"双导"神经支架介导海马神经元的研究

目的：研究聚吡咯/丝素蛋白双导神经支架与海马神经元细胞的生物相容性及其对细胞生长和突起延长的影响。方法：通过取向性静电纺丝和3D生物打印方法,制备具有导电性导向性的聚吡咯/丝蛋白双导神经支架,与海马神经元共培养。采用CCK8活性检测支架材料对海马神经元的细胞毒性,光学显微镜观察海马神经元细胞在支架材料上的粘附、生长状态,免疫组化观察突起延伸以及神经元突起长度。结果：双导神经支架材料对海马神经元无细胞毒性,海马神经元细胞在支架材料上的粘附性和细胞活力较强,总体沿着纤维方向生长,排列呈现线性,平均突起长度194μm。结论：双导神经支架与海马神经元细胞有良好的相容性,有利于神经元细胞的粘附生长和突起伸长,为双导神经支架材料用于中枢神经系统损伤治疗提供科学依据。     

聚己内酯静电纺丝纳米纤维基复合材料在口腔医学中的应用研究进展

静电纺丝可制备出模拟细胞外基质的生物支架材料，以聚己内酯（poly-caprolactone，PCL）作为静电纺丝原料可获得良好的生物相容性，而将PCL电纺纳米纤维与无机材料组合，可以改善支架材料亲水性和机械性能，调控降解性能，增强生物矿化能力，具有良好的应用前景。文章对PCL静电纺丝纳米纤维基复合材料在口腔医学中的应用进行综述。     

聚己内酯/纳米羟基磷灰石静电纺纤维膜的制备及其生物活性

目的 检测静电纺丝技术制备的聚己内酯/纳米羟基磷灰石复合支架材料的理化表征、生物学性能及成骨活性。方法 通过静电纺丝技术制备聚己内酯/纳米羟基磷灰石复合材料,测量其理化表征。以MC3T3-E1细胞为模型初步评估复合材料的细胞相容性与成骨活性,为骨组织再生提供实验依据。结果 聚己内酯/纳米羟基磷灰石静电纺丝是一种无序三维交错网状结构,具有较小的拉伸强度及良好的润湿性。在聚己内酯/纳米羟基磷灰石复合纤维材料表面MC3T3-E1细胞生长良好,有伪足伸出,促进碱性磷酸酶及Runx2基因的表达。结论 聚己内酯/纳米羟基磷灰石静电纺纤维膜具有良好的理化表征、生物学性能与成骨特性,是一种潜在可用于种植骨再生的材料。     

钛合金支架——明胶复合载药体系的制备及其抗菌性研究

目的：探究提高钛合金骨植入材料的抗菌性及生物相容性的有效方法。方法：本文以3D打印的多孔钛合金为支架，将负载有庆大霉素的明胶填充于其中以制备复合骨植入材料；通过红外吸收光谱、水溶性及体外药物释放测试评价不同载药量对明胶稳定性的影响；利用细菌黏附、细菌活性以及抑菌圈实验分析该复合材料的抗菌性能；采用细胞活性实验评价该材料的生物相容性。结果：不同载药量下明胶的耐水性均达到6 d，药物释放效应可维持到明胶完全溶解；载药量的提升能更有效地抑制大肠杆菌（E. coli）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）的生长，在载药量为8 mg/mL的情况下，两种细菌的抑菌圈最大；细胞毒性分析发现不同载药量对成骨细胞的活性无显著影响（P>0.05）。结论：此复合骨植入体材料具有良好的体外抑菌性能及生物相容性。     

电纺PLLA/PVP纳米纤维膜材料用于血管组织工程的前期研究

目的:研究静电纺丝在血管组织工程中的应用。方法:利用静电纺丝技术制备不同质量分数的聚乳酸(PLLA)/聚乙烯吡咯烷酮(PVP)电纺丝膜,并通过差示扫描量热分析(DSC)、扫描电子显微镜(SEM)观察、接触角测试(CA)和力学性能分析进行材料学表征。在不同的电纺丝膜上种植血管平滑肌细胞(VSMCs),并分别在2、4、6 d取样进行SEM、激光共聚焦显微镜(LCMS)观察,以检测VSMCs在材料上铺展的形貌和分布情况。经MTT测试,以了解材料对VSMCs增殖的影响,用血小板黏附实验测试材料的血液相容性。结果:混入PVP的PLLA电纺丝膜具有良好的表面结构,亲水性显著提高,且随着PVP含量的增多PLLA电纺丝膜的亲水性增高,但对力学性能影响不明显。细胞实验结果表明:混有PVP的PLLA电纺丝膜利于VSMCs的黏附生长,具有良好的细胞相容性和血液相容性。结论:成功地将PVP和PLLA进行了静电纺丝,该材料具有良好的细胞相容性和血液相容性,其在血管组织工程应用中具有广阔的前景。     

PLGA新型纳米支架的制备及其生物相容性

目的探讨和比较应用不同参数静电纺丝技术制备复合型聚乳酸-羟基乙酸[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]纳米纤维缓释膜片的可行性,检测其表面特性以及生物相容性。方法使用不同参数制备纳米纤维膜,扫描电镜观察膜片表面形态;人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPLDCs)培养及鉴定后接种于空白膜上,扫描电镜观察细胞与膜的附着情况,以MTT[3-(4,5-dimethylthiaozol-2-yl)-2,5-dip henyltetrazolium bromide]实验检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖变化情况的影响。结果随着PLGA流量增加,纳米纤维直径增加;细胞与PLGA膜复合后粘附良好且增殖状态无明显变化;不同浓度材料浸提液对牙周膜细胞增殖的影响无明显差异。结论通过不同参数静电纺丝制备的新型纳米纤维膜具有良好的生物相容性,可进一步作为多种药物及细胞因子载体构建缓释型支架,从而用于引导性牙周组织再生(guided tissue regeneration,GTR)或者牙周组织工程。     

PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜在大鼠体内降解的实验研究*

目的：对一种新型聚乳酸-羟基乙酸(polylactic acid-glycolic acid, PLGA)/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的细胞毒性和体内降解进行初步探讨,为应用于引导骨组织再生(guide bone regeneration, GBR)提供实验依据。方法：以PLGA和医用级鱼皮Ⅰ型胶原为原材料,通过共轭静电纺丝技术制备出高取向性的纳米纤维膜,然后分别检测细胞毒性和大鼠体内的降解过程,初步评价组织学形态与体内降解率。结果：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的细胞毒性为1级,符合植入性医用材料的标准。成纤维细胞黏附生长良好,且不能穿过纤维膜生长到膜的对侧。结论：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜可用作GBR的屏障膜。     

电纺壳聚糖与聚乙烯醇纤维膜的生物相容性研究

目的：制备壳聚糖与聚乙烯醇纤维膜并研究其体外的生物相容性,为应用于临床提供一定的理论依据。方法利用静电纺丝技术制备壳聚糖与聚乙烯醇纤维膜,通过扫描电子显微镜对其超微结构进行表征,采用溶血实验和细胞毒性实验评价其体外生物相容性。结果通过电纺制备的壳聚糖与聚乙烯醇纤维膜,质地均匀,伴有少量的珠状结构,纤维直径在60~300 nm之间,溶血实验显示溶血率为2.80%,无溶血作用,细胞毒性实验中,纤维膜的细胞增殖度为89.96%,细胞毒性为1级,评分合格,无细胞毒性。结论通过静电纺丝法可成功制备壳聚糖与聚乙烯醇纤维膜,生物相容性较好,有望应用于口腔临床中。     

聚乳酸乙醇酸共聚物与纳米羟基磷灰石共混制备组织工程纤维环支架的实验研究

目的探讨以聚乳酸乙醇酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)与纳米羟基磷灰石(hydroxyapa-tite,HA)为原料,利用静电纺丝的技术制备出的三维多孔支架构建组织工程纤维环的可行性。方法将PLGA与HA溶解于丙酮中,配制20%(w/v)的溶液,磁力搅拌均匀后,进行静电纺丝,制备三维多孔支架。支架通过扫描电镜和磷酸盐缓冲液降解(phosphate buffered saline,PBS)的方式,观察支架的形貌和降解性能;利用CCK-8和伊红染色的方法观察支架的生物相容性。结果支架具有良好的纤维形貌,直径均匀,扫描电镜下可见HA结晶。支架在磷酸盐缓冲液中降解速度较快,8周时支架失重可达40%,表现出良好的降解性能。细胞毒性试验和伊红染色均表明细胞在支架上的生长情况较好,支架具有良好的生物相容性。结论 PLGA与HA共混制备的纳米纤维支架具有良好的空间结构和生物相容性,因此该支架是一种良好的组织工程纤维环支架材料。     

小口径聚氨酯人工血管的制备及其力学性能、细胞相容性评价

目的使用静电纺丝法构建一种小口径聚氨酯血管替代物,观察人工血管的微观结构,并检测其力学性能和细胞相容性。方法以聚氨酯为原料,通过静电纺丝法,以高速旋转的转轴为收集装置,制备4 mm口径的PU人工血管。探讨纺丝液质量分数对纤维直径的影响,滚轴转速对纤维排列的影响,以及质量分数、纤维取向、管壁厚度对人工血管孔隙率的影响,并检测人工血管的力学性能及细胞相容性。结果静电纺丝法制备的PU人工血管具有由多层微纳级超细纤维叠加而成的三维多孔网状结构,平均孔隙率为(51.48±4.47)%,轴向抗拉强度为(5.85±0.62)Mpa,无细胞毒性,并有利于内皮细胞黏附及增殖。结论使用静电纺丝法制备小口径聚氨酯人工血管是可行的,具有潜在的临床应用前景。     

雪旺细胞与PDLLA/CS/CHS自组装复合材料生物相容性研究

目的利用自行培养的雪旺细胞(SCs)与具有良好可生物降解性的高分子聚乳酸/硫酸软骨素/壳聚糖(PDL-LA/CS/CHS)复合材料进行生物相容性研究,评价该材料应用于周围神经修复的可能性。方法利用双差速贴壁法进行SCs的培养与纯化,并观察其生长曲线,苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色观察细胞表征;将纯化后的SCs接种在PDLLA/CS/CHS复合材料上进行材料生物相容性研究,用MTT法和环境扫描电镜检测和观察细胞生长情况。结果 SCs生长平台期为1 d,对数期为5~7 d,倍增时间为5 d,其纯度超过90%。MTT实验显示,细胞接种0、2、4 d,PDLLA组、CHS组和PDLLA/CS/CHS组的吸光度值均低于SCs对照组,至7 d和10 d,PDLLA、CHS组吸光度值亦低于SCs对照组,PDLLA/CS/CHS组高于SCs对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),PDLLA/CS/CHS组与PDLLA组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDLLA/CS/CHS复合材料是具有较理想的生物相容性的生物材料,有良好的材料-细胞界面,较利于SCs黏附及生长、增殖,可应用于周围神经修复的研究。     

外源性神经节苷脂GM1对面神经再生的影响

目的：探讨神经节苷脂GM1对面神经损伤再生的影响。方法：建立兔面神经损伤后再生的实验模型，外源性给予GM1，分别在术后2，4，8周观察面神经的组织学及超微结构变化。结果：实验组术后2，4周光镜下可见大量有髓神经纤维排列整齐，髓鞘厚度增加，雪旺氏细胞多见。术后8周时实验组与对照组无明显差异。术后2，4周时，电镜观察实验组再生神经纤维增多，轴索成熟，可见雪旺氏细胞胞体完整。术后8周时实验组与对照组无明显差异。结论：神经节苷脂GM1对兔面神经损伤的早期康复有明显促进作用。     

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的应用携带胶质细胞源性神经营养因子基因的逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GDNF)对体外培养的雪旺细胞进行基因修饰,并结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建神经移植复合体,用于大鼠坐骨神经缺损的修复,同时对其促轴突再生及神经元保护作用予以检测评价.方法 40只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=10) 细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=10)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=10) GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=10)自体神经桥接组.损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况,辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术用于脊髓前角运动神经元再生评价.结果 12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析、透射电镜超微结构观察以及脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比无明显差异.结论雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果.     

大鼠坐骨神经切除后人发角蛋白诱导的神经的再生机制

目的 观察人发角蛋白(HHK)诱导坐骨神经再生时的形态学变化,以揭示神经再生机制,方法制备坐骨神经损伤动物模型,植入HHK丝束桥接体,手术后2天、1、2、3、6、9、12周进行组织学观察.结果 术后第2天到2周,大量新生微血管长入HHK植入部位,切除后近远端的施万细胞发生去分化.去分化后的施万细胞沿着HHK丝束表面纵向分裂增殖.术后第3周人发开始降解,HHK周围可见很多巨噬细胞和多核巨细胞,大量增生的施万细胞有规则地排列于HHK丝间,有轴突和大量的微血管出现.术后第6周,在HHK丝周围可见大量新生的神经纤维,其间有微血管分布.术后第9周,人发角蛋白降解显著,再生神经纤维增多,有明显的神经外膜和束膜.术后第12周,实验组人发角蛋白基本完全降解,其部位被新的神经纤维所取代,并已贯通缺损部位,且外观形态接近正常神经.结论 1,HHK对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥接作用.2、受损后高度分化的施万细胞通过去分化形成幼稚的施万细胞,其中胞质脱落起着关键作用.3、受损轴突立即发生保护性封闭、脱落.健康轴突形成膨大的带突起的生长锥,生长锥突起上伸出许多丝状生长芽.并与1到多个施万细胞嵌合,它们通过竞争性选择,最后只有一条生长芽可发育成完整的轴突.4、神经纤维屏障膜(神经外膜、束膜及内膜)是由最外侧的血管屏障膜中和束内的微血管间充质细胞演变而成的.总之,施万细胞、神经轴突、神经膜三者的再生模式是自身器官化过程所要求的,它们是同步进行的协调行为.     

不同方式损伤周围神经后许旺细胞钾通道基因的表达

目的:观察不同方式损伤兔坐骨神经电后受损区域神经许旺细胞Kv1.5钾通道基因的表达水平。方法:随机将实验动物分为3组:50V电损伤组、100V电损伤组、神经切割伤组,双酶消化法分离受损区域坐骨神经许旺细胞并体外培养,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术比较各组许旺细胞Kv1.5 mRNA的表达水平。结果:3组动物损伤区域神经许旺细胞均有Kv1.5基因的表达,其中损伤后3～7dKv1.5基因的表达最为显著;50V组及神经切割伤组两组之间比较无显著性差异(P>0.05);而100V组Kv1.5基因的表达水平较低,与其他两组有显著性差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后许旺细胞Kv1.5基因的表达与损伤后时间及损伤电压大小有关,可能与许旺细胞的增殖有密切关系。     

自体静脉套管联合雪旺细胞移植对周围神经缺损再生的影响

目的观察自体静脉套管联合雪旺细胞移植对周围神经缺损再生的影响,以探索周围神经缺损修复的新的治疗方法。方法20只新西兰白兔随机分为实验组和对照组,每组10只。取兔自体股外静脉,套于神经两断端之间,制成静脉套管,实验组向静脉套管内注射雪旺细胞、对照组注射生理盐水,术后6周通过光镜及透射电镜观察神经再生情况,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计分析,组间均值比较采用t检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果HE染色结果显示,实验组有髓神经和无髓神经数量较多,排列较整齐,髓鞘清晰可见,纤维数量较少。对照组有一定数量无髓神经,而有髓神经少见,纤维数量较多。t检验结果显示差异具有统计学意义（P〈0.05）。电镜观察实验组有髓神经纤维数量较多,排列较整齐,髓鞘清晰可见,纤维数量较少。可见雪旺细胞与有髓神经纤维相连。对照组有髓神经纤维和无髓神经纤维数量较少,排列不整齐,髓鞘不清晰,纤维数量较多,无雪旺细胞。结论本研究结果表明静脉套管可以促进周围神经再生;雪旺细胞注入神经缺损的静脉套管对周围神经再生的作用优于单纯使用静脉套管。     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

Survival and migration of Schwann cells after the vascularized peripheral nerve grafted into spinal cord in rats

Objective：To study the survival and ability of inducing axonal regeneration of the Schwann cells after the peripheral nerve being grafted into spinal cord. Methods：A total of 30 adult female Wistar rats were randomly divided into the VN （vascularized peripheral nerve） and PN （peripheral nerve） groups. A 5-mm spinal cord defect of the left posterior column was made at the T1-3 vertebral level. The defect was grafted with the vascularized or isolated peripheral nerve respectively. The survival and proliferation of the Schwann cells were assessed by histological and morphometric analysis 8 weeks after the operation. Resuits：In the VN group, the peripheral nerve grew into the cord with lots of Schwann cells survived and proliferated, and had more NF and S-100 positive fibers than in the PN group. Conclusion：The vascularized peripheral nerve enhances the survival and proliferation of the Schwann cells and prompts the regener- ation of injured axon of the central nerve system to certain degree.     

PLGA神经诱导管的制作及其神经再生诱导作用

目的观测制备的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[Poly(DL-lactide-co-glycolide)PLGA]管的神经再生诱导作用.方法采用大鼠坐骨神经缺损模型观察以两种构成比不同[(85:15)或(50:50)]的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物制备的PLGA管的神经再生诱导作用.结果(1)体内神经桥接情况下,硅胶管促发有明显的纤维组织增生,并形成包囊包裹于管壁,而两种PLGA管组未见类似现象;(2)与硅胶管组相似,PLGA(85:15)管能够顺利完成坐骨神经缺损桥接作用,再生神经电生理及组织学评价显示两组无明显差异,而PLGA(50:50)管体内神经桥接4周时即出现破裂,不能为坐骨神经桥接提供良好的支持作用.结论与硅胶管及PLGA(50:50)管相比,PLGA(85:15)管能够提供良好的神经再生诱导作用,而且由于其并物反应小、生物相容性佳,生物降解率适当,是一种良好的周围神经组织工程材料.     

e-PTFE膜管内自体许旺细胞种植促进面神经再生的实验研究

目的:观察e-PTFE再生室内植入自体许旺细胞促进面神经再生的效果。方法:选用纯种新西兰白兔48只,随机平均分为实验组和对照组。实验组建立面神经缺损模型,用e-PTFE桥连接缺损,并在再生室内注入自体许旺细胞;对照组单纯用e-PTFE桥连接,比较两组神经再生的效果。结果:实验组神经再生效果良好,可见明显的神经再生,各时期神经传导速度大于对照组。结论:e-PTFE再生室结合自体许旺细胞种植可明显促进面神经再生,其神经再生速度及质量好于单纯神经再生室。