志贺氏菌的接触性溶血试验

本文研究了接触性溶血试验的最适条件,并应用于检测志贺氏菌的毒力.绵羊红细胞(SRBC)和福氏2a志贺氏菌(F2a)的合适浓度分别在2～6×10~9/ml和1～4×10~(10)/ml范围内;细菌在贺氏肉汤内振荡培养8～12h溶血能力最强.比较强毒肠道菌及其无毒突变株的溶血能力与毒力相符;除侵袭性大肠菌以外,志贺氏菌的溶血活性都依赖温度.实验结果表明,接触性溶血试验与志贺氏菌及EIEC大质粒编码的"侵袭相关蛋白"的表达具有相关性.该法具有简便行易、省时、结果较为稳定和客观等特点.可作为检测志贺氏菌毒力的方法之一.     

苍蝇携带志贺氏菌属的调查报告

近年来,广州市食物中毒屡有发生,1989～1992＄为29.0％（29八00）;城市居民点阳性卒为u.0％年共发生微生物性食物中毒62起,中毒2189人,分（6/50）。这一结果表明,不同地点环境卫生状况不别;’i食物中毒总起数的59.1％,总人数的78.5％。同,苍蝇携带志贺氏菌属阳性率有明显差别。因此,因志贺氏菌属引起的菌痢占相当数量。4年来第3搞好环境卫生,消灭苍蝇,是控制细菌性痢疾及其它季议发生食物中毒的次数和人数均占首位。苍蝇是传染病流行的重要措施。肠近传染病的重要传播媒介,1994年8～9月,我们用SPA协同凝集试验快速检测广州市不同地区225只…     

志贺菌菌痢疾分子流行病学研究进展

志贺氏菌属的主要毒力因子:侵袭基因、LPS基因和志贺氏毒素的编码基因已先后被克隆出来,一些预防痢疾的菌苗候选株正在进行临床试验和田间试验。质粒图谱、限制性酶切图谱、核酸分子杂交、PCR及多位点酶电泳等分子生物学技术已普遍应用于志贺氏菌属的分子流行病学研究,并取得了可喜的进展。作者回顾了近年来国内外有关志贺氏菌属的分子生物学及分子流行病学研究概况,并就此作一简要地概述。     

志贺菌的菌型分布与耐药性研究

目的：了解宝铁辖区近年来志贺菌的菌型分布与耐药性分析。方法：对分离的139株志贺菌进行生化鉴定、血清学分型和K irby-Bauer纸片扩散法（K-B）药物敏感性试验。结果：139株志贺菌中,福氏志贺菌73株占52.5%（包括福式X、Y变异株各1株,占总数的1.4%）,宋内氏志贺菌64株占46.0%,鲍氏菌2株占1.4%。志贺菌对多种常用抗菌药物呈高度耐药,且多为多重耐药,对第三代头孢菌素的耐药性最低,其次为氟奎诺酮类。福式志贺菌与宋内氏志贺菌对多种药物的耐药率差异有显着性。结论：宝铁辖区检出的志贺菌以福氏和宋内氏、志贺菌为主,志贺菌尤其是福氏志贺菌对某些抗生素的耐药性有上升的趋势。     

口服福氏2a志贺氏菌T32菌苗株减毒基础分析

福氏2a志贺氏菌(下简称F2a)T32菌苗株,其质粒DNA经琼脂糖凝胶电泳表明,具有志贺氏菌属共有的约120～140Mdal大小的质粒.DNA探针杂交试验证明,T32株与志贺氏菌属侵入有关的17kb或4.1kbDNA探针没有同源性.免疫印迹技术显示,T32株不表达侵袭性4种外膜蛋白(a,b,c和d).当将宋内氏志贺氏菌毒株I相大质粒诱动转移到T32株时,它又回复了侵入上皮细胞并引起豚鼠眼角膜结膜炎的能力.上述事实揭示,T32株的减毒基础在于140Mdal大质粒上与侵入有关的某些基因片段的缺失突变,而与毒力有关的染色体上的基因片段并未发生改变.     

志贺菌rfbA基因突变体的构建

目的构建弗氏2a志贺菌301 rfbA基因缺失突变株,初步探究志贺菌脂多糖合成与糖蛋白合成通路是否相关。方法首先用PCR扩增出rfbA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对rfbA基因进行缺失,用PCR进行初步验证,然后通过LPS的银染方法进行进一步验证。随后,制备野生株、rfbA缺失突变株的全菌蛋白样品,进行双向电泳后比较野生株301和rfbA缺失株的蛋白表达谱。结果成功构建了301 rfbA缺失突变株。在LPS的银染实验中,rfbA突变株在凝胶中未形成一长串的梯状条带。在双向电泳实验中,野生株和突变株没有明显的蛋白差异点。结论获得了301 rfbA基因缺失突变体,初步认为志贺菌中不存在与脂多糖O-抗原合成相关的蛋白糖基化途径。     

志贺氏菌芳香族氨基酸缺陷减毒株的构建

目的构建一种新型痢疾疫苗,使其较完整地保留保护性抗原,又不致丧失其侵袭力。方法用PCR技术从野生型福氏2a志贺氏菌2457T中克隆出aroA基因,在体外进行精确的缺失突变,并通过体内同源重组,构建成ΔaroA突变体RS426。结果这种突变体仍保持了侵袭能力和保护性O抗原的表达,但其毒力已明显降低,不能产生豚鼠角结膜炎,小鼠半数致死量明显提高。结论免疫保护试验显示,RS426可在小鼠中产生对福氏2a野生菌100％的保护作用。     

弗氏志贺菌2a GadB蛋白的功能研究

目的探究gadB基因的潜在功能及其对弗氏志贺菌2a 301株致病能力的影响。方法利用λ-Red重组系统构建弗氏志贺菌2a 301株的gadB缺失突变株,随后进行基本的表型实验测评,并初步评价其毒力,最后制备突变株和野生株全菌蛋白样品,利用双向电泳技术比较二者在蛋白表达谱上的差异。结果成功获得gadB基因缺失株;生化实验发现缺失株不能利用甘油发酵;而豚鼠角膜实验发现突变株炎症反应稍轻于野生株;全菌蛋白表达谱中发现10个差异蛋白。结论利用双向电泳鉴定到一些可能与GadB有关的蛋白,为gadB潜在功能的研究提供了线索。     

弗氏志贺菌2aT32株asd基因缺失突变体的构建

目的：构建痢疾弗氏志贺菌２ａＴ３２的ａｓｄ基因全缺失突变体。方法；采用全菌Ｐ座痢疾弗氏２ａ Ｔ３２株染色体扩增了ａｓｄ基因及其上下游各约５００ｂｐ的染色体例 ＤＮＡ序列，并将其克隆至ｐＵＣ１８，测定其核苷酸序列，在体外用ｃｔｘＢ基因置换了ａｓｄ基因，然后将其克隆至自杀载体ｐＸＬ２７５。通过细菌酱和人同源重组，用ｃｔｘＢ基因完全取代痢疾弗氏２ａ Ｔ３２株染色体上的ａｓｄ基因。结果与结论：构建成ａｓｄ     

志贺菌检测用抗原研究进展

志贺菌是细菌性痢疾的病原体,目前检测手段主要为常规生化法、免疫学及分子生物学方法,其中免疫学方法快速、便捷,实用性较强。本文综述了志贺菌免疫学检测用抗原的研究进展。     

福氏2a痢疾杆菌侵袭相关基因的克隆与表达

以福氏2a 痢疾杆菌大质粒为材料,粘粒(cosmid)为载体构建大质粒基因库。用探针菌落原位杂交,质粒分析及酶切、Southern blot、Western blot 等方法进行鉴定。获得了四株表达侵袭相关蛋白的克隆株,而且它们表达出与侵袭活性密切相关的接触性溶血活性。     

用BA和ABC技术对角膜感染痢疾F_(2a)菌豚鼠眼泪特异抗体的观测

本文报告了用自制的N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯和抗生物素蛋白建立检测豚鼠IgA,IgG的微量BA和ABC技术,其敏感度达0.3～0.5ng/ml,并将BA法用于观测角膜感染痢疾F_(2a)菌后,豚鼠眼泪特异IgA,IgG水平。结果显示,感染后15天患侧眼泪特异IgA、IgG抗体阳性滴度(GMT)分别达400~(-1)和200~(-1)。感染后35天眼泪特异抗体水平明显下降。这些结果,为痢疾局部感染免疫关系的研究提供了方法和依据。     

福氏与宋内氏志贺氏菌二价抗原杂交株的组建

我们将标记Tn5的宋内氏菌Ⅰ相大质粒经诱动质粒R386诱动转移到福氏2aT_(32)菌苗株内,组建了二价抗原杂交株Fs-18。该株既表达福氏2a型(Ⅱ)、群(3、4)抗原,又表达宋内氏菌Ⅰ相抗原。刚果红吸收试验、组织培养物HeLa细胞侵入试验以及Sereny试验均证明Fs-18株无毒。用Fs-18株免疫小鼠可对福氏2a和宋内氏毒株攻击提供双重保护作用。     

兔膝关节半月板滑膜被覆的实验性研究——光镜观察部分

本文应用实验形态学研究方法,对兔半月板的组织学切片作一般染色和特殊染色,在不同切面上均观察到半月板表面有一层明显的滑膜被覆,特殊染色法证实为与胶原纤维同一染色特性的滑膜组织,而且这层滑膜是关节囊滑膜的延续。     

内毒素血症磷脂酶A2的激活与细胞膜流动性的变化

采用大肠杆菌内毒素休克兔实验模型，研究了红细胞膜磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性，膜荧光偏振度的各向异性系数的变化。内毒素组注射内毒素后各时相点平均动脉压显著低于对照组（Ｐ〈０．０１），ＰＬＡ２活性显著高于对照组（Ｐ〈０．０１），膜荧光偏振度、各向异性系数亦显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。药物预处理组上述变化较小，与内毒素组相比差别显著（Ｐ〈０．０５）。结果表明：内毒素致ＰＬＡ２活性升高，并由此导致膜微     

天门冬氨酸及精氨酸对烫伤小鼠细胞免疫变化的影响

本研究通过腹腔注射的方法,观察了天门冬氨酸、精氨酸对烫伤小鼠细胞免疫变化的影响.实验结果表明精氨酸腹腔注射同样能表现出显著的细胞免疫促进作用;天门冬氨酸也显示出减轻小鼠烫伤后胸腺萎缩、酯酶阳性细胞数减少、脾淋巴细胞转化反应能力受损的作用,但耳廓肿胀试验结果表明改善烫伤小鼠整体细胞免疫功能的效果并不明显.此外血清、脾脏游离氨基酸浓度分析结果初步排除了精氨酸或天门冬氨酸的作用是由于注射后血液及外周组织中浓度升高导致直接作用的可能性.     

大鼠缺血后脑磷脂酶A2,线粒体磷脂含量及线粒体膜流动性的改变

采用高效液要色谱仪及荧光分光光度计等技术测定脑缺血再灌流时脑磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）、脑线粒体磷脂含量及线粒体膜流动性改变，结果发现脑缺血２０ｍｉｎ及再灌流早期ＰＬＡ２的活性显著增强，随着再灌流时间延长，ＰＬＡ２活性明显下降；缺血２０ｍｉｎ再灌注１ｈ组线粒体卵磷脂（ＰＣ）、脑磷脂（ＰＥ）、心磷脂（ＣＬ）含量与流动性降低，提示：线粒体磷脂含量与膜注动性密切相关，ＰＬＡ２在与缺血性脑线粒体功能损伤。     

利用荧光探针JC-1检测心肌细胞线粒体膜电位的改变

利用荧光探针JC－1观察大鼠心肌细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化。用过氧化氢（H2O2）诱导心肌细胞凋亡，在凋亡早期，利用新型荧光探针JC－1标记细胞线粒体，在FACS Calibur流式细胞仪上检测JC－1荧光强度的变化，用Annexin-V/PI双染色法鉴别凋亡和坏死的心肌细胞。结果显示，在正常大鼠心肌细胞中，线粒体维持较高的膜电位，JC－1在线粒体内形成聚合物，发出红色荧光。H2O2导致线粒体膜电位下降，JC－1聚合物分解成单体，红色荧光强度减弱。提示JC－1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。     

宋内氏福氏2a双价痢疾菌株FS54-7Ⅰ相大质粒(pSS_(120)::Tn_5)上转座子Tn_5的去除

本文利用 RP_1质粒的温度敏感突变体 pMR_5::Tn_(132)的温敏特性,以及 pMR_5::Tn_(132)上所携带的转座子 Tn_(132)与宋内氏Ⅰ相大质粒 pSS_(120)::Tn_5上转座子 Tn_5两端插入序列的同源性,将 Tn_5置换成 Tn_(132),从而将 pSS_(120)::Tn_5携带的卡那霉素抗性换成了 Tn_(132)所携带的四环素抗性,进而又在 Bochner 培养基上选到了四环素敏感的突变体,得到了宋内氏Ⅰ相大质粒 pSS_(120)上无任何抗药性标记的宋内氏福氏2a 双价痢疾菌株。