某医院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的了解某医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌检出率,确定其基因型,并对其相关流行病学进行研究。方法收集2004年10月—2005年7月医院临床标本分离的多重耐药大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌134株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NC-CLS)所推荐的方法进行表型确证试验,以聚合酶链反应(PCR)法进一步检测CTX-M酶基因型,PCR产物测序并确定其基因型。随机扩增多态DNA(RAPD)对携带CTX-M酶的阳性菌株作流行病学分析。结果112株ESBLs表型阳性的肠杆菌科细菌中90株携带CTX-M基因,共检出3种基因型,即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。RAPD共测40株菌,19株大肠埃希菌有7种RAPD类型,11株肺炎克雷伯菌有5种RAPD类型,10株阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结论肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs相当普遍,主要为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。CTX-M酶存在克隆传播。     

产ESBLs大肠埃希菌CTX—M型耐药基因分析

目的了解某院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）在大肠埃希菌中的检出率，并确定其基因型。方法对该院2005年1—12月临床送检标本中分离的197株大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验和接合试验；采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M酶基因型，对PCR产物测序并确定其基因型。结果197株大肠埃希菌中有104株（52．79％）ESBLs表型检测阳性，其中91株符合供体菌标准，64株（70．33％）接合成功，接合子均确证产ESBLS。PCR扩增结果示104株产ESBLs大肠埃希菌中共有98株（94．23％）携带CTX-M型基因，其中38株（36．54％）检出blaCTX-M-1组基因，69株（66．35％）检出blaCTX-M-9组基因。64株接合子中共有51株（79．69％）携带CTX-M型基因，其中18株（28．13％）检出blaCTX-M-1组基因，35株（54．69％）检出blaCTX-M-9组基因。基因测序确定存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15、CTX-M-14、CTX-M-27五种基因亚型，以CTX-M-14为主。结论该院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重，产ESBLs细菌基因型以CTX-M-9组的CTX-M-14亚型为主，同时存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15和CTX-M-27等多种亚型。     

蚌埠地区产超广谱β-内酰胺酶菌株CTX-M型耐药基因的分布

目的 了解蚌埠市部分医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型ESBLs基因分布情况。方法 标本为蚌埠市3所医院2003年4月-2004年4月间，临床分离产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌147株；采用聚合酶链反应（PCR）扩增产CTX-M型ESBLs菌株基因；按Sanger双脱氧末端终止法，用自动测序仪对其进行测序以鉴定基因型。结果 147株产ESBLs菌株中有92株携带CTX-M型ESBLs基因，其中CTX-M-14型52株、CTX-M-3型20株、CTX-M-15型20株。结论 蚌埠市部分医院产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高，主要为CTX-M-14型。     

大肠埃希菌胆汁培养分离株ESBLs基因分型报告

目的了解深圳市人民医院来自肝胆外科胆汁培养的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的基因型和耐药性。方法应用PCR及DNA测序方法分别分析产酶株的TEM、SHV及CTX-M编码基因,并分析11种抗生素对产酶株的最低抑菌浓度(M IC)。结果在20株产ESBLs大肠埃希菌中,13株检出CTX-M-14基因;5株检出CTX-M-15基因,1株检出SHV-2 a基因,1株三种基因均未检出。结论该院胆汁培养分离的产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M-14。     

变性高效液相色谱分析浙江沿海地区ESBLs基因类型研究

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型,了解浙江沿海地区ESBLs基因型分布情况。方法对171株多药耐药肠杆菌科细菌进行表型确证试验,采用多重PCR对标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株进行CTX-M扩增,扩增产物经DHPLC分析,通过与标准菌株色谱峰比对进行临床菌株基因分型。结果 171株多药耐药肠杆菌科细菌,有142株临床菌株ESBLs表型阳性,经多重PCR扩增142株肠杆菌科109株携带CTX-M基因,52株为CTX-M-1产物,57株为CTX-M-9产物,检出率达79.80%,其中大肠埃希菌携带CTX-M基因比例最高,其次是肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌;109株临床菌株PCR产物经DHPLC分析检测出4种CTX-M基因型,33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14。结论运用DHPLC技术检测出CTX-M型ESBLs菌株有4种基因型,其中CTX-M-14型是CTX-M型ESBLs主要型别;该地区细菌携带CTX-M型ESBLs以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌最多见。     

8株产变异型CTX-M-14细菌的耐药基因分析

目的分析本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的变异株基因序列。方法使用通用引物经聚合酶链反应,自本地区1999~2000年间分离的确认产ESBLs的98株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分离出产CTX-M-9组的所有菌株,将PCR产物送交测序公司完成测序,提交GenBank进行比对,并作结构分析。结果本地区的产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶菌株中有8株变异株存在。结论合肥市存在新的CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶基因型,来自CTX-M-14。     

产CTX-M酶肠杆菌科细菌耐药性及其相关耐药基因研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用纸片扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,用聚合酶链反应(PCR)技术检测相关耐药基因并用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%;检测菌株对亚胺培南全部敏感,质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;产ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX-M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多;碳青霉烯类抗菌药物是目前治疗产ESBLs细菌最有效药物。     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。方法收集产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床菌株30株,应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法,分别对其TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER编码基因进行分析。结果在30株菌株中有26株为CTX-M型,占86.67%;其中CTX-M-9型共计16株占61.5%,CTX-M-1型8株占30.8%,CTX-M-2型7株占26.9%;同时产CTX-M-1型及CTX-M-2型共4株占15.4%,产CTX-M-2型及CTX-M-9型1株占3.8%,产CTX-M-1型及CTX-M-9型1株占3.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要临床流行基因型是CTX-M-9型。     

新生儿病房分离产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因检测

目的了解新生儿病房产ESBLs大肠埃希菌的ESBLs的基因型。方法运用多重PCR方法同时检测70株分离自连云港市第一人民医院新生儿病房产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因,并对65株CTX-M阳性菌株中的49株进行CTX-M单基因扩增,将扩增产物测序,测序结果进行网上比对,确定其基因型。结果所检测的70株产ESBLs菌株中,CTX-M单独阳性共55株,CTX-M+TEM同时阳性5株,CTX-M+SHV同时阳性5株;未检出TEM、SHV单独阳性菌株,另有5株菌未检出3种ESBLs基因;测序分析的49株CTX-M阳性菌株中,47株基因型为CTX-M-14,同时检出2株CTX-M-15。结论连云港市第一人民医院新生儿病房的产ESBLs大肠埃希菌基因型以CTX-M型为主,兼有SHV和TEM型;CTX-M型中以CTX-M-14为主;加强产ESBLs菌株基因检测对产ESBLs致病菌的预防控制有一定的指导意义。     

在中国大陆首次检出CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶基因

目的探讨湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及其基因型。方法采用多重PCR法对产ESBLs的142株临床分离株进行CTX-M酶基因检测,然后用组特异性引物对CTX-M酶整个开放阅读框进行扩增,PCR产物测序并确定其基因型。结果湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs检出率为76.8%（109/142）;组特异性PCR产物测序后发现有三种基因型,分别为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。结论本地区CTX-M型ESBLs检出率高,共检出三种CTX-M酶基因型,这是在中国大陆首次发现CTX-M-15型ESBLs。     

老年患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区老年患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集来自老年患者分离鉴定的大肠埃希菌株1 327株,通过K-B法作药敏试验,采用美国NC-CLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株,并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株,检出率为52.9%,产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为54.5%~100.0%;PCR初步分型结果：单独携带TEM型基因的占56.7%,单独携带SHV型基因的占15.0%,携带两种基因的占25.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升,具有多重耐药的特点;产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因,其中绝大部分为产TEM型β-内酰胺酶。     

重症监护病房多重耐药菌主动筛查及定植与感染状况调查分析

目的对某院4个重症监护病房患者多重耐药菌感染/定植状况进行调查分析,为预防和控制多重耐药菌在医院内传播,降低医院感染率提供依据。方法实时查阅病历,询问患者临床症状,主动收集患者肛拭子、咽拭子、鼻拭子、大便等标本,用显色培养基筛查(ESBLs)大肠埃希菌、(ESBLs)肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素肠球菌(VRE),结合临床微生物检验报告(2010年1月1日～2010年8月12日),对多重耐药菌的感染与定植状况、医院感染的危险因素等进行分析。结果患者入住ICU48h内、48h后均有多重耐药菌的感染与定植,而以(ESBLs)大肠埃希菌为主。(ESBLs)大肠埃希菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、(ESBLs)肺炎克雷伯菌、耐万古霉素肠球菌(VRE)的定植率(无感染症状)分别为42.86%、25.00%、42.86%、28.57%;感染率(有感染症状)分别为57.14%、75.00%、57.14%、71.43%。患者中有62.70%使用过抗菌药物,21.50%接受过气管插管,32.95%接受过呼吸机,2.27%接受过动静脉导管插管,4.00%接受过留置导尿管,12.40%使用过激素治疗。结论 ESBLs大肠埃希菌是ICU定植和感染的主要多重耐药菌。主动筛查多重耐药菌感染和定植状况,及时发现多重耐药菌,第一时间报告临床,采取消毒隔离措施,及时对患者进行治疗,切断多重耐药菌传播途径,降低或避免多重耐药菌医院感染。     

院内和社区感染大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：了解院内和社区感染患者标本中分离的大肠埃希菌ESBLs(超广谱β-内酰胺酶)的产生及耐药情况。方法：采用体外扩散确证试验检测。ESBLs，同时用VITEK-AMS和K—B琼脂扩散法进行体外药敏试验。结果：社区感染标本中分离出大肠埃希菌86株，产ESBLs菌株28株，阳性率为32．6％，其中尿液标本中分离出42株，产ESBLs菌株17株，阳性率为40．5％；院内感染标本中分离出大肠埃希菌95株，产ESBLs菌株50株，阳性率为52．6％，其中尿液标本中分离出53株，产ESBLs菌株22株，阳性率为41．5％。社区和医院感染大肠埃希菌ESBLs产生率存在差异有显著性，但从尿液标本中分离的大肠埃希菌其ESBLs产生率差异无显著性。ESBLs阳性株对多种抗生素耐药，其耐药性明显高于ESBLs阴性株。结论：本地区ESBLs产生情况十分严重。在抗感染治疗中，尤其是社区应加强广谱抗生素管理和使用。     

产ESBLs大肠埃希菌基因型分析

目的 了解医院感染的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌医院感染的临床分布及其基因型特征。方法用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs大肠埃希菌151株，应用PCR方法分别扩增产酶菌株的TEM、SHV和CTX-M3种β-内酰胺酶基因，并对PCR扩增结果及ESBLs株临床分布进行分析。结果PCR扩增结果显示，CTX-M、TEM和SHV基因的阳性率分别为92．10％，49．7％和1．30％；48．3％的菌株同时携带多个基因。产ESBLs大肠埃希菌广泛分布于24个临床科室，其中普外科占23．2％，重症监护病房占10．6％。标本分布较为集中，29．8％来自尿液，24．5％来自呼吸道标本，23．9％来自穿刺液。结论医院感染中，产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型是CTX-M，尿液、呼吸道标本、穿刺液是其主要来源，产ESBLs菌分布广泛，需引起重视。     

产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药性与基因型分析

目的 分析医院急诊科3年内产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型,以指导临床用药.方法 采用ESBLs表型确证试验筛选产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌,提取产ESBLs菌的质粒DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增产ESBLs株质粒TEM、SHV、CTX-M1、CTX-M9和OXA5种基因,并对其扩增物进行DNA序列分析,测定大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性.结果 共检出143株大肠埃希菌与77株肺炎克雷伯菌,其中84株为产ESBLs菌,占38.2％;ESBLs研究菌株全部携带TEM型、77.4％携带CTX-M9型基因;同一菌株携带2、3、4个基因的菌株比例分别为44.8％、33.3％和7.1％;产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌为多药耐药菌,其中对青霉素类、第一、二、三代头孢菌素类、磺胺类和氟喹诺酮类耐药率高达80.0％～100.0％;碳青霉烯类对产ESBLs细菌仍保持较高的抗菌效果.结论 产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药基因,以TEM型和CTX-M9型为主,携带＞2个耐药基因的产ESBLs菌株比例较高;产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对含酶抑制剂的抗菌药物、碳青霉烯类抗菌药物仍保持较高的敏感性,研究中发现美罗培南耐药菌株,应引起临床重视.     

VITEK-2 Compact高级专家系统对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的检测分析

目的 评估VITEK-2 Compact(V2C)高级专家系统(AES)对CTX-M型ESBLs的检测分析能力.方法 随机抽取2010年1-8月AES所提示的产ESBLs菌株194株,进行CTX-M表型分析,并与聚合酶链反应(PCR)方法加以比较.结果 194株产ESBLs菌株经AES提示CTX-M型94株,检出率为48.5％,PCR证实携带CTX-M基因型164株,检出率为84.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);AES报告的94株CTX-M型产ESBLs,经PCR确认为89株,头孢他啶MIC值≤1μg/ml占95.5％,其耐药表型以CTX-M型为主,而漏检的75株中,头孢他啶MIC值≤1 μg/ml只占2.7％,其耐药表型大肠埃希菌以产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌以产ESBLs或ESBLs+膜渗透障碍为主;AES与PCR漏检株对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟耐药率要高于符合株.结论 AES对混合型耐药机制的CTX-M型产ESBLs检测有一定的漏检;如需进一步进行产ESBLs的亚型研究或相关流行病学调查,仍需要以分子生物学方法进行验证.     

尿液pH对常见泌尿系感染细菌抗生素敏感性的影响

目的 探讨尿液pH对常见泌尿系感染细菌抗生素敏感性的影响。方法 配制不同pH的人工尿液,以大肠杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBL)的肺炎克雷伯菌和产ESBL的铜绿假单胞菌为研究菌种,环丙沙星、左氧氟沙星、磷霉素氨丁三醇和头孢呋辛为研究药物,采用药敏试验中的微量肉汤稀释法比较不同抗生素在不同pH的人工尿液培养基中的抗菌效力。结果 环丙沙星对大肠杆菌、表皮葡萄球菌和产ESBL的肺炎克雷伯菌的抗菌效果随着pH升高而升高;左氧氟沙星对大肠杆菌和表皮葡萄球菌的抗菌效果亦随着pH升高而升高;磷霉素对大肠杆菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的抗菌效果随着pH的升高而降低;头孢呋辛对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌效果亦随着pH的升高而降低。结论 通过调节尿液pH能够改变致病菌对抗生素的敏感性,以期在临床上提高抗生素对泌尿系感染的治疗效果。     

ESBL阳性多重耐药大肠埃希菌对消毒剂的抗性研究

摘要:目的　研究临床分离的28株产ESBL多重耐药大肠埃希菌对抗生素的耐药情况和对3种消毒剂的MICs与MBCs,分析其耐药性与消毒剂抗力的关系。方法　收集某医院临床分离出的产ESBL多重耐药大肠埃希菌,进行药敏试验,并测定其对氯己定、苯扎溴铵、2,4,4-三氯-2-羟基二苯醚的MICs和MBCs,并与大肠埃希菌ATCC25922相比较。结果　28株试验菌呈现25种耐药谱,有21种抗生素出现耐药现象。分别有35.7%、89.3%、96.4%的菌株对氯己定、苯扎溴铵、2,4,4-三氯-2-羟基二苯醚的MICs和MBCs均高于标准株。结论　临床分离的产ESBL多重耐药大肠埃希菌对抗生素有较高耐药性,同时亦对苯扎溴铵和2,4,4-三氯-2-羟基二苯醚呈现出MIC和MBC升高;各种来源菌株的耐药性与消毒剂抗性无明显相关性。     

大肠埃希菌和克雷伯菌属超广谱β-内酰胺酶的检测

目的 探讨超广谱β－内酰胺酶（ESBLs)介导的耐药性在临床分离的大肠埃然菌、克雷伯菌属中的作用。方法 收集耐氨苄西林的大肠埃然菌和克雷伯菌属146株,对其中119株β－内酰胺酶阳性的细菌用双纸片扩散法筛选产ESBLs菌株,阳性菌再用Etest复检;同时对36株含SHV基因的克雷伯菌用PCR－Nhe I酶切的方法从基因水平检测SHV－ESBL。结果 共筛选出28株细菌产ESBL,占产酶菌的23．5％,其中双纸片扩散法、Etest均阳性的细菌有25株,PCR－Nhe I酶发反应结果阳性的1株（155K）,DNA测序结果证实其所含SHV基因为SHV－2。结论 目前,大肠埃希菌、克雷伯菌属中SHV－ESBL介导的耐药性尚未占主要地位。     

Ⅰ类整合酶与大肠埃希菌耐药关系的初步研究

目的 了解医院大肠埃希菌临床分离株的耐药性变迁及Ⅰ类整合酶在产与非产ESBLs大肠埃希菌中的分布状况,分析和评估Ⅰ类整合酶在该菌耐药中的作用.方法 按CLSI 2010年标准,用K-B法进行药敏试验,双纸片协同法检测产ESBLs株,PCR法扩增Ⅰ类整合酶基因;数据经x2检验进行统计学分析.结果 2006-2010年大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因等耐药性较低,对其他各类的药物表现出较高的耐药率,未检出亚胺培南耐药株;部分菌株对氨基糖苷类药物的耐药性有稍下降的趋势;150株大肠埃希菌中104株Ⅰ类整合酶扩增阳性,产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶的检出率为71.8％,非产ESBLs菌株中检出率为66.6％,差异无统计学意义;Ⅰ类整合酶阳性菌株和阴性株对氨基糖苷类抗菌药物耐药率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院大肠埃希菌5年中耐药性多呈轻度升高趋势,Ⅰ类整合酶与产ESBLs耐药无关,Ⅰ类整合酶阳性株对多种抗菌药物的耐药率大于整合酶阴性菌株,建议临床加强对大肠埃希菌耐药性的监测.