miR-9通过Wnt/β-catenin信号通路调控甲状腺癌细胞侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨miR-9对甲状腺癌细胞侵袭和迁移影响及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-9在正常甲状腺上皮细胞系Nthyori3-1和人甲状腺癌细胞系TPC-1、MDA-T32及SW579中的表达情况,采用脂质体转染技术将miR-9 mim...     

TBL1XR1通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨转导蛋白（β）样1 X连锁受体1（TBL1XR1）通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的机制。方法 使用基因表达谱交互分析工具（GEPIA 2.0）、免疫组化和Western blotting评估TBL1XR1在卵巢癌和正常卵巢组织中的差异表达;评估TCGA数据库中TBL1XR1与卵巢癌患者总生存期的相关性,对TBL1XR1高、低表达组之间的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析;分别采用伤口愈合实验、Transwell基质胶侵袭实验检测TBL1XR1对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测敲低或过表达TBL1XR1后Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平的变化;TOP/FOP荧光素酶报告基因检测TBL1XR1对Wnt/β-catenin信号通路活性变化的影响。结果 卵巢癌组织中TBL1XR1表达水平高于正常卵巢组织,低表达组卵巢癌患者总生存期长于高表达组;GO和KEGG分析结果提示,TBL1XR1的生物学功能与激素转运、激素分泌、激素分泌的调节及肽转运、神经活性配体-受体相互作用相关;敲低TBL1XR1可显著抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭,且Wnt3a能逆转这一效应,过表达TBL1XR1可显著提高卵巢癌细胞迁移和侵袭能力;下调TBL1XR1表达可显著降低Wnt/β-catenin信号通路的活性及蛋白表达水平。结论 TBL1XR1在卵巢癌中高表达且与卵巢癌患者不良预后相关,TBL1XR1能够通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,可能作为促癌因子在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的研究

目地探讨白藜芦醇抗肿瘤活性的作用机制。方法本研究使用白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HCT116后,通过细胞生长实验和MTT增殖实验来探讨其对HCT116细胞生长、增殖的影响;通过免疫印迹实验检测β-catenin的表达水平和Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达,检测白藜芦醇对Wnt信号通路活化的影响。结果白藜芦醇能显著抑制HCT116的生长增殖,降低β-catenin的表达水平,抑制Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达。结论白藜芦醇通过抑制Wnt信号通路从而抑制肿瘤生长,本研究为白藜芦醇抗肿瘤机制提供了新的思路和方向。     

曲古抑菌素诱导HepG2细胞凋亡中Wnt/β-catenin信号转导通路的作用

目的研究Wnt/β-catenin信号通路在曲古抑菌素(TSA)诱导Hep G2细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期Hep G2细胞,设不同质量浓度药物诱导组,同时设空白对照组,用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Western Bolt法检测Hep G2细胞β-catenin的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,曲古抑菌素对肝癌Hep G2有明显的增殖抑制作用并呈浓度和剂量依耐性;流式细胞术细胞周期检测结果显示,药物组G0/G1期细胞数量明显增多(P<0.05),(G2+M)和S期细胞数量明显减少(P<0.05),提示曲古抑菌素可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡检测结果显示,空白对照组凋亡率为(3.82±0.23)%,250 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(23.00±0.65)%,500 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(37.85±0.87)%,提示TSA具有促进Hep G2细胞凋亡的作用,且呈浓度依赖性;Western Bolt检测结果显示β-catenin表达水平均明显升高。结论曲古抑菌素有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,Wnt/β-catenin信号通路在此过程中起重要作用。     

Wnt信号通路与肿瘤干细胞耐药

肿瘤细胞对化疗药物产生交叉耐药性,是造成肿瘤患者化疗失败的主要原因之一。肿瘤细胞具有异质性,即在同一肿瘤细胞中存在不同基因型或亚型的细胞。在化疗过程中,药物杀死对药物敏感的肿瘤细胞,而有一部分肿瘤细胞则表现出较强的耐药性,不能被化疗药物杀伤。肿瘤干细胞(Cancer stem cells,CSCs)的发现,为肿瘤耐药现象的研究提供了新的思路。CSCs是指肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞,其具有自我更新,多向分化,DNA修复以及耐药等特征。Wnt信号通路是调控肿瘤干细胞自我更新和分化的关键信号途径,该通路的激活在多种肿瘤的发生、发展和耐药过程中发挥重要作用。对Wnt信号通路的研究有助于揭示肿瘤干细胞耐药的机制,并有望成为治疗恶性肿瘤的一个新靶点。该综述重点阐述了Wnt信号通路在肿瘤干细胞介导的耐药过程中的研究进展。     

阻断Wnt信号通路对人绒毛膜癌细胞株JEG-3迁移及侵袭能力的影响

目的 观察阻断Wnt信号通路后,人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 将人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞传代后,按完全随机法分为实验组和对照组,每组6孔。实验组在常规细胞培养基础上,给予外源性Wnt信号通路阻断剂DKK-1（100 ng/mL）,对照组加入同体积细胞培养基。运用蛋白印迹法（Western blot法）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测两组细胞中β-catenin、Wnt、E-cadherin、Vimentin等蛋白及mRNA的表达;采用划痕实验、Transwell实验观测两组细胞迁移及侵袭能力的变化。结果 与对照组相比,实验组β-catenin、Wnt、Vimentin蛋白及mRNA的表达均降低,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增高,差异均有统计学意义（P<0.05）;实验组肿瘤细胞迁移及穿膜细胞数较对照组均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 阻断Wnt信号通路可抑制肿瘤细胞上皮-间充质转化过程,进而降低人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞的迁移及侵袭能力。     

巴西苏木素通过激活Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的研究

目的 探讨巴西苏木素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白组及低、中、高剂量实验组和联合组。低、中、高剂量实验组分别用20、30和40μmol·L^-1巴西苏木素处理细胞,联合组用40μmol·L^-1巴西苏木素和10 ng·mL^-1 DKK1共同处理细胞,空白组给予常规培养。用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用细胞划痕、Transwell小室实验分别检测细胞的迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达水平。结果 中、高剂量实验组和空白组的凋亡率分别为(15.24±1.20)%、(25.13±1.46)%和(3.26±0.78)%,划痕愈合率分别为(20.55±3.16)%、(9.58±1.92)%和(45.76±2.24)%,侵袭细胞数分别为(100.00±4.00)、(44.66±10.44)和(207.66±15.11)个,Bax蛋白相对表达水平...     

Wnt/β-catenin信号通路在复发性流产的研究现状

复发性流产是育龄期女性的常见疾病,严重影响女性的生活情况及家庭幸福。复发性流产是临床常见病、疑难病,病因至今仍不明确。Wnt/β-catenin信号通路是最经典的Wnt信号通路,参与众多的生命活动与进程,能够影响细胞的增殖、迁移、侵袭等行为,众多研究表明Wnt/β-catenin信号通路参与了复发性流产的发病。本文主要从滋养细胞的增殖、侵袭和侵袭、胎盘的血管生成及子宫内膜的蜕膜化对Wnt/β-catenin信号通路在复发性流产的发病机制进行综述。     

基于Wnt/β-catenin信号对胡椒碱抗肿瘤作用机制的研究

目的 研究小剂量胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27增殖及侵袭的机制。方法 体外培养人胃癌HGC-27细胞,设置梯度浓度的胡椒碱,CCK-8法检测24 h细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为正常组（HGC-27）细胞、对照组（Wnt/β-catenin抑制剂组）、实验组（小剂量胡椒碱）。CCK-8法检测12,24,48 h细胞的活力,BrdU标记流式细胞术检测细胞增殖率、划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western-blot法检测Wnt/β-catenin信号分子的表达以及MMP2、MMP9和N-cadherin的表达水平,RT-qPCR检测β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平。结果 5 μmol·L^-1的胡椒碱可以抑制细胞的增殖但无明显细胞毒性,可以显著降低HGC-27细胞的增殖能力,且具有时间依赖性,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。划痕试验和Transwell小室试验结果显示,5 μmol·L^-1的胡椒碱可以降低HGC-27细胞的迁移能力和侵袭能力,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。胡椒碱可以显著下调Wnt/β-catenin信号分子的表达,以及关键蛋白MMP2、MMP9、N-cadherin的表达水平,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平相比正常组显著下调（P<0.05）。结论 小剂量的胡椒碱可以通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27的增殖及侵袭,可能是胡椒碱抗肿瘤的作用机制之一。     

基于Wnt/β-联蛋白信号通路探究胃息肉形成的分子机制

目的 从Wnt/β-联蛋白(catenin)信号通路探究胃息肉形成的分子机制.方法 收集山西省中医药研究院经消化内镜和组织病理检查诊断为胃息肉的患者40例,其中炎性、增生性、胃底腺、腺瘤性息肉各10例,应用免疫组织化学技术测定胃息肉和息肉旁边正常胃黏膜组织中的Wnt1、β-catenin、cyclin D1的表达情况....     

小白菊内脂通过wnt/β-catenin影响胃癌细胞侵袭、迁移、凋亡的机制研究

目的 研究小白菊内酯对胃癌细胞的侵袭、迁移和凋亡的影响.方法 采用终浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的小白菊内酯处理胃癌细胞SGC-7901、SNU-1作为不同浓度小白菊内酯处理组,以0μmol/L小白菊内酯处理的SGC-7901、SNU-1细胞作对照(control)组;用...     

Wnt信号通路在肿瘤调控方面的研究进展

Wnt信号通路是一条进化上十分保守的信号通路,控制着细胞的生长、分化、凋亡和自我更新。在肿瘤的发生发展中,该通路常常异常激活,并能够和其他信号通路协同或拮抗调节肿瘤的增殖、迁移和侵袭。该文主要对Wnt信号通路的研究进展及其在各类肿瘤生长调控中的作用进行简要综述。     

基于Wnt/β-catenin信号通路的中医药防治骨质疏松症研究进展

目的 为中医药防治骨质疏松症提供参考。方法 以“Wnt/β-catenin信号通路”“骨质疏松症”“中医药”为关键词,检索国内外数据库中相关文献,分别探讨骨质疏松症的发病机制、Wnt/β-catenin信号通路与骨质疏松症的关系及中医药基于Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松症的研究进展。结果 Wnt/β-catenin信号通路与骨质疏松症的发生密切相关。现阶段关于中医药防治骨质疏松症的研究较广泛,组方中应用频次较高的中药包括熟地黄、淫羊藿、黄芪、骨碎补、补骨脂,其中大部分被证实可通过调控Wnt信号通路或下游靶基因表达促进骨形成和骨矿化。结论 以Wnt/β-catenin信号通路为切入点研究骨质疏松症的防治,可为该病的中医药治疗和中药研发提供一定的理论依据。     

阿魏酸对脂多糖诱导的OA软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨阿魏酸(Ferulic acid,FA)对脂多糖(LPS)诱导的OA软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法于4月龄新西兰大白兔膝软骨提取软骨细胞,体外培养后分为4组,空白对照组、OA模型组、OA+FA低剂量组和OA+FA高剂量组,将2μg/ml的LPS加入培养基中培养软骨细胞,构建OA软骨细胞模型,对照组加入等体积的细胞培养液,选取合适的阿魏酸浓度,确定低剂量组和高剂量组,低剂量组和高剂量组则分别加入5μmol/ml、20μmol/ml的阿魏酸进行共培养,甲苯胺蓝染色观察正常软骨细胞形态,qRT-PCR法检测4组软骨细胞Ⅱ型胶原基因的表达(COL2)、软骨细胞基质金属蛋白(MMP-13)基因的表达,CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,Western blot检测Wnt2、GSK-3β、β-catenin、COL2、MMP-13、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞,软骨细胞在显微镜下呈现形态不规则、梭形透光度良好的多层细胞,细胞核红染,呈球形;qRT-PCR和Western blot结果显示OA模型组COL2基因和蛋白的表达量显著低于空白组...     

Wnt/β-catenin信号通路抑制剂的抗肿瘤研究进展

Wnt信号通路广泛存在于多细胞真核生物中,并且高度保守,在胚胎发育过程中起到重要作用。大量研究表明,Wnt信号通路的异常激活与肿瘤的发生发展密切相关,其在多种恶性肿瘤的增殖、分化、凋亡、迁移、侵袭、上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)及肿瘤干细胞特性中发挥重要作用,因此开发靶向Wnt信号通路的抗肿瘤药物具有重要意义。目前,Wnt信号通路抑制剂的研究已取得一定进展。本文主要对近年来Wnt途径中关键成员Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展作一综述。     

lncRNA PVT1通过miR-1207-5p靶向调控Wnt6/β-catenin2信号通路对高级别浆液性卵巢癌的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）PTV1对高级别浆液性卵巢癌增殖和迁移能力的影响。方法 收集61例高级别浆液性卵巢癌患者的癌组织及相应癌旁正常组织,qRT-PCR检测miR-1207-5p、lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌组织、癌旁正常组织及不同细胞系中的表达情况。构建lncRNA PVT1沉默细胞系,分为Ovcar3-siPVT1组、Ovcar3-siNC组、NC组。采用MTT和平板克隆实验、Transwell和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移;双荧光素酶报告基因检测验证miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6的靶向关系,StarBase和TargetScan网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;Western blotting检测Wnt6/β-catenin2信号通路相关蛋白的表达。构建siPVT1+过表达miR-1207-5p、siPVT1+过表达Wnt6细胞系,以siPVT1+siNC为对照,验证lncRNA PVT1的调控作用。结果 qRT-PCR结果显示,高级别浆液性卵巢癌组织中lncRNA PVT1的表达水平显著高于正常癌旁组织（P<0.05）。与NC组和Ovcar3-siNC组相比,Ovcar3-siPVT1组中lncRNA PVT1的表达显著下调,细胞克隆数、侵袭数减少,细胞迁移率降低,Wnt6、β-catenin2蛋白表达水平明显下降,差异均具有统计学意义（P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测结果证明miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6具有靶向关系。经StartBase和TargetScan网站预测分析,miR-1207-5p分别与lncRNA PVT1、Wnt6存在靶向结合位点。与siPVT1+NC组相比,siPVT1+过表达miR-1207-5p组和siPVT1+过表达Wnt6组细胞克隆数和迁移数明显增加（P<0.05）。结论 lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌中高表达。高表达lncRNA PVT1可能通过上调miR-1207-5p表达增强Wnt6/β-catenin2信号通路的活性,从而促进高级别浆液性卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

Wnt/β-catenin信号通路在急性肾损伤及慢性肾脏病中的作用

目的 Wnt信号通路参与生物胚胎发育、器官形成、组织再生等多种生理过程,是生物进化过程中高度保守的信号通路.在病理情况下,Wnt信号通路异常激活,参与多种疾病的病理过程并发挥不同作用.在急性肾损伤中,Wnt信号通路被激活,发挥肾脏保护作用,而在慢性肾脏疾病,Wnt信号通路可以促进肾脏纤维化及肾功能恶化的发生.本文就经典的wnt/β-catenin信号通路在急性肾损伤及慢性肾脏病中异常激活,发挥的不同作用及其机制进行综述.     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞增殖并可促进细胞凋亡的作用机制。方法:大鼠肝星状细胞体外培养,分别用含梯度质量浓度(0,1,5,12.5,25,37.5μg·ml-1)青蒿琥酯的培养基培养24 h。采用Western blot方法检测青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞HSC-T6内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测随着药物浓度的变化在RNA水平上的变化。结果:0~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯作用大鼠肝星状细胞24 h后蛋白β-catenin和GSK-3β(ser9)逐渐降低(P<0.05)并且有一定的剂量相关性,而GSK-3β逐渐升高(P<0.05)。实时定量PCR结果提示,1~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯能抑制β-catenin的表达,且呈剂量相关性。但是GSK-3β在低剂量青蒿琥酯(1~12.5μg·ml-1)的时候并无明显变化(P>0.05),在高剂量青蒿琥酯(12.5~37.5μg·ml-1)抑制GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Wnt信号通路在神经病理性疼痛中的作用及机制研究进展

神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)作为一种慢性疼痛综合征,严重危害患者生活质量,且发病机制复杂,临床疗法有限,极易复发。越来越多的报道发现Wnt信号通路与神经病理性疼痛的发生和发展密切相关。因此,对Wnt信号通路的进一步研究可能为探索NP的发病机制及发现有效治疗手段提供新思路。本文就Wnt信号通路在神经病理性疼痛中的作用及机制进行综述。