黄芪六一汤对2型糖尿病大鼠降糖作用的机制研究

目的:探讨黄芪六一汤对糖尿病大鼠的降糖作用及其机制。方法:采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、达格列净阳性对照组及黄芪六一汤低、中、高剂量组。实验期间每周称体质量,尾静脉采血测量空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)和钠-葡萄糖转运蛋白(SGLT2)的表达;荧光定量PCR分别检测GLUT2、SGLT2 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、糖化血红蛋白水平及SGLT2、GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪六一汤各组糖化血红蛋白、SGLT2蛋白表达均显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。黄芪六一汤对模型大鼠体质量及GLUT2、SGLT2 mRNA表达无明显影响。结论:黄芪六一汤对高脂高糖饲养合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠具有降糖作用,治疗效果与达格列净相似,其作用机制与抑制SGLT2蛋白功能有关。     

代谢综合征患者中医体质分析

目的探讨黄芪对脾虚证大鼠模型小肠黏膜葡萄糖吸收功能的影响及其作用机制。方法采用皮下连续注射利血平注射液(0.5 mg·kg~(-1))14 d建立脾虚证大鼠模型。大鼠随机分为正常组、造模组,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪组(6.0 g·kg~(-1)),连续给药21 d。每日记录大鼠体质量;分别于造模结束和给药结束后收集大鼠尿液,采用硫酸苯酚法测定尿D-木糖排泄率;采用大鼠在体空肠灌流实验及葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖吸收量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)的蛋白表达;荧光定量PCR法测定SGLT1/GLUT2的m RNA表达。结果与正常组比较,造模组大鼠体质量及模型组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,黄芪组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显提高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论黄芪能够改善利血平致脾虚证大鼠小肠对葡萄糖的吸收功能,其机制可能与调节SGLT1/GLUT2的蛋白表达有关。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白5 表达的影响

目的：观察脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、葡萄糖转运蛋白5（GLUT5）mRNA与蛋白表达的变化,以及滋补脾阴方药（ZBPYR）的干预作用。方法：利用饮食失常兼过劳结合燥热耗伤阴液法进行脾阴虚大鼠模型的复制,将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、脾阴虚组和滋补脾阴方药组。使用实时荧光定量PCR（qPCR）法测定空肠GLUT1、GLUT5的mRNA表达,蛋白质印迹（Western Blot）法测定空肠GLUT1、GLUT5的蛋白表达。结果：与正常组比较,脾阴虚组GLUT1、GLUT5的mRNA和蛋白表达量均下降（P<0.05）;与脾阴虚组比较,滋补脾阴方药组能够明显上调GLUT1、GLUT5的mRNA表达水平（P<0.01）,并增加GLUT1、GLUT5蛋白的表达含量（P<0.05）。结论：通过上调脾阴虚大鼠空肠GLUT1、GLUT5 mRNA和蛋白的表达,可能是ZBPYR对脾阴虚证发挥干预作用的机制之一。     

黄芪提取物对结肠腺癌Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响

目的:探讨黄芪提取物对Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响,并探讨其作用机制。方法:采用系统溶剂法提取黄芪各部位,以Caco-2细胞为研究对象,设立空白组和黄芪各提取部位组(乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇4个部位组)。以荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)做为光学探针检测黄芪各提取部位对Caco-2细胞葡萄糖吸收能力的影响。筛选出黄芪中促进Caco-2细胞葡萄糖吸收的药效部位后,对这一药效部位有效作用浓度进行考察。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定Caco-2细胞钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)蛋白表达。结果:黄芪正丁醇提取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,与空白组比较,黄芪正丁醇提取部位100,150 mg·L-1组Caco-2细胞葡萄糖含量升高(P0.05,P0.01);且黄芪正丁醇部位可以上调Caco-2细胞GLUT2和SGLT1蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:黄芪正丁醇萃取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,这一作用机制可能与SGLT1和GLUT2蛋白的调节有关。     

四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能作用的影响

目的 观察四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能的影响。方法 通过颈部皮下注射利血平建立脾气虚证大鼠模型,观察大鼠体重及尿D-木糖排泄率变化,通过在体空肠灌流收集并检测葡萄糖吸收量,收集小肠黏膜,检测葡萄糖运载蛋白2（GLUT2）蛋白及mRNA表达变化。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率均降低,同时伴有葡萄糖吸收的下降以及GLUT2蛋白及mRNA表达的降低,通过给予四君子汤治疗,四君子汤组在各指标恢复上均优于自然恢复组。结论 四君子汤能够促进利血平致脾气虚证模型大鼠小肠吸收葡萄糖功能恢复。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路影响的研究

目的：探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法：以“大黄 利血平 控制饮食”多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,观察大鼠造模及给药后泄泻指数及肠粘膜Na -K ATP酶的变化,采用western blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3（NHE3）、P38MAPK、p- P38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、AKT2、p-AKT2、EZRIN、p-EZRIN蛋白的表达。结果：补中益气汤给药后腹泻指数有不同程度的的下降,以补中益气汤中、高剂量组较为明显（P<0.01或P<0.05）,脾虚泄泻大鼠小肠粘膜Na -K ATP酶活性与正常对照组比较显著降低（P<0.01）,而补中益气汤有提高Na -K ATP酶活性的作用。脾虚泄泻大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、 P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量较正常组减低（P<0.01）,经补中益气汤治疗后SGLT1、GLUT2、NHE3及P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量均有所提高（P<0.01或P<0.05）。结论：补中益气汤可能通过提高SGLT1蛋白的表达,促进P38 MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,进而促进包浆内NHE3募集到顶端膜,从而增加水钠的吸收,这可能是补中益气汤治疗腹泻的机理之一。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖吸收相关转运体的影响

目的:探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖相关转运体表达的影响。方法:以"大黄+利血平+控制饮食"多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,采用HE染色观察大鼠小肠黏膜组织病理学改变,并检测大鼠体质量、尿D-木糖排泄率及小肠葡萄糖吸收量,采用荧光定量RT-PCR检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3(NHE3)mRNA的表达。结果:脾虚泄泻大鼠小肠绒毛部分损伤,表面上皮缺失,补中益气汤可促进小肠黏膜的修复;与正常对照组比较,造模后大鼠尿D-木糖排泄率和葡萄糖吸收量显著降低(P0.05或P0.01);经补中益气汤治疗后尿D-木糖排泄率及葡萄糖吸收量升高。模型组大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均显著低于正常对照组(P0.01);给予补中益气汤后SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均不同程度提高,其中以高剂量组作用最佳(P0.05或P0.01)。结论:补中益气汤可促进脾虚泄泻大鼠小肠黏膜损伤的修复,上调SGLT1、GLUT2、NHE3mRNA表达,从而促进葡萄糖及水、钠的吸收。     

知柏地黄汤通过下调钠-葡萄糖共转运蛋白2保护2型糖尿病大鼠肾脏功能

目的?观察知柏地黄汤对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾脏病变的作用及其对大鼠肾脏钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT2）表达的影响。方法? 应用高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立T2DM大鼠模型，将成模大鼠随机分为模型组、达格列净组（DAPA组）和知柏地黄汤组（ZBDH组），并设立正常对照组，每组8只。DAPA组给予达格列净10 mg/（kg·d）灌胃，ZBDH组给予知柏地黄汤5.2 g生药/（ kg·d）灌胃，正常对照组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃，持续治疗12周，每周称重1次，根据体重变化调整给药剂量。于第12周，将各组大鼠放代谢笼中，检测24 h尿量、尿白蛋白排泄率（UAER）、尿糖（UG）、尿白蛋白/尿肌酐比值（ACR）。12周末处死大鼠，检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙氨酸转移酶（ALT）、天冬氨酸转移酶（AST）；HE、PAS、Masson染色观察大鼠肾脏病理变化；免疫组织化学法观察大鼠肾小管上皮SGLT2的表达；Western Blot法检测肾脏组织SGLT2蛋白表达。结果?模型组大鼠肾脏病理结果显示肾小球体积增大，系膜基质增生，基底膜增厚。给药组大鼠的肾脏病理改善。与正常对照组比较，模型组大鼠FBG、TG、TC、ALT、AST、ACR、UAER、UG水平升高，大鼠肾小管上皮细胞SGLT2表达及肾组织SGLT2蛋白表达增强（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，DAPA和ZBDH组大鼠FBG、TG、UAER、ACR，ALT、AST水平下降，大鼠肾小管上皮SGLT2表达减弱，肾组织SGLT2蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01）。结论?达格列净和知柏地黄汤均能改善T2DM糖脂代谢、肾功能和肾脏的病理改变。知柏地黄汤对糖尿病肾病的干预作用与抑制SGLT2的表达有关。     

温阳药对糖尿病前期大鼠降糖作用的研究

目的 研究温阳药对糖尿病前期大鼠的降糖作用机制。方法 制备高糖高脂饮食诱导糖尿病前期肥胖大鼠模型,动物随机分为8组:正常对照组、模型组、阳性对照药(二甲双胍)组、阴性复方组(无温阳及补肾药对)、补肾阳药对组、补肾阳复方组、温阳药对组、温阳复方组。模型复制后开始给药,每天1次,连续8周。实验结束后采用Western bolt法检测肝脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、肌肉葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平。结果 与模型组比较,温阳复方组能减轻大鼠体质量、降低肥胖指数(Lee’s Index)、抑制血糖升高(P＜0.01,P＜0.05),还能明显上调大鼠肝脏GLUT2及骨骼肌GLUT4的表达水平(P＜0.01)。结论 温阳药的降糖作用可能与改善GLUT2及GLUT4的表达抑制有关。     

水蛭素对高尿酸血症大鼠尿酸盐转运体OAT1、URAT1、GLUT9表达的影响

目的 探究水蛭素对高尿酸血症大鼠的作用及机制。方法 雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、别嘌醇（30 mg/kg）组和水蛭素低、中、高剂量（0.2、0.4、0.8 g/kg）组。大鼠ig氧嗪酸钾（0.75 g/kg）,1次/d,连续5周,建立高尿酸血症模型;同时各给药组分别ig相应剂量的药物,1次/d,连续5周。采用生化法检测大鼠血清和尿液中的尿酸水平;免疫组化法测定肾组织中有机阴离子转运蛋白1（organic anion transporter 1,OAT1）水平;Western blotting法测定肾组织中葡萄糖转运体9（glucose transporter 9,GLUT9）、OAT1、尿酸盐转运体1（urate transporter 1,URAT1）蛋白表达;qRT-PCR检测肾组织中GLUT9、OAT1、URAT1 mRNA表达。结果 模型组大鼠血清和尿液中尿酸水平显著升高（P<0.01）,GLUT9、URAT1 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,OAT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,水蛭素可显著降低大鼠血清和尿液中尿酸水平（P<0.01）,显著下调GLUT9、URAT1 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）,显著上调OAT1 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）。结论 水蛭素可通过调控高尿酸血症大鼠肾脏尿酸盐转运体OAT1、URAT1、GLUT9的表达,从而发挥降尿酸作用。     

北五味子油对糖尿病小鼠抗氧化及葡萄糖转运蛋白4mRNA表达的影响

目的：观察北五味子油对糖尿病小鼠抗氧化能力和肌肉组织表达葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA的影响。方法：尾静脉注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型，采用比色法测定血糖、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），以及RT—PCR法测定GLUT4mRNA表达。结果：北五味子油能降低四氧嘧啶小鼠血糖、MDA，增加SOD；增高肌肉组织GLUT4mRNA的表达。结论：北五味子油可以通过升高SOD，清除自由基，减少脂质过氧化，保护胰岛B细胞；同时增加GLUT4转运葡萄糖的能力，使血糖降低。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响

目的探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法采用"大黄+利血平+控制饮食"的多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,连续造模15 d;大鼠随机分为正常组,模型组,补中益气汤低、中、高剂量组(4.67,9.35,18.70 g·kg-1),连续给药15 d;观察并计算大鼠腹泻指数;测定大鼠肠黏膜Na+-K+ATP酶的活性;Western Blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠-氢交换体3(NHE3)、p38MAPK、p-p38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、Akt2、p-Akt2、Ezrin、p-Ezrin蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠小肠黏膜Na~+-K~+ATP酶活性显著降低(P0.01),小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、p-p38MAPK、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著降低(P0.01)。与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组大鼠在第25,30天的腹泻指数明显下降(P0.05,P0.01),补中益气汤高剂量组大鼠小肠黏膜Na~+-K~+ATP酶活性显著提高(P0.05),补中益气汤中、高剂量组的SGLT1、GLUT2蛋白相对表达量及补中益气汤高剂量组的NHE3、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著上调(P0.05,P0.01)。结论通过提高SGLT1蛋白的表达,促进p38MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,可能是补中益气汤治疗脾虚泄泻的机理之一。     

黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降血脂作用机制研究

目的探讨黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降脂作用机制。方法将50 只SD 大鼠随机分为正常组、模 型组、阳性药组（阿托伐他汀钙片,5 mg·kg-1）及黄芪葛根汤低、高剂量组（5、10 g·kg-1）,每组10 只。采用高 脂饲料喂养大鼠复制高脂血症模型,模型复制的同时各给药组按照上述剂量灌胃给药,正常组和模型组给予等 量生理盐水灌胃,每天1 次,连续灌胃20 d。检测大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆 固醇（HDL-c）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平;采用HE 及油红染色观察大鼠肝脏病理变化;采用qPCR 及Western Blot 法检测小肠组织尼曼-匹克C1 型类蛋白1（NPC1L1）、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5（ABCG5） 和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G8（ABCG8）mRNA 及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清 TC、TG、LDL-c 水平及小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,HDL-c 水平 明显降低（P＜0.01）,肝细胞脂肪变性程度和脂滴积聚明显增加。与模型组比较,黄芪葛根汤低剂量组大鼠血 清TC、TG、LDL-c 水平与小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.01,P＜0.05）,ABCG5、 ABCG8 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,肝细胞脂肪变性程度明显降低,脂滴积聚明显减 少。结论黄芪葛根汤对高脂血症大鼠具有明显降血脂作用,能降低肝细胞脂肪变性程度和减少肝细胞脂滴积 聚,可能与其下调小肠组织NPC1L1 的表达以抑制胆固醇的吸收,同时上调小肠组织ABCG5 及ABCG8 的表达 而增加胆固醇的排泄有关。     

电针“足三里”穴对脾气虚大鼠小肠黏膜转运体SGLT1及GLUT2表达的影响

目的:观察电针双侧"足三里"穴对脾气虚模型大鼠小肠黏膜上皮组织内的钠依赖葡萄糖转运体(SGLT1),葡萄糖运载蛋白2(GLUT2)的基因及蛋白表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、脾气虚组、足三里组、非经非穴组,每组10只。所有大鼠均在SPF级动物实验中心饲养。除正常组外,其余3组均采用劳倦过度和不规则饮食复合法建立脾气虚证的大鼠模型。造模成功之后,对足三里组、非经非穴组大鼠分别进行电针"足三里"穴、非经非穴点干预处理7天。采用HE染色方法观察各组大鼠小肠黏膜组织形态变化;采用荧光定量PCR法检测大鼠小肠黏膜上皮的SGLT1和GLUT2的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测大鼠小肠黏膜上皮组织内的SGLT1和GLUT2的蛋白含量变化。结果:脾气虚组大鼠小肠黏膜组织部分损伤,足三里组的小肠黏膜组织有一定程度的恢复;脾气虚组和非经非穴组大鼠小肠黏膜组织内的SGLT1和GLUT2蛋白和基因表达水平均明显低于正常组(P 0. 05);足三里组大鼠小肠黏膜组织内的SGLT1和GLUT2蛋白和基因表达水平相比于脾气虚组有所升高(P 0. 05),非经非穴组未见显著性差异(P 0. 05)。结论:电针"足三里"穴可以调节脾气虚大鼠小肠黏膜上皮组织内的SGLT1和GLUT2基因及蛋白的异常表达,参与小肠对葡萄糖的吸收作用进而改善脾气虚证。     

银杏叶提取物对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌 GLUT4 表达的影响

 目的 观察银杏叶提取物对高脂饮食所诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白 4 （ GLUT4 ）表达的影响,探讨银杏叶提取物改善胰岛素敏感性的分子机制。 方法 采用高脂喂养的方法建立胰岛素抵抗大鼠模型,并给予为期 4 周的不同剂量银杏叶提取物腹腔注射干预,以罗格列酮作为阳性对照。干预后测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素等指标,高胰岛素 - 正常葡萄糖钳夹实验评价银杏叶提取物的胰岛素增敏作用。 Western Blot 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 蛋白水平,实时荧光定量 RT-PCR 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 mRNA 表达。 结果 高脂饮食成功建立胰岛素抵抗大鼠模型,与正常对照组相比,葡萄糖输注率显著下降,空腹血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯升高 ( P<0.01) ,骨骼肌 GLUT4 蛋白水平下降 ( P<0.05) ,骨骼肌 GLUT4 mRNA 下降 ( P<0.01) 。银杏叶提取物干预使葡萄糖输注率增加,并不同程度地降低总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素,同时骨骼肌 GLUT4 表达上调,中、高剂量银杏叶提取物对上述指标的改善更加明显,优于低剂量组。 结论 银杏叶提取物能够改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗状态,其胰岛素增敏机制与增加骨骼肌 GLUT4 的表达有关。     

黄芪六一汤对2型糖尿病模型大鼠肾小管上皮葡萄糖重吸收的作用

目的:观察黄芪六一汤对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、血脂及肾小管上皮钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)的作用,探讨该方治疗糖尿病的疗效及其可能的作用机制。方法:将77只SPF级SD大鼠按体重随机分为6组,分别为正常组,模型组,二甲双胍组(0.15 g·kg~(-1)),黄芪六一汤低、中、高剂量组(3.15,6.30,12.60 g·kg~(-1));糖尿病模型复制方法采用高脂高糖喂养28 d后,40 mg·kg~(-1)体重剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造模。STZ注射后第7天开始分别给予相应治疗药物灌胃,正常组、模型组同法灌胃相应体积的水。连续灌胃给药治疗6周,每周1次,禁食6 h后尾静脉取血测血糖,末次给药后禁食12 h后,给大鼠进行尾静脉取血测血糖,然后麻醉大鼠,腹腔静脉取血,处死动物后留取取肾、胰腺做病理切片苏木素-伊红(HE)染色检查。观察血糖、糖化血红蛋白、血脂四项、体重、进食量、肾组织SGLT2蛋白表达等指标。结果:各造模组的血糖均高于正常组(P0.01),血糖13.0 mmol·L~(-1)。经过6周自行恢复后,模型组血糖仍显著高于正常组(P0.01);二甲双胍组、黄芪六一汤中、高剂量组血糖均明显低于模型组(P0.05)。模型组的糖化血红蛋白升高,高于正常组(P0.01),与模型组比较,二甲双胍、黄芪六一汤高剂量组糖化血红蛋白明显低于模型组(P0.05)。造模组大鼠胰腺病理切片HE染色可见胰岛结构完整,说明本实验中并未造成胰岛的完全破坏。肾脏病理切片可见,各组大鼠肾脏肾小球、集合小管、近端及远端小管的结构完整,未见明显病理损害。各给药组大鼠肾组织SGLT2蛋白表达均有所降低(P0.05,P0.01)。结论:高糖高脂饮食合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠模型肾组织SGLT2蛋白表达增高,黄芪六一汤能降低实验性糖尿病模型大鼠血糖、糖化血红蛋白,有降低模型大鼠肾组织中SGLT2蛋白表达的作用。部分抑制肾小管上皮葡萄糖重吸收可能是黄芪六一汤治疗糖尿病的作用之一。     

从空肠AQP3、GLUT1的表达变化探讨脾气虚、脾阳虚证的机理

目的:通过分析脾气虚、脾阳虚证模型大鼠空肠组织中水通道蛋白3、葡萄糖转运体1基因及蛋白的表达变化,从分子生物学角度,探讨空肠组织中AQP3及GLUT1与脾气虚、脾阳虚证之间的关系,为研究脾气虚、脾阳虚证分子机制提供新思路。方法:动物随机分为对照组、脾气虚组和脾阳虚组,复合因素造模;观察大鼠一般体征,运用Realtime PCR结合Western blot方法检测大鼠AQP3、GLUT1基因及蛋白表达变化。结果:脾气虚、脾阳虚模型大鼠下空肠组织中的AQP3、GLUT1基因及蛋白表达较对照组均有显著降低(P0.01);阳虚组表达较气虚组也有显著降低(P0.01)。结论:脾气虚、脾阳虚证状态下大鼠空肠AQP3、GLUT1表达下调,导致对水分和葡萄糖的吸收出现障碍,可能与脾气虚、脾阳虚证的发病机制有关。     

3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立、优化及分子指标鉴定

[摘要]：目的：探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）模型建立条件、优化及分子指标鉴定。方法：采用3-异丁基-1-黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）,地塞米松（Dexamethason,DEX）和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定。采用1μmol·L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞,1μmol·L-1DEX联合10μmol·L-1罗格列酮（Rosiglitazone,ROS）联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD）检测不同时间点细胞培养液葡萄糖含量,确认IR-3T3-L1细胞模型最佳诱导时间和IR状态稳定性;甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定胞内甘油三酯（Triglyceride,TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot法分别检测脂联素（Adiponectin,ADPN）和葡萄糖转运蛋白-4（Glucose transporter 4,GLUT4）mRNA基因和蛋白质表达水平。结果：DEX作用3T3-L1脂肪细胞96h葡萄糖消耗差值比例最大,为46.84%;DEX ROS作用72h葡萄糖消耗差值比例最大,为22.77%,可确认为两种IR模型建立的最佳时间点,其后可保持稳定IR状态至少60h。两类IR细胞中的GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平较正常组显著降低（P<0.01）,相较于DEX ROS组,DEX单独诱导细胞内GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平降低更显著。结论：DEX组和DEX ROS组两种诱导方法抑制GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平来建立稳定可靠的IR-3T3-L1细胞模型,但DEX单独诱导IR模型方法更稳定可能与更有效抑制了ADPN mRNA和蛋白表达导致葡萄糖消耗下降更为显著。     

半夏泻心汤对糖尿病大鼠糖原合成及GLUT4表达的影响

目的:探讨半夏泻心汤(BD)对糖尿病大鼠血糖、肝脏及骨骼肌组织糖原含量的影响并探讨其机制。方法:SD大鼠建立糖尿病模型,将糖尿病大鼠分为模型组、二甲双胍组(0.3 g.kg-1)、半夏泻心汤高、中、低剂量组(1.7,0.85,0.425 g.kg-1),另设正常对照组,ig 1周后测定各组大鼠空腹血糖、血清胰岛素,测糖原含量及葡萄糖转运蛋白(GLUT4)的表达。结果:在连续给药1周后,半夏泻心汤高、中、低剂量各组及模型组空腹血糖分别为(14.16±0.94),(18.1±1.12),(19.34±1.09),(21.79±1.08)mmol.L-1,前3组与模型组比,血糖明显下降(P<0.01);胰岛素水平变化差异无统计学意义;半夏泻心汤高、中、低剂量各组肝脏糖原含量分别为(15.94±0.82),(11.52±0.56),(10.48±0.45)mg.g-1与模型组(9.05±0.44)mg.g-1比显著提高(P<0.01);肝脏GLUT4表达分别为(47.01±2.21),(43.1±3.15),(42.45±3.06)μg.L-1与模型组(39.72±1.55)μg.L-1比明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论:半夏泻心汤能提高GLUT4的表达,增强组织对葡萄糖的转运合成,改善糖尿病大鼠糖代谢功能,从而降低血糖。