慢性应激抑郁模型大鼠海马神经干细胞的增殖、存活和分化

目的 探讨慢性应激抑郁状态对大鼠海马神经干细胞的影响.方法 应用慢性不可预知温和应激和孤养法建立抑郁模型,分为对照组、CUMS 14 d组、CUMS 28 d组,采用免疫组化、免疫荧光,测定大鼠海马神经干细胞的增殖、存活和分化的改变.结果 海马神经干细胞增殖:与对照组( 2919.50±188.80)比较,14d CUMS组(2254.17±164.41)和28 d CUMS组(1900.33±104.10)海马齿状回BrdU阳性细胞数均减少,差异有统计学意义(P＜0.01).海马神经干细胞存活:与对照组( 2404.50±148.77)相比,CUMS 28 d组(1845.33±126.88) BrdU阳性细胞数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).海马神经干细胞分化:与对照组[ NeuN/BrdU(71.63±10.21),GFAP/BrdU( 14.34±2.03)]比较,CUMS 28d组[NeuN/BrdU(69.11±11.30),GFAP/BrdU( 17.27±2.93)]细胞分化无明显变化(P＞0.05).结论 慢性应激抑郁模型大鼠海马齿状回神经干细胞的增殖和存活受到抑制,但干细胞的分化无明显改变.     

碱性成纤维细胞生长因子影响痴呆大鼠海马神经发生

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默氏病(AD)模型大鼠海马齿状回神经发生的影响.方法 AD处理组及AD对照组大鼠左侧海马伞切断制造阿尔茨海默病模型;正常对照组注射生理盐水.AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7 d;AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水.BrdU标记增殖细胞.TUNEL方法标记DNA片段,原位检测凋亡细胞.计数海马齿状回BrdU阳性细胞与凋亡细胞数.结果 AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞增加非常显著(P＜0.01),而凋亡细胞差异不显著(P＞0.05),AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞差异均不显著(P＞0.05).结论 bFGF可刺激AD模型大鼠海马神经发生.是治疗AD等神经缺损性疾病有希望的一种神经生长因子.     

全反式维甲酸在帕金森病大鼠模型中脑神经干细胞移植治疗中的作用

目的 观察全反式维甲酸(atRA)处理的大鼠中脑神经干细胞(NSCs)移植对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用.方法 制备PD大鼠模型并将成功模型分为对照组、常规培养中脑NSCs组和atRA处理中脑NSCs组(atRA+NSCs组).动态观察模型大鼠NSCs移植前后的行为学变化,定量分析纹状体多巴胺能神经元表达的变化.结果 atRA+NSCs组与对照组、NSCs组比较,实验动物的行为功能指标均得到有效改善(P＜0.05或0.01).atRA+NSCs组与NSCs组大鼠纹状体移植区BrdU标记的酪氨酸羟化酶染色阳性细胞(TH+细胞)分别为(261.2±31.7)、(204.3±25.1)个,差异有统计学意义(P＜0.05),而对照组纹状体区没有BrdU标记TH+细胞.结论 atRA在PD大鼠模型中脑NSCs移植治疗中有明显的促进作用,具有潜在的临床应用价值.     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖、分化及认知功能的影响.方法 SD大鼠45只,按随机数字表法分为对照组、VD组和治疗组;改良2-VO+硝普钠法建立VD大鼠模型;治疗组腹腔注射EPO;采用穿梭箱系统检测大鼠认知功能;免疫组化法检测神经干细胞增殖分化情况.结果 行为学测试:VD组大鼠AAR比率显著低于对照组(P<0.01);治疗组大鼠AAR比率显著高于VD组(P<0.01),但仍显著低于对照组(P<0.01).免疫组化结果:BrdU(5-Bromodeoxyuridine)标记阳性细胞随时间推移从海马颗粒下层(the subgranular zone,SGZ)向颗粒细胞层(granule cell layer,GCL)迁移.造模后1周,VD组BrdU标记阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01),低于治疗组(P<0.01);治疗组大鼠BrdU+DCX(doublecortin)双标阳性细胞数明显高于VD组(P<0.01).造模后4周,各组BrdU标记阳性细胞数与造模后1周相比均有明显下降,其中VD组下降最明显.治疗组BrdU+NSE(neuron-specific-enolase)双标阳性细胞数明显多于VD组(P<0.01).各组大鼠各时相点BrdU标记阳性细胞数中神经元所占比例无统计学差异(P>0.05).结论 腹腔注射EPO可促进VD大鼠脑内NSC增殖,显著改善大鼠认知功能,但对NSC分化无明显影响.     

电针干预对放射性脑损伤小鼠神经干细胞分化的影响

目的:分析电针对放射线照射小鼠内源性神经干细胞分化的影响及机制。方法:放射线照射小鼠制备脑损伤小鼠模型,分别电针针刺百会、风府和双侧肾俞穴位1周(电针1组)、2周(电针2组)和3周(电针3组)进行治疗。免疫荧光方法检测海马的5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromo-2-deoxy uridine,BrdU)、星形胶质细胞标记蛋白(S100 calcium-binding protein B,S100β)、小胶质细胞特异性蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及DNA结合蛋白(sex determining region Y-box 2,Sox2)阳性细胞数,观察电针针刺穴位对放射性脑损伤小鼠海马神经干细胞分化的影响。结果:与空白组比较,模型组小鼠海马BrdU/S100β、BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著减少(P0.05,P0.001,P0.05)。与模型组比较,电针针刺穴位1周后,小鼠海马BrdU/S100β、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著增加(P0.01,P0.01),而BrdU/Iba1双标阳性细胞数目无明显变化;电针针刺穴位2周后,小鼠海马BrdU/S100β双标阳性细胞数目明显增加(P0.01),而BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目无明显变化;电针针刺穴位3周后,小鼠海马BrdU/S100β、BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著增加(P0.001,P0.05,P0.01)。结论:放射线照射可影响海马区神经元分化,电针干预可激活放射线照射小鼠海马神经干细胞向星形胶质细胞、小胶质细胞分化,其疗效与电针疗程有一定相关性。     

皮质酮大鼠神经干细胞增殖分化的变化

目的观察皮质酮(corticosterone,CORT)大鼠神经干细胞增殖分化的变化,探讨肾阳虚证与CORT大鼠神经干细胞增殖分化的联系.方法成年雄性SD大鼠连续14 d皮下注射CORT(10mg·kg-1·d-1),采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞.给予CORT大鼠右归饮水煎剂灌胃,观察CORT大鼠神经干细胞增殖分化的变化.结果与正常对照组相比,CORT大鼠大脑皮层、海马及下丘脑区BrdU阳性细胞数明显减少,BrdU NF200,BrdU NeuroD,BrdU GFAP免疫荧光双标细胞数也显著减少(P＜0.01).给予右归饮后CORT大鼠BrdU阳性细胞以及免疫荧光双标细胞数明显增加(P＜0.01).结论CORT大鼠神经干细胞增殖分化能力显著下降,右归饮可显著增加CORT大鼠神经干细胞增殖分化能力.     

甲状腺激素在新西兰家兔面神经损伤修复中的作用

目的 观察甲状腺激素在兔面神经损伤修复中的作用.方法 25只成年健康新西兰家兔,设立正常对照组、手术对照组、T3治疗组3个实验组.制作双侧面神经横断损伤、损伤局部硅胶管套接的动物模型;其中右侧为T3治疗组,硅胶管中注入甲状腺素溶液16～18μl;左侧为手术对照组,硅胶管中注入等量生理盐水.在术后4、6周取再生面神经,电镜检测有髓轴突比率和髓鞘厚度,取脑桥中下部组织,运用免疫组织化学SP法检测面神经核运动神经元中神经营养因子NGF、BDNF表达的变化,光镜下计数两种神经营养因子标记的阳性细胞数.结果 电镜结果显示在术后4周和6周,T3治疗组的有髓轴突比率和髓鞘厚度均＞手术对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).术后4周,手术对照组和T3治疗组NGF、BDNF两种分子标记的阳性细胞数较之正常对照组增幅明显,差异有统计学意义(P＜0.01).术后6周,T3治疗后阳性细胞数NGF、BDNF比手术对照组NGF、BDNF仍有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 面神经横断损伤后,再生室中注射T3能够促进面神经有髓轴突比率和髓鞘厚度的增加,并且增加面神经核运动神经元中神经营养因子NGF、BDNF的表达.     

碱性成纤维细胞生长因子对海马伞切断大鼠海马神经细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生成因子(bFGF)对海马伞切断造成的阿尔茨海默氏病(AD)模型大鼠海马齿状回神经细胞增殖的影响.方法 AD处理组及AD对照组大鼠单侧海马伞切断制造阿尔茨海默病模型;正常对照组注射生理盐水.AD处理组造模后每天侧脑室注射bFGF共7天;AD对照组及正常对照组同时间注射生理盐水.BrdU标记增殖细胞.TUNEL方法标记DNA片段,原位检测凋亡细胞.计数海马齿状回各区域BrdU阳性细胞与凋亡细胞数.结果 AD处理组大鼠与AD对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞增加明显(P<0.01), 而凋亡细胞差异不显著(P>0.05).AD对照组大鼠与正常对照组大鼠相比,海马齿状回BrdU阳性细胞数及凋亡细胞数差异均不显著(P>0.05).结论 bFGF可促进AD模型大鼠海马神经细胞的增殖.是治疗AD等神经缺损性疾病有希望的一种神经生长因子.     

Notch1调控小鼠脑出血后海马神经发生与神经功能恢复

目的 探讨Notch1在小鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分裂方式影响中的作用以及对小鼠ICH后远期神经功能恢复的影响.方法 利用免疫荧光、Western blot、转轮实验和平衡木实验等方法检测小鼠脑出血后海马NSCs的分裂方式情况、Notch1蛋白表达情况和神经功能恢复情况.结果 与Sham组比较,ICH导致小鼠海马NSCs水平分裂的比例明显降低(P＜0.01),同时发现小鼠海马中Notch1的表达也明显降低(P＜0.05).促进ICH小鼠海马中Notch1的表达能够有效地增加小鼠海马NSCs水平分裂的比例(P＜0.01),维持NSCs的数量,同时能够有效地增加ICH后小鼠转轮实验掉落的潜伏期以及小鼠海马中DCX阳性细胞数(P＜0.01),维持神经发生的持续性,另外还能够减少ICH后小鼠平衡木行走实验腿的滑落次数(P＜0.01).结论 Notch1信号可以调控脑出血后小鼠海马NSCs的分裂方式以及促进远期神经功能恢复.     

胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经红蛋白及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的研究胎鼠神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经红蛋白(Ngb)及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、脊髓损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSCs组)、神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组)。采用电控SCI打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植。免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移及Ngb和caspase-3的表达,改良Rivlin法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果 BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs。BrdU+NSCs组和NSCs组各时间点caspase-3免疫阳性细胞光密度值均比SCI组减少(P<0.01),Ngb免疫阳性细胞光密度值比SCI组明显增加(P<0.01),且Ngb表达高峰延长至伤后第14天;移植后第7、14、28天,后肢运动功能评分比SCI组明显升高(P<0.01)。BrdU+NSCs组与NSCs组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs可在SCI区域存活、迁移,并能通过上调Ngb的表达来抑制大鼠SCI后神经细胞的凋亡,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复。     

自体骨髓间充质干细胞促进大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究

目的　观察自体骨髓间充质干细胞在神经再生室中的作用 ,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法　成年Wistar大鼠 2 4只 ,随机分成 3组 ,每组 8只 ,硅胶导管桥接右侧 13mm的坐骨神经缺损 ,A组在神经再生室内植入骨髓间充质干细胞 ECM (extracellularmatrix ,ECM )凝胶 ;B组植入ECM凝胶 ;C组注入生理盐水。术后 12周 ,进行大体观察及坐骨神经功能指数测定、电生理检测、神经组织学等观察。结果　A、B两组均有再生神经生成 ,但A组各项检测指标均优于B组 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　自体骨髓间充质干细胞能够促进周围神经再生 ,可以作为种子细胞应用于外周神经组织工程。     

神经干细胞和神经生长因子联合移植对大脑中动脉阻塞大鼠的影响

目的 将神经干细胞(NSCs)移植和神经生长因子(NGF)单独及联合应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察NGF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及NGF对自体和移植NSCs的影响.方法 体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记.实验动物随机分为A组(MCAo组)、B组(MCAo NGF组)、C组(MCAo NSCs组)及D组(MCAo NGF NSCs组),每组16只,移植后进行神经功能损害评分(NSS),用免疫组化行BrdU、槽蛋白检测,分析结果.结果 移植后的2周、4周神经功能评分显示D组显著好于其他3组(P<0.05),B组与C组显著好于A组(P<0.05).B组的槽蛋白及BrdU阳性细胞数最著多于A组(P<0.05),D组的BrdU阳性细胞数显著多于C组(P<0.05).结论 NSCs移植和NGF单独及联合应用对MCAo大鼠的神经功能恢复均有作用,二者联合具有协同作用.NGF对自体NSCs的激活、增殖有促进作用,对移植NSCs的增殖有促进作用.     

BrdU标记冷冻胚胎雪旺细胞构建人工神经的研究

目的寻求人工神经较为理想的种子细胞。方法将体外扩增的胚胎兔雪旺细胞两步冷冻法处理后运用组织工程学的原理,5-溴脱氧尿嘧啶（5-bromodeoxyuridine,BrdU）标记后种植到去细胞基膜管中制备2cm长人工神经桥接体,经培养后,桥接修复兔正中神经缺损。结果16周后移植体再生神经中仍可见到大量BrdU阳性标记的雪旺细胞。冷冻雪旺细胞为种子细胞组,取得了与自体移植组相似的效果。结论冷冻保存胚胎雪旺细胞有可能成为人工神经较好的种子细胞来源;     

神经干细胞移植对大鼠脑自由落体撞击伤的治疗作用

目的通过神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑自由落体撞击伤,探讨NSCs对脑外伤功能恢复的影响。方法体外培养NSCs并用5-2溴脱氧尿嘧啶(B rdU)标记。自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、4周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测B rdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达。结果大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显。神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、4周时,实验组的评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。第2、4周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,以后逐渐下降。B rdU阳性细胞在损伤灶中心区最高多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现。结论NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复。移植的NSCs可以在损伤部位存活并增殖分化与迁移。     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

移植的神经干细胞在脑损伤区壳聚糖载体中的存活与分化

目的:探讨移植的NSCs在大鼠脑损伤区壳聚糖载体中的存活、分化情况及其对TBI大鼠认知功能的影响。方法:低温冷冻干燥法制备壳聚糖多孔支架。将从鼠胚前脑中分离的NSCs扩增、标记BrdU。Feeney法制备SD大鼠TBI模型,随机分为3组:损伤对照组清创后不做移植;NSCs 支架移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植;NSCs 支架 NGF移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植,并在其中加入NGF。术后1、2、3个月行避暗回避和跳台试验。脑切片行Nissl染色、BrdU与NF-200免疫荧光双标染色。结果:两移植组的认知功能在术后1、2、3个月较损伤对照组明显改善,含NGF的移植组改善更加显著。两移植组术后1、2、3个月在移植区均可见BrdU与NF-200免疫荧光双标细胞,含NGF移植组中的双标细胞数量多、胞体大、突起多且长。结论:大鼠TBI后移植的外源性NSCs可以在脑损伤区壳聚糖载体中长期存活并向神经元分化,可以改善大鼠的认知功能;NGF对其具有促进作用。     

神经支架复合体修复周围神经缺损

目的探讨壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性神经生长因子联合制成组织工程神经支架复合体修复大鼠周围神经缺损的可行性.方法壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性的神经生长因子结合,制备成新型的组织工程神经支架复合体,修复大鼠坐骨神经10 mm缺损,术后16周进行免疫组织化学等再生神经形态学观察.用单纯壳聚糖导管和自体神经分别作为阴性、阳性对照.结果复合支架组的神经再生数目和直径均优于单纯壳聚糖导管组(P＜0.01),与自体神经移植组相当.结论壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性的神经生长因子结合,制备成的组织工程神经支架复合体对大鼠神经再生提供良好的再生微环境,可明显促进神经再生,效果接近自体神经移植水平.     

牙髓干细胞对兔面神经损伤的修复作用及其机制

目的：通过手术建立兔面神经损伤模型,探讨牙髓干细胞对兔面神经损伤的修复作用,阐明其可能机制。方法：分离、培养并诱导牙髓干细胞。45只兔随机分为正常对照组、模型组和实验组,每组15只。除正常对照组外,其余各组兔沿嘴角至耳前处做长约3 cm的切口,离断面神经上颊支,建立面神经上颊支损伤的动物模型。1周后向实验组兔手术术腔部位注入0.1 mL牙髓干细胞悬液（5×10⁶个）,正常对照组兔不作任何处理,模型组兔注射等量磷酸盐PBS缓冲液。术后2周观察各组兔行为表现及面部胡须运动功能评分,HE染色观察各组兔面神经组织病理形态表现,免疫组织化学染色观察兔面神经组织中脑源神经生长因子（BDNF）和睫状神经生长因子（CNTF）阳性细胞数,透射电镜观察兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度。结果：成功分离鉴定原代幼兔牙髓干细胞,大多数呈成纤维状、长梭形。HE染色后,第3代干细胞的细胞核呈深蓝色、卵圆形,呈梭形着色深细胞为成纤维细胞样细胞。与正常对照组比较,模型组兔面部胡须运动功能评分降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面部胡须运动功能评分升高（P<0.05）。与模型组比较,实验组兔治疗10周后,再生神经纤维较多,呈束状且紧密。与正常对照组比较,模型组兔面神经组织中BDNF和CNTF阳性细胞数明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面神经组织中BDNF和CNTF阳性细胞数明显升高（P<0.05）。与正常对照组比较,模型组兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度数均明显升高（P<0.05）。结论：牙髓干细胞对面神经损伤具有一定的修复作用,其机制可能与上调BDNF及CNTF表达有关联。