荧光定量聚合酶链反应检测HCV-RNA的临床价值

目的 评价荧光定量聚合酶链反应（FQ—PcR）检测丙型肝炎病毒在临床中的应用价值。方法 用FQ—PCR检测456例肝炎病人标本，并同时采用ELISA检测抗-HCV，了解样本中HCV—RNA含量与HCV的相关性。结果 456份标本中有81份HCV—RNA含量高于1000拷贝／ml，85份抗-HCV阳性。经统计分析，两者有明显的相关性。结论 FQ-PCR技术检测HCV-RNA特异性强，灵敏度高，具有良好的应用价值。     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA观察

乙型肝炎病毒（HBV）感染的实验诊断主要依据血清学标志（HBV—M）和HBV—DNA的检测。以往运用的普通PCR检测只能定性,其后处理过程易导致假阳性污染,且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物。因此,普通PCR的应用和推广受到一定限制。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应（Fluorescence quantitative,FQ—PCR）克服了常规PCR的不足。直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数,并同时与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行对照,现将结果报道如下。     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒

乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV)是引起常见性传播疾病－－尖锐湿疣和人类肿瘤较为重要的一种现毒,可 的皮肤和粘膜上皮细胞,诱发细胞增生产生乳头瘤样病变^[1],近几年来由HPV引起的生殖道感染的发病率逐渐增高,为了角门诊可疑尖锐湿疣患者中HPV的感染率,我们用荧光定量聚合酶链反应技术（FQ－PCR）检测711例临床可疑PV感染患者,现将结果报告如下。     

荧光定量聚合酶链反应检测血液制品中细菌污染方法的建立

目的建立快速检测血液制品中细菌污染的荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法。方法以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌分别作为革兰阴性菌和革兰阳性菌代表菌,模拟不同程度细菌污染的血液标本,利用3种不同抽提方法提取细菌基因组DNA进行荧光定量PCR(FQ-PCR);以大肠埃希菌系列浓度梯度基因组DNA为模板建立标准曲线,将14株不同菌株模拟细菌污染的血液标本进行FQ-PCR检测。结果根据Ct值和扩增效果,3种基因组抽提方法中以DNA过柱纯化法效果最佳;以大肠埃希菌梯度稀释(1.2×108)～(1.2×102)CFU/ml进行FQ-PCR反应,得到标准曲线为Y=-0.2211X+8.80(R2=0.998);14株不同细菌均能在103CFU/ml检测出阳性,但Ct值差异有统计学意义。结论建立了检测血液制品中细菌污染的荧光定量诊断技术,该方法快速可靠,在预防和诊断输血相关性细菌污染上具有一定的应用价值。     

TaqMan-MGB荧光定量聚合酶链反应检测水痘-带状疱疹病毒

目的利用TaqMan-MGB探针技术,建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)的荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,用于临床标本VZV的检测。方法从GenBank上下载几十株VZV基因组序列,在IE62基因的保守区域设计引物与TaqMan-MGB探针,并对反应条件和体系进行优化,同时评价建立检测体系的特异性、敏感性和重复性;利用已知拷贝数的质粒标准品的病毒脱氧核糖核酸(DNA),建立了VZV基因拷贝数定量分析模型。结果该方法与引起相似发病症状的肠道病毒71型,柯萨奇病毒A、B组以及腺病毒均无交叉反应,具有很高的特异性,且灵敏度达到102拷贝,优于常规PCR方法。采用该法对8份疑似水痘、带状疱疹患者疱疹液标本检测均为阳性,较病毒分离、常规PCR法更为简便、快速、敏感。结论该方法适合临床早期感染病例的确认以及水痘、带状疱疹爆发疫情的应急诊断。     

荧光定量聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒

目的　验证单纯疱疹病毒 (HSV )临床简单、实用、可靠的检测方法 ,以利早期诊断、早期治疗。方法　荧光定量聚合酶反应检测单纯疱疹病毒并对阳性病例进行抗病毒治疗。结果　 10 0例可疑标本检出 HSV 阳性 4 6份 ;阳性基因拷贝数范围在 (45 0～ 5 )× 10 6。结论　荧光定量聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒 ,能较好的解决假阳性污染 ,并实现准确定量 ;对单纯疱疹病毒感染的早期诊断、治疗方案选择 ,提高疗效有较大指导意义     

TaqMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应快速检测麻疹病毒核酸

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法检测麻疹病毒的核酸,对设计的引物与探针进行筛选与条件优化.结果 Tag Man荧光定量RT-PCR方法具有对麻疹病毒核酸检测的高度特异性与准确性,检测的敏感度可达0.1TCID50,从病毒核酸提取至检测完成仅需3个多小时,操作简便,而且大大减少了常规PCR扩增产物的污染机会.结论采用Tag Man荧光定量RT-PCR方法对麻疹病毒与相关的临床样本进行了检测,均获得了满意的结果,为麻疹病毒的分子生物学检测,提供了一种新方法.     

聚合酶链反应诊断肺结核病的应用分析

现代分子生物学最重要的进展之一当属聚合酶链反应（PCR）。PCR把结核病的诊断提高到分子基因水平,从而提高了诊断的敏感性和特异性。自1994年6月一1995年6月采用PCR技术对89例病人的痰标本进行检测,现分析如下。1对象与方法1．1对象1．1．1进展期肺结核6O问,其中另39例、女21例,年龄19～72岁（平均48岁）。分型：浸润型肺结核47例,血播型肺结核2例,慢性纤维空洞型肺结核9例,胸膜炎2例。所有病例均经痰菌、X线摄片检查并经抗疫治疗后病灶吸收而确诊。1．丑．2痰菌阴转肺结核10例,其中男7例、女3例,年龄18～74岁（平均49岁）。…     

立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立

目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法.方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法.结果建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数呈线性关系（R2=0.996）,最低检测浓度为5拷贝/μl;用荧光定量PCR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌,检出结果均为阴性.用该方法检测立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本,检测的结果与立氏立克次体感染相关.结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性,适用于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断.     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒的实验研究

目的:探讨尖锐湿疣(CA)患者人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HPV与分型的临床意义。方法:用FQ-PCR测定292例CA患者疣体组织或分泌物的HPV6、11和HPV16、18及HPV-DNA载量。结果:292例CA患者标本中HPV-DNA阳性感染率95.55%,其中HPV6、11型感染率85.62%,HPV16、18型感染率22.95%,HPV6、11型和HPV16、18型混合感染的感染率为13.01%。定量测定结果显示:HPV6、11型患者病毒载量最高1.0×108copies/ml,最低2.8×103copies/ml;HPV16、18型患者病毒载量最高1.0×108copies/ml,最低2.75×104copies/ml。结论:FQ-PCR检测技术具有灵敏、简捷、安全、特异性等的特点,其定量检测的结果可为临床治疗及观察CA患者感染HPV后病情变化提供可靠依据,有较高的临床实用价值。     

荧光定量PCR检测TB-DNA与抗酸染色阳性率的比较

目的　探讨荧光定量检测TB -DNA在结核病中的应用价值。　方法　采集 82例高度怀疑结核病患者的临床标本 ,应用FQ -PCR检测TB -DNA ,同时用浓集法涂片查找抗酸杆菌 ,比较两种检测方法在结核病患者标本中的阳性检出率。　结果　TB -DNA阳性检出率为 60 .98% ,显著高于抗酸杆菌阳性检出率 3 2 .93 % (P <0 .0 5 ) ;且治疗后TB -DNA的拷贝数和阳性检出率也显著下降 (P <0 .0 5 )。　结论　TB -DNA定量能提高结核杆菌的检出率 ,可作为药物选择和判断疗效的指标。     

流行性腮腺炎病毒荧光定量逆转录-聚合酶链反应快速检测方法的建立

目的建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),用于检测流行性腮腺炎(腮腺炎)病毒(MuV)核酸。方法针对MuV血凝素(H)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异性、灵敏度与准确性;并通过体外克隆技术建立MuV基因拷贝数定量分析模型。结果引物与探针的优化浓度分别为880mmol/L和280mmol/L,具有良好的保守性和特异性,与其它呼吸道病毒均无交叉反应;方法检测灵敏度为10拷贝/反应,相当于0.01TCID50,标准曲线线性范围为107~10拷贝/反应;从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重现性好。结论TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法特异、敏感、快速,为MuV的早期快速检测提供了一种新的检测技术。     

核酸扩增检测结核杆菌DNA方法在肺结核诊断中的临床价值

目的确定核酸扩增结核杆菌DNh检测与抗酸杆菌涂片镜检两种方法在临床诊断上的应用价值。方法选取2009年11月至2011年5月肺结核病例208例为结核组,同期36例非结核病患者作为非结核组,对两组患者晨起痰液进行核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（polyerasechainreaction,PCR）和涂片抗酸杆菌镜检,对痰检结果阳性率进行,检验。结果208例结核病患者的痰液中,FQ—PCR法和涂片抗酸染色法检出的阳性率分别为51．92％和25．96％,FQ—PCR法痰检患者结核杆菌DNA的阳性率明显高于涂片法,两种方法相比差异有统计学意义（x2=29．48,p〈0．01）：对两组方法的特异性及敏感性进行分析,两种方法特异性无统计学差异（x2=2．35,p〉0．05）,敏感性有统计学差异（J2=9．447,p〈0．01）。结论荧光定量PCR检测技术对临床上肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术用于孕妇外周血浆中游离胎儿DNA检测的可行性。方法:利用FQ-PCR技术特异性扩增Y基因性别决定区(SRY)并定量分析妊娠中期(18～25周)孕妇血浆中含量。结果:148例男胎孕妇血浆标本中,SRY基因检出率为98.65%。139例女胎孕妇血浆标本中未检测到SRY基因。结论:FQ-PCR技术在孕妇外周血游离胎儿DNA的检测中具有较高的灵敏性和特异性,FQ-PCR技术可应用于非创伤性产前诊断。     

大肠菌群荧光定量聚合酶链反应法和多管发酵法检测结果相关性研究

目的比较大肠菌群荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和多管发酵法检测结果的相关性。方法建立大肠菌群荧光定量PCR法和多管发酵法同时检测系列浓度梯度的实验室模拟水样的大肠菌群水平,比较2种方法定量结果的相关性。结果大肠菌群荧光定量PCR能够准确检测高于10000 CFU/L水平的水样大肠菌群,在此水平以上的定量结果同多管发酵法结果具有较高相关性。结论大肠菌群荧光定量PCR法具有快速、特异、操作简便的特点,可以作为多管发酵法检测方法的补充,用于水样大肠菌群的快速定量检测。     

应用Taq Man荧光定量聚合酶链反应技术检测鼠疫耶尔森菌

目的发展一种快速、敏感、特异的检测鼠疫耶尔森菌方法。方法应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术，针对pMT1质粒上的caf1基因，pPCP1质粒上的pla基因，染色体上的与色素沉着相关的hms基因和侵袭素inv基因设计TaqMan引物探针，进行荧光定量PCR检验，评价方法的特异性、敏感性；构造并应用上述引物探针的外标对照定量；构造pla的内标对照，采用多重荧光定量PCR（FAM，VIC荧光检测），发现假阴性；采用UDG抗污染、ROX参照荧光染料矫正背景噪音，提高检验能力；检验模拟鼠疫耶尔森菌强毒株和EV菌感染的动物脾脏器样本，评价该法在实际工作的应用。结果设计的引物、探针特异性良好，pla、f1、hms指标的敏感性分别是最低检出10拷贝、1拷贝、1拷贝。结论该方法能快速、灵敏、特异检出鼠疫耶尔森菌，对鼠疫监测、预防生物恐怖等方面具有重要意义。     

荧光定量聚合酶链反应用于非脊髓灰质炎肠道病毒定性方法的评估

目的在河北省脊灰实验室应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法对非脊髓灰质炎肠道病毒（NPEV）进行定性。方法采用荧光定量PCR法对既往河北省脊灰实验室分离到NPEV进行检测,并将检测结果与中和实验鉴定结果和新流程方法检测结果进行比较分析。结果 75株用中和实验方法定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为98.7%（74/75）,33株用新检测流程定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为81.8%。结论荧光定量PCR用于NPEV进行定性的检测方法是可行的。     

流行性感冒病毒应急检测中缩减荧光定量逆转录-聚合酶链反应时间的实验研究

目的在相同的敏感度与特异性条件下,进一步缩减流行性感冒(流感)病毒荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的时间,为应急检测服务。方法缩短荧光定量RT-PCR经典检测方法中不同反应阶段的时间参数,并与经典方法进行比较,考察改良方法的检测敏感性与特异性。结果用经典方法与缩短某些时间参数的改良方法检测甲3型流感病毒,结果其特异性与灵敏度差异无显著的统计学意义,并可将检测时间缩短1h左右。结论适当缩短经典荧光定量RT-PCR方法中的逆转录、变性以及延伸时间后,灵敏度和特异性无显著影响,这对于突发疫情的应急检测具有实用价值。     

定量聚合酶链反应检测乙肝患者HBV DNA的临床意义

ＢＶＤＮＡ是目前检测乙肝病毒最敏感、直接的指标。定量聚合酶链反应 (ＰＣＲ) [1 ] 检测ＨＢＶＤＮＡ更趋敏感稳定。我们应用此技术检测各种肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量 ,以探讨其含量与疾病严重程度的相互关系。对象与方法1　对象　 387例患者为我院 2 0 0 0～ 2 0 0 1年的住院病人 ,男2 33例 ,女 15 2例 ,平均年龄 4 1 2岁± 18 7岁。其中急性肝炎 78例 ,慢性肝炎 2 4 3例 ,肝硬化和慢重肝 6 6例。诊断符合 1995年 5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准[2 ] 。2　方法　采用萤光定量ＰＣＲ法。结　　果1　血清ＨＢ…