125Ⅰ-HPNS-TOC的生物学评价

目的 研究联接标记法制备的125Ⅰ-HPNS-TOC与小细胞肺癌株NCI-H446的受体结合特性及其在小鼠体内的分布.方法 125Ⅰ-HPNS-TOC与NCI-H446进行受体分析,并进行昆明鼠体内分布实验.结果 125Ⅰ-HPNS-TOC与NCI-H446上的SSTR结合的具有高亲和力,在小鼠体内主要经消化系统和泌尿系统排出体外.结论 125Ⅰ-HPNS-TOC与SSTR结合力高,有望成为生长抑素受体阳性肿瘤的靶向放射性药物.     

125Ⅰ-HPNS-TOC的生物学评价

目的研究联接标记法制备的^125I—HPNS—TOC与小细胞肺癌株NCI—H446的受体结合特性及其在小鼠体内的分布。方法^125I—HPNS—TOC与NCI—H446进行受体分析,并进行昆明鼠体内分布实验。结果^125I—HPNS—TOC与NCI—H446上的SSTR结合的具有高亲和力,在小鼠体内主要经消化系统和泌尿系统排出体外。结论^125I—HPNS—TOC与SSTR结合力高,有望成为生长抑素受体阳性肿瘤的靶向放射性药物。     

生长抑素受体2亚型在NCI-H446细胞和裸鼠肺组织细胞中的表达

目的研究生长抑素受体2(SSTR2)亚型在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织细胞中的表达特性。方法选择体外培养的小细胞肺癌NCI-H446细胞株及裸鼠正常肺组织的冷冻切片,应用免疫荧光技术检测SSTR2亚型的分布与表达。结果NCI-H446细胞在激光共聚焦显微镜下呈现明亮的绿色荧光,肺组织的冷冻切片也可见闪亮荧光。SSTR2在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织中表达的阳性率分别为100.0%、93.8%,两者比较差异无显著性(χ2=0.004,P>0.05);但两种标本细胞SSTR2强阳性表达数构成比之间比较,差异有显著意义(χ2=5.661,P<0.05)。结论体外培养的NCI-H446小细胞肺癌细胞株和正常裸鼠肺组织细胞均有SSTR2亚型表达,但小细胞肺癌细胞上的表达密度明显高于正常肺组织。     

RC-160对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

0　引言　RC-160是一种新兴的生长抑素的类似物,近年来由于它在抑制肿瘤细胞增殖及异常分泌等方面的作用而受到关注.研究表明,人类小细胞肺癌(SCLC)细胞株NCI-H446表面富含生长抑素受体,通过该受体可介导RC-160对NCI-H446的抑制作用.国内尚未见到有关报道.我们应用细胞生物学方法评价RC-160对人SCLC.细胞株NCI-H446的作用及其作用特点,旨在为SCLC的临床治疗提供新的思路.1　材料和方法1.1　材料　1细胞:NCI-H446细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所的细胞库.细胞按常规培养;2试剂:RC-160由美联(西安)生物科技有限公司合…     

高/低侵袭转移性肺癌干细胞模型的建立

目的以人肺癌NCI-H446细胞为研究对象,建立一种高/低侵袭性肺癌干细胞(high/low invasion lung tumor stemcells,H/L-ILTSCs)模型,并鉴定其生物学特性。方法首先,利用transwell小室迁移实验分离高/低迁移性NCI-H446细胞。取高/低迁移性NCI-H446细胞采用transwell小室侵袭实验分离高/低侵袭转移性NCI-H446细胞。然后,以CD133、CD44为肺癌干细胞(lung tumor stem cells,LTSCs)表面标志,采用磁珠分选法分离NCI-H446细胞H/L-ILTSCs并进行纯度鉴定。最后,采用MTT法、transwell侵袭及免疫缺陷动物成瘤等实验,检测H-ILTSCs、L-ILTSCs及NCI-H446细胞的生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力。结果 H-ILTSCs生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力均高于L-ILTSCs及NCI-H446细胞,而L-ILTSCs与NCI-H446无显著差别。结论人肺癌细胞NCI-H446中可以分离和富集H/L-ILTSCs,且二者存在着干性差别。     

芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响

目的：研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制。方法：采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞。测定球形成率用以评价0(0.1% DMSO对照组),5.0,10.0,20.0 μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达。结果：0,5.0,10.0,20.0 μmol/L 芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)%,(13.6±1.7)%,(10.6±1.6),(6.9±1.3)%],并呈浓度依赖性下调uPAR蛋白的表达(P<0.05)。结论：芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调uPAR表达相关。     

Sorcin蛋白高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的关系

目的探讨Sorcin高表达与肺癌细胞NCI-H446多药耐药的相关性。方法研究对象为肺癌细胞NCI-H446,以顺铂为诱导药物,建立多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP;应用反义核酸技术抑制NCI-H446/CDDP细胞Sorcin的表达建立转染细胞,为反义核酸组,同时设空白对照组。通过RT-PCR及Western-blot分别检测各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达;MTT法测定NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组3组细胞在不同化疗药物DDP、VCR、ADM、VP-16作用下生存率;用Pearson相关分析Sorcin高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的相关性。结果各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达,NCI-H446/CDDP组与空白对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05),NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组各组间比较均具有显著性意义(P<0.05);NCI-H446/CDDP细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平均明显高于NCI-H446细胞,分别为NCI-H446细胞的9.81倍和7.67倍。各组细胞在不同化疗药物作用下IC50:NCI-H446/CDDP组>反义核酸组>NCI-H446组,各组间比较差异具有显著性意义(P<0.05)。Pearson相关提示:Sorcin核酸及蛋白水平的表达与在不同化疗药物作用下各组细胞的IC50值呈负相关(P<0.05)。结论 Sorcin蛋白的高表达与肺癌多药耐药相关,抑制Sorcin蛋白的表达可以逆转肺癌多药耐药性。     

MnSOD沉默对NCI-H446细胞系球细胞体外致瘤性的影响

目的：研究锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)沉默对人小细胞肺癌NCI-H446细胞 系球细胞体外致瘤性的影响及其潜在的机制。方法：采用悬浮培养法得到人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞,用 Western印迹分析MnSOD和尿激酶型纤溶原酶激活物(urokinase type plasminogen activator,uPAR)表达。利用腺病毒感染 技术沉默NCI-H446细胞MnSOD,球形成法和软琼脂集落形成法评价MnSOD沉默对NCI-H446球细胞体外致瘤性的影 响,用Western印迹检测uPAR的表达。结果：与NCI-H446细胞比较,NCI-H446细胞第2代球细胞的球形成率和集落形 成率及MnSOD和uPAR表达明显增加(P<0.05)。表达shMnSOD的腺病毒抑制NCI-H446细胞第2代球细胞球形成率、集 落形成率及uPAR的表达。结论：MnSOD可能通过调控uPAR表达维持小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞的体外高致 瘤性。     

热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖和VEGF mRNA表达的影响

目的:观察热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖作用以及VEGF mRNA表达的影响。方法:将NCI-H446细胞分组,Ⅰ热疗组(43℃加热90 min);Ⅱ紫杉醇组;Ⅲ热疗联合紫杉醇组;Ⅳ对照组(常规培养细胞)。分别在处理72 h后用MTT法检测4组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组细胞中VEGF mRNA的表达量。结果:加热抑制了NCI-H446细胞的增殖;单独应用紫杉醇随着药物浓度的倍比增大,增殖抑制率逐渐增大;加热联合紫杉醇与对应浓度单独使用比较差异有统计学意义(P<0.05)。加热降低了NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达;加热联合紫杉醇组中NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达量明显减少,与对应浓度紫杉醇组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:43℃加热90 min联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖有抑制作用,并降低了VEGF mRNA的表达量。     

125I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性.方法氯胺-T法标记、Sephadex G-50柱层析分离纯化制备 125I-VIP.通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价 125I-VIP与鼠H22肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察 125I-VIP在荷H22小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性.结果 125I标记率为73.8%, 125I-VIP比活度18.2 TBq/mmol,放射化学纯度(RCP)98%. 125I-VIP与H22细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1.74 nmol/L与28.63 nmol/L,最大结合容量(Bmax)分别为0.27 pmol/106细胞与5.75 pmol/106细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制 125I-VIP与H22细胞结合.各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P<0.05, P<0.001),20 min T/NT比值达最大为2.68,肺放射性高于血液与肝脏(P<0.05, P<0.01),体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg 非标记VIP对T/NT比值的抑制率分别为26.87%与35.82%.结论 125I-VIP在体内、外与鼠H22肝癌细胞的结合由受体介导.此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据.     

注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物的体外抗肿瘤作用

为了评价注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物(ML061)对各种体外培养肿瘤细胞的细胞毒性作用,本研究选取MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446、HO-8910、Bcap-37、KB、SMMC-7721、HT-29、SW480、LS-174t、SGC-7901、MCF-7、A549、NCI-H460等14个肿瘤细胞株,分别用不同质量浓度(200,20,2,0.2,0.02,0.002,0.000 2,0.000 02μg/mL)ML061处理肿瘤细胞72 h,用MTT法测定细胞活力,并计算药物对各肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50。结果发现,ML061可抑制多种体外培养的肿瘤细胞株的活力,且这种抑制作用呈剂量依赖性。与阳性对照药市售多西他赛注射液奥名润相比,在选取的14个肿瘤细胞株中,ML061对Bcap-37、MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446和SW480的IC50小于0.1μg/mL。ML061对人卵巢癌Bcap-37、人结肠癌SW480、人小细胞肺癌NCI-H446、人乳腺癌MDA-MB-435及MDA-MB-435s等肿瘤细胞株的体外抑制作用较强。总之,ML061抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖,与阳性对照药奥名润相同,以Bcap-37、SW480、NCI-H446和MDA-MB-435s这4个细胞株较为敏感,而MDA-MB-435对ML061的敏感性高于奥名润。     

Tipe2过表达对小细胞肺癌H446细胞迁移的影响

目的观察Tipe2过表达对小细胞肺癌H446细胞迁移的影响及可能机制。方法以脂质体转染技术建立Tipe2过表达的H446小细胞肺癌细胞系,利用荧光显微成像技术、Western Blot免疫印迹技术和细胞划痕实验分别检测Tipe2蛋白表达情况,细胞信号Erk1/2、p38、p65通路激活情况和细胞迁移能力变化。结果 GFP-Tipe2质粒转染H446细胞成功高表达Tipe2并带有标签GFP的绿色荧光。Tipe2过表达抑制Erk1/2通路磷酸化、抑制NF-κB通路p65磷酸化、增强p38通路磷酸化。H446-Tipe2组在48 h细胞迁移运动明显比H446-Vector组划痕区间宽,细胞运动缓慢。结论 Tipe2过表达抑制Erk1/2和NF-κB通路并激活p38通路,并且抑制H446的细胞迁移运动。     

肺癌细胞RhoA、RhoB和RhoC的表达及意义

目的：通过研究RhoA、RhoB和RhoC在肺癌组织及细胞系中表达水平的变化,探讨Rho亚家族与肺癌发生、发展及转移的关系。方法应用荧光定量RT-PCR法、Western blotting法研究四种肺癌细胞系RhoA、RhoB和RhoC mRNA和蛋白表达水平变化,免疫组织化学法检测45例人肺癌组织RhoA、RhoB和RhoC蛋白表达。结果四种肺癌细胞系RhoA和RhoB mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组（P均〈0.05）,肺癌细胞系组间比较,表达水平差异无统计学意义（P均〉0.05）,各组间RhoC mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义（P均〉0.05）。RhoA、RhoB蛋白在人肺癌组织呈阳性表达,中分化鳞癌组阳性率与非中分化鳞癌组阳性率差异无统计学意义（P均〉0.05）,而RhoC全部呈阴性表达。结论 RhoA、RhoB在肺癌组织中异常高表达,提示Rho亚家族参与了肺癌的发生、分化和转移过程。     

ABCE1基因siRNA 稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选

 目的构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA 表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株。方法根据的DNA 序列设计3 对siRNA 引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的基因siRNA 表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2 及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446 细胞中,并以G418 进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA 表达载体构建成功。将基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NCI-H446 后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418 筛选,获得了基因沉默的小细胞肺癌细胞系,该细胞系的ABCE1水平明显低于未转染siRNA 的小细胞肺癌细胞。结论成功的构建了基因siRNA 表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1 /Neo-siRNA。筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA 表达载体研究基因的作用机制提供实验基础。     

正常及糖尿病大鼠肝细胞膜胰高糖素受体放射分析

作者用蔗糖梯度离心分离肝细胞膜,以聚乙二醇为分离剂,建立了大鼠肝细胞膜胰高糖素受体放射分析法。本法的非特异性结合率<5％,特异性结合率25％～35％,批内双管变异为6.83％(n=18),批间重复性符合要求。用受体稀释法和竞争抑制法测定正常及糖尿病大鼠肝细胞膜胰高糖素受体的亲和力均无差异,但糖尿病大鼠肝细胞膜胰高糖素受体浓度较正常大鼠显著增加(P<0.05),尤以低亲和力受体增加明显。作者对受体浓度增加的机理进行了讨论。     

牛肾上腺皮质细胞成纤维细胞生长因子受体观测

目的：检查基础培养条件下牛肾上腺皮质束、网状带细胞（ＢＡＣ细胞）碱性成纤维细胞生长因子（ＢＦＧＦ）受体的分布情况。方法：ＢＡＣ细胞培养，＾１２５Ｉ－ｂＦＧＦ放射怀受体结构标记：γ－计数仪放射活性测定；Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析。结果：在该培养条件下，ＢＡＣ细胞表达的ｂＦＧＦ受体分为高、低两个亚型。它们的数目分别为４５００个／细胞和２８０００个／细胞，它们的平衡解离常数（ＫＤ）分别为２３．５和３８１．９