大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜有效部位及其组合物对人胃癌MKN45细胞杀伤的作用。方法:采用体外大鼠脾淋巴细胞增殖实验和MTT法测定细胞杀伤作用,筛选出具有免疫增强作用和细胞毒作用的大蒜有效部位进行组合,并对大蒜有效部位及其组合物对肿瘤细胞杀伤作用进行对比,运用正交试验筛选出大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞杀伤作用的最佳配比。结果:大蒜总多糖+大蒜总皂苷(2#+5#)对大鼠淋巴细胞增殖具有明显的促进作用,大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷(1∶1∶1)的联合应用,其杀伤肿瘤细胞的作用(IC50 13.3μg.mL-1)明显优于同等剂量的2个有效部位组合及大蒜油的单独用药(IC50 35μg.mL-1)。对MKN45细胞杀伤作用的顺序为大蒜油>大蒜多糖>大蒜总皂苷,3个有效部位组合最佳配比为大蒜油∶大蒜多糖∶大蒜总皂苷1∶2∶1。结论:3个部位联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用最强,并且组合物最大优势是在扶正、祛邪的同时,可能减少大蒜油的刺激性。     

大蒜总多糖、总皂苷的提取纯化工艺

目的:优选大蒜总多糖、总皂苷的提取纯化工艺.方法:采用双提法提取大蒜油和大蒜总多糖,乙醇提取总皂苷,以大蒜总多糖、总皂苷收得率为考察指标,对料液比、提取时间、提取次数以及药液浓缩浓度等进行L9(34)正交试验和单因素考察.结果:优选大蒜总多糖提取工艺条件为加5倍量水,提取3次,每次1 h;纯化条件为药液浓缩至含生药1.0g?mL-1.85％乙醇沉淀;总皂苷提取工艺为加5倍量乙醇提取2次,每次1h;纯化条件为药液减压回收乙醇至无醇味(53℃相对密度1.065),加水至药材质量的0.8倍(1.25 g?mL-1).结论:该工艺稳定,利用一批大蒜原料,可同时得到大蒜油、大蒜总多糖和总皂苷,大蒜总多糖提取物出膏率为21.36％,含多糖51.36％,大蒜总皂苷提取物出膏率为6.04％,含总皂苷3.79％.     

均匀设计法筛选三七、山楂有效部位组合物剂量配比

目的:研究确定三七、山楂(SS)组合物中2个有效部位最佳配比剂量的有效方法.方法:按照U6(64)表将小鼠随机分为山楂叶总黄酮∶三七叶总皂苷200∶15,100∶1.875,50∶30,25∶3.75,12.5∶60,6.25∶7.5 (mg·kg-1)6个剂量给药组,连续给药5d后,采用小鼠腹腔注射异丙肾上腺素和断头致急性脑缺血两种模型观察小鼠存活时间,分别得出多元回归方程,推算2个有效部位的最佳配比.结果:确定SS组合物中山楂叶总黄酮∶三七叶总皂苷最佳组合比例为20∶15 mg·kg-1,即配比为4∶3,此时药效作用明显(P＜0.05).结论:运用均匀设计与药效学验证相结合的方法可确定有效部位组合物的最佳配比.     

大孔树脂纯化大蒜总皂苷的工艺优选

目的:优选大蒜总皂苷的大孔树脂纯化工艺.方法:以总皂苷转移率为指标,采用单因素试验考察树脂型号、吸附性能(吸附容量、上样液质量浓度、pH、吸附速度)、洗脱性能(洗脱剂浓度、流速、体积),优选大蒜总皂苷纯化工艺.结果:优选的纯化工艺条件为采用AB-8型大孔树脂,树脂-生药1∶1.3,上样液质量浓度0.8 g·mL-1,pH 7,吸附速度2 BV·h-1,加30％乙醇3 BV除杂,95％乙醇5 BV洗脱,洗脱速度3 BV·h-1,大蒜总皂苷纯度＞65％.结论:AB-8型大孔树脂可用于纯化大蒜提取物中总皂苷,优选的纯化工艺稳定可行.     

黄芪有效部位的复合型纯化工艺

目的:确定黄芪有效部位的复合型纯化工艺。方法:采用正交试验设计法,以多糖收率、多糖含量为指标,优选了多糖醇沉和除蛋白工艺;以单因素考察法优选了黄芪总皂苷的纯化工艺。结果:总多糖最佳醇沉工艺为醇沉前生药量与浓缩液体积比1∶1,醇沉温度40℃,加入3倍量95%的工业乙醇,醇沉静置18 h,粗多糖除蛋白的最佳工艺为配制质量浓度为15 g.L-1的粗多糖溶液,加入粗多糖溶液1/3体积的Sevage试剂,连续脱除2次;大孔树脂纯化黄芪总皂苷的最佳工艺为使用D101型树脂,树脂-药材比为5∶2,以4BV水洗除杂,再以4 BV 70%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干即可。结论:此法优选出的工艺可以实现黄芪总多糖、总皂苷的次序提取。工艺流程科学、经济,可有效节约资源,指导工业生产。     

三七地上部分提取总皂苷及人参皂苷Rb3工艺研究

目的优化现有三七地上部分三七花、茎叶的提取工艺,以便于开发三七花、茎叶的特色食品、保健食品、药品。方法通过不同三七花、茎叶的配比,采用L9(34)正交处理,检测所得三七花、茎叶提取总皂苷和人参皂苷Rb3含量、考察三七花、茎叶提取率,确定最佳提取工艺。结果三七花、茎叶(花、叶配比3∶7),添加1%的组合酶(纤维素酶、果胶酶配比1∶0. 4),提取温度45℃,提取时间2 h,滤液经絮凝、离心、脱色、过滤、冷冻干燥制得。结论三七花叶提取物总皂苷含量为80. 5%、人参皂苷Rb3含量为20. 58%,提取率为92. 8%,溶解性好,色泽金黄,工艺简单易行,适于工业化生产和市场推广应用。     

药对“丹参-黄芪”有效组分的最佳配伍配比研究

 目的确定药对“丹参-黄芪”有效组分丹参总酚酸和黄芪总皂苷的最佳组方配比。方法以麻醉犬心肌氧摄取率及其变化率作为考察指标。根据权重配比法初步实验设不同配比组方6组,由结果分析得出最佳理论配比。在此基础上进一步做确证性实验考察两组分的协同作用。结果丹参总酚酸-黄芪总皂苷间有较好的协同作用,两者比例在5∶2时,可非常显著地降低麻醉犬心肌氧摄取率。结论丹参总酚酸-黄芪总皂苷的最佳组方配比为5∶2。     

比色法测定大蒜多糖提取物中总多糖含量

目的:建立大蒜多糖提取物中总多糖的含量测定方法.方法:以葡萄糖为对照品,硫酸-苯酚比色法测定大蒜多糖提取物中总多糖含量.结果:样品经苯酚-硫酸显色后于485 nm处测定吸收度,在此波长处溶液的吸光度与葡萄糖含量呈良好的线性关系;线性范围0.0116～0.0578 g·L-1 (r =0,999 5),加样回收率101.4％,RSD 2.1％.结论:该方法简单,准确性、重复性良好,可作为大蒜多糖提取物中总多糖质量的控制方法.     

响应面法优化提取黄精茎秆中总多糖、总皂苷、总黄酮的工艺研究

目的:初步研究黄精非传统药用部位黄精茎秆中的资源性成分,通过响应面法优化黄精茎秆中总多糖、总皂苷、总黄酮的超声提取工艺。方法:在提取时间、提取次数、液料比3个单因素试验的基础上,对总多糖、总皂苷、总黄酮提取率建立Box-Behnken中心组合试验设计,模拟二次回归模型,通过响应面分析,对超声提取黄精茎秆总多糖、总皂苷、总黄酮工艺进行优化。结果:通过模型分析和可行性修正,发现提取次数对于综合加权评分影响最为显著,得到最佳提取条件为液料比15∶1,提取3次,每次0.5 h,此条件下总多糖提取率为0.69%,总皂苷提取率为0.44%,总黄酮提取率为0.03%。结论:黄精非传统药用部位黄精茎秆中含有一定量的多糖、皂苷、黄酮等资源性成分,响应面法能够有效优化黄精茎秆总多糖、总皂苷、总黄酮的超声提取工艺,为黄精茎秆资源的开发利用提供了参考依据。     

大蒜有效部位组合物对模型大鼠胃癌前病变的疗效和作用机制

目的：研究大蒜油-大蒜皂苷-大蒜多糖组合物治疗胃癌前病变的疗效,阐明该组合物治疗胃癌前病变的作用机制。方法：将大鼠随机分为空白对照组（n=14）和造模组（n=144）。于造模22周时,将造模组大鼠再随机分为6组：模型组（n=24）、大蒜油对照组（n=24）、胃复春对照组（n=24）、组合物高、中、低剂量组（3×24）。连续给药13周后处死。取材后,在光镜下观察胃黏膜的病理学变化。同时,采用电化学发光法检测各组大鼠离心血浆中的3种肿瘤标志物CEA、CA199、CA724的水平。运用Western Blotting和Real-time PCR技术检测胃癌前病变大鼠胃组织中TGF-β1和Smad4的蛋白和mRNA表达情况。结果：1）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够显著地改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化。2）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够明显降低胃癌前病变大鼠血清中的CEA、CA199、CA724 3种肿瘤标志物的水平。3）组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够下调TGF-β1 mRNA及其蛋白表达水平,而能够上调Smad4 mRNA及其蛋白表达水平。结论：组合物高剂量（2.38 g/kg）组能够显著改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化,降低血清肿瘤标志物水平,调节TGF-β1和Smad4的蛋白表达,从而纠正TGF-β/Smads信号转导通路的异常变化,有效地治疗胃癌前病变。     

多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制

目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95%乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况。结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95%乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P0.05),并呈现浓度依赖关系。挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98±2.62)mg·L~(-1),三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901最为敏感,其IC50为(8.73±0.55)mg·L~(-1),而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P0.05)。结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901最为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期。研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物大孔树脂纯化工艺优选

目的:优选抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物大孔树脂纯化工艺.方法:以总皂苷、总黄酮和总木脂素含量为指标,考察树脂的吸附和解吸能力,筛选大孔树脂型号,采用单因素试验对最大上样量、上样流速、洗脱溶剂等进行考察.结果:非极性D101型大孔树脂效果最佳,优选的纯化工艺条件为醇提液生药质量浓度0.5 g·mL-1,药材-湿树脂量1∶4,吸附流速2 BV·h-1,3 BV水洗除杂,4 BV 70％乙醇洗脱.在此工艺条件下,总皂苷、总黄酮和总木脂素纯度分别由5.36％,0.3％,2.26％提高到53.82％,3.01％,22.87％.结论:D101型大孔树脂纯化抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊醇提物,方法简便可行,纯化效果好,可推广使用.     

灵芝多糖对小鼠胃肿瘤活性的体内外抑制作用

目的:通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨灵芝多糖体内外抗肿瘤作用,并阐明其作用机制。方法:体外实验,使用胃癌细胞株MKN45及AGS,分为空白组、顺铂组、灵芝多糖(20,10,5 g·L~(-1))组,加入药物孵育24,48 h后,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。体内实验,60只BALB/c裸鼠随机分为模型组、阿霉素组、灵芝多糖高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg~(-1))组,除空白组外,其余各组使用Walker-256肿瘤细胞移植法建立胃肿瘤模型。1周后,除空白和模型组灌胃蒸馏水外,其余各组给予相应药物灌胃。4周后测量肿瘤大小,并取部分胃组织,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达。结果:与空白组比较,灵芝多糖高、中、低剂量组作用24,48 h后,均可以明显抑制胃癌细胞株MKN45和AGS的生长(P0.05);灵芝多糖高、中剂量组作用24 h均可以有效促进胃癌细胞MKN45和AGS的凋亡(P0.05),可以抑制AGS胃癌细胞的细胞周期,使其停留在G1期(P0.05)。体内实验表明,灵芝多糖高、中剂量组可以有效抑制胃部肿瘤的生长,同时增加Bax基因表达量,抑制Bcl-2基因表达(P0.05)。结论:灵芝多糖具有体内外抑制胃肿瘤细胞生长的作用,其作用与增加Bax基因表达,抑制Bcl-2基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

三因素析因设计分析黄芪有效部位的交互关系

目的:采用2×2×2析因设计分析黄芪有效部位(黄芪黄酮、黄芪多糖、黄芪皂苷)干预失血性贫血模型小鼠的效应机制及其交互关系。方法:将108只小鼠随机分为9组,每组12只。除正常组外,各组小鼠分别于第1,4,7天进行眶静脉放血,放血量为0.5 mL·20 g-1,正常组、模型组ig给予蒸馏水10 mL·kg-1,其余各给药组分别按照0.166,0.445,0.611,0.069,0.235,0.514,0.680 g·kg-1剂量ig黄芪有效部位药物。运用析因设计方差分析方法对外周血红蛋白(Hb)浓度、红细胞(RBC)计数、红细胞压积(Hct)、造血因子等指标进行方差分析。结果:模型组与正常组比较,外周血Hb,RBC,Hct,血清、肾组织促红细胞生成素(EPO),血清特异转录因子(GATA-1),骨髓干细胞因子(SCF)等指标差异均有统计学意义(P<0.05)。黄酮、多糖、皂苷对外周血象作用显著(P<0.05),黄酮与皂苷合用、多糖与皂苷合用效果均优于单一用药;黄酮、多糖对血清EPO浓度,多糖、皂苷对肾组织EPO浓度有影响,以多糖与皂苷的配伍组合效果最佳;黄酮、多糖对血清GATA-1浓度、骨髓SCF浓度有影响,以黄酮作用效果最好。结论:多糖与皂苷配伍是改善失血性贫血小鼠外周血象,提升血清及肾组织EPO浓度的最佳配伍组合;黄酮增加骨髓SCF、血清GATA-1浓度作用最佳。     

知母降糖有效部位的提取工艺优选及成分分析

目的: 优选知母中降糖有效部位的提取工艺并鉴定其成分。 方法: 以总皂苷得率及浸膏得率为指标,通过均匀设计试验考察乙醇体积分数、乙醇用量及提取时间对工艺的影响;以双苯吡酮类成分、总皂苷提取率为指标,利用单因素试验筛选提取次数。采用紫外分光光度法测定双苯吡酮类成分含量,HPLC测定总皂苷含量,利用UPLC/Q-TOF-MS技术分析知母降糖有效部位的主要成分。 结果: 知母降糖有效部位的最佳提取工艺为加8倍量80%乙醇提取2次,每次1 h,其主要成分包括43种知母皂苷类和7种双苯吡酮类成分。 结论: 优选的提取工艺稳定可行,为糖尿病及其并发症的中药有效部位药物研发提供参考。     

刺五加根有效组分的抗氧化活性分析

目的:研究刺五加根有效组分在不同质量浓度下的体外抗氧化活性,筛选最佳有效组分,为刺五加根的研究和开发提供参考。方法:采用紫外分光光度法测定各组分中总黄酮和总皂苷含量,检测波长分别为510,550 nm。利用超氧阴离子自由基(O-2·)清除法,羟基自由基(·OH)清除法,1,1-二苯基-2-苦基肼基(DPPH)自由基清除法和亚铁还原能力实验(FRAP)法测定刺五加根不同有效组分的抗氧化活性。结果:不同有效组分的刺五加根在一定质量浓度范围内均有一定的抗氧化活性,且随着质量浓度的增加抗氧化能力越强。在O-2·清除法模型中,质量浓度为20 g·L~(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率(91.61±2.59)%。在·OH清除法模型中,质量浓度为1.0 g·L~(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率(90.29±2.06)%。在DPPH自由基清除法模型中,质量浓度为0.7 g·L~(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率清除率达(84.45±0.14)%。在FRAP法中,质量浓度为1.0 g·L~(-1)时,30%乙醇洗脱部位的FRAP值3 474±36.84。结论:刺五加根各有效组分均有一定的抗氧化活性,30%乙醇洗脱部位的抗氧化能力最强,可开发成天然的植物抗氧化剂。     

商品天冬等级与其活性物质含量的相关性分析

目的:测定不同等级天冬药材中醇溶性浸出物和活性物质总皂苷、总多糖的含量,分析天冬商品等级与醇溶性浸出物、活性物质含量之间的相关性,考察商品天冬等级划分方法的合理性。方法:根据2015年版《中国药典》测定不同商品等级天冬药材醇溶性浸出物含量;采用紫外-可见分光光度法测定37份不同等级天冬中总皂苷含量,检测波长408 nm;采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量,检测波长490 nm;运用相关分析和线性回归分析天冬药材醇溶性浸出物、总皂苷及总多糖含量与商品等级间的相关性。结果:不同等级天冬药材醇溶性浸出物和总皂苷含量有显著性差异(P0.05),一等品与三等品比较天冬总多糖含量具显著性差异(P0.05),其余各等级间总多糖含量差异无显著性。在相关性分析中,天冬商品等级与醇溶性浸出物、总皂苷含量呈极显著正相关关系(P0.01),与总多糖含量呈显著正相关关系(P0.05)。结论:商品天冬以药材中部直径为主要标准的分级方法能体现天冬醇溶性浸出物和内在活性物质总皂苷含量,传统等级划分方法仍具有合理性;天冬药材建议以测定总皂苷含量为主,醇溶性浸出物和总多糖含量作为辅助质量评价指标。     

竹叶柴胡炮制前后有效成分含量比较

目的:分析比较鄂西北地区竹叶柴胡经不同方法炮制前后有效成分的含量变化情况.方法:将竹叶柴胡饮片经蜜制、酒制、醋制后,分别提取生品和几种炮制品中的总皂苷、挥发油,使用紫外-可见分光光度法测量炮制前后总皂苷和挥发油含量.结果:竹叶柴胡炮制前后柴胡皂苷和挥发油含量均发生了明显的变化.蜜制后总皂苷含量升高,酒制和醋制后总皂苷含量降低,含量高低依次为蜜柴胡＞生柴胡＞醋柴胡＞酒柴胡,含量分别为2.037 5％,1.519 6％,1.317 4％,1.127 4％;几种炮制方法炮制后挥发油含量均有明显升高,含量高低依次为蜜柴胡＞酒柴胡＞醋柴胡＞生柴胡,含量分别为0.736％,0.689％,0.630％,0.395％.结论:不同炮制方法炮制竹叶柴胡前后有效成分含量均有不同程度的变化,证明根据不同的药用目的炮制柴胡药材具有科学性.     

基于柴胡皂苷抗溃疡药效成分的药动药效相关性

目的:明确柴胡皂苷发挥治疗胃溃疡作用的化学成分,开展柴胡皂苷治疗胃溃疡药动药效相关性研究,为探讨其药效物质及作用机制提供前期实验基础。方法:采用高分辨质谱,一、二级质谱解析方式解析柴胡皂苷化学成分,同时取SD大鼠灌胃柴胡皂苷提取液(300 mg·kg~(-1))后不同时间点采血,采用高效液相色谱法对其入血成分柴胡皂苷B_2,柴胡皂苷D进行血药浓度测定;分别对柴胡皂苷B_2,柴胡皂苷D血药浓度与人体胃黏膜上皮细胞体外增殖率,超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)进行时效相关性分析,评价柴胡皂苷作用特点及可能机制。结果:柴胡皂苷抗溃疡化学成分主要为柴胡皂苷A,D,B_2,I,E,prosaikogenin D,F,G;柴胡皂苷含药血浆与损伤的人体胃黏膜上皮细胞增殖率具有良好的相关性,其吸收也与血中MDA,SOD水平呈一定的时效关系。结论:该研究明确了柴胡皂苷发挥治疗胃溃疡作用的化学成分,探讨了入血成分与药效相关性,其作用机制可能与MDA,SOD蛋白调控有关。