滴注空气在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型建立过程中的作用

目的:研究滴注空气对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型的影响,为建立更加有效的气管滴注方法提供依据。方法:45只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+空气组,每组15只。以LPS作为刺激物,LPS组和LPS+空气组小鼠采用暴露式气管滴注方法建立ALI模型,LPS+空气组小鼠行气管滴注前1mL注射器内预先吸入100μL空气,对照组小鼠不进行任何处理。气管滴注后24h进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中生化指标检测、细胞分类计数、肺湿/干重(W/D)比值测定和肺组织形态学观察。结果:与对照组比较,LPS组和LPS+空气组小鼠BALF中碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、总蛋白浓度、总细胞和中性粒细胞数量以及肺W/D比值显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+空气组小鼠BALF中ALP和LDH活性、总蛋白浓度、总细胞和中性粒细胞数量以及肺W/D比值显著升高(P<0.05)。肺组织学观察,与对照组比较,LPS组和LPS+空气组小鼠肺组织均有不同程度的液体积聚、中性粒细胞浸润、充血和出血。与LPS组小鼠比较,LPS+空气组小鼠肺泡腔内积聚了更多富含蛋白的液体、中性粒细胞和红细胞。结论:滴注空气可以用于改进气管滴注方法,建立更加可靠的ALI动物模型。     

氢气饱和生理盐水对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨氢气饱和生理盐水对内毒素(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的保护作用。方法 将90只雄性BABL/c小鼠随机分为空白(Sham)组、肺损伤(ALI)组、肺损伤氢气饱和生理盐水干预(ALI+HRS)组,每组30只。ALI组和ALI+HRS组通过腹腔注射LPS制作肺损伤模型,ALI+HRS组在LPS注射1h后,腹腔注射氢气饱和生理盐水,每组分别取12只小鼠,观察各组小鼠7d生存情况。在损伤后3、5、7d,每组处死3只小鼠,观察肺组织病理变化,检测肺组织中iNOS和Arg-1的表达变化。结果 与Sham组相比,ALI组生存率降低;与ALI组相比,ALI+HRS组生存率明显升高;H-E染色显示,与ALI组相比,ALI+HRS组肺组织炎性细胞浸润明显减少;qPCR检测显示,相比于ALI组,ALI+HRS组iNOS的表达量下降,Arg-1表达上升;免疫荧光染色的结果与qPCR相一致。结论 对于LPS诱导的小鼠肺损伤,腹腔注射饱和氢气生理盐水能够抑制促炎因子iNOS的表达并促进抑炎因子Arg-1的表达,从而减轻内毒素诱导的小鼠肺损伤。     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠血清细胞因子IL-18及肺湿干重比的影响

目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对急性肺损伤小鼠血清IL-18及肺湿干重(Wet/Dry,W/D)的影响.方法 90只健康昆明小鼠,随机分为5组:①ALI组:腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS);②预防组:腹腔注射DATS 7 d后注射LPS;③治疗组:腹腔注射LPS后30 min注射DATS;④DATS组,腹腔注射DATS 7 d;⑤对照组:腹腔注射等量氯化钠溶液.光镜观察12h点肺组织形态学改变.测定血清中IL-18在2h和6h含量.测定2 h和6 h肺湿干重比.结果 DATS预防组肺泡间渗出及炎性细胞浸润较ALI组明显减轻.其血清中IL-18含量均明显低于ALI组(P<0.01).DATS预防组肺W/D与ALI组相比显著下降(P<0.05).结论 预防性应用DATS可减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应及肺水肿,并抑制LPS诱导的小鼠血清中炎性细胞因子IL-18的生成.     

滴注空气在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型建立过程中的作用

目的：研究滴注空气对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）模型的影响,为建立更加有效的气管滴注方法提供依据。方法：45只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+空气组,每组15只。以LPS作为刺激物,LPS组和LPS+空气组小鼠采用暴露式气管滴注方法建立ALI模型,LPS+空气组小鼠行气管滴注前1 mL注射器内预先吸入100 μL空气,对照组小鼠不进行任何处理。气管滴注后24 h进行支气管肺泡灌洗液（BALF）中生化指标检测、细胞分类计数、肺湿/干重（W/D）比值测定和肺组织形态学观察。结果：与对照组比较,LPS组和LPS+空气组小鼠BALF中碱性磷酸酶（ALP）和乳酸脱氢酶（LDH）活性、总蛋白浓度、总细胞和中性粒细胞数量以及肺W/D比值显著升高（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+空气组小鼠BALF中ALP和LDH活性、总蛋白浓度、总细胞和中性粒细胞数量以及肺W/D比值显著升高（P<0.05）。肺组织学观察,与对照组比较,LPS组和LPS+空气组小鼠肺组织均有不同程度的液体积聚、中性粒细胞浸润、充血和出血;与LPS组小鼠比较,LPS+空气组小鼠肺泡腔内积聚了更多富含蛋白的液体、中性粒细胞和红细胞。结论：滴注空气可以用于改进气管滴注方法,建立更加可靠的ALI动物模型。     

地昔帕明对脂多糖急性肺损伤小鼠核因子-κB表达的影响

目的:观察地昔帕明(DP)对脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)的影响,进一步探讨DP对急性肺损伤的保护机制。方法:昆明小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、地昔帕明对照组(DP组)、模型组(LPS组)及地昔帕明处理组(DP+LPS组)。腹腔注射LPS建立小鼠急性肺损伤模型。造模6h后光镜下观察肺组织病理学改变,免疫组化检测NF-κB在肺组织的表达和分布。结果:病理切片显示LPS组肺泡和间隙水肿明显,大量中性粒细胞浸润,肺间隔增厚,充血明显,DP处理组病理改变较LPS组有不同程度减轻。免疫组化结果显示LPS组NF-κB p65表达较DP处理组明显升高。结论:DP对LPS急性肺损伤小鼠的保护机制可能抑制与NF-κB信号转导通路,减轻肺组织中性粒细胞浸润程度有关。     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠血清细胞因子IL-18,IL-10的影响

目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对急性肺损伤小鼠血清IL-18,IL-10的影响.方法 90只健康昆明小鼠,随机分为5组:①急性肺损伤组:腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS);②预防组:腹腔注射DATS 7 d后注射LPS;③治疗组:腹腔注射LPS后30 min注射DATS;④DATS组:腹腔注射DATS 7 d;⑤对照组:腹腔注射等量生理盐水.光镜观察12h点肺组织形态学改变.测定血清中IL-18及IL-10在2h和6h含量.结果 DATS预防组肺泡间渗出及炎性细胞浸润较ALI组明显减轻.其血清中IL-18含量均明显低于ALI组(P<0.01),IL-10含量均明显高于ALI组(P<0.01).结论 预防性应用DATS可减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应.并能抑制LPS诱导的小鼠血清中炎性细胞因子IL-18的生成,而促进抗炎性细胞因子IL-10的生成.     

桃叶珊瑚苷减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的：探讨预防性给予桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤 (acute lung injury,ALI)的作用。方法：以成年雄性BABL/c小鼠为研究对象,随机分为对照组、ALI组和AU处理组,每 组16只。气管注射LPS(5 mg/kg)复制ALI小鼠模型,AU处理组于造模前30 min腹腔注射AU(10 mg/kg)。LPS注射6 h后处 死小鼠,采用HE染色检测肺组织形态学改变,并进行损伤评分;采用real-time PCR法检测小鼠肺组织炎症因子肿瘤坏 死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的mRNA表达;收集小鼠支气管肺泡灌洗 液(bronchoalveolar lavage fl uid,BALF)进行细胞计数、检测BALF中的总蛋白量、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH) 活性以及TNF-α和IL-10的蛋白含量。结果：与ALI组小鼠相比,AU处理组小鼠肺组织病理损伤明显减轻、损伤评分降 低,BALF总细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数目显著减少,LDH活性和总蛋白含量亦明显降低(均P<0.01)。同时,AU 可减少ALI小鼠肺内TNF-α mRNA和蛋白的表达,增加IL-10 mRNA和蛋白的表达(均P<0.01)。结论：AU可减轻LPS诱导 的小鼠ALI。     

厄洛替尼对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应和小鼠急性肺损伤的影响

目的: 探讨厄洛替尼对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞产生的炎症反应和小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,阐明其作用机制。方法: 原代培养的小鼠骨髓来源的巨噬细胞随机分为对照组、厄洛替尼组、LPS组和LPS+厄洛替尼组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blotting法检测各组巨噬细胞中ERK1/2和p38磷酸化水平。16只C57BL/6小鼠随机分为对照组(生理盐水灌胃3d,腹腔注射生理盐水1次)、厄洛替尼组(45mg·kg^-1厄洛替尼预处理3d,腹腔注射生理盐水1次)、LPS组(生理盐水灌胃3d,腹腔注射5mg·kg^-1LPS)和LPS+厄洛替尼组(45mg·kg^-1厄洛替尼连续3d灌胃,腹腔注射5mg·kg^-1LPS)。ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α的表达水平;Western blotting法检测各组小鼠肺组织中ERK1/2和p38磷酸化水平;HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。结果: 与对照组比较,厄洛替尼组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α水平、ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平差异无统计学义(P>0.05),小鼠肺组织形态无明显改变;与厄洛替尼组比较,LPS组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α水平明显升高(P<0.05),巨噬细胞和肺组织中ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05),小鼠肺组织出现ALI改变;与LPS组比较,LPS+厄洛替尼组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α表达水平明显降低(P<0.05),巨噬细胞和肺组织中ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),小鼠肺组织ALI病理状态改善。结论: 厄洛替尼可以抑制巨噬细胞炎症通路蛋白ERK1/2和p38的磷酸化水平及炎症因子TNF-α的生成,降低ALI小鼠的全身炎症反应,在一定程度上对ALI有保护作用。     

胞外DNA在急性呼吸窘迫综合征小鼠炎症损伤中的作用

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠胞外DNA的生成情况及其对肺部炎症损伤的作用.方法 以LPS(6 mg/kg)经鼻气管滴注法建立ARDS模型.40只雄性C57 BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、DNase Ⅰ组、LPS组和LPS+ DNase I组,每组10只.造模后24 h取肺组织行HE染色观察肺组织病理改变;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)检测细胞数量,采用超敏荧光核酸染料检测其中双链DNA浓度;采用ELISA检测BALF中白介素石(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)浓度.结果 LPS组小鼠肺组织HE染色可见大量中性粒细胞浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血及间质水肿,提示LPS诱导ARDS建模成功.LPS组BALF中细胞计数、MPO、IL-6、TNF-α和双链DNA浓度均分别显著高于对照组(P＜0.05),LPS+DNase Ⅰ组肺损伤评分和炎症指标均较LPS组显著降低(P＜0.05).结论 LPS诱导ARDS小鼠BALF中胞外DNA浓度升高,而DNase Ⅰ能够降低ARDS小鼠BALF中DNA浓度,减轻肺部炎症损伤.     

颗粒蛋白前体在博来霉素致肺纤维化小鼠中的表达

目的：探讨颗粒蛋白前体（PGRN）在博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中的表达。方法：选取C57BL/6小鼠36只,随机分为3组,博来霉素模型组向气管内灌注博来霉素（5 mg/kg）后第14、28天分批处死小鼠,生理盐水对照组注入等量的生理盐水。肺组织采用HE染色和Masson染色观察小鼠肺组织炎症和纤维化情况,以免疫组化法检测PGRN在肺组织中的分布和表达,蛋白印迹法检测PGRN在小鼠肺组织中的蛋白表达水平。结果：光镜下观察发现,生理盐水对照组小鼠肺组织结构完整,少量炎症细胞浸润;博来霉素组小鼠肺组织结构破坏,炎症细胞浸润,呈弥漫性肺纤维化改变。免疫组化检测可见博来霉素组小鼠PGRN在肺泡巨噬细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率明显高于生理盐水对照组,肺组织中PGRN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PGRN可能参与了博来霉素致小鼠肺纤维化的过程。     

NMDA受体阻断剂美金刚胺对小鼠内毒素急性肺损伤的保护作用

目的:探讨NMDA受体阻断剂美金刚胺对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法:健康成年雄性昆明小鼠随机分为正常组、美金刚胺组、ALI组和美金刚胺+ALI组.腹腔注射美金刚胺(10 mg/kg) 30 min后腹腔注射LPS(10 mg/kg)制作ALI小鼠模型.各组小鼠处理后6h测定全肺测定湿/干重比值;采用苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;采用ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:美金刚胺预处理可降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值,减轻其肺组织病理学改变,减少肺组织中MPO和MDA的含量,同时可降低BALF中TNF-α含量以及LDH活性(均P＜0.05).结论:采用美金刚胺阻断NMDA受体可减轻LPS诱导的小鼠ALI,为临床治疗ALI提供了新思路.     

巨噬细胞极化与脂多糖致新生大鼠支气管肺发育不良的相关分析研究

目的探讨巨噬细胞极化在脂多糖(LPS)致新生大鼠支气管肺发育不良发病中的作用。方法使用新生鼠腹腔注射LPS的方法构造新生大鼠支气管肺发育不良模型,选取成功造模的27只作为LPS组,并选取27只同日龄新生大鼠腹腔注射等量生理盐水作为对照组。各组大鼠均行标准饲养,分别在10日龄、14日龄、21日龄进行观察。使用苏木精-伊红(HE)染色检测各组各时间点肺的病理情况;免疫组织化学染色检测各组各时间点肺组织中巨噬细胞CD68的表达情况;免疫荧光检测各组各时间点肺组织中M1型巨噬细胞(CD68~+与诱导型一氧化氮合酶iNOS~+)和CD68~+与精氨酸酶-1(Arg-1)~+的M2型巨噬细胞;流式细胞术检测各组各时间点的肺泡灌洗液中M1 (CD45/CD68/CD86阳性)和M2 (CD45/CD68/CD163阳性)型巨噬细胞所占的比例;荧光定量PCR检测各组肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、NOS和Arg-1的mRNA表达情况。结果病理HE染色显示,随着日龄的增长,对照组大鼠肺泡逐渐分化成熟,其各时间点的肺泡大小均匀、形态规则,肺泡间隔无增厚,肺泡腔内未见炎性细胞浸润;随着日龄的增长,LPS组大鼠肺泡结构紊乱,肺泡间隔明显增厚,并伴肺泡腔及肺间隔周围有炎性细胞的浸润,第21天可见明显的肺泡简单化。免疫组织化学染色后CD68阳性表达呈现胞浆褐色,10日龄、14日龄、21日龄时LPS组大鼠的CD68阳性表达细胞数量均多于对照组。M1型、M2型巨噬细胞免疫荧光染色阳性结果呈现橙色,10日龄、14日龄、21日龄时LPS组大鼠的M1型和M2型巨噬细胞均多于对照组,且第21天,LPS组M2型巨噬细胞增加比M1型更明显。对照组在第10天时以M1极化为主,之后演变为M2极化为主。而LPS组一直以M2极化为主,第10天和第21天的M1%∶M2%比值均较对照组低,差异有统计学意义(t=4.654和4.465,均P0.001)。以对照组基因表达为1,2~(-△△C)t法计算LPS组各基因的相对表达量。LPS组Arg-1基因相对表达量与对照组有1倍差异:LPS组第10天Arg-1 mRNA表达减少至对照组(0.43±0.21)倍,而在第21天表达明显增加至(2.33±0.75)倍。结论 LPS引起新生大鼠的肺损伤在14～21日龄后发展为支气管肺发育不良表型,伴随着巨噬细胞的浸润增加和M1/M2型极化,巨噬细胞激活及M1/M2型极化可通过肺炎症反应失调而阻碍肺发育。巨噬细胞高表达提示可能存在支气管肺发育不良,其可用于提前诊断。     

NMDA受体阻断剂美金刚胺对小鼠内毒素急性肺损伤的保护作用

目的：探讨NMDA受体阻断剂美金刚胺对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法：健康成年雄性昆明小鼠随机分为正常组、美金刚胺组、ALI组和美金刚胺+ALI组。腹腔注射美金刚胺(10 mg/kg) 30 min后腹腔注射LPS(10 mg/kg)制作ALI小鼠模型。各组小鼠处理后6 h测定全肺测定湿/干重比值;采用苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;采用ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：美金刚胺预处理可降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值,减轻其肺组织病理学改变,减少肺组织中MPO和MDA的含量,同时可降低BALF中TNF-α含量以及LDH活性(均P<0.05)。结论：采用美金刚胺阻断NMDA受体可减轻LPS诱导的小鼠ALI,为临床治疗ALI提供了新思路。     

血浆高分子量激肽原在内毒素血症中的作用

目的研究高分子量激肽原(HK)在内毒素血症中的作用。方法将内毒素(LPS)经腹腔内注射于小鼠,观察和比较野生型小鼠和血浆HK缺陷小鼠生存率的表型,应用ELISA检测和比较二者血浆中缓激肽(BK)和炎症因子浓度,应用实时PCR检测和比较二者白细胞炎症因子mRNA水平,制作肺组织石蜡病理切片,通过HE染色观察肺组织的病理变化。结果野生型小鼠在注射LPS后3 h,血浆缓激肽含量明显增高,说明LPS在体内可导致高分子量激肽原的裂解。在LPS注射4 h后,HK缺陷小鼠血浆炎症因子水平较野生型小鼠显著降低,HK缺陷小鼠白细胞炎症因子mRNA水平明显降低。野生型小鼠的肺组织间质增生明显,纤维细胞增多,炎性细胞浸润明显,血管扩张,提示炎性较强,而HK缺陷小鼠无明显病理变化。结论血浆高分子量激肽原在内毒素介导的炎症反应中具有重要的调控作用。     

鼻滴脂多糖对新生小鼠肺发育的影响及机制探讨

目的：观察鼻滴脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对新生小鼠肺发育的影响及NF-κB、MIP-1α和VEGFR-2的变化,探讨出生后肺部炎症在支气管肺发育不良发病中的作用及可能的机制。方法：新生1 d内的C57BL/6小鼠20只随机分为生理盐水组和LPS组：LPS组于出生后1 d（P1）到出生后13 d（P13）每天鼻滴LPS 25 mg/kg,生理盐水组P1到P13每天鼻滴等量生理盐水。第14天收集2组小鼠肺组织标本进行检测,运用HE染色观察各组小鼠肺组织形态学改变,免疫组化观察CD31的表达并进行肺微血管密度计数,qRT-PCR检测VEGFR-2、MIP-1α mRNA水平变化,Western blot检测P65、IκBα、磷酸化P65（Ser536）、磷酸化IκBα（Ser32）及VEGFR-2蛋白水平的变化。结果：与生理盐水组相比,LPS组HE染色表现为肺泡增大,血管周围可见炎性细胞浸润。LPS组放射性肺泡计数（4.533±0.166）低于生理盐水组（8.377±0.290）（P=0.000）,肺泡平均截距（54.890±2.074）高于生理盐水组（32.750±0.787）（P=0.000）。CD31免疫组化示LPS组肺微血管密度（3.387±0.007）低于生理盐水组（5.631±0.014）（P=0.000）。qRT-PCR示LPS组VEGFR-2 mRNA表达下降（P=0.000）,MIP-1α mRNA表达升高（P=0.000）。Western blot示LPS组P65蛋白、磷酸化P65（Ser536）及磷酸化IκBα（Ser32）蛋白水平升高,IκBα蛋白及VEGFR-2蛋白水平降低（P=0.000）。结论：鼻滴脂多糖抑制新生小鼠肺发育,出生后肺部炎症可能参与支气管肺发育不良的发生,其机制可能和VEGFR-2表达下降、NF-κB激活上调MIP-1α有关。     

Casp-8通过调控NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡减轻脓毒症引起的急性肺损伤

目的:分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Casp-8)对脓毒症引起的急性肺损伤(ALI)的作用及其相关分子机制。方法:对40只C57BL/6小鼠使用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症诱导的小鼠ALI模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组(CLP组)和CLP+Casp-8抑制剂组(CLP+Z-IETD-FMK组),每组20只。另取20只正常饲养的小鼠设为假手术组(sham组)。采用称质量法测定小鼠肺组织湿干质量比值(W/D),HE染色观察小鼠肺组织病理变化,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,qRT-PCR检测肺组织中Casp-8 mRNA表达,Western blotting检测小鼠肺组织中Casp-8蛋白、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与sham组比较,CLP组小鼠24 h存活率明显降低(P<0.05);小鼠肺组织充血水肿,肺泡结构严重破坏,肺间质内大量炎症细胞浸润;肺组织W/D,细胞凋亡率,BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、I...     

黄连素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤和炎症的改善作用及其机制

目的：构建内毒素（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠模型,探讨黄连素对ALI的保护作用及其机制。方法：40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、LPS组、黄连素+LPS组和黄连素组,每组10只。对照组小鼠给予生理盐水,LPS组小鼠通过滴鼻给予5 mg·kg^-1 LPS 6 h,黄连素+LPS组小鼠在给予LPS的前5天灌胃50 mg·kg^-1黄连素,黄连素组小鼠给予50mg·kg^-1黄连素灌胃5 d。HE染色检测各组小鼠肺组织形态表现;检测各组小鼠肺湿干重比值;检测各组小鼠肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白浓度和细胞渗出数;ELISA法检测各组小鼠BALF中炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平;超氧化物阴离子荧光探针（DHE）检测各组小鼠肺组织中活性氧（ROS）水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测各组小鼠肺组织中线粒体膜电位;Western blotting法检测各组小鼠肺组织中Bcl-2和Bax蛋白表达水平,计算Bcl-2/Bax比值。结果：与对照组比较,LPS组小鼠肺间质炎性细胞浸润增加,肺泡空间增大,肺泡壁增厚,小鼠肺湿干重比值明显升高（P<0.01）,总蛋白质浓度升高（P<0.05）,BALF中细胞渗透数增多（P<0.01）,BALF中TNF-α和IL-6水平升高（P<0.01）,肺组织中ROS水平升高,线粒体膜电位降低（P<0.01）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.01）;与LPS组比较,黄连素+LPS组小鼠肺组织炎性改变减轻,小鼠肺湿干重比值降低（P<0.05）,总蛋白浓度降低（P<0.05）,BALF中细胞渗透数降低（P<0.05）,BALF中TNF-α和IL-6水平降低（P<0.01）,肺组织中ROS水平降低,肺组织中线粒体膜电位升高（P<0.05）,肺组织中Bax/Bcl-2比值降低（P<0.01）。结论：黄连素可改善LPS诱导的小鼠ALI和炎症程度,其机制可能与降低肺组织中ROS水平和保护线粒体功能有关。     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

热痛方对大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究

目的了解热痛方对大鼠急性肺损伤的保护作用机制。方法40只健康成年SD雄性大鼠随机分为4组:生理盐水组(NS组)、模型组(ALI组)、热痛方组(RT组)和地塞米松组(DM组)。除NS组外,每组大鼠尾静脉注射脂多糖(LPS,5mg/kg)复制急性肺损伤模型,并于注射LPS2 h后行腹腔麻醉,腹主动脉采血处死。测肺系数、外周血白细胞与血小板数,行肺泡灌洗后测灌洗液中的白细胞数及TNF-α的含量。光镜下观察肺组织形态学变化。结果应用热痛方预先给药可明显减轻内毒素引起的肺组织形态学改变。与ALI组相比,RT组肺系数、肺泡灌洗液中白细胞数及TNF-α含量均显著降低(P<0.01或P<0.05),外周血白细胞数升高(P<0.05);与DM组相比,肺系数、外周血小板计数、肺泡灌洗液中白细胞数存在差异。结论热痛方预先给药可能通过减轻肺部的炎性渗出、改善肺部的局部微循环、抑制炎症因子TNF-a的产生等途径减轻内毒素引起的急性肺损伤。     

利多卡因对急性肺损伤中肺组织细胞凋亡的抑制作用

目的 观察利多卡因对大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型肺组织细胞凋亡的抑制作用.方法 成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组：生理盐水组（n=6）、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组（n=18）、利多卡因＋LPS组（n=18）、利多卡因组（n=6）.取材后进行肺组织石蜡切片苏木精-伊红染色,观察肺组织病理变化.并且应用TUNEL法进行肺组织细胞凋亡的检测.最后LPS组和利多卡因＋LPS组分别取15只大鼠进行生存率的分析.结果 LPS组苏木精-伊红染色结果显示肺泡腔广泛的炎性粒细胞以及红细胞渗出,肺泡正常结构破坏,肺泡间隔增厚以及部分肺不张.TUNEL染色则观察到肺组织上皮细胞大量凋亡.而这些改变在利多卡因＋LPS组则得到明显改善.利多卡因组和生理盐水组,肺组织形态学无明显异常,显微镜下几乎没有找到TUNEL染色阳性的细胞.结论 利多卡因减少LPS诱导的ALI过程中肺组织上皮细胞的凋亡,减轻ALI的程度,改善大鼠的生存率.