通过Wnt/β-catenin通路影响结肠癌细胞凋亡

目的 探究驱动蛋白家族分子C3(kinesin superfamily protein C3, KIFC3)对结肠癌细胞凋亡的影响和可能作用机制。方法 通过慢病毒载体构建稳定低表达KIFC3的HCT116细胞株(sh-KIFC3),同时设置对照组和阴性对照(sh-NC)组。Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡形态,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western blot法检测沉默KIFC3表达对Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9(CC9)、PARP1、β-catenin、GSK-3β和c-Myc蛋白含量的影响。结果 Hoechst 33258荧光染色显示,sh-KIFC3组有较多的细胞核呈现出核染色质浓缩、聚集等凋亡特征性改变,而对照组和sh-NC组则无凋亡特征性改变;流式细胞术结果显示,sh-KIFC3组细胞凋亡率明显高于对照组和sh-NC组(P<0.001)。同时,Western blot法检测结果显示,sh-KIFC3组Bax、CC9、PARP1及GSK-3β蛋白表达量均明显高于对照组和sh-NC组(P<0.05),Bcl-2、β-catenin和c-Myc蛋白表达量明显低于对照组和sh-NC组 (P<0.01)。结论 KIFC3下调可能通过干扰Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞HCT116凋亡。     

青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞杀伤活性及作用机制研究

目的观察体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法人前列腺癌细胞系LNCaP分为对照组、青蒿琥酯组、顺铂组、顺铂+青蒿琥酯组、顺铂+青蒿琥酯+MET质粒组。采用噻唑蓝(MTT)法检测前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率;流式细胞术检测LNCaP细胞的凋亡;Western blot实验检测LNCaP细胞Met表达水平,AKT和Bad磷酸化水平,caspase-9和caspase-3活化水平;免疫共沉淀法检测Bad与Bcl-xl及Bcl-2相互作用。结果顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%和凋亡率(12.5±1.0)%(P均0.05)。顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞Met表达水平,AKT和Bad磷酸化水平均低于顺铂组,而顺铂+青蒿琥酯组LNCaP细胞Bad与Bcl-xl及Bcl-2结合水平,caspase-9和caspase-3活化水平均高于顺铂组(P均0.05)。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,顺铂+青蒿琥酯+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均低于顺铂+青蒿琥酯组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%(P均0.05)。结论青蒿琥酯可能通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

青蒿琥酯增强顺铂对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用

目的 研究青蒿琥酯(Art)及其联合顺铂(DDP)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别采用不同浓度的Art(0.16、0.8、4、20、100μmol/L)、DDP(0.16、0.8、4、20、100 mg/L)及Art(4μmol/L)和DDP(4 mg/L)联合处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测Art(4μmol/L)组、DDP(4mg/L)组和Art(4μmol/L)+DDP(4 mg/L)联合处理组细胞48 h的凋亡状况.结果 随着处理时间延长(24～72h),Art和DDP对HepG2细胞生长的抑制/杀伤作用明显增强;它们在暴露72 h的条件下分别在0.16 μmol/L和0.8 mg/L以上浓度具有浓度依赖性细胞毒作用.Art联合DDP处理细胞组对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用比单用Art或DDP组更强(P＜0.05);人肝癌HepG2细胞48 h的早期凋亡率分别为:Art组23.5％,DDP组27.8％,Art+DDP联合用药组49.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可抑制人肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡;它与顺铂联合应用可能增强后者对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用.     

中药活性成分青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性及机制研究

目的 探讨体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法: 前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率用噻唑蓝(MTT)法进行检测。LNCaP细胞的凋亡用流式细胞术进行检测。LNCaP细胞中Met的表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平,caspase-9和caspase-3的活化水平用western blot实验进行检测。Bad与Bcl-xl及Bcl-2的相互作用用免疫共沉淀法进行检测。结果: 青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均显著高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%(P<0.05)和凋亡率(12.5±1.0)%(P<0.05)。青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Met表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平均低于顺铂组,而青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Bad与Bcl-xl及Bcl-2的结合水平,caspase-9和caspase-3的活化水平均均高于顺铂组。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,青蒿琥酯+顺铂+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均显著低于顺铂+顺铂组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%(P<0.05)和凋亡率(34.8±2.9)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

青蒿琥酯抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善大鼠哮喘模型气道炎症及气道重塑关系的研究

目的 研究Wnt/β-catenin信号通路在哮喘气道炎症和气道重塑中的作用,探讨青蒿琥酯（artesunate,ART）治疗哮喘的可能机制。方法 采用卵白蛋白（OVA）激发和雾化吸入的方式建立哮喘模型,并予以药物治疗。观察各组大鼠肺组织的病理形态改变、外周血、支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数;Image-Pro plus 6.0图像分析软件测量大鼠肺组织支气管壁厚度和平滑肌厚度;免疫组化法检测大鼠肺组织β-catenin和WISP-1表达情况,RT-PCR检测大鼠肺组织WISP-1表达情况,ELISA法检测血清及BALF中IL-6的表达情况。结果 ART干预哮喘组大鼠气道炎性细胞浸润、支气管壁厚度、平滑肌厚度均明显低于哮喘组大鼠,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组肺组织β-catenin、WISP-1蛋白和WISP-1 mRNA的表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组大鼠血清及BALF中IL-6水平表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 ART改善哮喘大鼠气道炎症及气道重塑的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性及下调IL-6水平有关。     

青蒿琥酯联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT116的作用研究

目的观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)与奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)联合用药对人结肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响。方法利用不同浓度单药Art、L-OHP及Art(6.25μg·mL-1)联合不同浓度L-OHP处理结肠癌HCT116细胞株48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖变化;金正均Q值法判断两药联合效应,苏木精—伊红(HE)染色法观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度Art和L-OHP对HCT116细胞株增殖均有抑制作用,且抑制率随药物浓度提高而增高(P0.05);联合用药表现出协同或相加效应;HE染色可见随Art浓度增加,细胞膜破裂,细胞核染色逐渐加深,细胞正常结构消失;Art(6.25μg·mL-1)与LOHP(0.5μg·mL-1)联合用药,联合组早期细胞凋亡率较单药Art(20.31±3.8)%、L-OHP(14.83±3.9)%显著提高(P0.05)。结论 Art与L-OHP联合用药能够显著抑制HCT116细胞株增殖并增强对细胞凋亡的诱导作用。     

白藜芦醇调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制

目的 分析白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制.方法 采用0(对照组)、25(低剂量组)、50(中剂量组)以及100μmol/L(高剂量组)白藜芦醇对胶质瘤细胞U251进行处理,比较各组细胞培养24、48以及72 h时的细胞活力、侵袭个数、迁移个数、凋亡率,比较各组细胞培养72 h时的...     

鼻咽癌相关基因6在人结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用

目的:探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)对结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子的影响,明确NGX6与Wnt通路之间是否存在反馈调节.方法:将pCMV-myc-NGX6真核表达载体及pCMV-myc空白载体瞬时转染结肠癌细胞系SW620,Western印迹检测转染NGX6前后Wnt/β-catenin信号...     

转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究

目的 研究转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用,观察药物作用后细胞凋亡情况.方法 采用MTT法检测青蒿琥酯单用或与转铁蛋白合用对鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制作用,DAPI染色观察CNE2细胞凋亡,流式细胞术分析细胞凋亡率变化.结果 青蒿琥酯对CNE2细胞的IC50值为116 μg/mL,青蒿琥酯合用转铁蛋白后IC50值降为17.4μg/mL,DAPI染色显示青蒿琥酯合用转铁蛋白作用CNE2细胞24h后,细胞出现明显凋亡现象,流式细胞分析结果显示,与对照组相比,青蒿琥酯合用转铁蛋白组作用24h后,细胞出现明显凋亡现象,而平行进行的青蒿琥酯100μg/mL,组相同作用时间没有出现凋亡.结论 转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性有较强增效作用,转铁蛋白与青蒿琥酯合用加速了青蒿酯诱导的细胞凋亡,是转铁蛋白增强青蒿琥酯作用的重要机制之一.     

Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响.方法 差速贴壁法分离人成熟表皮细胞.并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组义分为氯化锂(LiCI,20 mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Western blot检测衷皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和B1整合素的表达变化.结果 人表皮细胞内β-catenin的表达在被Licl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01).而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大.免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性.结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节.     

青蒿琥酯对NK细胞活性及ADCC活性的影响

体内实验表明，青蒿琥酯５０ｍｇ／ｋｇ及１００ｍｇ／ｋｇ（ｉ，ｐ，ｑｄ×６ｄ）能显抑制正常小鼠ＮＫ细胞活性和ＡＤＣＣ活性，体外试验表明，１．３０×１０＾－５～２．６０×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ青蒿琥酯能剂量依赖性抑制小鼠脾细胞ＮＫ活性，２．６０×１０＾－９～２．６０×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ青蒿琥酯对小鼠脾细胞ＮＫ活性无显影响。     

人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯抗肿瘤活性研究

目的:探讨人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯(R-A合剂,1∶1)的抗肿瘤活性。方法:MTT法观察R-A合剂对刀豆蛋白A(Co-nA)诱导的小鼠脾细胞增殖的影响。小鼠接种S180肉瘤,分为5组,模型组、R-A合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组,分别灌胃200 mg.kg-1、100 mg.kg-1、50 mg.kg-1,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺50 mg.kg-1,给药10 d后,各组称体质量和瘤质量,计算抑瘤率。结果:R-A合剂(≥0.1μmol.L-1)对淋巴细胞增殖表现出较强的抑制活性(P<0.01),细胞增殖的抑制作用随药物浓度的增加而显著提高。R-A合剂各组荷瘤小鼠的瘤质量与模型组相比均明显减轻(P<0.05或P<0.01),抑瘤率为41%～49%,抑瘤作用呈剂量依赖性。结论:人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯有良好的抗肿瘤活性。     

Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂与骨质疏松

Wnt/β-catenin信号通路是重要的细胞信号转导途径,在细胞的增殖、分化中发挥重要作用。目前的研究表明Wnt/β-catenin信号通路在骨代谢中发挥重要作用,该通路的异常与骨质疏松的发生有关。Wnt/β-catenin拮抗剂可以抑制Wnt/β-catenin信号通路,导致通路表达异常,进一步研究Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂,设计出阻断该通路拮抗剂的物质,可为骨质疏松的治疗提供一种新的途径。     

敲低着丝粒蛋白U对顺铂耐药卵巢癌细胞自我更新、顺铂耐药和Wnt/β-catenin信号活性的抑制作用

目的:探讨下调着丝粒蛋白U(CENPU)对卵巢癌(OC)细胞顺铂耐药的影响,并分析其作用机制.方法:采用Western blotting法检测OC细胞(OVCAR3和SKOV3细胞)和顺铂耐药OC细胞(OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞)中CENPU蛋白表达水平.将OVCAR3/DDP和SKOV3/DDP细胞...     

Wnt/β-catenin信号通路与大肠癌研究进展

Wnt信号通路与人类大肠癌的发病密切相关,Wnt信号通路的基因缺陷可激活Wnt信号通路并使其保持持续激活状态,使肠粘膜上皮过度增生,从而导致正常的肠粘膜向肿瘤转化,针对Wnt/β-catenin信号通路中的关键成分为靶点,靶向治疗大肠癌,已成为肿瘤治疗的新方向。我们就Wnt信号通路的异常变化及其调节和干预综述如下。