SIL-TAL1融合基因阳性急性T淋巴细胞白血病19例临床分析北大核心CSCD

目的分析伴有SIL-TAL1融合基因急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者的临床、分子生物学和预后特征,以提高对该疾病的认识。方法回顾性分析2014年1月至2022年2月苏州大学附属第一医院收治的19例SIL-TAL1融合基因阳性T-ALL患者临床资料,并与同期收治的196例SIL-TAL1融合基因阴性T-ALL患者比较。结果19例SIL-TAL1阳性T-ALL患者中,男16例(84.2%),女3例(15.8%),诊断时中位年龄15(7~41)岁;与SIL-TAL1阴性患者相比,SIL-TAL1阳性T-ALL患者年龄更低(P<0.001),HGB、WBC更高(P值分别为<0.001、0.009),在性别分布、PLT、染色体异常分布、免疫分型、完全缓解(CR)率方面,差异均无统计学意义(P值均>0.05);接受造血干细胞移植后,SIL-TAL1阳性与SIL-TAL1阴性T-ALL患者3年OS率分别为60.9%和74.4%(HR=2.070,P=0.071);3年无复发生存(RFS)率分别为49.2%和70.6%(HR=2.275,P=0.040),SIL-TAL1阳性T-ALL患者3年RFS率显著低于SIL-TAL1阴性T-ALL患者。结论伴SIL-TAL1融合基因的T-ALL患者发病年龄更低,HGB、WBC更高,接受造血干细胞移植后预后较差,复发期短。     

儿童急性淋巴细胞白血病6q16.3微卫星DNA缺失及生物信息学分析

目的定位儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）杂合性缺失（LOH）的集中区域,探索新的肿瘤抑制基因.方法取6q16.3的15个微卫星标记,用聚合酶链反应-变性凝胶电泳-银染技术对165例ALL患儿等位基因LOH的情况进行生物信息学分析;同时分析其与临床预后因素的相关性.结果至少1个位点的LOH率为32.7%,D6S1709-D6S1028及D6S2160-D6S1580是高频率集中缺失的区域,早期复发患儿的LOH率高于无早期复发患儿;谷氨酸受体6基因（GRIK2）可能为抑癌基因,2个区域存在可能代表新基因的表达序列标签12个.微卫星LOH与白细胞计数、病态细胞数、核型分析、早期复发均有相关性（P值均＜0.05）.结论D6S1709-D6S1028和D6S2160-D6S1580为目前国内外所确定的最精确缺失区,该区域可能存在1个或数个肿瘤抑制基因,6q16.3的LOH的发生与ALL预后有一定关系.     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

SET-NUP214融合基因在急性T淋巴细胞白血病患者中的表达及临床意义

本研究旨在探讨SET-NUP214融合基因在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达,分析伴有SET-NUP214的T-ALL的临床及分子生物学特征。运用RT-PCR检测58例T-ALL患者骨髓标本中SET-NUP214的表达,以间期荧光原位杂交(FISH)及微阵列比较基因组杂交(Array-CGH)检测9q34缺失,基因测序法检测PHF6和NOTCH1基因突变。结果表明,仅在6例T-ALL患者中检测到SET-NUP214融合基因的表达。除T系抗原标记外,这些患者均表达髓系抗原CD13和(或)CD33,其中4例患者经FISH检测到9q34缺失,3例患者经Array-CGH检测到del(9)(q34.11q34.33)。6例SET-NUP214阳性的T-ALL患者中有4例检测到PHF6基因突变,5例检测到NOTCH1基因突变。结论:SET-NUP214融合基因多由染色体9q34的缺失所致,SET-NUP214阳性的T-ALL常伴有PHF6及NOTCH1基因突变。     

慢性淋巴细胞白血病13q14缺失的基因检测

目的研究慢性淋巴细胞白血病（CLL）13q14缺失的情况。方法运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319、D13S25和间期荧光原位杂交（I-FISH）技术对26例初发的B细胞CLL患者进行染色体13q14的检测。结果26例B．CLL中14例（53．8％）有13q14缺失,阳性细胞率为30．0％～90．0％,其中RB1缺失2例（7．7％）,D13S319缺失11例（42．3％）,D13S25缺失13（50．0％）RB1、D13S319、D13S25同时缺失2例,D13S319、D13S25同时缺失有8例（30．7％）。结论CLL患者13q14缺失区域是不恒定的。     

急性T淋巴细胞白血病中SIL—TAL—1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患该基因５＇端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５＇端相融合，形成ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显     

急性T淋巴细胞白血病中SIL－TAL－1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患者该基因５’端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５’端相融合，形成ＳｉＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显子拼接而成。对该法的敏感度测定显示，可从１０￣６个正常细胞中检测出１个肿瘤细胞，并在２例缓解期标本中检测到微量残留白血病（ＭＲＤ）。此外，对３例有融合转录本患者的ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测发现，其ＴＡＬ－１基因５’端丢失的位点相同，均为Ｔａｌ￣（ｄ１）重组。可见，ＴＡＬ－１基因的改变是Ｔ－ＡＬＬ一个有用的克隆标志，为其诊断和残留白血病检测提供了十分重要的依据。     

ETV6-RUNX1融合基因阳性儿童急性前体B淋巴细胞白血病的临床特征及预后分析

目的:探讨ETV6-RUNX1融合基因阳性儿童急性前体B淋巴细胞白血病（B-ALL）的临床特征及预后。方法:回顾性分析2011年4月至2020年5月福建医科大学附属协和医院小儿血液科收治的927例初诊B-ALL患儿的临床资料。根据ETV6-RUNX1检测结果,分为ETV6-RUNX1 +组及ETV6-RUN...     

急性T淋巴细胞白血病的分子遗传学研究进展

急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是以T淋巴细胞增殖为特征的恶性克隆性疾病.大约50%～70%的T-ALL患者可检出核型异常,细胞遗传学的改变已成为T-ALL最重要的诊断指标.近年来,随着荧光原位杂交(FISH)、微阵列-比较基因组杂交(array-CGH)以及cDNA芯片等细胞遗传学及分子生物学技术的广泛应用,人们认识到T-ALL患者的预后与染色体易位、缺失、基因突变等细胞和分子遗传学改变密切相关并取得一定进展.现将有关T-ALL分子遗传学的研究进展综述如下.     

T细胞急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

本研究探讨T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）免疫表型特点。应用一组系列相关单克隆抗体和CD45/SSC设门的三色流式细胞术对140例T-ALL进行免疫表型检测。结果显示,白血病细胞表面T系抗原表达依次为CD7〉CD2〉CD3〉CD5,近20%患者CD10表达阳性。140例患者中12例带有B系抗原标记,阳性率达8.57%;136例中31例带有髓系抗原标记,阳性率达22.79%,所有病例均无CD14表达。干/祖细胞标记CD34表达阳性率31.06%,41例CD34＋T-ALL髓系抗原表达15例,阳性率36.59%,91例CD34-T-ALL髓系抗原表达14例,阳性率15.38%,二者具有统计学差异（p〈0.01）。儿童T-ALLCD3表达高于成人（p〈0.05）,而CD33表达明显低于成人（p〈0.01）结论：免疫表型分析是诊断T-ALL的重要手段,T-ALL免疫表型具有异质性。     

垂体瘤转化基因在急性淋巴细胞白血病患者中表达的研究

本研究旨在探索垂体瘤转化基因(pituitary tumor-transforming gene,PTTG)在急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblastic leukemia,ALL)患者中的表达及其与ALL发病机理的关系,同时探讨PTTG在Ph1染色体阳性和阴性ALL中的表达是否存在差异性。采用实时荧光定量PCR方法检测28例ALL患者及28例正常对照骨髓中PT-TG的表达水平。结果表明:ALL患者PTTG的表达水平(1.9428E5±1.8372E5)明显高于正常对照组(4.5766E3±1.1817E3)(P<0.05),一个周期诱导缓解治疗后达完全缓解(complete remission,CR)患者中PTTG的初始表达水平低于未缓解(non-complete remission,non-CR)患者;Ph1染色体阳性ALL(Ph1+ALL)患者中PTTG的初始表达水平高于Ph1染色体阴性ALL(Ph1-ALL)患者。结论:PTTG的过度表达可能和ALL的发生发展有关,可能与Ph1染色体阳性ALL的发生关系更加密切,这为ALL的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。     

成人T细胞急性淋巴细胞白血病中NOTCH1突变的特征研究

本研究旨在阐明NOTCH1突变在成人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中的特征及临床意义。通过对42例成人T-ALL患者外显子（exon）26／异二聚体N末端（HD-N）、exon27／异二聚体c末端（HD-C）、exon28和exon34／脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸（PEST）区域进行扩增、克隆和测序,研究NOTCH1突变的发生率、突变位点和类型、突变与临床和实验室指标的相关性及其预后意义。结果显示,本组成人T-ALL中NOTCH1突变率66．7％（28／42）,共发现45种NOTCH1突变,最多见于HD-N（48．9％,22／45）和PEST（40．0％,18／45）;HD-N结构域突变最多位于氨基酸位点1575（L1575P）（25．O％,7／28）,PEST结构域突变最多位于氨基酸位点2443（14．3％,4／28）;初诊时白细胞计数大于10×10^9／L者NOTCH1突变组显著高于无突变组（91．7％vs 54．5％,P=0．021）;骨髓原始及幼稚淋巴细胞比例超过50％者突变组显著高于无突变组（95．8％vs 57．1％,P=0．006）;流式免疫表型CDl0阳性表达率突变组显著高于无突变组（51．9％vs0％,P=0．006））,CD15和CD11b阳性表达率突变组显著低于无突变组（分别为5．3％vs 42．9％,P=0．047和0％vs57．1％,P=0．002）。结论：成人T-ALL的NOTCH1突变具有不同于儿童的突变特征和预后意义,而且中国成人T-ALL的NOCH1突变与西方国家相比可能存在差异。     

急性淋巴细胞白血病bcr/abl融合基因表达及其与免疫表型的关系

采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了M-bcr/abl和m-bcr/abl两种类型融合基因在48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达,并且绝大多数病例同时进行了免疫表型和DNA倍体的流式细胞术分析。结果表明,25%(12/48)的病例M-bcr/abl或m-bcr/abl融合基因阳性,m-bcr/abl阳性率略高。分析bcr/abl阳性病例的免疫表型,发现大多数病例为B系标志阳性,但部分T系标志阳性的病例也检测出M-bcr/abl或m-bcr/abl,说明bcr/abl阳性ALL病例以B系标志阳性者居多,T系标志阳性的ALL病例也可为bcr/abl阳性。     

儿童急性淋巴细胞白血病伴有TEL-AML1融合基因表达的免疫表型特点分析

为了探讨伴有TEL—AML1融合基因表达的儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的免疫表型及其它临床特点，采用三色流式细胞术（FCM）检测免疫表型，用巢式逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测TEL—AML1融合基因的表达；同时在FAB分型基础之上进行形态学（M）、免疫学（I）、细胞遗传学（c）分型。结果显示：④儿童B系ALL中TEL—AML1^＋占18．5％（22／119），主要以L2亚型为主，糖原（PAS）染色阳性率和积分值均数分别为65％和121，均高于TEL—AML1^-组（P〈0．05）；②与儿童B系ALLTEL—AML1^-组相比，TEL—AML1^＋年龄、性别、白细胞计数、外周血中幼稚细胞数目均未见有统计学差异；③TEL/AML1^＋组中，普通淋巴细胞表型295．5％（21／22）；与TEL／AML1^-组比较，CD13表达率增高（59．1％，13／22），CD20表达率减低（22．7％，5／22）（P〈0．05）；CD10及HLA—DR的平均荧光指数（MFI值）增高，分别为92．80及53．61（P〈0．05）。结论：儿童伴TEL—AML1融合基因表达在儿童ALL中较常见，且具有特殊的免疫表型特点，该特点可作为儿童白血病微量残留病的辅助检测。     

MLL基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因及免疫表型特点

为了探讨混合谱系白血病（mixed linage leukemia,MLL）基因重排阳性的儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）融合基因与免疫表型的特征,利用多重巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测601例ALL患儿中MLL基因重排的发生率,通过对PCR产物的测序,分析融合基因的亚型及特点;比较分析重排阳性的22例患儿与同期未检出任何融合基因的随机抽取的30例ALL患儿及43例pro—B—ALL患儿初诊时免疫表型特点。结果表明：MLL基因重排阳性的ALL患儿检出率为3．66％,占pro—B—ALL的29．9％。20例MLL基因重排阳性的B—ALL患者全部为CD10^-,表达CD13、CD33和CD34的例数较pro—B—ALL对照组低,CD20、CD22、CD2、CD5、CD7的表达则无差异。共检出4种MLL基因的伙伴基因AF4、AF9、AF10和ENL。MLL基因融合位点主要位于第6、7、8外显子,同一患者可同时存在多种MLL基因融合位点;而其伙伴基因的融合位点相对单一。1例患儿MLL—AF10融合转录本存在随机插入序列。结论：MLL基因重排的发生率低,重排形式多样,阳性ALL患儿在免疫表型及融合转录本的表达方面具有独特的生物学特征。     

富马酸二甲酯对急性T淋巴细胞白血病影响的研究

目的:探讨富马酸二甲酯(DMF)对急性T淋巴细胞白血病的影响及潜在的作用机制,为临床治疗急性T淋巴细胞白血病提供实验基础和理论依据.方法:用不同浓度DMF处理Jurkat细胞24 h,然后采用流式细胞术检测Ki67+的Jurkat细胞比例和绝对计数;同时采用Western blot方法检测DMF处理24 h之后,Jur...     

Netrin-1在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的:研究Netrin-1蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的表达及其与临床指标的相关性,并探讨其可能的调控机制。方法:采用ELISA法检测48例ALL患儿(初诊、复发)外周血血清中Netrin-1的表达水平,并分析其与27例非恶性血液病患儿对照样本表达水平的差异,进而分析ALL外周血Netrin-1水平与临床指标的相关性。体外培养ALL细胞Jurkat、Molt-4、SUP-B15和Raji,经不同浓度重组人Netrin-1蛋白处理后,用Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法测定Netrin-1对细胞增殖的作用;采用Western blot检测FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键蛋白的表达及其磷酸化水平。结果:ALL患儿外周血中Netrin-1的表达量显著高于对照组(P<0.05)。随着Netrin-1表达水平的上调,WBC水平(r=-0.290,P<0.05)呈下降趋势,Plt水平(r=0.483,P<0.05)呈上升趋势,且与年龄、Hb水平、骨髓幼稚细胞比例无显著相关性;Netrin-1浓度在25-50 ng/ml水平时,Netrin-1水平与WBC(r=0.886,P<0.05)呈正相关;WBC>50×10^9/L和Plt<20×10^9/L的患儿Netrin-1表达水平显著降低(P=0.042,P=0.001);Netrin-1的表达水平在危险度分级中具有显著性差异(P=0.017),与低危组与中危组相比,高危组Netrin-1的表达水平显著提高;Netrin-1在性别、肝脾淋巴结肿大、MRD、复发、染色体异常等分组中的表达水平均无显著性差异;Netrin-1对4种细胞的侵袭能力有促进作用(P<0.05),随着Netrin-1浓度的提高,细胞数有先增加后降低的趋势,且均在Netrin-1浓度为100 ng/ml时,侵袭下室的细胞数最高;Netrin-1浓度为25 ng/ml时,4种细胞存活率显著增加(P<0.05),其中SUP-B15细胞在浓度为100 ng/ml时,细胞存活率最高;4种细胞存活率呈现低浓度升高及高浓度降低的趋势;Western blot结果显示,Netrin-1使FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键分子磷酸化水平提高(P<0.05)。结论:ALL患儿血清中存在Netrin-1的异常表达,Netrin-1可能通过增加白血病细胞的增殖、侵袭能力来影响ALL的发生发展,可能成为ALL的危险因素或生物治疗中的潜在靶点。     

CAG方案清除T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株A3细胞作用机制的研究

本研究主要探讨CAG方案清除T细胞性急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞株A3细胞的作用机制及G-CSF／G—CSFR配体受体系统在清除过程中的作用。以单克隆抗体结合流式细胞术测定A3细胞表面G—CSFR表达率；以A3细胞为体外实验模型，分组加入不同浓度的G—CSF作用48小时后收集细胞，碘化丙锭细胞核染色法分析细胞周期变化；用Cell Counting Kit（CCK-8）检测不同浓度阿糖胞苷（Ara—C）和G-CSF组合作用48小时后对细胞生长抑制率的影响；用AnnexinV试剂盒结合流式细胞术检测Ara—C、阿克拉霉素（ACR）及G-CSF联合作用48小时后细胞凋亡水平。结果表明：T—ALL细胞株A3细胞表面高表达G—CSFR（94．2％）；G—CSF作用48小时后S期A3细胞比例在一定浓度范围内随G—CSF浓度的增加而升高；CCK-8检测显示Ara—C＋G—CSF组较单药Ara—C组抑制细胞生长更明显（Ara—C浓度10^-5mmol／L和10^-6mmol／L时P〈0．05）；凋亡检测显示Ara—C＋ACR＋G-CSF组细胞早期凋亡率高达38％，显著高于Ara—C＋ACR组。结论：T—ALL细胞株A3细胞表面高表达G-CSFR；G-CSF／G—CSFR配体受体系统在CAG方案清除A3细胞的过程中与化疗药物具有协同作用，即通过动员G0期细胞进入细胞增殖周期使细胞对化疗药物的敏感性增强、导致细胞凋亡，从而清除细胞。诱导凋亡是CAG方案清除T—ALL细胞株A3细胞的机制之一。