活。［结论］ circ_0001946靶向miR-671-5p激活了Wnt/β-catenin信号通路,促进了结直肠癌细胞恶性进展。     

MiR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探究miR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］利用qRT-PCR 验证在耐药和敏感结直肠癌蜡块组织中miR-885的相对表达量;运用质粒转染方法沉默结直肠癌细胞系HCT116中miR-885基因,按照miR-885表达水平分为2组：miR-NC和miR-885 inhibitor组,并且利用qRT-PCR验证转染效率。将细胞分成4组,分别是阴性对照组(NC)、阴性对照加奥沙利铂组（L-OHP）、miR-NC加奥沙利铂组（L-OHP/miR-NC）和miR-885 inhibitor加奥沙利铂组（L-OHP/miR-885 inhibitor）。利用CCK-8法检测HCT116细胞活性;Transwell检测HCT116细胞的侵袭能力;流式细胞术检测HCT116细胞的细胞周期。［结果］ 相比于癌旁正常组织（1.31±0.36）,耐药组织（2.75±0.82）中miR-885的表达量增加,而敏感组织（0.31±0.14）中miR-885的表达量降低。在miR-885组中miR-885表达水平（0.02±0.01）相对于miR-NC组（0.80±0.19）呈显著降低(P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（0.77±0.14）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（0.48±0.23）细胞活性降低（P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（169±25）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（28±9）细胞的侵袭数量减少（P<0.05）。与NC组G0/G1期（42.27±3.33）相比,L-OHP组（3.33±0.41）细胞比例降低（P<0.001）,与NC组S期（32.19±2.29）相比,L-OHP组（53.29±3.04）细胞比例增多(P<0.05),与NC组（16.32±2.29）G2/M期相比,L-OHP组（4.83±0.76）细胞比例减少(P<0.05)。同时,与L-OHP/miR-NC组（5.07±0.31）G0/G1期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（45.59±1.95）细胞比例增加（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组（42.71±2.58）S期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（12.72±1.60）细胞比例降低（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组(18.19±1.30)G2/M期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（2.55±0.51）细胞比例减少（P<0.01）。［结论］ 沉默miR-885能够增强结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂化疗敏感性,miR-885可能成为结直肠癌治疗的新靶点。     

TBL1XR1介导上皮-间质转化和干细胞特性调控头颈部鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

摘 要：［目的］ 阐明转导素β1X连锁受体蛋白1（transducin β-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1）可介导上皮-间质转化和干细胞特性,从而调控头颈鳞癌细胞的迁移、侵袭。［方法］ 利用UALCAN数据库网站搜索TBL1XR1在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,应用Cbioprotal 在线分析平台分析癌症基因组图集（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中523例头颈鳞癌RNA-SEQ 数据。将慢病毒介导的TBL1XR1过表达载体、沉默载体和对应空白载体分别转染头颈鳞癌细胞Tu686。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验评价Tu686细胞的迁移、侵袭能力;Western blot、qRT-PCR检测上皮-间质转化标志物表达;肿瘤球形成实验、qRT-PCR检测干细胞特性;抑制Wnt/β-catenin信号通路后检测TBL1XR1过表达引起的细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和干细胞特性。［结果］ TBL1XR1 mRNA 在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织（P<0.001）。过表达TBL1XR1的Tu686细胞划痕愈合能力（90%±4% vs 53%±6%）、Transwell迁移（0.68±0.04 vs 0.32±0.03）、侵袭能力（0.59±0.04 vs 0.26±0.04）较对照组显著性增强（P 均<0.05）。TBL1XR1表达被抑制时,细胞划痕愈合能力（70%±4% vs 96%±5%）、Transwell迁移（0.32±0.06 vs 0.63±0.08）、侵袭能力（0.24±0.04 vs 0.52±0.05）较对照组显著性降低（P均<0.05）。TBL1XR1过表达后,Tu686细胞的间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达降低;肿瘤球形成数较对照组明显增多（41±9 vs 13±4,P<0.05）,肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD44、CD133表达上调。抑制Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转TBL1XR1过表达引起的迁移、侵袭、上皮-间质转化及干细胞特性改变。［结论］ TBL1XR1可在体外介导上皮-间质转化和干细胞特性,进而促进头颈鳞癌细胞迁移、侵袭,其调控机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

MiR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］ 通过qRT-PCR 验证奥沙利铂耐药和敏感结直肠癌组织蜡块中miR-655的相对表达量;CCK-8法检测细胞活性;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期。［结果］ 相比于癌旁的正常组织,对奥沙利铂耐药的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较低（1.24±0.28 vs 0.25±0.12,P<0.01）,而对奥沙利铂敏感的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较高（1.24±0.28 vs 2.68±0.76,P<0.01）。QRT-PCR鉴定miR-655转染效率结果显示,在miR-655 mimics组中miR-655表达水平相对于miR-NC组显著升高（1.70±0.10 vs 0.83±0.07,P=0.004）。CCK-8检测细胞活性结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞活性降低（48h：0.79±0.05 vs 0.56±0.03,P=0.0015;72h：0.65±0.05 vs 0.25±0.05,P=0.0081）。Transwell法检测细胞的侵袭能力结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimic组细胞侵袭数量减少（845±85 vs 613±36,P=0.0292）。流式细胞术检测细胞周期结果显示,与L-OHP/miR-NC组G0/G1期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例增加（5.16±0.22 vs 45.53±0.75,P=0.022）,与L-OHP/miR-NC组S期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例降低（44.83±1.17 vs 20.75±0.36,P=0.015）,与L-OHP/miR-NC组G2/M期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例减少(22.86±1.21 vs 3.85±0.35,P=0.0023）。［结论］MiR-655能够提高结直肠癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,miR-655可能成为联同奥沙利铂治疗结直肠癌的新靶点。     

RNASE4异常表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及机制研究

摘 要：［目的］ 阐明RNASE4在胶质瘤细胞迁移和侵袭中的潜在作用及机制。［方法］ 利用实时定量PCR（qPCR）检测RNASE4在正常胶质细胞和胶质瘤细胞系中的表达水平。将胶质瘤U87细胞分为对照组、siRNA-NC组和siRNA-RNASE4组。在体外细胞中瞬时转染siRNA-RNASE4，利用CCK-8法检测胶质瘤细胞U87增殖率。采用伤口愈合实验和Transwell小室实验检测U87细胞的侵袭和迁移能力。通过定量PCR和Western blot实验检测各组细胞中相关因子的表达。［结果］ RNASE4在胶质瘤细胞系T98（1.34±0.06，P<0.01）、A172（1.79±0.10，P<0.01）、U251（1.86±0.09，P<0.01）、U118（2.19±0.17，P<0.01）和U87（2.64±0.17，P<0.01）中较NHAs细胞系均异常高表达（1.00±0.05）。在胶质瘤细胞U87中下调RNASE4表达引起细胞增殖活力下降（48h，P<0.05；72h，P<0.01）。同时，siRNA-RNASE4组U87细胞的划痕愈合能力（46.0±4.6 vs 87.2±3.6，P<0.01）以及细胞侵袭能力（72.5±4.7 vs 147.8±16.8，P<0.01）均明显降低。下调RNASE4表达抑制了BCL2、MMP9基因表达，并促进各组细胞中E-cadherin表达（P<0.01）。［结论］ RNASE4能够通过调节BCL2、MMP9等因子的表达来调节胶质瘤细胞的增殖与迁移能力，发挥促癌因子的作用。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

替莫唑胺缓释微球局部植入治疗大鼠脑胶质瘤的疗效

目的：研究替莫唑胺缓释微球（temozolomide/PLGA microsphere, TMMS）局部植入对大鼠C6胶质瘤的治疗效果。方法：将C6大鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑左侧尾状核,制备大鼠脑胶质瘤模型。分别用替莫唑胺（temozolomide, TM）口服及TMMS肿瘤局部植入治疗,观察大鼠的一般情况、生存期、肿瘤体积大小、病理学变化;免疫组织化学染色检测胶质瘤组织中增殖细胞核抗原（proliferadion cell nuclear antigen, PCNA）蛋白的表达;TUNEL法检测胶质瘤组织细胞的凋亡。结果：TMMS治疗大鼠的生存期较假手术组、空载体组、替莫唑胺口服组明显延长\[（31.2±6.21）d vs （20.7±4.83）、（19.2±6.23）、（24.7±6.31）d;P<0.05或P<0.01\]。MRI检查显示经TMMS治疗后脑内瘤灶体积较假手术组、空载体组、替莫唑胺口服组明显缩小\[（28.8±6.41）mm3 vs （56.4±6.92）、（58.2±5.36）、（46.7±7.28）mm3;P<0.05或P<0.01\];TMMS治疗后肿瘤细胞PCNA表达率较假手术组、空载体组、替莫唑胺口服组显著降低\[（20.2±4.33）% vs （63.2±5.91）%、（62.1±7.88）%、（41.7±6.71）%;P<001\],细胞凋亡率也明显增高\[（32.31±317）% vs （8.63±1.52）%、（9.25±2.31）%、（16.14±3.42）%;P<0.01\]。结论：TMMS局部植入治疗大鼠脑胶质瘤能显著抑制脑胶质瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、延长大鼠生存期,具有潜在的临床应用价值。     

MicroRNA-326在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨microRNA-326（miR-326）在脑胶质瘤中的表达及其临床意义。［方法］ 用qRT-PCR检测福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的89例胶质瘤和20例正常脑组织病理标本。应用SPSS16.0分析miR-326的表达水平与临床病理学特征之间的相关性。［结果］ 脑胶质瘤（3.824±1.7011）和正常脑组织（6.135±1.2897）中miR-326的表达水平有显著性差异（P＜0.001）。miR-326的表达与肿瘤直径（P=0.029）、WHO分级（P<0.001）和KPS评分密切相关（P<0.001）;与患者的年龄（P=0.518）和性别（P=0.501）无显著性相关。MiR-326低表达与胶质瘤患者的生存率降低密切相关（P＜0.001）。胶质瘤的WHO分级增高、肿瘤直径＞3cm、KPS评分<80分及miR-326低表达均是影响胶质瘤患者预后的危险因素（P<0.05）。［结论］ miR-326在胶质瘤组织中呈低表达,其可能可成为预测胶质瘤发生发展及预后的生物标志物。     

miR-218-5p靶向N-cadherin调节胃癌细胞迁移、侵袭分析

摘 要：［目的］ 研究miR-218-5p靶向N-钙黏蛋白（N-cadherin）调节胃癌细胞迁移、侵袭的作用及机制。［方法］ 收集28例胃癌组织及癌旁组织,检测miR-218-5p及N-cadherin的表达水平;培养MNK45胃癌细胞,分为转染阴性对照（NC）mimic的NC组和转染miR-218-5p mimic的miR-218-5p组,检测细胞的迁移及侵袭数目、N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力。［结果］胃癌组织中miR-218-5p的表达水平（0.45±0.09）显著低于癌旁组织的（0.71±0.22）（P<0.05）,N-cadherin的表达水平（0.93±0.20）显著高于癌旁组织的（0.67±0.14）（P<0.05）,且miR-218-5p的表达水平与N-cadherin的表达水平呈负相关（r=-0.201,P<0.05）。miR-218-5p组MNK45胃癌细胞的迁移数目（65.57±11.49）及侵袭数目（67.11±10.34）均少于NC组（113.84±20.13,98.72±18.57;P均<0.05）,N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、野生型N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力低于NC组（P<0.05）。［结论］ miR-218-5p在胃癌中低表达,过表达miR-218-5p能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,靶向抑制N-cadherin是可能的分子机制。     

长链非编码RNA UCA1 靶向调控miR-185-5p 对非小细胞肺癌A549 细胞的作用及其机制

[摘要] 目的：探究长链非编码RNA（ long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1 ( urothelial carcinoma associated 1,UCA1) 调控非小细胞肺癌(NSCLC) A549 细胞增值、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：NSCLC A549 细胞培养及慢病毒转染完成后,RT-PCR检测A549 细胞UCA1 表达水平,荧光素酶实验验证UCA1 和miR-185-5p 的靶向关系,MTT检测A549 细胞活性,Transwell 和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测Wnt1/β-catenin 信号通路蛋白的表达。结果：sh-UCA1 能显著抑制UCA1 表达并促进miR-185-5p 表达(均P<0.05),miR-185 inhibitor 可减弱sh-UCA1 对miR-185-5p 表达的促进作用(P<0.05),UCA1 能明显抑制miR-185-5p 表达(P<0.05),miR-185 mimic 可减弱UCA1 对miR-185-5p 表达的抑制作用(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明UCA1 序列上有miR-185-5p 的结合位点。sh-UCA1 能显著抑制A549 细胞增殖、侵袭和迁移(均P<0.05),并能降低信号通路蛋白Wnt1、β-catenin 信号和TCF-4 表达水平(均P<0.05);miR-185 inhibitor 能显著减弱sh-UCA1 对A549 细胞的增殖、侵袭、迁移及对Wnt1/β-catenin 通路蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论：UCA1 可通过靶向miR-185-5p 促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与Wnt1/β-catenin信号通路激活有关。     

miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的： 探讨miRNA-210（miR-210）在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： 收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。 结果： miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞（P<0.01）。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为（88.29±2.98）%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱（P<0.05）,被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多\[（64.23±3.12）% vs （55.53±0.96）%,P<0.01\],凋亡细胞比例也显著增加\[（31.90±3.05）% vs （15.98±0.63）%,P<0.01\],细胞的迁移\[（291.00±43.12） vs （1137.38±83.49）个,P<001\]、侵袭\[（131.63±32.01） vs （647.88±31.20）个,P<0.01\]均受到明显抑制。 结论： miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。     

过表达RFX1 对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨过表达调节因子X1 基因（regulatory factor X1,RFX1）对神经胶质瘤细胞株F98 细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法：用慢病毒转染法将RFX1 转染到F98 细胞,构建过表达RFX1 的F98 细胞株（F98-RFX1 组）,同时设立空质粒对照组（F98-Vector 组）和正常培养组（F98 组）。用计数法观察过表达RFX1 对各组F98 细胞增殖的影响,用AnnexinV/PI 染色法流式细胞术检测过表达RFX1 对F98 细胞凋亡的影响,用Transwell 小室法检测过表达RFX1 对F98 细胞侵袭能力的影响。结果：成功建立过表达RFX1 胶质瘤F98 细胞株。过表达RFX1 组胶质瘤F98 细胞的增殖能力显著低于F98 组[48 h: （12.08±2.17）×104/ml vs（23.67±4.51）×104/ml,P<0.05]和F98-Vector 组[96 h: （8.17±0.31）×104/ml vs（18.58±1.18）×104/ml;P<0.05];过表达RFX1 组细胞的凋亡水平明显上升[ （21.89±2.33）% vs（3.38±1.39）%、（10.42±1.83）%,P<0.05];过表达RFX1 组细胞侵袭能力显著下降[ （33.3±7.99）vs（56.5±13.9）、（60.6±11.8）个,P<0.01]。结论：RFX1 可以调控增殖和侵袭相关基因的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力、促进细胞凋亡。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

miR-423-5p调控PDCD5表达增强神经胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性

目的：探讨miR-423-5p在人脑神经胶质瘤组织和细胞中的表达及其调控程序性细胞死亡蛋白5（programmed cell death protein 5,PDCD5）增强胶质瘤细胞对替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的耐药性。方法：收集2017年1月至2018年12月北 华大学附属医院神经外科手术切除的20例脑神经胶质瘤患者的瘤及瘤旁组织标本,以及胶质瘤细胞系U251、 U87、SHG-44和人 脑小胶质细胞株HMC-3, 用qPCR法检测胶质瘤组织及细胞系中miR-423-5p和PDCD5的表达水平。用合成的miR-423-5p mimics 和miR-NC分别转染U251和U87细胞,同时用不同浓度（50、100、150和200 μmol/L）的TMZ处理细胞,检测转染细胞对TMZ的 耐药性,用MTT法、克隆形成实验检测转染细胞的增殖活力,用Western blotting检测U251、 U87细胞中c-caspase 3、Bcl-2和 PDCD5蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证 miR-423-5p 与 PDCD5 的靶向关系。结果：miR-423-5p 在脑神经胶质 瘤组织和胶质瘤细胞系中均高表达（均P<0.01）。与miR-NC组比较,miR-423-5p mimics组U251和U87细胞的增殖能力明显增 强（均P<0.01）, 对TMZ的耐药性增强。双荧光素酶报告基因实验证实miR-423-5p可与PDCD5 3'' UTR结合,抑制PDCD5的表 达。结论：miR-423-5p高表达增强胶质瘤细胞对TMZ的耐药能力,其可作为临床胶质瘤治疗的潜在新靶点。     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。     

Gab2基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘 要：［目的］ 探讨Gab2结合蛋白2（Gab2）基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。［方法］ 以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中Gab2的蛋白表达;转染48h后Western bloting检测Gab2、Cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1（cyclin D1）、c-myc蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。［结果］ 与MRC5细胞比较,Gab2在肺癌细胞中的表达显著性升高（P<0.05）。与对照组比较,Gab2-siRNA组Gab2 的蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,Cleaved caspase3和Bax蛋白上调表达,Bcl-2、β-catenin、cyclin D1、c-myc蛋白表下调表达,差异均具有统计学意义（P<0.05）。［结论］ 抑制肺癌细胞Gab2表达能诱导细胞凋亡,机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

宫颈癌组织中YB-1、miR-29a、Nek2的表达与细胞增殖、侵袭基因的相关性

摘 要：［目的］ 评价宫颈癌组织中YB-1、miR-29a、Nek2表达与细胞增殖、侵袭基因的相关性。［方法］ 选取2017年1月至2018年1月我院收治的宫颈癌患者60例,取宫颈癌患者手术切除癌组织及癌旁组织标本,检测癌组织、癌旁组织中YB-1、miR-29a、Nek2、细胞增殖基因和细胞侵袭基因表达情况。［结果］ 癌组织中YB-1 mRNA、Nek2 mRNA表达量为（1.52±0.36、1.96±0.35）高于癌旁组织（1.00±0.10、1.00±0.13）,miR-29a mRNA表达量为（0.98±0.10）低于癌旁组织（1.06±0.23）（P均<0.05）。癌组织细胞增殖基因YAP1 mRNA、Piwil2 mRNA、EZH2 mRNA、PKCε mRNA表达量高于癌旁组织（P均<0.05）。癌组织细胞侵袭基因Rab11 mRNA、TUG1 mRNA、Gli1 mRNA、FoxM1 mRNA表达量高于癌旁组织（P均<0.05）。［结论］ YB-1、Nek2在宫颈癌组织中高表达,miR-29a在宫颈癌组织中低表达,且与癌细胞增殖、侵袭基因相关,其表达异常可促进细胞增殖、侵袭。