shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的:研究shRNA干扰GRP78基因对肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法:将GRP78特异性shRNA质粒载体Pla-anti-GRP78转染SMMC-7721,采用流式细胞术(FCM)检测转染效率、分析细胞周期分布和凋亡,从蛋白和mRNA水平检测干扰GRP78效果,MTT法检测干扰GRP78对SMMC-7721增殖的影响。结果:Pla-antiGRP78转染SMMC-7721细胞48h后,GRP78表达下降,空白对照组GRP78 mRNA的表达量为1,无关对照组组为0.95,而Pla-anti-GRP78组为0.25(P0.05);转染Pla-anti-GRP78的SMMC-7721细胞G2期阻滞(55.2%,P0.05);空白对照组凋亡率为6.6%,无关对照组为8.1%,而Pla-anti-GRP78组高达58.2%(P0.05)。结论:shRNA干扰GRP78表达抑制SMMC-7721的增殖,并诱导其凋亡。     

葡萄糖调节蛋白78在棕榈酸诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白(GRP)78在棕榈酸(PA)诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法选取人肝癌细胞SMMC-7721,分为对照组和PA组;采用光学显微镜观察两组细胞死亡情况,采用反转录PCR检测两组GRP78 mRNA表达;同时将肝癌细胞分为对照组、空白载体组和GRP78载体转染组,其中GRP78载体转染组转染高表达GRP78质粒,空白载体组转染空白质粒,采用Western印迹检测GRP78蛋白表达情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞SMMC-7721在PA刺激下,24 h后死亡细胞明显增多;PA组肝癌细胞SMMC-7721 GRP78 mRNA相对表达量为(3.014±0.447),明显高于对照组的1.012±0.322(P<0.05);GRP78载体转染组GRP78蛋白相对表达量明显高于对照组和空白载体组,细胞凋亡率明显低于对照组和空白载体组(均P<0.05)。结论高表达GRP78可抑制PA诱导的肝癌细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响.方法 人工合成survivin基因ASODN和正义ODN(SODN),并行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径转染SMMC-7721;分别用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA和蛋白表达;用MTT法检测ASODN对SMMC-7721增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;倒置显微镜观察细胞形态变化.结果 SMMC-7721可强表达survivin mRNA和蛋白;ASODN呈浓度依赖性抑制survivin mRNA和蛋白表达及SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M期.SODN对survivin mRNA和蛋白及SMMC-7721的增殖、细胞周期无明显抑制作用.结论 脂质体介导转染survivin ASODN可抑制细胞增殖、使细胞阻滞于G2/M期,从而促进细胞凋亡.     

XPD对SMMC-7721肝癌细胞中DNp73和GADD45β的调控及意义

目的:观察人剪切修复基因人类着色性干皮病D组基因(xeroderma pigmentosum group D,XPD)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721细胞后XPD、DNp73和GADD45β基因的表达变化以及对肝癌细胞生长的影响.方法:实验分4组:重组质粒SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD组)、空载质粒SMMC-7721-pEGFP-N2组(N2组),脂质体组和SMMC-7721细胞空白对照组.应用Lipofectamine2000脂质体瞬时转染,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法检测转XPD基因后,人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中DNp73以及GADD45β的mRNA和蛋白质的表达量变化,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:荧光显微镜下,XPD组和N2组细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明转染成功;RT-PCR检测显示:XPD组中DNp73 mRNA相对表达量较其他3组显著下调,XPD和GADD45βmRNA相对表达量较其他3组明显上调(均P<0.01);Western blot检测显示:XPD、DNp73以及GADD45β蛋白相对表达量在各组间的差异与其mRNA各组间差异一致;MTT检测示:SMMC-7721细胞空白对照组、脂质体组、N2组、XPD组的吸光度(A)值分别为0.633±0.012,0.623±0.009,0.628±0.016,0.384±0.011,XPD组低于其他3组,差异均有统计学意义(均P<0.01),表明转染XPD后SMMC-7721细胞的增殖能力减弱.流式细胞仪检测SMMC-7721肝癌细胞凋亡:转染XPD的SMMC-7721细胞凋亡显著,凋亡率达56.53%,而其他3组均未见明显凋亡.结论:XPD基因在肝癌的发生发展中起抑制作用,癌基因DNp73的表达随XPD表达增加而降低,抑癌基因GADD45β则随XPD表达增加而增加,提示两者可能在XPD抑制肝癌细胞的生长机制中起重要作用.     

DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DEK基因在肝癌中的表达及RNA干扰抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702作为对照,RT-PCR检测人肝癌HepG2、Huh-7、SMMC-7721、SNU-475细胞中DEK mRNA表达;DEK-siRNA转染HepG2细胞,同时转染阴性对照和空白对照,转染48 h后Western blotting检测各组细胞中DEK、Cleaved caspase 3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果各个肝癌细胞中DEK mRNA表达均显著高于正常细胞,差异有统计学意义(P0.01);DEK基因在HepG2细胞中表达最高,选择作为后续研究对象;转染DEK-siRNA后DEK蛋白表达显著降低;DEK-siRNA组细胞存活率及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制肝癌HepG2细胞中DEK基因可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

RNAi技术沉默Survivin基因抑制肺癌细胞株H1299增殖并诱导其凋亡

目的:研究RNAi技术沉默Survivin基因对人肺癌细胞株H1299增殖和凋亡的影响。方法:将Survivin特异性siRNA表达载体siRNA-Sur转染H1299细胞,利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率,通过Western blot和Realtime-PCR方法检测RNAi沉默Survivin基因表达的效果,MTT法检测RNAi沉默Survivin基因对基因H1299细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡。结果:siRNA-Sur转染H1299细胞48 h后,细胞的Survivin基因表达明显减少,空白对照组Survivin mRNA的相对表达量为1.0,siRNA-空白对照组为0.98,而siRNA-Sur组为0.32(P0.01);导致H1299细胞G2期阻滞,空白对照组为23.7%,而siRNA-Sur组为50.1%(P0.01);细胞抑制率和凋亡率增加,转染48 h,空白对照组凋亡率为5.8%,无关对照组为6.2%,而siRNA-Sur组达50.6%(P0.01)。结论:RNAi沉默H1299细胞Survivin基因表达抑制细胞增殖,并诱导H1299细胞凋亡。     

RNAi技术沉默Survivin基因抑制肺癌细胞株H1299增殖并诱导其凋亡

目的　研究RNAi技术沉默Survivin基因对人肺癌细胞株H1299增殖和凋亡的影响。方法 将 Survivin特异性siRNA 表达载体siRNA-Sur转染H1299细胞, 利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率,通过Western blot和Realtime-PCR方法检测RNAi沉默Survivin 表达的效果, MTT 法检测RNAi沉默Survivin对H1299细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡。结果　siRNA-Sur转染H1299细胞48h后,细胞的Survivin基因表达明显减少,空白对照组Survivin mRNA的相对表达量为1.0,siRNA-空白对照组为0.98,而siRNA-Sur组为0.32(P<0.01);导致H1299细胞G2期阻滞,空白对照组为23.7% ,而siRNA-Sur组为50.1%(P<0.01);细胞抑制率和凋亡率增加, 转染48h,白对照组凋亡率为5.8%,无关对照组为6.2%,而siRNA-Sur组达50.6%(P<0.01)。 结论　RNAi沉默H1299细胞Survivin基因表达抑制细胞增殖,并诱导H1299细胞凋亡。     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平。利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组。Real-time PCR和Western blotting方法检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况。结果胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P0.05)。结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用。而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.     

Inhibitory effect of antisense vascular endothelial growth factor 165 eukaryotic expression vector on proliferation of hepatocellular carcinoma cells

AIM: To construct antisense VEGF(165) eukaryotic expression vector PCDNA(3)-as-VEGF(165) and to study its expression and effect on the proliferation of hepatocarcinoma SMMC-7721 cells. METHODS: VEGF(165) cDNA was inserted into polylinker sites of eukaryotic expression vector PCDNA(3) to construct PCDNA(3)-as-VEGF(165). Then the vector was transferred into human hepatocarcinoma cell strain SMMC-7721 with cation lipofectamine 2000 mediated methods to evaluate the expression of VEGF protein and the inhibitory effect on the proliferation of hepatocarcinoma SMMC-7721 cells. RESULTS: The detection indicated the presence of VEGF cDNA in normally cultured SMMC-7721 cells by PCR. VEGF mRNA expression was notably decreased in SMMC-7721 cells by RT-PCR after PCDNA(3)-as-VEGF(165) transfection. The expression of VEGF protein was dramatically inhibited (142.01+/-7.95 vs 1 625.52+/-64.46 pg/ml(-1), P<0.01) 2 days after transfection, which correlated with the dose of PCDNA(3)-as-VEGF(165)5 gene. VEGF protein was most expressed in PCDNA(3) transferred SMMC-7721 cells but few in PCDNA(3)-as-VEGF(165) transferred cells by immunohistochemical staining. The apoptotic rate of hepatocarcinoma SMMC-7721 cells was significantly promoted (17.98+/-0.86% vs 4.86+/-0.27%, P<0.01) and the survival rate was notably decreased (80.99+/-3.20% vs 93.52+/-3.93%, P<0.05) due to antisense VEGF(165) by flow cytometry (FCM). The transfection of antisense VEGF(165) gene resulted in the inhibitory effect on the proliferation of hepatocarcinoma cells by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and the death of all hepatocarcinoma cells on day 6 after transfection. CONCLUSION: It is confirmed that antisense VEGF(165) can inhibit the expression of VEGF protein, interfere with the proliferation and induce the apoptosis of hepatocarcinoma cells in our study. Antisense VEGF(165) gene therapy may play an important role in the treatment of human hepatocarcinoma.     

生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对抗肿瘤药物敏感性的研究

背景：生存素是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，生存素基因有可能成为肿瘤反义基因治疗的理想靶基因。目的：研究生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对常用抗肿瘤药物敏感性的作用，探讨生存素反义核酸用于肿瘤基因治疗的可能性。方法：应用基因重组技术构建pEGFP-C1-生存素反义核酸重组质粒，以脂质体转染法转染SMMC．7721细胞，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测生存素mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。将生存素反义核酸分别与7种常用抗肿瘤药物共同作用于SMMC-7721细胞，用四唑蓝(MTT)比色法测定细胞杀伤率。结果：生存素反义核酸可抑制SMMC-7721细胞中生存素mRNA的表达，从而导致细胞凋亡增加，其作用呈剂量依赖性。生存素反义核酸可增加SMMC-7721细胞对7种常用抗肿瘤药物的敏感性，明显增强药物的杀伤作用。结论：生存素反义核酸能靶向抑制野生型生存素基因的表达，提高肝癌细胞对常用抗肿瘤药物的敏感性，有可能成为肿瘤基因治疗的新方法。     

血管内皮细胞生长因子反义核糖核酸对肝癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA转染人肝癌细胞后对细胞体内外生物学性状的影响。方法 将含正义、反义VEGFcDNA序列的质粒PCMV—VEGF、PCMV—FGEV及空载体质粒pcDNA3.1,在脂质体介导下导入SMMC—7721肝癌细胞,分别称为正义、反义及对照组,并通过G418筛选获得阳性克隆。细胞原位杂交和免疫组织化学方法检测转染后VEGF在肝癌细胞内的表达情况;MTT法和FCM检测转染后细胞在体外的增殖和凋亡情况;并制备裸鼠动物模型,观察转染后细胞的体内生长情况。结果 转染PCMV—FGEV后肝癌细胞内VEGF的转录及其蛋白的表达水平显著下降,但转染后体外细胞的增殖与凋亡情况均无明显变化。转染PCMV—FGEV后细胞在裸鼠体内的生长缓慢,反义组成瘤时间为(25.0±1.8)d,明显长于正义组(15.7±2.5)d和对照组(18.5±2.1)d,F=19.455,P<0.01;而平均瘤重以反义组最轻,为(0.96±0.28)g,F=21.501,P<0.01;同时反义组裸鼠肿瘤细胞发生明显的凋亡。结论 VEGF反义RNA转染人肝癌细胞可抑制肿瘤细胞VEGF的表达,在体外对细胞增殖和凋亡无影响,而体内可显著诱导细胞凋亡并抑制肿瘤生长。     

Inhibitory effect of antisense vascular endothelial growth factor RNA on the profile of hepatocellular carcinoma cell line in vitro and in vivo

AIM:To evaluate the effect of antisense vascularendothelial growth factor(VEGF)RNA(PCMV-FGEV)transfection on the profile of hepatocellular carcinoma(HCC)SMMC-7721 cells in vitro and in vivo.METHODS:SMMC-7721 cells were transfectedwith PCMV-FGEV antisense,PCMV-VEGF sense andempty vector plasmid encapsulated by lipofectamineas antisense group,sense group and control grouprespectively.The positive cell clones were selectedwith G418.The stable transfection and expressionof VEGF in the cells were determined by RT-PCR andimmunohistochemistry.Cell proliferation was observedby MTT assay.FACS analysis was used to determine theeffect of PCMV-FGEV transfection on cell apoptosis.Thegrowth of transfected cells in Wvo was also observed innude mice.RESULTS:VEGF expression was reduced in SMMC-7721transfected with PCMV-FGEV,which was confirmed byRT-PCR and immunohistochemistry.No effect of PCMV-FGEV transfection was found on cell proliferation andcell apoptosis of SMMC-7721 in vitro.The growth of cellstransfected with PCMV-FGEV was slow in nude miceand accompanied with obvious apoptosis.The latenttime of tumors in the antisense group was 25.0±1.8d,which was longer than that in sense and controlgroups(F=19.455,P<0.01).The average tumor weightin antisense group(0.96 g±0.28 g)was the smallestamong the three groups(F=21.501,P<0.01).CONCLUSION:The expression of VEGF can be inhibitedby antisense PCMV-FGEV.Antisense PCMV-FGEV has no effect on cell proliferation and apoptosis of SMMC-7721in vitro but can inhibit tumor growth and induce cellapoptosis in vivo.     

Knockdown of survivin gene expression by RNAi induces apoptosis in human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721

AIM: To investigate the survivin gene expression in human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 and the effects of survivin gene RNA interference (RNAi) on cell apoptosis and biological behaviors of SMMC-7721 cells. METHODS: Eukaryotic expression vector of survivin gene RNAi and recombinant plasmid pSuppressorNeo-survivin (pSuNeo-SW), were constructed by ligating into the vector, pSupperssorNeo (pSuNeo) digested with restriction enzymes Xba I and Sail and the designed double-chain RNAi primers. A cell model of SMMC-7721 after treatment with RNAi was prepared by transfecting SMMC-7721 cells with the lipofectin transfection method. Strept-avidin-biotin-complex (SABC) immunohistochemical staining and RT-PCR were used to detect survivin gene expressions in SMMC-7721 cells. Flow cytometry was used for the cell cycle analysis. Transmission electron microscopy was performed to determine whether RNAi induced cell apoptosis, and the method of measuring the cell growth curve was utilized to study the growth of SMMC-7721 cells before and after treatment with RNAi. RESULTS: The eukaryotic expression vector of survivin gene RNAi and pSuNeo-SW, were constructed successfully. The expression level of survivin gene in SMMC-7721 cells was observed. After the treatment of RNAi, the expression of survivin gene in SMMC-7721 cells was almost absent, apoptosis index was increased by 15.6%, and the number of cells was decreased in G2/M phase and the cell growth was inhibited. CONCLUSION: RNAi can exert a knockdown of survivin gene expression in SMMC-7721 cells, and induce apoptosis and inhibit the growth of carcinoma cells.     

缺氧环境中黏着斑激酶对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的 研究缺氧对人肝癌细胞SMMC-7721黏着斑激酶(FAK)表达的影响以及FAK表达对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响.方法 通过1%体积分数O2的低氧培养建立人肝癌细胞SMMC-7721物理缺氧模型,Western blot检测FAK的表达.构建针对FAK mRNA的干扰质粒pshRNA-FAK及阴性对照质粒pGensil-2,并将其转染至SMMC-7721细胞,G418筛选稳定转染细胞株.Western blot检测FAK蛋白表达的变化,细胞迁移和侵袭实验检测缺氧条件下细胞迁移和侵袭能力的改变.在正常条件下将FAK真核表达质粒pcDNA3-FAK转染至SMMC-7721细胞,观测其侵袭能力的改变.根据数所资料的不同分别采用t检验、单因素方差分析,LSD法及Dunnett法进行统计学处理. 结果低氧培养的SMMC-7721细胞FAK蛋白表达水平逐渐升高,24 h后较0 h时明显升高(P<0.01).SMMC-7721细胞稳定转染pshRNA-FAK后,FAK蛋白表达显著下降,抑制率达74.6%±5.1%,在正常及缺氧条件下都对FAK表达有显著抑制作用.细胞迁移实验结果显示,缺氧显著促进SMMC-7721细胞迁移能力(t=18.66,P<0.01),侵袭实验结果与迁移实验结果一致.转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞在缺氧环境中的迁移能力有显著抑制作用,透膜细胞数(353±36)个较对照组(392±31)个明显降低(F=173.983,P<0.05);细胞侵袭实验显示,转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞侵袭能力有显著抑制作用,透膜细胞数(160±12)个较对照组(194±13)个明显降低(F=59.674,P<0.05).同时转染真核表达质粒pcDNA3-FAK显著促进SMMC-7721细胞侵袭能力.结论 缺氧促进SMMC-7721细胞侵袭可能与FAK表达水平升高相关,FAK表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞侵袭转移的机制之一.     

双萘酰亚胺类化合物诱导SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 观察双萘酰亚胺类化合物(C8)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐法检测C8对SMMC 7721细胞的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测Bcl 2蛋白表达量;流式细胞术分析细胞内Bcl 2蛋白量;酶联免疫法检测Caspase9和Caspase 3表达量. 结果 C8抑制SMMC 7721细胞增殖,半数抑制浓度为15 umol/L.C8作用浓度在10,15、20 umol/L时,SMMC 7721细胞的凋亡比例分别为16.8%、29.4%和35.8%,对照组为2.1%,SMMC 7721细胞的凋亡率明显高于对照组,P<0.01.细胞内Bcl-2蛋白表达水平下降.酶联免疫检测结果表明Caspase 9和Caspase 3被活化.结论 C8可诱导人肝癌SMMC 7721细胞的凋亡,为抗肿瘤药物的研究提供新的化合物.     

端粒酶逆转录酶小干扰RNA对肝癌细胞的体外抑制作用

目的 研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞SMMC-7721中抗肿瘤作用。方法 针对hTERT基因编码区及非编码区，采用T7转录系统在体外合成了2条siRNA，转染SMMC-7721细胞。以四甲基偶氮唑盐试验、逆转录聚合酶链反应及western blot观察其对SMMC-7721细胞增殖、hTERT mRNA及蛋白表达的影响。结果 2条siRNA以剂量依赖性方式抑制了SMMC-772l细胞增殖，当给药浓度为100nmol／L时，对hTERT mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用。结论 靶向hTERT的siRNA对hTERT基因表达有抑制效果，有可能发展为一种新的抗肿瘤药物。