胞浆内的Ca~(2+)浓度变化在五味子乙素诱导HepG2细胞凋亡过程中的作用

目的探讨五味子乙素在诱导HepG2细胞凋亡过程中Ca~(2+)浓度变化的作用和可能机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,分为空白对照组、2-APB(2-Aminoethyl diphenylborinate)组、五味子乙素组和联合用药组(五味子乙素与2-APB合加),加药48和72 h后,MTT检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜、免疫印迹法检测内质网相关蛋白Grp78、Cleaved caspase-4和CHOP蛋白含量,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果与单加五味子乙素组相比,联合用药组的细胞生存率明显升高(P0.05),Ca~(2+)浓度、Grp78、Cleaved caspase-4、CHOP蛋白的含量明显降低(P0.05)。结论五味子乙素能诱导人肝癌HepG2细胞内质网应激,导致细胞内Ca~(2+)浓度显著升高,并进一步诱导细胞凋亡。     

五味子乙素通过Traf6/TAK1信号通路介导人胃癌细胞凋亡

目的研究五味子乙素介导人胃癌HGC27细胞凋亡发生的作用及对Traf6/TAK1信号通路的影响。方法不同浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)干预细胞后,采用CCK8法检测HGC27细胞增殖情况,流式细胞术分析五味子乙素诱导HGC27细胞发生凋亡的情况,免疫印迹法分析五味子乙素对HGC27细胞中Bax、Bcl-2、Traf6、TAK1及p-TAK1蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,五味子乙素能显著抑制HGC27细胞增殖,诱导细胞凋亡;诱导促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达;显著抑制Traf6、p-TAK1蛋白表达,且呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论五味子乙素能明显抑制HGC27细胞增殖、诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

Notch1表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的研究Notch1基因对Hes1、Hes2表达水平以及肝癌细胞HepG2生物学行为的影响。方法将HepG2细胞分为Notch1受体胞内段质粒(A)组、Notch1干扰RNA(B)组、空载体(C)组和未处理HepG2细胞(D)组。采用MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞周期,RT-PCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白的表达。结果与C组和D组相比,A组细胞增殖能力减弱,G1期细胞以及Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白表达均明显增加(P<0.05),而B组细胞增殖能力增强,G1期细胞以及Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05)。结论上调Notch1的表达能促进Hes1与Hes2表达水平并抑制肝癌细胞HepG2增殖。     

去甲斑蝥素抑制人脑胶质瘤细胞增殖的体内外研究

目的研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体内外对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和去甲斑蝥素6个剂量组,MTT法检测NCTD对人脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组、顺铂阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规及肝肾功能;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 NCTD 6个剂量组显著抑制SHG-44细胞的增殖,且呈时间和剂量依耐性;并提高SHG-44细胞的凋亡率;NCTD 3个剂量组可抑制SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤的生长,对移植瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响。结论 NCTD体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

膜联蛋白A1基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A1(ANXA1)基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响及其机制.方法 应用免疫组化法检测100例胆囊癌组织中ANXA1基因的阳性表达,分析其与临床病理特征的关系.培养人胆囊癌GBC-SD细胞,分别将ANXA1小干扰RNA(ANXA1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染效果;细胞转染后培养48 h,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、STAT3、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)蛋白表达.结果 ANXA1基因在胆囊癌中的阳性表达率显著高于癌旁组织(69.0%比7.5%,χ2=43.261,P<0.01);ANXA1在胆囊癌中的表达与性别和年龄不相关(P>0.05),与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴转移显著相关(P<0.01).siRNA-NC组中ANXA1、Cleaved caspase3、STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);ANXA1-siRNA组ANXA1蛋白表达、细胞存活率及p-STAT3蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),STAT3蛋白表达在三个组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 ANXA1基因的表达参与了胆囊癌的生长、分化和迁移过程,下调ANXA1的表达能抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖,并通过下调Cleaved caspase3蛋白促进细胞凋亡,其机制与STAT3信号通路的调控有关.     

Bel-2和P53在放射性粒子近距离治疗脑胶质瘤中的作用和意义

目的 本文旨在通过观察^125I粒子近距离放射治疗SHG-44细胞增殖抑制及相关基因蛋白的变化来探讨其可能的作用机制。方法 体外培养的SHG-44细胞达到一定指数后，经0，1，2，3粒^125I粒子近距离放射治疗诱导处理组细胞，观察不同天数、不同粒数的^125I粒子对细胞增殖抑制的情况以及免疫组化法标记经0、1、3粒^125I粒子处理3天的SHG-44人胶质瘤细胞的Bcl-2和P53基因产物的变化。结果 ^125I粒子作用于体外培养的SHG44胶质瘤细胞，产生了剂量、时间依赖性的增殖抑制作用且Bcl-2蛋白表达明显减弱、P53蛋白表达明显增强。结论 ^125I粒子对体外培养的SHG44胶质瘤细胞，产生了剂量、时间依赖性的增殖抑制作用，这种作用是通过Bcl-2蛋白低表P53蛋白高表达来实现的。     

三苯氧胺对人胶质瘤细胞的生长抑制作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂三苯氧胺对人胶质瘤细胞SHG-44生长抑制作用.方法 SHG-44细胞中PKCα和雌激素受体(ER)的表达用免疫组化,细胞活性分析用台盼兰实验和四唑盐(MTT)比色实验,细胞增殖和凋亡,通过流式细胞术(FCM)进行检测,三苯氧胺作用终浓度为5、2.5、1.25μg/ml;治疗对照为卡氮芥(BCNU),终浓度与三苯氧胺相同.结果 SHG-44细胞中PKCα表达阳性,ER表达阴性.三苯氧胺组与空白对照组相比,细胞衰老、脱落、总数减少;细胞活性下降;G0～G1期细胞比例增加,提示细胞增殖受到抑制;凋亡细胞比例增高.与BCNU组相比,在2.5和1.25μg/ml剂量组中出现G0～G1期细胞比例增加;凋亡细胞比例无统计学差异.结论 三苯氧胺在体外对SHG-44胶质瘤细胞生长具有明显的抑制作用.     

五味子乙素通过ROS介导内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 研究五味子乙素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 用细胞计数试剂(CCK-8)检测不同浓度五味子乙素对MDA-MB-231细胞存活率的影响;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）作用 MDA-MB-231 细胞 24 h,分别用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况;用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;用Western blot法检测细胞凋亡及内质网应激相关蛋白（Bcl-2、Bax、CHOP、GPR78、PERK、p-PERK、p-eIF2α、eIF2）的表达。结果 与空白组比较,随着五味子乙素浓度增大,细胞存活率明显降低,其IC₅₀为19.16 μmol/L;与对照组比较,五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均能抑制细胞克隆形成(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均可诱导细胞凋亡（P<0.05）,使抗凋亡蛋白BCL-2的表达显著降低,促凋亡蛋白Bax的表达显著升高(P<0.05);五味子乙素（10、20、40 μmol/L）显著升高细胞内ROS水平(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）能够激发内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP、GPR78、p-eIF2α表达增多(P<0.05),且呈剂量依赖。结论 五味子乙素可能通过ROS介导内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

神经胶质瘤细胞株H MGA1基因沉默对吉西他滨化疗敏感性的影响

目的探讨神经胶质瘤细胞株SHG-44高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因表达下调后对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用HMGA1 siRNA慢病毒载体及阴性siRNA慢病毒载体分别转染SHG-44细胞。稳定转染HMGA1 siRNA的细胞为阳性组、稳定转染不含HMGA1的细胞为阴性组,未转染的细胞为对照组。RT-PCR和Western blot检测HMGA1 mRNA和蛋白的表达,MTT法和克隆集落形成实验检测吉西他滨对细胞生长、增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果阳性组HMGA1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于阴性组和对照组(P<0.05)。经吉西他滨处理后,MTT表明阳性组细胞生长抑制率显著高于阴性组,阳性组IC50为(0.279±0.013)μg/ml,明显低于阴性组的(0.746±0.020)μg/ml(P<0.05)。克隆形成实验表明阳性组克隆形成率显著低于阴性组(P<0.05),而细胞凋亡率显著高于阴性组(P<0.05)。结论神经胶质瘤细胞SHG-44中HMGA1基因沉默后,显著增强SHG-44细胞对吉西他滨的化疗敏感性。     

苯丁酸钠对SHG-44 胶质细胞瘤株的抗肿瘤作用机制研究

目的观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用的机制是否涉及调节ASIC2的表达。方法体外培养人脑胶质细胞瘤株SHG-44,平皿克隆形成法测定细胞描定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术（Flow cytometry,FCM）分析细胞周期和凋亡率,Hoechst33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态,Western Bloting分析药物对ASIC2蛋白表达的影响。结果平皿集落形成法检测显示苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,且呈浓度依赖性。PI染色FCM结果表明苯丁酸钠以时间和浓度依赖方式对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用。Hoechst33258染色荧光显微镜观察可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,苯丁酸钠处理后凋亡细胞比例增加,且呈时间和浓度依赖性。Western Bloting检测显示苯丁酸钠诱导细胞凋亡的机制涉及上调ASIC2表达。结论苯丁酸钠在体外对人脑胶质细胞瘤株SHG-44具有抑制增值的作用,初步推断苯丁酸钠诱发人脑胶质细胞凋亡与其上调ASIC2表达有关。     

不同浓度米诺环素对人胶质瘤细胞增殖、自噬、凋亡的影响及其机制

摘要：目的 探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤 U87 和 LN229 细胞增殖及凋亡的影响和作用机制。方法 （1）U87和LN229细胞设对照组（DMSO处理），5 μmol/L米诺环素组和10 μmol/L米诺环素组，分组处理72 h 后采用 MTT法检测细胞增殖水平，免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基（LC3B）表达水平，Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化。（2）构建沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）-shRNA载体，观察 敲低SIRT1表达后，不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响。结果 （1）与对照组相比，5 μmol/L和10 μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降，免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多，Western blot结果 显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平显著降低，自噬基因相关蛋白5（Atg5）、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚 基（p-AMPKα）、SIRT1水平显著增加（P＜0.05）。与对照组相比，10 μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷 酸化 p70 核糖体蛋白 S6 激酶（p-p70s6k）水平显著降低，活化形式的 Caspase-3（Cleaved caspase-3）水平显著增加 （P＜0.05），而5 μmol/L米诺环素组除Cleaved Caspase-3表达水平下降外其他凋亡相关蛋白水平未见显著变化（P＞ 0.05）。（2）敲低SIRT1表达后，shSIRT1组mTOR和LC3B表达水平较对照组明显下降；而经过米诺环素处理后，mTOR 的表达出现明显升高，而LC3B表达水平仅部分恢复。结论 5、10 μmol/L的米诺环素均能有效抑制人类胶质瘤U87 和LN229细胞的生长，其机制可能与AMPK/SIRT1通路诱导细胞自噬和p70s6k/Bcl-2通路诱导细胞凋亡有关。     

SHG-44细胞体内外实验中KDR mRNA 的表达及意义

目的探讨插入型激酶受体(KDR)mRNA在裸小鼠可移植人脑胶质瘤不同生长阶段与不同组织区域中的表达规律,以及探讨其与肿瘤血管形成的作用关系,以期从肿瘤间质角度为胶质瘤选择治疗靶点提供实验依据.方法利用恶性人脑胶质瘤SHG-44细胞进行裸小鼠体内实验:在30只裸小鼠(10组)皮下建立SHG-44细胞移植瘤动物模型,每5天取一组标本,以KDR mRNA原位分子杂交技术处理移植瘤石蜡标本.同时在体外进行SHG-44细胞原位杂交,所得结果和移植瘤比较分析.结果 KDR mRNA高表达于移植瘤中内皮细胞和部分瘤细胞,且在移植的早期(5-15d)和晚期(35-50d)以及在缺氧瘤组织区域上存在相对高表达.体外SHG-44细胞不表达KDR mRNA.结论 KDR mRNA在移植性人脑胶质瘤细胞中有较高表达,在不同的生长阶段和不同的瘤组织区域上存在差异表达的规律性,对肿瘤血管形成具有重要作用.KDR可作为抗胶质瘤血管形成的治疗靶点.     

蓝萼乙素通过NF-κB信号通路调控舌鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

摘要：目的:探讨蓝萼乙素调控舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:体外培养人TSCC细胞SCC15,使用不同浓度的(3,6,12μmol·L-1)蓝萼乙素处理24 h。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蓝萼乙素对核因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白[磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-IκBα）、磷酸化p65（p-p65）、p65、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）]表达的影响; NF-κB信号通路的激活剂脂多糖（LPS）预处理SCC15细胞后,MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖能力及细胞凋亡率; Western blot法检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3总蛋白（T-caspase-3）的蛋白水平。结果:与空白组相比,蓝萼乙素不同浓度组细胞增殖率显著降低,CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-IκBα、p-p65蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）;与蓝萼乙素高浓度+PBS组相比,蓝萼乙素高浓度+LPS组细胞增殖率显著升高,CyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:蓝萼乙素能够抑制TSCC细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化而发挥作用。     

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者（低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例）和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照（NC）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照（si-OIP5-AS1+anti-NC）组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂（si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p）组,采用Lipofectamine 30...     

蛋白酶体抑制剂MG-132通过JNK信号通路对人脑胶质瘤细胞SHG-44内质网应激相关机制的探讨

目的探讨MG-132通过内质网应激途径在诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡中的作用。选择内质网应激凋亡信号转导通路JNK,使用JNK特异阻断剂SP600125,观察MG-132通过JNK信号通路诱导胶质瘤细胞凋亡过程中凋亡指标的变化。方法传代法培养人脑胶质瘤细胞。选择浓度为5、10、15、50μmol/L的MG-132,分别作用于实验组,用噻唑噻(MTT)法筛选半数有效浓度后进行实验。实验分为5组:正常对照组、二硫苏糖醇(DTT)组、MG-132组、SP600125组、MG-132+SP600125组。试剂干预终止后,应用流式细胞仪和DNALadder评估肿瘤细胞凋亡,以聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测内质网应激指标GRP78、JNK。结果5μmol/L为筛选的最佳抑制浓度,SHG-44细胞活力下降达39%(P<0.05)。MG-132干预后,与对照组比较,DNA电泳呈凋亡特征(梯状条带),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),GRP78m RNA表达明显增加(P<0.05)。但给予DTT后,与MG-132组表现一致,差异无统计学意义(P>0.05)。SP600125+MG-132较DTT和MG-132组有所减低,但不如单独SP600125组降低明显(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示,与对照组比较,MG-132组和DTT组内质网应激指标GRP78、JNK表达明显增加(P<0.05),SP600125+MG-132组表达有所减低,但不如单独给予SP600125组明显(P<0.05)。结论内质网应激是MG-132诱导胶质瘤细胞凋亡的主要途径之一,JNK通路抑制剂SP600125可以部分阻断内质网应激,即JNK信号通路为MG-132发挥凋亡作用的途径之一。     

多巴胺下调 XIAP表达促进胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

摘 要 目的：探究多巴胺（DA）通过下调X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法: DA处理胶质瘤U251细胞,Cell Counting Kit 8（CCK 8）法检测细胞增殖情况;线粒体膜电位（MMP）检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量多聚酶链式反应（qRT PCR）和蛋白免疫印迹检测XIAP、B淋巴细胞瘤 2基因（BCL2）、Bcl 2相关X蛋白（BAX）、生存素（survivin）、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved caspase3）表达情况。 结果: 与U251组相比,U251+100 μmol·L-1DA组、U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低（P＜0.05）。与U251+25 μmol·L-1DA组相比,U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低（P＜0.05）。与U251+50 μmol·L-1DA组相比, U251+100 μmol·L-1 DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均显著升高（P＜0.05）,红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均显著降低（P＜0.05）。 结论: DA可能通过下调XIAP表达,从而促进胶质瘤U251细胞凋亡。     

五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制研究

目的研究五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制。方法采用不同浓度的五味子乙素分别处理细胞24、48、72 h后,观察牙髓细胞形态并用波形蛋白染色和角蛋白染色鉴定细胞,检测细胞增殖率和细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测牙髓细胞中碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、丝氨酸蛋白酶(HtrA1)、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测牙髓细胞中局部黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)的表达。结果化学染色鉴定结果发现,传代后的细胞波形蛋白染色结果显示阳性,角蛋白染色结果显示阴性,说明此细胞来源于中胚层,具有牙髓细胞的生物学特性;随着五味子乙素浓度的增加牙髓细胞的增殖率呈现上升趋势(P<0.01),而牙髓细胞凋亡率明显下降(P<0.01),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度五味子乙素处理牙髓细胞后,细胞中的ALP、DSPP、TGF-β1 mRNA相对表达量以及FAK、ERK、AKT的表达均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论五味子乙素可以促进牙髓细胞增殖并抑制其凋亡,这一效应可能是通过FAK、ERK、AKT信号通路实现的。     

基于Notch信号通路探讨β-榄香烯逆转肺腺癌耐药机制的研究

目的基于Notch信号通路,探讨β-榄香烯逆转肺腺癌耐药的机制。方法选择对A549/DDP细胞无细胞毒性的β-榄香烯浓度处理A549/DDP细胞,设β-榄香烯组与对照组,两组细胞均给予不同浓度的DDP(0.25、0.5、1、2、4、8、16、32μg·mL^-1)处理24h,MTT法检测细胞活力并计算IC₅₀,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9)、耐药相关蛋白(P-gp、survivin、p21)及Notch信号通路蛋白(Notch1、Hes1、Hey2)的表达。A549/DDP细胞在β-榄香烯处理的基础上,联合1μg·mL^-1Notch信号通路激活剂rhNF-κB处理,比较两组的IC₅₀,Western blotting检测P-gp以及Notch1、Hes1、Hey2的表达。结果当β-榄香烯浓度低于20μg·mL^-1时,其对A549/DDP细胞的抑制率小于10%,无细胞毒性。β-榄香烯组DDP的IC₅₀显著低于对照组(t=14.712,P<0.05),逆转倍数为4.452倍。β-榄香烯组细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白cleavedcaspase 3和cleaved-caspase 9的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。β-榄香烯组P-gp、survivin蛋白相对表达量低于对照组,而p21蛋白相对表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。β-榄香烯组Notch1、Hes1、Hey2蛋白相对表达量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。β-榄香烯+rhNF-κB组DDP的IC₅₀以及P-gp、Notch1、Hes1、Hey2蛋白表达水平均高于β-榄香烯组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论β-榄香烯可通过抑制Notch信号通路促进A549/DDP细胞凋亡,并逆转肺腺癌耐药。     

CXCR4拮抗剂对三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

摘 要 目的：探讨趋化因子基质细胞衍生因子 1受体（CXCR4）拮抗剂（AMD3100）对三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞增殖和凋亡的影响及机制。 方法: 设MCF10A细胞组、三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞组、氟尿嘧啶组(8.0 μg·ml-1)、CXCR4拮抗剂低、高剂量组(4.0,8.0 μg·ml-1),测定各组癌细胞的细胞活力、单克隆形成数目、细胞凋亡率、穿膜孔数,及三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞基质细胞衍生因子1（SDF 1）、CXCR4、半胱氨酸蛋白酶 3（caspase 3）、半胱氨酸蛋白酶 6（caspase 6）、血管内皮生长因子（VEGF ）mRNA、蛋白水平。 结果: 与MCF10A细胞组比较,MDA MB 231细胞组吸光度（A）值、存活率水平、细胞克隆形成数目、穿膜数、SDF 1、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、caspase 3、caspase 6 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与MDA MB 231细胞组比较,氟尿嘧啶组、CXCR4拮抗剂低、高剂量组的A值、存活率水平、细胞克隆形成数目、穿膜数、SDF 1、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、caspase 3、caspase 6 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与氟尿嘧啶组比较,CXCR4拮抗剂低剂量组的A值、存活率水平、细胞克隆形成数目、穿膜数、SDF 1、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、caspase 3、caspase 6 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;CXCR4拮抗剂高剂量组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论: AMD3100能抑制三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞增殖、侵袭,诱导其凋亡;其机制与AMD3100能特异性阻断三阴性乳腺癌MDA MB 231细胞 SDF 1、CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平,导致其SDF 1/CXCR4信号传导受阻有关。     

五味子乙素抑制视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的分子机制研究

摘要：目的:研究五味子乙素对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及其对共济失调毛细血管扩张突变基因（ATM）/转录因子E2F1信号通路的作用。方法:体外培养Y79细胞,ATM inhibitor质粒和ATM mimics质粒转染Y79细胞进行ATM沉默或过表达,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定细胞活力和增殖情况,流式细胞仪分析Y79细胞凋亡及周期分布,划痕实验检测Y79细胞迁移,Transwell实验分析细胞侵袭,Western Blotting实验检测Y79细胞中细胞周期蛋白（cyclin D1、cyclin B1和CDK2）、抑癌基因周期蛋白依赖性激酶抑制4b（INK4b）、INK4a、肿瘤抑制蛋白ARF、人体抑癌基因p53、人视网膜母细胞抑制蛋白pRB、ATM及E2F1蛋白表达。结果:五味子乙素呈浓度依赖性抑制Y79细胞活力、克隆、迁移及侵袭,将Y79细胞阻滞在G0/G1期,诱导其凋亡;另外,五味子乙素显著诱导INK4b、INK4a、ARF、p53、pRB、ATM及E2F1蛋白表达,显著抑制cyclin D1、cyclin B1及CDK2蛋白水平（P<0.05）; ATM沉默能部分降低五味子乙素对Y79细胞生物学行为的抑制作用。结论:五味子乙素通过激活ATM/E2F1信号传导,进而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖,提示ATM/E2F1信号通路可能是视网膜母细胞瘤治疗的新靶标。