房颤患者vWF与ADAMTS-13水平的变化及意义

目的 研究房颤患者vWF、ADAMTS-13的变化及意义.方法 分别测定27例持续性房颤、20例阵发性房颤患者和25例正常对照组血浆血管性血友病因子（vWF）、血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）水平、D-二聚体（D-D）水平,测vWF/ADAMTS-13比值.结果 与对照组比较,阵发性房颤组、持续性房颤组的vWF、D-D均显著增高、ADAMTS-13明显下降,vWF/ADAMTS-13比值明显增高;vWF/ADAMTS-13比值在阵发性房颤组和持续性房颤组间差异有统计学意义,且持续性房颤组比值与D-D水平呈正相关.结论 房颤患者存在有明显vWF、ADAMTS-13水平变化,且与其可能出现的血栓栓塞并发症有密切关系.     

血管性血友病因子vWF73和vWF114片段的表达及其在ADAMTS13活性测定中的应用

目的 构建血管性血友病因子(vWF)A2区片段vWF73和vWF114的表达质粒,在大肠杆菌中表达两种谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白,并探讨两种蛋白作为底物在测定ADAMTS13活性中的应用价值.方法 应用PCR的方法扩增vWF A2区内vWF73和vWF114的相应DNA片段,分别克隆至GST融合表达载体pGEX-6P-1进行诱导表达,Ni-NTA琼脂糖柱纯化可溶性蛋白部分.以Western blot法榆测正常人血浆、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者血浆和重组ADAMTS13(rADAMTS13)水解两种重组vWF A2区片段的情况,并以此为底物用抗GST和抗His两种抗体建立酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血浆ADAMqS13活性的新方法.结果 成功表达和纯化了ADAMTS13的两种可溶性小分子底物GST-vWF73-H和GST-vWF114-H,均能被rADAMTS13或正常人血浆有效地水解,而遗传性和特发性TTP患者血浆则无此作用.同时,以此为底物建立了测定ADAMTS13活性的ELISA方法.结论 采用原核表达系统成功得到了vWF A2区片段vWF73和vWF114两种GST融合蛋白,可作为底物用于ADAMTS13活性的测定.

Abstract：

Objective To construct the expression vectors of vWF73 and vWF114 fragments of von Willebrand factor (vWF) A2 domain, and to express glutathione S-transferase (GST) fusion proteins in E.coli, and to explore their values in measuring ADAMTS13 activity as substrates. Methods The DNA fragments encoding vWF73 and vWF114 were generated using PCR and separately cloned into pGEX-6P-1 , a Schistosoma japonicum GST fusion expression vector. The expression of GST-vWF73-H and GST-vWF114-H was induced in liquid culture, followed by purification with Ni-NTA agarose column. The cleavage of two GST fusion proteins by recombinant ADAMTS13 ( rADAMTS13) or plasma from normal individuals and thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) patients were identified by Western blot. Based on an enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA) with anti-GST and anti-His monoclonal antibodies, GST-vWF73-H and GSTvWF114-H were used to measure plasma ADAMTS13 activity as substrates. Results Two small molecular substrates of ADAMTS13, GST-vWF73-H and GST-vWF114-H, are expressed and purified,which could be specifically cleaved by rADAMTS13 or plasma from healthy individuals, but not by plasma from congenital or idiopathic TTP patients. An ELISA assay was established to detect plasma ADAMTS13 activity using GSTvWF73-H and GST-vWF114-H as substrates. Conclusions Two GST fusion proteins in vWF A2 domain,vWF73 and vWF114, were expressed effectively using a prokaryotic expression system and could be used to detect ADAMTS13 activity as substrates.     

急性缺氧时内皮细胞中vWF的变化

目的：观察急性缺氧时内皮细胞中血管血友病因子（ｖＷＦ）的变化及其与血液高凝状态之间的关系。确定其在反映血管内皮细胞损伤和血液高凝状态研究中的价值。方法用免疫组织化学染色和显微分光光计及ＥＬＩＳＡ方法分别对急性缺氧所致大鼠肺血管内皮细胞和血中ｖＷＦ的含量进行检测,并用磷钨酸苏木素染色法显示肺血管中纤维蛋白的含量。结果随着缺陷氧时间的延长,内皮细胞的ｖＷＦ含量呈递减趋势,血中ｖＷＦ的含量呈递增趋势,血     

急性心肌梗死患者血浆vWF/ADAMTS13比值与冠状动脉病变程度的关系

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者的血管性血友病因子/血管性血友病因子裂解酶比值?(vWF/ADAMTS13)与AMI患者冠状动脉(冠脉)病变严重程度的关系.方法 纳入2018年4月1日至2019年3月1日在新疆维吾尔自治区人民医院心内科住院并且行冠脉造影的人群,根据是否确诊为AMI分为AMI组和对照组.采用Gens...     

急性心肌梗死和脑梗死患者血浆中ADAMTS13的测定及意义

目的 研究急性心肌梗死(AMI)及急性脑梗死(AIS)患者血浆中血管性血友病因子(vWF)裂解酶(ADAMTS13)抗原和活性变化情况,探讨ADAMTS13在动脉血栓性疾病患者发病中的作用及意义.方法 用Frests-WF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13的活性;用ELISA法检测ADAMTS13抗原含量;并对患者血浆vWF多聚物进行电泳分析.结果 正常对照组、AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量分别为(878±198)、(618±188)和(702±155)U/L;活性分别为(81.7±13.9)%,(59.2±22.1)%和(65.4±15.8)%.AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量及活性均显著低于正常对照组(P《0.01);vWF多聚物分析未见异常.结论 AMI及AIS患者血浆ADMATS13抗原及活性均降低,提示ADAMTS13的减少与动脉血栓性疾病的发病相关.     

ADAMTS13的结构、功能及其与TTP诊疗的关系

血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS 13）是一种能够特异性裂解血管性血友病因子（vWF）的血浆金属蛋白酶,严重的ADAMTS13活性缺失可导致特发性血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的发生.本文简要综述了ADAMTS13的结构和功能及其与TTP的发病机制、诊断和治疗之间的关系.     

肝移植后的继发急性髓系白血病

背景：肝移植后急性髓系白血病是一种极少见但病死率极高的并发症。目的：分析肝移植后急性髓系白血病的临床特征。方法：报告1例肝移植后发生急性早幼粒细胞性白血病病例,并辅以文献复习。结果与结论：患者接受原位肝移植后85个月,拔牙后出血不止,进一步查凝血功能异常、血常规、骨髓细胞学、白血病免疫分型检查提示为急性早幼粒细胞白血病、PML/RARa融合基因阳性,明确诊断急性早幼粒细胞性白血病,合并弥散性血管内凝血,给予输注新鲜冰冻血浆纠正凝血异常,经维甲酸、亚砷酸、柔红霉素联合诱导化疗,骨髓完全缓解。予柔红霉素和阿糖胞苷,米托蒽醌和阿糖胞苷巩固化疗2个疗程,之后定期予亚砷酸化疗,骨髓持续缓解。化疗同时,调整免疫抑制剂剂量和类型,患者肝功能稳定,未发生严重感染等并发症。结果说明,肝移植后可并发急性髓系白血病,以急性早幼粒细胞白血病常见,肝移植患者出现血象、凝血异常,要考虑急性早幼粒细胞白血病可能。应早期诊断及治疗,以减少死亡率。     

急性髓系白血病干细胞的研究进展

急性髓系白血病(AML)细胞群是由不同分化阶段的白血病细胞组成，其中最原始的细胞为白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)。虽然LSC所占比例极少，但仅其具有维持白血病细胞克隆的作用。AML的恶性转化发生在干细胞水平。这种发生恶性转化的干细胞的细胞和分子遗传学改变决定了白血病细胞克隆的分化特点，从而形成不同亚型的AML。LSC与正常遣血干细胞(hematopoietic stem cell，HSC)有许多相似之处，它具有自我更新能力和有限的分化潜能，同时又具有其自身独特的特征。LSC具有某些特殊的细胞表面标志，如CD90^-，CD117^-，CD123^ 。与正常的HSC相比，肿瘤抑制性蛋白-死亡相关蛋白激酶和干扰素调节因子1在LSC中高表达。与相对分化的白血病细胞相比，LSC主要处于G0期，其对常规化疗药物无效，因此LSC是白血病复发的根源。虽然LSC具有耐药的特点，但经合适的刺激如蛋白酶体抑制剂MG132的处理，LSC比正常HSC更易于凋亡。本将近年来对LSC的细胞和分子生物学方面研究的进展进行综述。为白血病发病机制及治疗策略的探讨提供新的思路。     

血友病A并急性髓系白血病(M3)一例

患者 ,男 ,32岁 ,因皮肤出现瘀癍、关节肿胀 ,全血细胞减少 2ｄ于 2 0 0 2年 6月 10日入院。患者自幼即反复出现皮肤瘀癍 ,多次出现膝关节、肘关节、肩关节肿胀疼痛 ,14岁时在本院就诊 ,血常规正常 ,ＰＴ 13.9ｓ(对照 13.0ｓ) ,ＡＰＴＴ 183.5ｓ(对照 4 6 .6ｓ) ,凝血活酶生成 +纠正试验示抗血友病球蛋白减少 ,进一步检测ＦⅧ∶Ｃ为 0 .0 0 1Ｕ ,ｖＷＦ∶Ａｇ为 1.2 0Ｕ ,诊断为血友病Ａ(重型 ) ,输注ＦⅧ后疼痛及皮肤瘀癍消失 ,关节肿胀明显减轻。 2ｄ前患者再次出现右侧肘关节肿胀疼痛 ,牙龈出血 ,为进一步治疗而入我院。既往史 :患有银屑…     

细胞凋亡相关抗原7A6在急性粒细胞白血病表达的意义

为了研究细胞凋亡相关抗原7A6在急性粒细胞白血病化疗前和化疗过程中的表达,探讨其表达率与疗效的关系。应用流式细胞仪和直接免疫荧光法,测定28例病人化疗前及化疗72小时后抗原7A6的表达率,比较表达率与疗效的关系。同时以10例正常人作为对照组。结果病人化疗前抗原7A6表达率与对照组无差别。化疗72小时后抗原7A6表达明显增高,表达率与疗效成正相关。结论提示,测定细胞凋亡相关抗原7A6表达率可预测急性粒细胞白血病的疗效。     

急性白血病合并弥散性血管内凝血41例临床分析

目的:总结急性白血病(AL)合并弥散性血管内凝血(DIC)的临床特点及诊治经验。方法:回顾性分析2009年1月至2013年12月收治的AL合并DIC患者41例的临床资料,包括原发病、临床症状、DIC发病时期、感染、白细胞计数及疗效。结果:AL合并DIC有90%发生在初发期,11例发生颅内出血,其中10例死亡。结论:防治AL致DIC的重点在于初发期。     

急性和慢性髓系白血病患者VEGF表达的研究

目的：探究急性髓系白血病（AML）与慢性髓系白血病（CML）血清及CML骨髓细胞VEGF含量的变化。方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）对49例AML和17例CML患者血清及20例CML患者骨髓细胞VEGF浓度进行检测。结果：AML患者血清平均VEGF浓度为201．17pg/ml,与正常对照组（133．37pg/ml)比较,有明显的统计差异（P＜0．05）;而CML患者血清VEGF水平可达517．79pg/ml,显著高于正常对照组（P＜0．001）,AML患者各亚型中VEGF水平无明显差异,但以M3型最高（299．31pg/ml),CML患者骨髓细胞培养上清液ＶＥＧＦ的浓度（649．16pg/ml)也显著高于正常骨髓细胞对照组（P＜0．01）,结论：AML和CML患者存在VEGF的异常高表达,提示血管生成和血管内皮生长因子可能在急性与慢性髓系白血病的发病中发挥重要作用。     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病中的表达

目的研究急性髓系白血病(AML)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)表达水平及其与预后的关系.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对45例初治、12例复发AML患者血清VEGF表达水平进行检测.结果45例初治、12例复发AML患者的血清VEGF表达水平分别为211.75±108.33pg/ml和237.17±113.56pg/mL,均明显高于正常对照组(119.51±41.60pg/mL;P＜0.05).初治AML患者中VEGF高表达组(＞211.75 pg/ml)完全缓解(CR)率为52%,低表达组(＜211.75 pg/ml)CR率为75%,两者比较差异显著(P＜0.05).结论血管内皮生长因子在刺激白血病细胞增殖、迁移中发挥重要作用.AML患者血清VEGF水平与预后具相关性.     

妊娠高血压综合征患者血浆血管性血友病因子及其裂解酶的测定及临床意义

目的检测正常孕妇及妊娠高血压综合征(PIH)患者血浆血管性血友病因子(vWF:Ag)水平及vWF裂解酶(vWF-CP)活性,探讨vWF及vWF-CP在PIH中的临床意义。方法采用残余胶原结合实验法及ELISA法分别对35例正常孕妇及52例PIH患者血浆vWF-CP活性及vWF:Ag水平进行检测。结果正常妊娠妇女血浆vWF:Ag(103．4±68．4)％显著高于正常非孕妇(78．4±51．6)％(P＜0．01),而血浆vWF-CP活性(76．3±1 8．4)％显著低于正常非孕妇(84．7±2．1)％(P＜0．05)。轻度妊高征妇女血浆vWF:Ag(98．8±48．5)％及vWF-CP活性(70．4±2 1．8)％与正常妊娠妇女无显著性差别(P＞0．05),而中、重度妊高征妇女血浆vWF:Ag(148．4±75．6)％显著高于正常妊娠妇女(P＜0．01),血浆vWF-CP活性(60．8±19．8)％显著低于正常妊娠妇女(P＜0．05)。结论妊高征患者血浆vWF升高,vWF-CP活性低下,参与妊高征的发生、发展,内皮损伤可能是致妊高征患者血浆vWF升高,vWF-CP活性低下的原因。     

初治急性早幼粒细胞白血病合并弥散性血管内凝血经验性治疗分析

本研究旨在探索初治急性早幼粒细胞白血病（acutepromyelocyticleukemia,APL）合并弥散性血管内凝血（disseminatedintravascularcoagulation,DIC）的临床特点及最佳治疗方法,以便指导临床治疗。对APL合并DIC的治疗方法及疗效进行回顾性分析。2008年1月-2013年3月收治的初治APlL患者25例,给予全反式维甲酸20mg,每日2次口服;三氧化二砷10mg,每日1次静脉滴注,诱导分化治疗。待早幼粒细胞脱颗粒后加用化疗。在患者治疗同时给予血小板补充、新鲜冰冻血浆、纤维蛋白原、冷沉淀、凝血酶原复合物,适当应用氨甲苯酸、低分子肝素联合治疗DIC。根据血常规、凝血功能及纤溶指标,调整用药。应用多因素分析初诊时白细胞数,血小板数,凝血酶原时间（PT）,血浆化部分凝血酶原时间（APTT）,纤维蛋白原水平,年龄等因素与出血严重性的关系。结果表明,在25例APL患者中（低危组5例,中危组13例,高危组7例）合并DIC22例,DIC发生率为88％。22例合并DIC患者中经系统治疗后,DIC得到纠正2l例（95．5％）,死亡1例（4．5％）。第1疗程获得完全缓解（CR）23例（92％）,平均CR时间为31．8±7．2d。诱导至完全缓解期平均输注血小板7．68±5．88u,红细胞8．90±5．69U;发生DIC患者中平均输注新鲜冰冻血浆21．92±19．32U,血小板数恢复时间29．3±9．3d,PT恢复时间12．7±9．5d,APTT恢复时间为11．6±8．6d,FDP恢复时间16．0±9．3d,纤维蛋白原恢复时间12．3±8．3d。多因素分析显示,发病时白细胞数〉10×10^9／L及APlH延长为严重出血的主要影响因素。结论：初治APL易发生DIC,因此早期积极输注血制品,积极应用抗凝血及抗纤溶的药物及肝素,尽快使凝血功能恢复正常水平,达到早期纠正DIC,可明显降低早期APL因DIC造成的死亡,高白细胞血症及AFTT 延长为严重出血的主要影响因素。     

慢性肾脏病患者血浆血管性血友病因子裂解酶活性测定

目的检测慢性肾脏病（CKD）患者血浆血管性血友病因子裂解酶（vWF-CP）活性及血浆血管性血友病因子（vWF）水平,探讨其在慢性肾脏病的意义。方法将139例CKD患者根据不同种类肾病及不同肾功能状态分组,其中狼疮肾炎（LN）31例,原发性肾病综合征（NS）25例,糖尿病肾病（DN）45例及慢性肾炎（CGN）38例;CKDⅠ期38例,CKDⅡ期30例,CKDⅢ期39例,CKDⅣ期19例,CKDⅤ期13例。采用残余胶原结合实验法及ELISA法对患者血浆vWF-CP活性及vWF水平进行检测,观察不同组患者血浆vWF-CP活性及vWF水平,并与正常对照组（40名）比较。结果LN、NS、DN及CGN患者血浆vWF-CP活性显著低于对照组,且以LN、NS组下降最明显,vWF水平均显著高于正常对照组,血浆vWF含量均与血浆vWF-CP活性呈负相关。CKDⅡ期、Ⅲ期血浆vWF-CP活性显著低于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ期．而Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ期之间无显著区别,vWF含量各期之间无显著差别。结论CKD患者血浆vWF-CP活性明显降低,其低下程度与肾病的病种有关。内皮损伤、自身抗体可能是致CKD患者vWF-CP活性低下的原因之一。它参与了CKD的发生发展,可能是CKD血栓形成的机理之一。     

急性髓系白血病患者骨髓细胞相关分子标志物表达研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病患者骨髓细胞相关分子标志物（PTEN、mTOR、NF-kB、CD44、PI3K）表达.选取20例住院患者,抽取骨髓液,先涂片检查骨髓白血病细胞百分比,并分临床缓解（9例）与未缓解（11例）两组.再将剩余的骨髓液以石蜡包埋,常规切片,免疫组化技术检测PTEN、mTOR、NF-kB、CD44、PI3K表达.结果表明：光学显微镜观察缓解组与未缓解组PTEN、mTOR、NF-kB、CD44、PI3K阳性细胞表达率分别为33.3、33.3、77.8、22.2、0与63.6,18.2,90.9,63.6,0.经统计学处理,PTEN和CD44两组比较,有统计学意义（P＜0.05）,荧光表达强度与图像分析也得出同样的研究结果.结论表明：急性白血病骨髓细胞PTEN、CD44高表达可作为急性髓系白血病难治诊断和预后判定的重要参考指标.