槲皮素对多发性骨髓瘤的抗肿瘤作用及其相关机制

目的:研究槲皮素对多发性骨髓瘤细胞NCI-H929增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:常规培养NCI-H929细胞,取对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度槲皮素(50、100、200μmol/L)处理NCI-H929细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;用槲皮素100、200μmol/L处理NCI-H929细胞24 h后,使用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,采用PI标记流式细胞术分析细胞周期的变化;采用Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP、BCL-2和细胞周期相关蛋白P53、P21、P27、CDK4蛋白的表达水平,并检测ERK和AKT的活化情况。结果:不同浓度的槲皮素可显著抑制NCI-H929细胞的增殖,抑制效应随时间的延长和剂量的增大而增强。流式细胞术分析结果显示,槲皮素可显著诱导NCI-H929细胞凋亡,并诱导细胞发生G_2/M期阻滞。Western blot实验结果显示,槲皮素能够活化caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,进而抑制BCL-2的表达,促进P53、P21、P27蛋白的表达和抑制CDK4蛋白的表达,并降低ERK、AKT磷酸化水平。结论:槲皮素可有效发挥对骨髓瘤细胞NCI-H929的抗肿瘤作用,该作用可能是通过诱导细胞凋亡、促进细胞周期阻滞和下调ERK/AKT通路实现的。     

ERK1/2抑制剂AZD8330对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERKU2）抑制剂AZD8330对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞的作用及其机制.方法 Raji细胞用不同浓度的AZD8330进行处理;采用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时定量PCR法检测Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3和血管内皮生长因子（VEGF） mRNA表达;Western blot法检测Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3、磷酸化（p）-ERK1/2蛋白表达.结果 1.00 μmol/L的AZD8330处理24、48和72 h后细胞存活率分别为（62.09±0.86）％、（50.06±1.33）％和（39.13±2.34）％,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;0.10、1.00、10.00 μmol/L的AZD8330分别处理Raji细胞24、48和72 h,Raji细胞发生凋亡,凋亡率呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;随着浓度增加和时间延长,Bcl-2、Bcl-x1、VEGF mRNA表达降低,caspase-3mRNA表达升高,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;同时,Bcl-2、Bcl-x1、p-ERK1/2蛋白表达明显受抑制,而caspase-3蛋白表达增强.结论 AZD8330可能通过抑制ERK1/2通路相关基因和蛋白的表达而诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡,抑制其增殖.     

Longikaurin A诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的初步研究

本研究冬凌草甲素结构类似物longikaurin A对多发性骨髓瘤细胞H929的作用和机制。采用CCK-8法检测longikaurin A和冬凌草甲素对H929细胞的增殖抑制效应。在相差显微镜下观察longikaurin A处理12 h对H929细胞形态的影响;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡的比例;Western blot检测caspase-9、caspase-3的活化水平及PARP的剪切情况;应用DCFDA探针检测2μmol/L longikaurin A处理不同时间H929细胞中活性氧的水平。结果显示,与冬凌草甲素(IC50为10.66μmol/L)相比,longikaurin A(IC50为0.85μmol/L)能够更有效地抑制H929细胞增殖;longikaurin A作用24 h,AnnexinⅤ阳性细胞比例显著升高,caspase-3、caspase-9活化,caspase-3的底物PARP发生剪切,提示longikaurin A能诱导H929细胞发生凋亡;活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸能够显著抑制longikaurinA诱导的细胞凋亡,然而longikaurin A本身并不升高活性氧水平。结论:与冬凌草甲素相比,longikaurin A在较低浓度下能够诱导多发性骨髓瘤细胞H929发生细胞凋亡。     

三氧化二砷联合硼替佐米对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡及β-连环蛋白水平的影响

本研究探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,AS2O3）联合硼替佐米对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡及β-连环蛋白（β-catenin）水平的影响。硼替佐米、As2O3单用及联合处理RPMI8226、CZ-l、NCI-H929骨髓瘤细胞株48小时后,采用台盼蓝拒染法检测活细胞比例,用改良的四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测凋亡细胞比例,免疫印迹法比较用前药后β-连环蛋白的水平。结果表明：硼替佐米对RPMI8226、CZ-l、NCI-H929的半数抑制浓度（IC50）为46.9、20.7、6.8nmol/L;As2O3（1μmol/L）联合硼替佐米（5nmol/L）作用后,活细胞比例分别由88.99%、72.23%、51.06%降至54.01%、39.59%、25.00%（p〈0.05）,凋亡细胞比例由（11.1±0.1）%、（26.8±1.7）%、（36.8±5.5）%增加为（36.1±2.2）%、（60.4±3.8）%、（76±5.6）%,两组Q值介于增强与明显增强之间（1.198-3.75）。联合用药组RPMI8226、CZ-l、NCI-H929胞浆β-连环蛋白水平与单药组相比,分别下降24.15%,31.85%,33.72%。结论：As2O3能增强硼替佐米对骨髓瘤细胞的增殖抑制和凋亡诱导,降低β-连环蛋白表达水平,提高骨髓瘤细胞对硼替佐米的敏感性。     

雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明:雷公藤内酯醇(10-100 ng/ml)和硼替佐米(10-100 nmol/L)单用和联用均可抑制H929细胞增殖,呈浓度依赖性,雷公藤内酯醇和硼替佐米联用组的细胞凋亡率明显高于单用硼替佐米组。经非抑制浓度的雷公藤内酯醇(10 ng/ml)联合硼替佐米(40 nmol/L)处理H929细胞24 h后的凋亡率明显高于单用硼替佐米组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对多发性骨髓瘤细胞MM1R的抑制作用

本研究探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或者联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米,对多发性骨髓瘤(MM)细胞的抗瘤效应。采用MTT法检测LBH589(10、20、50 nmol/L)及50 nmol/L分别联合硼替佐米(10、20 nmol/L)作用于人多发性骨髓瘤MM1R细胞24,48 h后的细胞增殖抑制作用;采用流式细胞术检测LBH589对MM1R细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Western blot分析LBH589(10、20、50 nmol/L)作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度。结果表明,LBH589单药及与硼替佐米联合均能够抑制MM1R细胞增殖,并与药物浓度和作用时间呈正相关。MM1R细胞经药物作用48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期及S期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期,同时可见MM1R细胞的凋亡率增加,作用呈浓度依赖性,且LBH589与硼替佐米联合作用均较单药作用更加明显(均P<0.001);Western blot分析显示,不同浓度LBH589作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度上调,呈浓度依赖性。结论:LBH589能够抑制MM1R细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,且与硼替佐米联合对骨髓瘤细胞有协同作用。     

土木香内酯对RPMI-8226细胞的增殖抑制作用及其相关机制研究

目的:探讨土木香内酯(alantolactone)对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:使用浓度为1、2.5、5、7.5及10μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h,应用CCK-8检测细胞活力,并计算其半数抑制浓度(IC50)值;使用浓度为2.5,5及7.5μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h后,应用AnnexinV/PI双标记法分析细胞凋亡;Western blot方法检测呈切割的caspase-3及ERK信号通路的变化;裸鼠荷瘤并给予土木香内酯以进一步验证其对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡作用。结果:土木香内酯可抑制RPMI-8226细胞活力,并呈现剂量依赖效应(r=-0.9784,P=0.0007);RPMI-8226细胞48 h的IC50为4.32±0.15μmol/L;流式细胞术分析凋亡结果显示,随着土木香内酯浓度的增高,细胞早期凋亡率显著增加(r=0.9601,P0.05);Western blot结果显示,土木香内酯处理RPMI-8226细胞后,活化了caspase-3,降低ERK磷酸化水平;体内结果显示,给药组小鼠瘤体积明显小于对照组(P0.05);免疫组织化学检测结果显示,与对照组相比,实验组瘤内细胞核增殖相关抗原Ki67及p-ERK的水平降低。结论:土木香内酯可有效地抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制ERK信号通路的活性,抑制裸鼠皮下多发性骨髓瘤的生长。     

大蒜素抑制多发性骨髓瘤侧群细胞增殖机制研究

目的:探讨大蒜素对多发性骨髓瘤侧群细胞(side population,SP)增殖的影响及其作用机制。方法:培养RPM I-8226和NCI-H929细胞,应用Hoechst33342染色分析其侧群细胞的含量;对培养的侧群细胞,应用10μg/ml大蒜素处理,采用CCK8法分析大蒜素对侧群细胞增殖的影响,应用平板集落形成法分析大蒜素对侧群细胞集落形成能力的影响,流式细胞术分析大蒜素对侧群细胞周期的影响,Western blot法分析大蒜素对周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达。结果:在RPM I 8226和NCI-H929中均存在有侧群细胞,其所占比例分别为(3.17±0.98)%和(2.65±0.61)%。大蒜素能够呈时间依赖性抑制侧群细胞的增殖并显著抑制集落形成;大蒜素能够抑制周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达并诱导细胞发生G1/S周期阻滞。结论:大蒜素可以抑制多发性骨髓瘤侧群细胞增殖和集落的形成,并可能通过下调细胞周期相关蛋白的表达诱导细胞发生G1/S阻滞。     

伊马替尼诱导c-kit阳性多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨伊马替尼在体外对c-kit表达阳性多发性骨髓瘤细胞的作用及机制.方法 不同浓度伊马替尼处理KM3细胞后,采用二甲氧唑黄比色法(XTT法)检测药物的细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V/PI双标流式细胞术和DNA片段分析法检测细胞凋亡,Westernblot法检测蛋白质水平变化.结果 伊马替尼浓度在0.25 μmol/L或以上时,可明显抑制KM3细胞增殖,呈量效关系,48 h IC50为0.33μmol/L(P＜0.01);阻滞细胞周期于G0/G1期;Annexin V和DNA凝胶电泳检测提示随着伊马替尼浓度的增大,KM3细胞凋亡率增加,且可以促使caspase-3和聚ADP核糖聚合酶(PARP)发生裂解;处理后c-kit表达降低,且阻断外源性IL-6对c-kit的促磷酸化作用.结论 伊马替尼可以通过抑制c-kit受体相关信号传导途径抑制KM3细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

Study on the relationship of beta-catenin level and sensitivity to Bortezomib of myeloma cell lines

OBJECTIVE: To explore the relationship of beta-catenin and sensitivity to Bortezomib of myeloma cell lines. METHODS: Myeloma cell lines RPMI8226, CZ-1 and NCI-H929 were treated with Bortezomib and 2ME2, alone or in combination. Typan blue dye exclusion and modified MTT were used to assess the cell viability with or without treatment. Annexin V-FITC and PI staining was performed to detect apoptosis rate. RT-PCR was used to detect beta-catenin mRNA and western blot to analyze beta-catenin protein. RESULTS: The basic expression level of beta-catenin was different in tested myeloma cell lines: RPMI8226 was the most while NCI-H929 the least and CZ-1 the intermediate. IC50 of RPMI8226, CZ-1 and NCI-H929 were (49.8 +/- 0.6), (24.7 +/- 0.4) and (8.4 +/- 0.2) nmol/L, respectively. After the treatment of Bortezomib (at 0, 1, 5, 10 nmol/L), beta-catenin level of tested cell lines accumulated in a time and dose dependant manner for western blot, while no significant change was observed in the result of RT-PCR. The beta-catenin protein levels in the Bortezomib (5 nmol/L) and 2ME2 (1 micromol/L) treated cell group were much lower than that in Bortezomib (5 nmol/L) group, the decrease of the gray scale of beta-catenin/beta-actin was 64.03% for RPMI8226, 52.56% for CZ-1, 51.48% for NCI-H929, and the apoptosis rates were 8.00, 1.86 and 1.19 times increase compared to untreated group. CONCLUSION: Myeloma cell lines with higher beta-catenin level are less sensitive to Bortezomib, and combination treatment of low dose 2ME2 and Bortezomib can reduce beta-catenin accumulation and enhance the sensitivity to Bortezomib.     

骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性与β-连环素表达水平关系的研究

目的 探讨β-连环素(β-catenin)与骨髓瘤细胞系对硼替佐米(Bortezomib)敏感性的关系.方法 以骨髓瘤细胞系RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞为研究对象,采用锥虫蓝拒染法及改良四呷基偶氮唑盐比色(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制,Annexin V及PI染色流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blot法比较硼替佐米、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME2)单药或联合处理后,不同细胞系胞质内β-连环素的表达及变化,分析β-连环素表达水平与骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性的关系.结果 β-连环素蛋白在不同骨髓瘤细胞系的基础表达水平由高到低依次为RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞,对应的硼替佐米半数抑制浓度(IC50)分别为(49.8±0.6)、(24.7±0.4)、(8.4±0.2)nmol/L;硼替佐米(0、1、5、10 nmol/L)单药处理后,各细胞系β-连环素蛋白水平呈时间、剂量依赖性升高,而相应mRNA水平无明显变化;与硼替佐米(5 nmol/L)单药处理组相比,硼替佐米(5 nmol/L)联合2ME2(1 μmol/L)处理后,RPMI8226、CZ-1及NCI-H929细胞胞质β-连环素蛋白水平分别降低64.03%、52.56%和51.48%,凋亡细胞比例分别增加8.00、1.86、1.19倍.结论 β-连环素表达水平较高的骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性较低;小剂量2ME2联合硼替佐米可降低β-连环素水平,增强骨髓瘤细胞系对硼替佐米的敏感性.     

Caspase-2 functions upstream of mitochondria in endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis by bortezomib in human myeloma cells

Multiple myeloma is an incurable plasma cell malignancy. The 26S proteasome inhibitor, bortezomib, selectively induces apoptosis in multiple myeloma cells; however, the mechanism by which this compound acts remains unknown. Here, we, using immunoblotting analysis, observed that the expression of BiP, CHOP, and XBP-1 is up-regulated in bortezomib-induced apoptosis in human multiple myeloma cell lines NCI-H929 and RPMI-8226/S, strongly suggesting that endoplasmic reticulum (ER) stress response or the unfolded protein response (UPR), a signaling pathway activated by the accumulation of unfolded proteins within ER, is initiated. In the meantime, we also showed that bortezomib inhibited classic ER stressor brefeldin A-induced up-regulation of prosurvival UPR components BiP and XBP-1, resulting in increased induction of apoptosis in multiple myeloma cell lines, raising the possibility that bortezomib induces apoptosis of multiple myeloma cells by means of evoking the severe ER stress but disrupting the prosurvival UPR required. Using caspase inhibitors and a RNA interference approach, we finally confirmed that bortezomib-triggered apoptosis in multiple myeloma cells is dependent on caspase-2 activation, which is associated with ER stress and required for release of cytochrome c, breakdown of mitochondrial transmembrane potential, and its downstream caspase-9 activation. Taken together, these data strongly suggest that caspase-2 can serve as a proximal caspase that functions upstream of mitochondrial signaling during ER stress-induced apoptosis by bortezomib in multiple myeloma cells.     

2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖与凋亡的影响

为了探讨2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖及凋亡的影响,并观察其与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠等药物联合时的协同作用,采用台盼蓝染色法检测细胞活力,应用BrdU掺入法检测浆细胞标记指数(PCLI),DNA片段原位末端标记(TUNEL法)检测凋亡细胞.药物协同作用判断标准按金氏公式计算Q值.结果表明,7株骨髓瘤细胞系NCI-H929、HS-sultan、KM3、SK0-007、CZ-1、U266、LP-1经1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时后细胞活力明显受抑制,呈现时间剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).各细胞系对2-甲氧基雌二醇敏感性不同,其IC50介于(20.8±0.27)μmol/L与(34.1±0.57)μmol/L之间.1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时可诱导骨髓瘤细胞系凋亡,凋亡率介于9%-33%之间,呈现时间和剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).经12 μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用24小时后浆细胞标记指数(PCLI)由作用前平均(30.14±4.28)%下降到作用后的(14.71±6.27)%,差异显著(P＜0.05).2-甲氧基雌二醇与药物联合作用后计算Q值介于1.13-1.43之间,具有协同作用.结论2-甲氧基雌二醇可抑制骨髓瘤细胞生长,并可诱导骨髓瘤细胞凋亡,与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠联合使用具有协同作用.     

The small-molecule Bcl-2 inhibitor HA14-1 interacts synergistically with flavopiridol to induce mitochondrial injury and apoptosis in human myeloma cells through a free radical-dependent and Jun NH2-terminal kinase-dependent mechanism

Interactions between the cyclin-dependent kinase inhibitor flavopiridol and the small-molecule Bcl-2 antagonist HA14-1 were examined in human multiple myeloma cells. Whereas individual treatment of U266 myeloma cells with 10 micromol/L HA14-1 or 100 nmol/L flavopiridol had little effect, exposure of cells to flavopiridol (6 hours) followed by HA14-1 (18 hours) resulted in a striking increase in mitochondrial dysfunction (cytochrome c and Smac/DIABLO release; loss of mitochondrial membrane potential), activation of the caspase cascade, apoptosis, and diminished clonogenic survival. Similar findings were noted in other myeloma cell lines (e.g., MM.1S, RPMI8226, and NCI-H929) as well as in those resistant to dexamethasone and cytotoxic agents (e.g., MM.1R, 8226/Dox40, and 8226/LR5). Combined exposure to flavopiridol and HA14-1 was associated with down-regulation of Mcl-1 and Bcl-xL, Bid cleavage, and mitochondrial translocation of Bax. Flavopiridol/HA14-1-treated cells also exhibited a pronounced activation of Jun NH2-terminal kinase, a modest activation of p38 mitogen-activated protein kinase, and down-regulation of cyclin D1. Flavopiridol/HA14-1-induced apoptosis was associated with a marked increase in reactive oxygen species generation; moreover,both events were attenuated by the antioxidant N-acetyl-l-cysteine. Finally, in contrast to dexamethasone, flavopiridol/HA14-1-induced lethality was unaffected by exogenous interleukin-6 or insulin-like growth factor-I. Together, these findings indicate that flavopiridol and the small-molecule Bcl-2 antagonist HA14-1 cooperate to trigger oxidant injury, mitochondrial dysfunction, caspase activation, and apoptosis in human multiple myeloma cells and suggest that this approach may warrant further evaluation as an antimyeloma strategy.     

Apogossypolone诱导骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

本研究探讨棉酚衍生物apogossypolone（ApoG2）对多发性骨髓瘤细胞系的抑制增殖、诱导凋亡的作用及其作用机制。应用台盼蓝染色、Hoechst 33258染色、透射电子显微镜检、DNA凝胶电泳法、流式细胞仪分析细胞DNA含量等来判断ApoG2对多发性骨髓瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。以caspase-3、caspase-9以及BCL-2、BCL—XL分析ApoG2诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制。结果表明：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,IC50值在U266细胞和Wusl细胞（48小时）分别为0．1、0．2μmol／L。ApoG2可以诱导骨髓瘤细胞凋亡且呈时间和剂量依赖性。ApoG2可以使骨髓瘤细胞周期停止在G2期,U266细胞G2期比例从9．7％增至19．6％。Wusl细胞从9．8％增至31．7％。ApoG2能导致U266、Wusl细胞caspase-9、caspase-3活性增高。U266细胞和Wusl细胞经ApoG2 25μmoL／L作用24小时后,BCL—XL表达分别下降（7．3±1．4）％和（11．2±6．2）％,Wusl细胞BCL-2表达下降84．4±3．4％。结论：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能和下调BCL-2／BCL—XL表达以及影响细胞周期有关。     

硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡及分子伴侣BiP表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株NCI—H929（H929）的凋亡诱导作用及其对H929细胞中分子伴侣BiP表达的影响。以不同浓度硼替佐米处理H929细胞24小时后,采用Annexin V—FITC／PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;用RT—PCR和Westernblot检测靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白的表达。结果表明：不同浓度硼替佐米（20、40、80nmol／L）均可诱导靶细胞凋亡,凋亡率分别为（15．73±0．67）％、（27．83±1．26）％7t．（44．17±2．25）％,呈剂量依赖性,且均显著高于未处理组（1．21±0．07％）（P〈0．05）;经不同浓度硼替佐米处理后,靶细胞BiPmRNA和BiP蛋白水平均高于未处理组,且二者变化一致;在相近的促凋亡条件下（凋亡率约40％-50％）,标准内质网应激诱导剂brefeldin A（500ng／ml,24小时）对H929细胞BiP mRNA和BiP蛋白表达的上调作用与硼替佐米（80nmol／L,24小时）基本一致。结论：硼替佐米诱导H929细胞凋亡并伴有分子伴侣BiP mRNA和BiP蛋白表达上调,表明硼替佐米诱导的H929细胞凋亡极可能涉及内质网应激反应。