酶标固相免疫测定(ELISA)检测乙型肝炎e抗体

前文报道我们用双抗体夹心法EIA检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)获得成功。在此基础上我们建立了检测乙型肝炎e抗体(抗HBe)的EIA法。所用试剂和操作与检测HBeAg的方法基本相同,只是在检测时于血清标本中加入一定浓度的HBeAg阳性血清(中和试剂),以中和标本中相应量的抗HBe。具体操作如下:(1)用抗HBe IgG包被经鞣酸处理的聚苯乙烯反应板。(2)在测定孔中加入血     

酶标F(ab′)_2和酶标IgG结合物在酶免疫分析法检测乙型肝炎“e”抗原中的比较

本文作者于1978年曾报导了用酶免疫分析法(EIA)的夹心法检测乙型肝炎“e”抗原(HBeAg),对供血者和乙型肝炎患者进行筛选检查。但大多数的肝脏疾病患者血清中存在类风湿因子(RF),可以和抗乙型肝炎“e”抗原抗体(抗—HBe)IgG的     

分泌抗HBe单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

乙型肝炎e抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒核心颗粒主要构成蛋白,其合成受乙肝病毒遗传密码所控制。HBeAg检测对肝病临床诊断、传染性判定以及预后等方面均具有重要价值。目前常用的检测方法均是以乙肝患者血清中的e抗体(抗-HBe)作为检测试剂。由于试剂来源困难,且每批效价不一,很难制备统一,标准HBcAg检测试剂,不利于质量控制。近年来改用杂交瘤技术制备抗HBe单克隆抗体(McAb),先后已有一些成功的报道;这些抗HBe McAb对乙型肝炎研究、HBeAg的兔疫化学结构、HBeAg与乙型肝炎c抗原(HBcAg)之关系的研究起了很好的推动作用。但是这些抗HBe McAe效价尚不很理想,     

用放射免疫分析方法测定表面抗原阳性急性乙型肝炎的e抗原及e抗体

本文用固相放射免疫分析方法对70例乙型肝炎表面抗原阳性的急性肝炎病人检测了乙型肝炎e抗原及e抗体。结果发现病后二周内的16例病人中有15例检出e抗原(HBe Ag)。10例疑诊或确诊为慢性肝病病人,其中5例患者e抗原检出是在发病后的10周以上。血清中e抗原转为e抗体(抗-HBe)的33例病人中,有27例(82％)是在e抗原消失后二周内出现e抗体。因此e抗原似乎是     

乙型肝炎e抗原(HBeAg)研究进展

自1972年Magnius发现HBeAg以来,由于它在乙型肝炎的发病机理研究及流行病学调查中的特殊作用,引起了国内外不少学者的关注。十多年来,人们在对HBeAg本质,HBeAg与核心抗原(HBcAg)间的关系、抗HBe(e抗体)研制以及e系统在乙型肝炎发病     

用e抗原阳性血清制备抗-HBe单克隆抗体及其鉴定

目的：为了解决多克隆抗HBe抗体的来源困难和单克隆抗体的配对问题。方法：用人的e抗原阳性血清，经过提纯后免疫BALB／c小鼠，用杂交瘤技术获得8株能分泌抗HBe单抗的细胞株。结果：7株单抗为IgG1,1株11E8为IgG2a，8株单抗标酶后能与基因工程抗原制备的包被单抗配对的只有11E8，11E8酶标单抗的效价为1∶6400，并且仅与HBeAg起反应，与HBsAg，HBcAg，正常人血清均不发生交叉反应，用于临床标本检测中与多克隆抗HBe酶标抗体的结果一致。结论：血源性的单克隆抗HBe-HRP，可以替代多克隆抗HBe-HRP制备诊断试剂盒，克服了多克隆抗HBe来源困难问题。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记抗原，建立了检测血清中抗－ＨＣＶ总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗－ＨＣＶＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）比较，其灵敏度（１∶１２８）稍高于间接法（１∶６４），特异性相同，均为１００％。该法可同时检测抗－ＨＣＶ各类抗体，使检出率提高１０％。     

使用中和法的反向间接血凝试验检测乙型肝炎e抗原

我们曾报道用抗HBe IgG致敏的双醛固定的羊红细胞,通过反向间接血凝试验(RPHA法)检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)。试验中用正常人IgG致敏红细胞作对照,以排除样品中非特异性凝集(包括抗IgG的干拢)(上海医学,4(11):31,1981)。本文进一步改用中和法检测HBeAg,这样既保证了试验的特异性,也提高了试验的重复性。现介绍如下:     

儿童乙型肝炎血清标志物的检测分析

20世纪80年代中期前出生的人群,其乙型肝炎病毒(HBV)感染率曾报道为10%[1].围绕儿童乙型肝炎(乙肝)防治,开展大量研究工作,1992年将乙肝疫苗接种纳入儿童计划免疫管理,2002年列入计划免疫,使城镇儿童乙肝病毒携带率明显下降.本次研究注重实验室收集检测3267份儿童血清标本,运用美国雅培公司i2000SR化学发光微粒子免疫分析仪,进行HBV 5种血清标志物检测,即乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗HBe)和乙肝核心抗体(抗HBc).其中HBsAg和抗HBs为全定量检测.标本结果分析如下.     

白喉和破伤风类毒素抗原ELISA检测方法的建立

目的建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板,兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体作为酶标抗体,以平行线法建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原含量的夹心ELISA法,并进行方法学验证。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。检测白喉类毒素抗原ELISA方法的定量限为8.90×10-4Lf/ml,回收率为98.35%,批内变异系数(CV)≤10.59%,批间CV≤13.51%;检测破伤风类毒素抗原ELISA方法的定量限为2.13×10~(-3)Lf/ml,回收率为107.28%,批内CV≤13.96%,批间CV≤10.06%。结论建立了白喉、破伤风类毒素抗原ELISA检测方法,该法特异性强、准确度高、重复性好,可用于白喉破伤风疫苗产品的质量控制和生产过程控制。     

儿童血清乙型肝炎五项标志物检测结果分析

目的 探讨儿童乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）血清学标志物的表达模式。方法 对1687份申请乙肝五项的儿童血清标本采用快速酶联固相免疫法（ELISA）进行检测,以聚合酶链反应（PCR）检测HBV DNA。对HBV感染标本的血清学标志物设定其表达模式为：（1）乙肝表面抗原（HBsAg)、（2）乙肝表面抗体（抗-HBs)、（3）乙肝e抗原（HBeAg)、（4）乙肝e抗体（抗－HBe)和（5）乙肝核心抗体（抗－HBc),并以出现阳性项目的序号为该模式的代码。结果 共获得335份HBV感染标村,占全部标本19．86％,HBV感染模式以HBsAg是否为阳性,分为感染期模式和恢复期模式,共发现13种。感染期模式中以“135”模式为主,占感染标本50．45％。抗－HBs单项阳性标本占53．23％（898／1687）。结论 儿童乙型肝炎病毒血清学标志物表达模式比较复杂,以“135”模式为HBV感染的主要模式。     

非平衡法在乙型肝炎e抗体和核心抗体检测中的效果评价

目的 探讨酶联免疫吸附试验非平衡法对乙型肝炎e抗体和核心抗体检测结果的影响.方法 收集电化学发光免疫分析法（ECLIA）检测抗-HBe阳性标本44例和抗-HBc阳性标本57例,再用酶联免疫吸附试验法（ELISA）对阳性标本进行检测,样本加入反应孔中分别于0min、30min后加入酶标志物,余下步骤均严格按照说明书操作.结果 对ECLIA检测抗-HBe阳性标本44例、抗-HBc阳性标本57例进行ELISA复检后,平衡法抗-HBe的漏检率为52.3％,抗-HBc漏检率为40.4％;非平衡法抗-HBe的漏检率为34.1％,抗-HBc漏检率为24.6％.结论 竞争法检测抗-HBe和抗-HBc时应适当延迟加酶的时间,以降低漏检率.     

HBV-前S_2抗原和抗体在乙型肝炎中的临床意义

本文用酶免疫法检测了HBV-前S_2抗原和抗体在乙型肝炎患者血清中的变动。结果表明,在急性HBV感染时,病程一月内前S_2抗原的阳性效为86.9％,抗前S_2抗体的阳性率为27.3％;在病程1～6个月间,前S_2抗原的阳性率降至34.7％,抗前S_2抗体的阳性率升至60％。前S_2抗原在HBeAg和HBV-DNA阳性血清中的检出率(84.2％)明显高于在HBeAg和HBV-DNA阴性血清中的检出率(20.0％),而抗前S_2抗体则相反。在慢性活动性肝炎时,前S_2抗原的检出率为80％,在慢性迁延性肝炎时的检出率为82.6％,抗前S_2抗体在慢性乙型肝炎病人血清中的检出率均很低。本文结果提示前S_2抗原的表达与HBV病毒的复制相关,而抗前S_2抗体的出现可作为预示HBV感染恢复的指标。     

鼠单克隆抗HBc检测病人血清抗HBc应用的研究

<正> 我们在建立分泌抗 HBc 杂交瘤细胞株后,将获得的鼠单克隆抗 HBc 进行纯化和辣根过氧化物酶标记作为酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病人血清抗 HBc 诊断试剂(下称单克隆抗 HBc 试剂),并与多年来应用HBsAg 携带者血清纯化的抗 HBe IgG 及其酶标记物作为试剂(下称多克隆抗 HBc 试剂)的酶联免疫吸附试验及应用纯化 HBcAg的免疫粘连血凝试验进行了比较。现将结果报告如下。     

21种药用植物醇提物体外抗乙型肝炎病毒的研究

目的从21种药用植物醇提物中筛选出体外具有抗乙型肝炎病毒（HBV）活性的药物。方法60％乙醇回流提取得到药物醇提物,以HepG22．2．15细胞株为筛选工具,60％乙醇回流提取得到药物醇提物,用四甲基偶氮唑盐检测药物的细胞毒性;以酶联免疫法（ELISA）检测细胞培养上清的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）的滴度。结果田基黄和石花醇提物对乙型肝炎病毒的e抗原分泌有明显的抑制作用且具有剂量相关性,有较强的体外抗乙型肝炎病毒的活性,对乙型肝炎病毒e抗原的分泌抑制率分别为69．06％、67．03％,IC50值分别为14．57μg·ml-1、37．42μg·ml-1。结论田基黄和石花醇提物有较强的体外抗乙型肝炎病毒的活性。     

生物工程人源抗-HBsFab的抗原特异亲合力简易测定

目的 建立一种简易的抗体亲合力测定技术，对生物工程抗—HBsFab进行抗原特异亲合力测定。方法 应用异种抗体竞争抑制法，在硝酸纤维素膜上进行不同抗原浓度、不同抗体抑制浓度的抗原、抗体反应。酶标记抗Fab抗体(Fabspecific)与相应底物显色，通过抑制效果估测靶抗体的亲合力。结果 ①抗—HBsFab组对不同浓度的抗原皆为阳性且能显示浓度差。②鼠腹水单克隆抗—HBs在10倍于人源抗—HBsFab范围内无抑制作用；多克隆羊抗—HBsAg在10倍于人源抗—HBsFab时显不抑制效应，而在同倍和1／10浓度时无抑制作用。结论 本研究建立的是一种简易、实用的方法，能够达到直观、实际的抗体亲合力检测目的。     

双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

目的建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法。方法汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后，同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原，建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法，并与常用的IFA法进行比较分析。结果检测不同血清时特异性为100％，敏感性高于IFA法4～8倍。且不需考虑更换检测试剂，不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响。结论本方法操作简单，成本低，具有较高的敏感性和特异性，适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测。     

多种单抗联合检测HIV抗原

目的 建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法.方法 以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2 gp36的腹水型单克隆抗体(McAb),用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记.建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测.将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体,4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体,建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法,检测混合HIV抗原.结果 按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法,检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为:重组HIV-1 p24:0.625 pg/ml,gp41:6.25 ng/ml,gp120:6.25 ng/ml;HIV-2 gp36:9.25 ng/ml.结论 建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法,为早期榆测HIV抗原提供了新的思路,为后续的研究奠定了一定基础.     

多种单抗联合检测HIV抗原

目的 建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法.方法 以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2 gp36的腹水型单克隆抗体(McAb),用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记.建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测.将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体,4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体,建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法,检测混合HIV抗原.结果 按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法,检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为:重组HIV-1 p24:0.625 pg/ml,gp41:6.25 ng/ml,gp120:6.25 ng/ml;HIV-2 gp36:9.25 ng/ml.结论 建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法,为早期榆测HIV抗原提供了新的思路,为后续的研究奠定了一定基础.