一株极广谱耐药的肺炎克雷伯菌引起手术感染的病原学实验研究

克雷伯菌已成为人体感染的较为常见的重要病原菌之一.自Friedlander 1883年从病人肺组织发现首例肺炎克雷伯菌以来,至今该菌属已发展到5个菌种和3个亚种.尤以肺炎克雷氏菌已是临床感染与院内感染的重要病原菌[1～3].1999年9月,我们从一前列腺摘除膀胱造瘘手术后手术处重度感染的病人脓液标本中分离到一株纯培养的肺炎克雷伯菌,在做药敏试验中发现,该株菌对所试的28种药物中22种显著耐药.由于如此极广谱耐药的肺炎克雷伯菌迄今研究报告极为少见,为此,我们对其进行了生物学特征及有关致病性的实验研究.     

泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的 了解1株对临床常用18种抗菌药物(包括亚胺培南、美罗培南)均耐药的肺炎克雷伯菌(KPN)所携带的耐药基因状况.方法 对该株KPN进行了9类耐药基因的PCR法检测,包括β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1、2、9群、blaOXA-1、2、10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、金属β-内酰胺酶基因blaIMP、blaVIM、blaKPC,AmpC酶基因blaDHA、blaACT/MIR、blaCMY/MOX、blaCMY/LAT,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,喹诺酮类耐药基因qnrA、TMP耐药基因dfrA1、dfrA17,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sul1,整合子遗传标记基因intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3,转座子遗传标记基因tnpA、merA,共计36种.结果 KPN共检出7种耐药基因,分别为β-内酰胺酶基因blaTEM,blaSHV,金属β-内酰胺酶基因blaKPC-2,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅱ,ant(3")-Ⅰ,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sull,整合子遗传标记基因intⅠ1.结论 在该株泛耐药KPN中发现了少见的blaKPC-2金属β-内酰胺酶基因,该菌对18种抗菌药物的耐药可能与其同时携带有多种耐药基因有关,临床应对此类菌株引起重视.     

肺炎克雷伯菌老年患者分离株亲缘性分析

目的了解肺炎克雷伯菌菌株亲缘性状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)法对20株肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因,氨基糖苷类药物耐药相关基因,染色体、质粒介导的喹诺酮类药物耐药相关基因,转座子遗传标记和整合子遗传标记等49种耐药基因检测,以耐药基因为分子标记结果作聚类分析。结果20株肺炎克雷伯菌分为A、B两群,A群耐药基因较少;B群携带耐药基因较多,并存在两个克隆传播,这两个克隆已成为医院感染流行株。结论肺炎克雷伯菌可导致医院内传播,遗传标志物聚类分析方法可快速了解菌株间的亲缘关系。     

肺炎克雷伯菌临床分离株获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的调查肺炎克雷伯菌临床分离株中36种获得性耐药基因和3种整合子遗传标记的存在状况,以及获得性耐药基因和整合子遗传标记的相关性。方法收集江苏某市级医院2005年8月-2006年2月住院患者痰液标本中分离的肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应的方法分析21种β-内酰胺类获得性耐药基因、15种氨基糖苷类获得性耐药基因以及3种整合子遗传标记,并用指标聚类分析分析β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因与整合子遗传标记的相关性。结果 20株肺炎克雷伯菌共检测到7种β-内酰胺类获得性耐药基因、5种氨基糖苷类获得性耐药基因和1种整合子遗传标记基因,其余26种基因均未检测到。结论β-内酰胺类耐药基因比氨基糖苷类耐药基因检出率高,与表型相符;指标聚类分析显示,TEM、LEN、DHA、OXA-1、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、rmtB基因与Ⅰ类整合子遗传标记intⅠ1相关联,提示这些基因可能位于Ⅰ类整合子上。     

肺炎克雷伯菌耐药基因的检测及流行病学研究

目的 研究医院临床分离的肺炎克雷伯菌的耐药基因以及流行病学特征,提高临床对其认识及诊治水平。方法 收集2012年3月-2013年5月临床分离的45株肺炎克雷伯菌,采用纸片琼脂扩散法(K-B)测定其对18种药敏纸片的耐药性,并对β-内酰胺酶、氨基糖苷类药物修饰酶等耐药基因进行PCR扩增,并用DNA测序证实。结果 45株肺炎克雷伯菌对亚胺培南/西司他丁100.0%敏感,对氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁、氨曲南、妥布霉素、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率均<60.0%,对其余抗菌药物的耐药率均>60.0%;45株肺炎克雷伯菌检出β-内酰胺酶基因最多的为TEM32株检出率为71.1%,其次为SHV10株检出率为22.2%;氨基糖苷类修饰酶阳性检出最多的是aac(3)-Ⅱ39株,检出率为86.7%,其次为aac(6)-Ⅰb 18株、ant(3)-Ⅰ6株,检出率分别为40.0%、13.3%;检出氨基糖苷类修饰酶基因40株,检出率为88.9%,qacE-1-sull 38株,检出率为84.4%。结论耐药基因的肺炎克雷伯菌对临床患者治疗造成了极大困难,因此,有必要加强对产ESBLs肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测,从而更好地指导临床,控制肺炎克雷伯菌感染。     

神经内科住院患者感染肺炎克雷伯菌耐药性分析与产ESBLs酶耐药基因检测

目的了解神经内科住院患者感染肺炎克雷伯菌的耐药性及存在状况,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法采用VITEK-60型、肉汤稀释法测定86株肺炎克雷伯菌的药敏结果;采用PCR分析ESBLs基因型。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率明显高于非产ESBLs肺炎克雷伯菌,产ESBLs肺炎克雷伯菌首选亚胺培南,其敏感率为100.0%,对其他抗菌药物均有不同程度的耐药;对27株产ESBLs的肺炎克雷伯菌菌株耐药基因检测,100.0%检出TEM基因,81.5%检出CTX-MⅠ基因,63.0%检出SHV基因与CTX-MⅢ基因。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌表现多药耐药,碳青霉烯类药物亚胺培南是治疗效果最好的药物,同时存在2~3种不同类型的耐药基因。     

肺癌化疗患者肺部感染病原学及其与SP-D基因多态性的关联性

目的 研究肺癌化疗患者肺部感染病原学特点、危险因素及其与表面活性蛋白D(SP-D)基因多态性的关联性。方法 选取2018年1月-2020年12月南通市第一人民医院796例肺癌化疗患者临床资料为样本开展横断面研究,诊断有无肺部感染并进行病原学分析,同时检测SP-D基因多态性,根据肺部感染情况分为感染组92例和非感染组704例,比较两组临床资料并分析SP-D基因多态性对肺部感染的影响。结果 796例肺癌化疗患者发生肺部感染92例,占比11.56%,共检出病原菌146株,其中革兰阴性菌82株(56.16%),革兰阳性菌53株(36.30%),真菌11株(7.53%);感染组年龄、糖尿病占比、血清白蛋白(ALB)、化疗周期和住院时间高于非感染组,应用抗菌药物患者占比低于非感染组(P<0.05);感染组和非感染组SP-D基因rs2243639 A/G、rs3088308 A/T和rs721917 T/C位点基因型分布均满足Hardy-Weinber平衡定律,且感染组SP-D基因rs721917 T/C位点CC基因型和C等位基因分布频率均高于非感染组(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、糖尿病、化疗周期和SP-D基因rs721917 CC基因型为肺癌患者肺部感染独立危险因素(P<0.05),ALB和应用抗菌药物为保护因素(P<0.05)。结论 肺癌化疗患者肺部感染发生风险较高,病原菌分布主要为革兰阴性菌,同时SP-D基因rs721917 CC基因型可能导致肺部感染易感性增加。     

肺癌患者并发肺部感染的病原菌谱及耐药基因检测

目的 了解肺癌患者合并肺部感染的病原菌谱及主要病原菌的耐药基因,以指导临床合理应用抗菌药物.方法 对220例肺癌并发肺部感染患者进行痰培养,其中100例培养阳性,对培养阳性的细菌进行鉴定;应用纸片扩散法对主要细菌进行药敏试验,并应用PCR法检测主要细菌的耐药基因.结果 肺癌并肺部感染的病原菌以革兰阴性菌为主占62.0％、革兰阳性菌占31.0％,真菌占7.0％,革兰阴性菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌为主,革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌及肺炎链球菌为主,革兰阴性菌及阳性菌对多种抗菌药物耐药;部分大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌携带TEM型及SHV型耐药基因.结论 肺癌并肺部感染以革兰阴性菌最为常见,多药耐药严重,部分携带有耐药基因.     

泛耐药肺炎克雷伯菌耐药基因研究

目的了解1株泛耐药肺炎克雷伯菌(PDRPKA)耐药基因携带状况。方法采用三维试验分析泛耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶、氨基糖苷酶等,聚合酶链反应(PCR)扩增和产物测序方法确认,检测该株PDRPKA49种基因。结果该株PDRPKA携带TEM-1、SHV、DHA、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-9群、aac(3)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、tnpU、tnp513、merA等14种耐药基因。结论该株PDRPKA携带多种耐药基因是泛耐药原因。     

肺癌患者165株肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药敏试验

对肺癌患者临床痰标中分离出的165棉肺炎克雷伯菌进行16种抗生素药敏分析,结果该菌对氨苄青莓素耐药率达81.8%,而对亚胺硫霉素、菌必治、环丙氟哌酸敏感。提示预防和积极治疗感染应合理应用抗生素。     

多药耐药肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药相关基因研究

目的 了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)喹诺酮类耐药机制.方法 对一组25株MDRKP进行了染色体介导和质粒介导的耐药相关基因进行检测和分析.结果 25株中,有19种存在gyrA基因突变(76.0%);9株存在aac(6′)-Ⅰ b-Cr(36.0%);2株存在qnrA1基因(8.0%)、2株存在qnrB基因(qnrB4-like)(8.0%)、3株存在qnrS1基因(12.0%);25株均存在mdfA基因,未检出qepA基因.结论 在MDRKP中,gyrA基因突变是喹诺酮类耐药的主要原因.     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.     

肺炎克雷伯菌多药耐药株的耐药机制研究

目的 调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况. 方法 对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类,喹诺刚类和其他广谱抗菌药物耐药相关基因与可移动遗传元件. 结果 该株MDRKP检出TEM-1、SHV-11(均测序比对证实)、tetA、mafA、trbC、tnp513、ISEcp1基因,且gyrA基因存在突变,其余50种基因未检出. 结论 该菌株耐Ⅰ～Ⅲ代头孢菌素抗菌药物,可能与同时产TEM-1型和SHV-11型β-内酰胺酶引起牵制耐药机制有关,该株MDRKP表型为多药耐药与gyrA基因突变及获得可移动遗传元件和多种耐药基因相关,在肺炎克雷伯菌中检出ISEcp1为国内首次报道.     

多药耐药肺炎克雷伯菌毒力基因研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)中5种毒力基因存在情况,为临床治疗提供参考依据。方法收集2008年8月-2010年5月杭州市和湖州市6所医院共47株MDRKP,采用PCR及序列分析方法检测5种毒力基因(arr、magA、rmpA、hofA和ompT)。结果 47株MDRKP中检测到arr和magA两种毒力基因,检出率分别为29.8%和17.0%;6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因arr的检出阳性率分别为26.7%、81.8%、0、14.3%、0、0,6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因magA的检出阳性率分别为0、0、0、0、0、88.9%。结论 MDRKP中毒力基因arr和magA具有一定的携带率,在MDRKP中检出毒力基因arr和magA为国内首次报道。     

ICU多耐药肺炎克雷伯菌整合子及耐药基因研究

目的 研究ICU多耐药肺炎克雷伯菌的整合子及其耐药基因情况.方法 收集宁波市医疗中心李惠利医院2019年ICU来源多耐药肺炎克雷伯菌30株,统计分析药敏结果;多重PCR检测Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类整合酶基因及整合子可变区,进一步对整合子阳性菌株的可变区进行测序分析.结果 30株多耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物(头孢类头孢唑林、...     

新生儿感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA基因研究

目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA基因检测,采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定检测16种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果 gyrA基因耐药决定区的突变,其中17株都有第83位的改变,3株发现有第87位的改变。结论本省儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。     

老年住院患者肺炎克雷伯菌感染危险因素及其毒力和耐药基因

目的 分析老年住院患者肺炎克雷伯菌感染的危险因素及其毒力、耐药基因携带情况。方法 选取2018年2月-2020年6月金华市第五医院收治的老年住院患者245例,其中肺炎克雷伯菌感染60例为研究组,185例未感染患者为对照组,分析老年住院患者肺炎克雷伯菌感染标本来源、科室分布及危险因素,聚合酶链式反应(PCR)检测产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株检出率,检测高黏液(HM)表型、OmpK36变异型、常见荚膜血清型、耐药基因及毒力基因。结果 60例老年住院患者肺炎克雷伯菌分离株主要来自痰液标本(56.67%)及重症监护病房(30.00%),对氨苄西林耐药率较高,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦复合制剂耐药率低,对阿米卡星、厄他培南、米诺环素敏感;住院时间≥15 d、合并基础疾病≥3种、长期使用广谱抗菌药物、侵入性操作、白蛋白<30 g/L为肺炎克雷伯菌感染独立危险因素;产ESBLs肺炎克雷伯菌25株占41.67%,OmpK36变异型以C、D型为主,HM表型阳性菌株占40.00%,荚膜血清型检出率为35.00%,以K1、K2型为主,多数携带耐药基因KPC、NDM及毒力基因rmpA...     

ICU泛耐药肺炎克雷伯菌肺部感染暴发与控制

目的 调查重症监护病房(ICU)泛耐药肺炎克雷伯菌(PDRKP)医院感染暴发原因,探讨控制措施的有效性及不足之处.方法 对2010年10月22日-11月3日4例泛耐药肺炎克雷伯菌患者进行流行病学调查和病区环境卫生学监测,采取环境消毒、隔离防护、加强手卫生等一系列措施控制感染暴发.结果 13d内相继发生4例PDRKP肺部感染,罹患率15.38％;从暴露时间、区域分布和相同病原菌、相同耐药谱判断,本次感染符合局部同源暴发.结论 患者出院后终末消毒不彻底、医务人员接触传播,可能是此次肺炎克雷伯菌流行的外源性因素;合理使用抗菌药物,延缓耐药菌的产生,做好多药耐药菌的监测,严格执行各项消毒隔离措施,提高手卫生依从性,在预防与控制医院感染暴发中发挥重要作用.     

耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因及KPC-ISKpn6连锁检测

目的研究和分析18株耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶基因表达及KPC型阳性菌株与插入序列ISKpn6的关联。方法采用微生物鉴定仪鉴定并通过gyrA、parC基因测序和比对确认了18株肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的药敏试验采用K-B纸片扩散法;40种β-内酰胺酶基因和KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPCISKpn6)连锁检测均采用PCR法,β-内酰胺酶编码基因的亚型通过测序和比对进行确认。结果 18株耐药肺炎克雷伯菌除对四环素、米诺环素的敏感率>83.3%外,对其余抗菌药物的敏感率均<50.0%,有的甚至100.0%耐药;40种β-内酰胺酶基因中共检出TEM-1 17株、CTX-M-3 4株、LAP-2 1株、KPC-2 14株、IMP-4 2株、DHA-1 4株、OXA-1 1株共7种耐药基因亚型,且基因检出与其细菌耐药表型相符合;14株KPC-2型阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论耐药肺炎克雷伯菌每一株均有阳性基因检出,且检出的7种耐药基因亚型分布于β-内酰胺酶4个类别中,显示耐药株携带的β-内酰胺酶编码基因多种性;14株携带KPC-2型基因的阳性株其KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性,提示KPC-2型β-内酰胺酶编码基因与插入序列ISKpn6高度关联。