乙肝病毒DNA定量与免疫学标志物检测的比较和分析

目的探讨乙肝病毒免疫学标志物常见模式与HBVDNA拷贝数之间的关系。方法对509例血清标本进行乙肝病毒免疫学标志物和HBVDNA荧光定量(FQ-PCR)测定。结果在111例HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性的标本中,检出HBVDNA阳性者有100例,平均拷贝数为2.85×107/ml;在145例HBsAg、抗HBe、抗HBc均阳性的标本中,HBVDNA阳性者为68例,平均拷贝数为8.21×106/ml;在11例HBsAg、HBcAg阳性的标本中,HBVDNA阳性10例,平均拷贝数8.57×106/ml;而在211例HBV-M全阴性的标本中,仍有4例检出HBVDNA阳性,平均拷贝数为7.85×103/ml。结论在各种HBV-M模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高,而血清中未检出HBV-M者并不能排除HBV感染。     

HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性研究

目的:探讨HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性.方法:采用时间分辨荧光定量法(TRFIA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法对360例疑似乙肝患者进行HBV-DNA和HBV-M定量检测.结果:HBeAg( )组患者血清HBVDNA检出率为95.17%,平均拷贝数为106.53±1.45/ml,HBeAg(-)组患者血清HBV-DNA检出率为53.49%,平均拷贝数为104.52±1.60/ml,HBeAg( )组的HBV-DNA阳性率,拷贝数明显高于HBeAg(-)组(P＜0.05, P＜0.01).HBsAg(-)组患者仍有HBV-DNA阳性者.结论:单凭血清学标志物模式难以判断HBV的复制程度及传染性强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV复制情况,对乙型肝炎的诊断及防治提供客观依据.     

5600例血清标本乙肝病毒DNA定量与免疫学标志物检测的对比分析

目的探讨乙肝病毒(HBV)感染血清学标志物常见模式与HBVDNA拷贝数之间的相关关系。方法对5600例血清标本进行HBVDNA荧光定量测定(FQ-PCR)和乙肝病毒感染血清学标志物(HBVm)测定。结果在2010例大三阳(即HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性)的标本中,检出HBVDNA阳性者有1796例,平均拷贝数为3.73×107/mL;在1790例小三阳(即HBsAg、抗HBe、抗HBc均阳性)的标本中,HBVDNA阳性者为301例,平均拷贝数为1.21×106/mL;在793例HBsAg、HBcAb阳性的标本中,HBVDNA阳性235例,平均拷贝数6.27×106/mL;而在278例HBVm全阴性的标本中,仍有3例检出HBVDNA阳性,平均拷贝数为1.63×104/mL。结论在各种HBVm模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高;在HBsAg、抗-HBc阳性的血清中存在中等水平的HBV复制;而血清中未检出HBVm者并不能排除HBV感染。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。     

FQ-PCR和ELISA联合检测乙型肝炎的意义分析

目的:探讨血清HBV-DNA水平与HBV血清标志物(HBV-M)的相关性及其在临床中的应用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)对1560例临床血清标本进行对比检测。结果:血清HBV-DNA水平与血请HBV-M的表现模式有很大关系。以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式患者中的HBV-DNA阳性检出率最高,为93.7%;DNA平均拷贝数为7.76×107/ml,显著高于其他HBV-M模式的患者(P<0.01)。其他HBsAg(+)模式:HBV-DNA阳性率分别为78.5%、42.7%,平均拷贝数分别为2.88×105/ml、8.91×104/ml,患者血清中HBV-DNA的含量差异无显著性(P>0.05);另外,HBsAb(+)及HBV-M全阴患者中也有HBV-DNA检出;HBsAg(+)中也有患者未检到HBV-DNA。结论:单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV的复制情况,对诊断、治疗乙型肝炎患者及疗效观察具有较大的指导意义。     

乙型肝炎血清学标志物和HBV-DNA定量对比

目的探讨乙型肝炎患者血清标志物与乙型肝炎病毒核酸(HBVDNA)含量关系及其临床意义。方法用ELISA法检测1 515例患者血清乙肝病毒标志物(HBVM),用FQ-PCR法定量检测HBVDNA。结果1 515例乙肝患者中HBsAg、HBeAg、HBcAb、阳性640例,其HBV-DNA阳性595例,阳性率(0.93),平均拷贝数4.7×106,前PreS1阳性574例,阳性率(0.89)。在HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性875例,其HBV-DNA阳性420例,阳性率(0.48),平均拷贝数3.5×104,前PreS1324(0.37)。HBVDNA与PreS1比,χ2=0.958,P>0.05;HBVDNA与HBeAg比χ2=52.436,P<0.01。ALT与HBVDNA含量无相关性(r=0.02,P>0.05)。结论HBeAg,前S1蛋白(PreS1)等血清学标志和HBV-DNA定量测定是乙肝病毒感染的重要方法。FQ-PCR定量测定HBV-DNA,有助于乙型肝炎的早期诊断、疗效观察和预后判断。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA及对乙型肝炎规范化治疗的临床应用

目的 探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA在乙型肝炎病毒(HBV)感染诊疗中的应用价值,了解用ELISA法检测 HBV-M不同的标志物组合时,其对应的HBV-DNA阴、阳性及阳性的拷贝数.方法用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测800例患者的血清HBV-DNA含量(临界值为500copies/ml),同时用ELISA法测定HBV血清标记物.结果 经FQ-PCR检测,347份HBsAg,HBeAg,抗-HBcAb,ProS1-Ag都阳性的标本,HBV-DNA阳性率为98.7%,平均拷贝数为1.87×108copies/ml,显著高于其他组(P<0.05).HBsAg,HBeAg,ProS1-Ag一项或多项阳性者的HBV-DNA阳性率和平均拷贝数显著高于三项抗原全阴者.结论 FQ-PCR可以快速而准确地检测HBV-DNA拷贝数.HBV-DNA可准确、灵敏地反映HBV复制.与HBV血清标记物联合应用可使诊断更准确,治疗更合理.对疾病的诊断、治疗过程的监测,预后监控及药效评价等都具有很高的实用价值.     

乙肝产妇乳汁HBV DNA定量检测的意义

目的 探讨乙肝产妇乳汁中乙肝病毒标志物(H B V-M)和H B V-D N A的关系,从而正确指导乙肝产妇产后母乳喂养.方法 采用时间分辨荧光免疫定量分析法(TRFIA)检测乙肝产妇血清中的HBV-M,采用荧光定量PCR 法(FQ-PCR)检测血清及乳汁中HBV-DNA含量情况.结果 100例乙肝阳性产妇大三阳的血清与乳汁HBVDNA阳性检出率为100%,二者HBVDNA含量为最高,小三阳组HBVDNA阳性率分别为87.2%和84.6%,HBsAg/HBcAb组的阳性率分别为88.9%和86.1%,后两组血清HBV DNA含量分别为4.57×105和5.84×106copy/ml,乳汁HBV DNA分别为4.40×105和5.98×106 copy/ml.结论 乙肝产妇产后能不能母乳喂养与产后产妇血清和初乳中HBV-DNA情况有关,根据检测结果 决定喂养方式,以保证分娩婴儿的安全哺乳环境.     

PCR定量检测HBV—DNA与HBV标志物关系探讨

目的探讨PCR定量检测HBV-DNA拷贝数与乙肝病毒标志物常见模式的关系。方法对疑似乙型肝炎病毒患者428例采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量,酶联免疫吸附试验检测HBV-M。结果 92例HBsAg、HBeAg、抗HBc标志物均阳性的患者中,HBV-DNA定量拷贝数〉1.0&#215;103/ml者有85例,平均拷贝数为1.42&#215;107/ml;在12例HBsAg、HBeAg标志物阳性的标本中,HBVDNA阳性11例,平均拷贝数4.42&#215;106/ml;在99例HBsAg、抗HBe、抗HBc标志物均阳性的标本中,HBV-DNA阳性者为39例,平均拷贝数为9.89&#215;105/ml;而在207例HBV-M标志物全阴性的标本中,仍有4例检出HBV-DNA〉1.0&#215;103/ml,平均拷贝数为9.54&#215;103/ml。结论 在各种HBV标志物模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高,而血清中未检出HBV-M者并不能排除HBV感染。     

PCR-ELISA法及荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV-DNA的探讨

目的探讨PCR-ELISA法及荧光定量PCR法（FQ-PCR）检测HBV感染者精液中HBV-DNA检出情况及其临床意义。方法选取男性HBV感染者60例,采集患者精液、静脉血,用PCR-ELISA法来检测患者精液及血清中HBV-DNA。同时采用荧光定量PCR检测患者精液中HBV-DNA。结果PCR-ELISA法：60例精液标本HBVDNA阳性12例,阳性率18.33%,拷贝数为1.267×10^3-6.532×10^5/ml,平均拷贝数为4.781×10^4/ml;60例血清标本阳性53例,阳性率为88.33%,拷贝数1.462×10^3-5.153×10^7/ml,平均拷贝数为2.451×10^6/ml。荧光定量PCR法：60例精液标本HBVDNA阳性13例,阳性率21.67%,拷贝数为1.357×10^3-7.113×10^5/ml,平均拷贝数为4.983×10^4/ml;两种检验方法检测精液HBV-DNA的阳性检出率比较无显著性意义（P〉0.05）。结论PCR-ELISA法与荧光定量PCR定量检测精液中HBVDNA同样具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解乙型肝炎患者精液中肝炎病毒的感染状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响

目的：研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用,并初步探讨其作用机制。方法：以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ＩＣＲ－ＴｇＮ（ＨＢＶａｄｒ１．２）ＳＭＭＵ 为动物模型,运用ＥＬＩＳＡ和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果：分别予氧化苦参碱１００, ２００, ３００ ｍ ｇ／ｋｇ 腹腔注射,１次／ｄ,３０ ｄ 后,乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较空白对照组（予等体积生理盐水腹腔注射）均有明显的下降,且对两者作用一致;进一步的研究表明氧化苦参碱２００ ｍ ｇ／ｋｇ 作用１０ ｄ,２０ ｄ 时小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较治疗前有明显的下降。结论：氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量,有抗乙型肝炎病毒作用。     

乙肝病毒不同血清标志物ALT中与HBVDNA载量临床意义

目的分析乙肝病毒（HBV）不同血清标志物（HBVM）中丙酸氨基转移酶（ALT）异常率与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）载量的关系,探讨乙肝病毒感染时肝损伤的主要原因及检测HBVM与HBVDNA载量及ALT的临床意义。方法对345份乙肝患者的血清标本分别用ELISA、荧光定量PCR、速率法检测HBVM、HBVDNA载量及ALT。结果①HBeAg（＋）与HBeAg（-）两组HBVDNA阳性率、HBVDNA载量〉10^5的百分率比较均有显著差异（P〈0．01）。②ALT异常率在HBeAg（＋）组的不同HBVDNA载量级中无差异（P〉0．05）,在HBeAg（-）组中随HB—VDNA载量级增大而增大（P〈0．01）。结论在HBeAg（＋）时,肝损伤与HBVDNA载量无关;HBeAg（-）时,大多病毒复制减弱,但有少数HBVDNA载量为高拷贝,其肝损伤程度与HBVDNA载量呈正相关。     

Relationship between Maternal PBMC HBV cccDNA and HBV Serological Markers and its Effect on HBV Intrauterine Transmission

Objective To investigate the relationship between maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) hepatitis B virus(HBV) covalenty closed circular deoxyribonucleic acid(cccDNA) and other HBV serological markers and its effects on HBV intrauterine transmission. Methods We enrolled 290 newborns and their hepatitis B surface antigen(HBsAg) positive mothers. HBV cccDNA in PBMC and HBV DNA in serum were detected by a real‐time PCR‐TaqM an probe while HBV serological markers were detected with an electrochemiluminescence immunoassay. Results There was a positive correlation between the levels of PBMC HBV cccD NA and serum HBV DNA and HBeA g(r = 0.436 and 0.403, P 0.001). The detection rate of pattern A [‘HBsA g(+), HBeA g(+), and anti‐HBc(+)'] was significantly higher in the PBMC HBV cccD NA positive group than in the control group(χ2 = 48.48, P 0.001). There was a significant association between HBV intrauterine transmission and PBMC HBV cccD NA(χ2 = 9.28, P = 0.002). In the presence of serum HBV DNA, HBeA g, and PBMC HBV cccD NA, the risk of HBV intrauterine transmission was three times higher(OR = 3.69, 95% CI: 1.30‐10.42) than that observed in their absence. The risk of HBV intrauterine transmission was the greatest(OR = 5.89, 95% CI: 2.35‐14.72) when both PBMC HBV cccD NA and pattern A were present. A Bayesian network model showed that maternal PBMC HBV cccD NA was directly related to HBV intrauterine transmission. Conclusion PBMC HBV cccDNA may be a direct risk factor for HBV intrauterine transmission. Our study suggests that serological markers could be combined with PBMC‐related markers in prenatal testing.     

乙型肝炎病毒载量与血清免疫标志物及ALT的关系

目的探讨不同乙肝病毒（HBV）载量与其血清标志物模式及ALT的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和速率法分别检测患者血清HBV-DNA载量、血清学标志及谷氨酸丙氨酸转移酶（ALT）活性。结果在605例患者样本中共检测出9种血清模式,HBeAg阳性模式,即HBsAg（＋）,HBeAg（＋）,抗HBc（＋）模式与HBsAg（＋）,HBeAg（＋）模式,其HBV-DNA阳性率分别为96.2%和100.0%,病毒平均含量106.53copies/mL,明显高于HBeAg阴性模式（P〈0.01）。HBV-DNA水平与ALT异常存在相关。结论 HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式,HBV载量越高,ALT异常的比例越大。     

乙肝母婴阻断中婴幼儿隐匿性 HBV 感染研究

目的：研究乙肝母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染情况和影响因素。方法通过深圳市疫苗监测和接种网络,收集223对乙肝母婴阻断人群的血清样本,进行HBV血清学和分子生物学检测,分析隐匿性感染对传统HBV母婴阻断效果评价标准的影响;并分析母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染的因素。结果血清学结果显示223例婴幼儿接受乙肝母婴阻断后,212例HBbAg （＋）,传统血清学结果计算HBV母婴阻断成功率为95.1％（212／223）;分子生物学筛查显示,183例HBV－DNA（－）,40例HBV－DNA（＋）,该方法计算HBV母婴阻断成功率为82.1％（183／223）,两者差异有统计学意义（P＜0.05）。孕产妇血清HBV－DNA水平与所产婴幼儿隐匿性感染相关性分析显示,孕产妇血清HBV－DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关;31例隐匿性感染的婴幼儿中有12例病毒S区“a”抗原决定簇出现点突变;而6例血清型HBsAg（＋）的病例S区“a”抗原决定簇没有发生突变,病毒突变对血清学漏检差异有统计学意义（礸2＝7.025,P＝0.020）。结论隐匿性感染在HBV母婴阻断婴幼儿群体中存在一定的流行趋势,并对HBV母婴阻断成功构成了威胁;病毒突变和孕产妇血清HBV－DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关。     

乙型肝炎病毒滴度与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和ELISA法同时检测420份血清的HBV-DNA和血清标志物(HBV-M),并用全自动生化分析仪测定其肝功能ALT,对结果进行分析。结果105例HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清HBV-DNA平均拷贝数为3.16×1010/m l,检出率为95.23%,显著高于其他组(P<0.01);HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组ALT异常率为64.76%(68/105),显著高于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组ALT异常率36.96%(34/92)(P<0.01)。45例HBsAb+组血清HBV-DNA检出率为0,38例HBV-M全阴性组血清HBV-DNA检出率为7.89%。HBV-DNA阳性组ALT异常率为57.84%(107/185),显著高于HBV-DNA阴性组ALT异常率31.06%(73/235)(P<0.01)。结论定量PCR方法可以作为确认乙肝病毒感染不同状态的一种有效手段,血清标志物HBV-M阴性患者仍可有HBV-DNA阳性,HBV-DNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效判断有一定的指导意义。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。     

应用竞争性PCR方法探讨血清HBV DNA浓度与HBV免疫标志的关系

目的：探讨血清ＨＢＶＤＮＡ浓度与ＨＢＶ免疫学标志的关系。方法：应用竞争性ＰＣＲ方法，检测ＨＢＶ免疫标志不同背景的原发性肝癌（ｎ＝３８），肝硬化（ｎ＝３６），慢性肝炎（ｎ＝５１）共１２５例的血清ＨＢＶＤＮＡ浓度，结果：ＨＢＶＤＮＡ浓度与血清ＨＢＶ免疫标志有关，而与慢性肝病类型无关，五项免疫标志均阴性或抗－ＨＢｓ阳性的慢性肝病患者中，约有三分之一病例存在低水平ＨＢＶ感染，ＨＢｅＡｇ阳性病例的ＨＢＶＤＮ