树突状细胞融合瘤苗的体内抗肝癌效应

目的：观察小鼠脾树突状细胞（DC）与肝癌H22细胞融合瘤苗体内诱导抗肿瘤免疫反应。方法：采用细胞因子诱导、CD11c磁珠标记、MACS分选等技术与传统的聚乙二醇（PEG）法相结合制备DC与H22细胞融合瘤苗，进行致瘤性和诱导CTL活性检测。体内抗肿瘤实验分免疫保护组和免疫治疗组两大组，观察融合瘤苗对肿瘤保护和治疗作用。结果：1、融合瘤苗接种于小鼠体内未见肿瘤形成，脾、肺和肝等器官未出现肿瘤病变。2、接种活融合疫苗的免疫小鼠针对H22细胞细胞的脾CTL活性明显高于对照组小鼠（P＜0．01）。3、在免疫保护组，经融合瘤苗免疫的小鼠，肿瘤潜伏期较对照组明显延长（P＜0．05）。结论：1、DC与H22细胞的融合瘤苗无体内致瘤性，已失去其亲本H22细胞的恶性生长特征，完全可靠。2、融合细胞能明显激活小鼠脾特异性的CTL，提示已获得亲本DC提呈抗原的功能。3、融合瘤苗对H22细胞的攻击有明显的抵抗作用。4、融合瘤苗治疗荷瘤小鼠有一定的抑瘤效应，而以抵抗肿瘤攻击的免疫保护作用较为显著。     

羟基喜树碱对融合瘤苗抗肿瘤效应的实验研究

目的 观察羟基喜树碱(HCPT)处理的树突状细胞(DC)与Hepal-6肝癌细胞融合后的瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫应答以及对荷瘤小鼠的治疗效果。方法 应用免疫磁珠分选和贴壁培养法收集融合细胞,Rhodamine 123/PI双标法检测凋亡,4h ~(51)Cr释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性,观察瘤苗对荷瘤小鼠保护性免疫反应和免疫治疗作用。结果 用50μg/ml HCPT处理DC-Hepa融合瘤苗24 h后,凋亡率为29.7％±4.1％,HCPT处理的DC-Hepa瘤苗在体内诱导出更强的特异性CTL活性,使免疫小鼠产生一定的免疫保护作用,抵抗Hepal-6肝癌细胞的再次攻击,使治疗小鼠的肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。结论 HCPT处理的DC-Hepa瘤苗进行体内免疫保护和治疗,能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应,为DC介导的肝癌生物治疗开辟了新的途径。     

树突状细胞与肥大细胞瘤细胞融合后诱导T细胞介导的抗肿瘤效应

该研究利用聚乙二醇将相同来源的树突状细胞(DC)与小鼠的肥大细胞瘤系P815融合在一起，形成治疗性DC瘤苗，并对这种树突状细胞瘤苗免疫小鼠后抑制肿瘤生长的作用及其机制进行初步探讨。     

白细胞介素-12基因修饰的树突状细胞瘤苗 小鼠体内抗肝癌的作用

目的在小鼠H22肝癌模型中研究mIL-12基因修饰的及酸洗脱肽致敏的树突状细胞（dendriticcells,DC）瘤苗体内诱导抗肝癌免疫的能力。方法用mIL-12的重组腺病毒AdmIL-12及对照病毒AdBGFP转染从小鼠骨髓细胞中诱导培养的DC。弱酸洗脱小鼠肝癌细胞株H22表面的抗原肽并致敏mIL-12基因转染组及对照病毒转染组DC。免疫小鼠后观察不同处理的DC瘤苗对小鼠H22皮下移植瘤成瘤情况及肿瘤生长的影响。结果mIL-12基因修饰的及酸洗脱肽致敏的DC瘤苗明显抑制小鼠H22皮下移植瘤的生长,瘤重与对照组相比差别有显著意义（P＜0.05）。结论以mIL-12基因修饰且以酸洗脱肽致敏的DC瘤苗可在小鼠肝癌模型中诱导较强的抗肿瘤免疫,这将为肝癌的防治提供可行的DC瘤苗制备方案。     

树突状细胞与细胞融合后诱导T细胞介导的抗肿瘤效应

目的　研究树突状细胞与小鼠肥大细胞瘤细胞P815融合作为肿瘤疫苗免疫小鼠后抑制肿瘤生长的作用及其机理。方法　Balb/C小鼠DC与P815细胞体外融合 ,形成的杂交瘤分 2次免疫接种同基因小鼠皮下 ,然后用P815细胞攻击免疫的小鼠 ,观察肿瘤的生长情况及免疫小鼠脾细胞特异性CTL功能。结果　DC P815融合率为 3 0 %,杂交瘤接种小鼠能产生明显的抗肿瘤效应 ,其拮抗P815细胞攻击的能力明显强于用灭活的死P815细胞与DC混合 ,和单用死亡P815细胞免疫的小鼠及用生理盐水的对照组小鼠。DC P815杂交瘤免疫接种小鼠的脾细胞特异性CTL ,杀伤活性强于其它各组小鼠。结论　DC与肿瘤细胞融合后作为肿瘤疫苗接种可在体内产生明显的抗肿瘤免疫 ,其机理主要是特异性CTL的作用。     

脂质体瘤苗抗小鼠H22腹水型肝癌作用研究

目的观察脂质体瘤苗的抗癌作用,寻找有效的抗肿瘤疫苗.方法制备H22肝癌细胞的脂质体瘤苗,将该瘤苗通过腹腔接种,免疫荷瘤的BalB/c小鼠(LAg组),同时设单用抗原免疫组(Ag组)和D-Hanks组作为对照,比较各组小鼠的生存期,并用MTT法检测外周血和脾淋巴细胞对H22肝癌细胞的体外杀伤作用.结果LAg免疫的BalB/c鼠的平均生存期及脾和外周血淋巴细胞毒活性均高于Ag组及D-Hanks组(P＜0.05),Ag组及D-Hanks组两者之间差异无显著性(P＞0.05).结论单用H22抗原不能诱导有效的抗肝癌免疫反应,用脂质体包裹后,其抗肝癌作用可明显增强,脂质体瘤苗有潜在的临床应用前景.     

白血病抗原冲击致敏的树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫反应

目的：研究树突状细胞(DC)的体外培养扩增及诱导特异性的抗肿瘤免疫反应。方法：使用mGM-CSF加mIL-4培养诱导骨髓细胞分化，采用反复冻融法制备L7212白血病细胞的冻融抗原(TAA)，在DC培养的第3天加入TAA，将TAA冲击致敏的DC与T淋巴细胞共培养，获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，采用MTT法检测CTL对L7212细胞的杀伤作用及其对野生型L7212细胞再攻击的免疫保护作用。结果：MTT检测发现CTL对L7212细胞有特异性杀伤抑制作用，L7212抗原冲击致敏的DC能显著提高和延长野生型L7212细胞再攻击小鼠的生存率和存活期。结论：mGM-CSF和mIL-4配伍可有效地从小鼠骨髓细胞中诱导出大量的成熟的功能性DC，L7212白血病TAA冲击致敏的DC可诱导机体产生较强的抗肿瘤免疫反应。     

T淋巴细胞瘤转基因瘤苗抗肿瘤作用研究

目的观察C57小鼠源性淋巴瘤瘤苗抗肿瘤免疫效果。方法采用电穿孔法将粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）表达质粒导入T淋巴瘤RMA细胞制作转基因瘤苗,筛选出高表达GM-CSF的细胞克隆（RMA-GM）,经丝裂霉素处理后皮下接种C57小鼠,观察抗肿瘤免疫效果。结果RMA-GM接种C57小鼠后,出瘤时间延长,肿瘤生长速度减慢,生存期延长,40%的小鼠长期生存。结论GM-CSF基因质粒转导的RMA-GM转基因瘤苗具有较好的抗肿瘤免疫效果。     

抗CD25抗体联合瘤苗抗肿瘤作用的实验研究

将雌性C57BL/6小鼠随机分为抗CD25抗体 未接种瘤苗(A组)、抗CD25抗体 接种瘤苗(B组)、磷酸盐缓冲液(PBS) 未接种瘤苗(C组)和PBS 接种瘤苗(D组)四组,用流式细胞术检测小鼠尾静脉注射抗CD25抗体前后的CD 4CD 25调节性T细胞(Treg细胞)变化,用丝裂霉素灭活的肿瘤细胞免疫小鼠,观察其抗肿瘤能力(包括出瘤时间、肿瘤生长速度和生存期);用乳酸脱氢酶杀伤试验验证抗CD25抗体增强细胞毒T淋细胞的杀伤活性及特异性.结果 A组和C组CD 4CD 25Treg细胞百分比有统计学差异(P<0.05).接种瘤苗后第13天,A、C组及B、D组肿瘤发生率分别为25%、75%、0和25%,两两比较均有统计学意义(P均<0.05);接种后第5、13、18天,A、C、D组分别发生出瘤现象,B组最终未见肿瘤,A、C组间及B、D组间比较均有统计学差异(P均<0.05).B、D组脾脏细胞杀伤活性有统计学差异(P<0.05),并具有特异性.提示抗CD25抗体可降低CD 4CD 25Treg细胞,增强其抗肿瘤免疫作用,联合接种瘤苗可增强其抗肿瘤攻击的能力.     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫功能的研究

目的 研究树突状细胞(DC)表面免疫分子HLA-DR及B2表达水平及其与DC免疫诱导能力相关性.并进一步探讨DC免疫功能在宿主免疫功能中的作用。方法 以健康成人(n=10)作为对照．检测临床确诊肝癌患(n=10)外周血DC表面免疫分子HLA-DR及B，表达水平及DC免疫诱导能力．结果 肝癌患DC表面HLADR及B2表达水平(6.7±1.6及6.1±1.1)明显低于对照组(10.7±1.4及9.6±1.2VOF,P<0.05).其DC体外诱导T细胞增殖能力(3100±120cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.01)：以抗HLA-DR单抗及抗B2单抗完全封闭对照组DC表面HLA-DR及B2．则该DC诱导T细胞增殖能力(3900±1.5cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm．P<0.05)．结论 肝癌患DC表面HLA-DR及B2表达水平下降与DC免疫功能低下密切相关，DC免疫功能低下可能是肝癌(或许包括其它肿瘤)逃避宿主免疫监视的重要原因。     

小鼠甲胎蛋白/树突状细胞疫苗体外免疫活性检测及对小鼠皮下移植瘤的抑制作用

Vollmer等首次将转染有甲胎蛋白（AFP）基因的树突状细胞（DC）免疫C57BL／6小鼠，能有效诱导出AFP特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL），显示出良好的免疫保护作用，只是作用稍弱。同时体内癌细胞能够分泌由全长cDNA表达的AFP，但自分泌型AFP不能诱发有效抗肝癌免疫作用㈦，因此，外源性转染很难达到满意疗效，是否与具有分泌性信号肽的AFP-cDNA分泌出胞。     

达肝素钠对肝癌生长转移抑制的实验研究

目的研究低分子肝素达肝素钠对肝癌生长转移的抑制作用。方法采用人肝癌裸鼠转移模型(LCI-D20)。40只模型鼠随机分成4组即对照组、化疗组(顺铂 氟尿嘧啶),达肝素钠组、联合组(顺铂、氟尿嘧啶与达肝素钠)。观察肿瘤大小和转移、抑瘤率、测血清甲胎蛋白(AFP)、肿瘤微血管密度(MVD)、CD31。结果对照组、化疗组、达肝素钠组、联合组的肿瘤体积分别为(25245±13367)mm3、(1610 ±1217)mm3、(5883±3131)mm3和(5556±2570)mm3;抑瘤率分别为0%、93.6%、76.7%和78.0%;MVD 分别为20.7±6.8、18.2±2.6、4.8±1.8和6.5±2.4;CD31分别为31.8±5.7、25.5±5.1、21.6±4.8和19.6±2.4;AFP分别为(121.8±31.4)ng/ml、(21.5±13.3)ng/ml、(75.6±29.7)ng/ml 和(55.8±38.0)mg/ml;肝转移率分别为80%、70%、20%和10%;肺转移率分别为70%、60%、20%和10%; 腹壁转移率分别为90%、60%、30%和30%;腹水形成率分别为20%、10%、0%和0%。化疗组、达肝素钠组、联合组分别与对照组比,对肝癌生长的抑制作用差异有统计学意义,F=9.191,P<0.01。达肝素钠对肝癌血管形成和转移有良好的抑制作用,与对照组及单纯化疗组比差异有统计学意义,F=4.937,P<0.01。结论低分子肝素达肝素钠通过抗肿瘤血管形成,对肝癌的生长与转移有抑制作用。     

肝癌细胞裂解物致敏的树突状细胞瘤苗预防肝癌术后转移复发

目的探讨人自体肝癌细胞裂解物致敏的树突状细胞(D C)瘤苗预防肝癌术后转移复发的价值。方法从肝癌患者外周血单核细胞中诱导D C,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)刺激活化,经自体肝癌细胞裂解物致敏D C制备瘤苗。将3 0例肝癌术后患者随机分为D C瘤苗治疗组1 5例,对照组1 5例。对两组病例治疗前后免疫功能、临床疗效、肿瘤转移复发率及生存率进行观察比较。结果DC瘤苗治疗后外周血CD 3 、CD4 /CD 8 及自然杀伤细胞比率较治疗前明显升高(P<0.0 5),且明显高于对照组治疗后的相应水平(P<0.05)。DC瘤苗治疗后血清IL-1 0水平明显下降(P<0.0 5)。随访18个月,DC瘤苗治疗组的转移复发率为13.3 3%,明显低于对照组53.33%(P <0.05);而治疗组的生存率为93.33%,明显高于对照组60.00%(P<0.05)。结论肝癌术后行自体肝癌细胞裂解物致敏的DC瘤苗治疗,可改善患者的免疫功能,降低肿瘤转移复发率,提高患者术后生存率,为肝癌的免疫治疗开辟一条新途径。     

MAGE-1修饰的树突状细胞体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的通过观察肿瘤相关抗原基因MAGE-1转导的树突状细胞(dendritic     

树突状细胞负载肝癌相关抗原后成熟调控的研究

目的 研究树突状细胞（DC）负载肝癌相关抗原后的成熟调控。方法 用SDS－PAGE制备电泳纯化牛结核分枝杆菌热休克蛋白70，用其诱导DC的分化与成熟。结果 DC负载肝癌可溶性抗原后，10％2细胞失去了DC特征，同时其表面CD54（90．0％），CD83（78．0％），CD86（85．0％）分子表达下降；牛分枝杆菌卡介苗－热休克蛋白70（BCG HSP70）的活化有利于负载肝癌可溶性抗原后的DC维持其特异性标志，同时DC表面CD54（92．0％），CD83（90．0％），CD86（91．0％）分子表达增加，DC诱导同种异体淋巴细胞转化的能力增加，淋巴细胞增殖加快，从而促进DC成熟，增加其抗原呈递能力。结论 预示BCG HSP70有可能成为促进DC活化和成熟的另一重要分子。     

树突状细胞诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞对裸鼠人肝癌转移的预防和治疗

目的探讨肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20的治疗作用。方法从健康人外周血单个核细胞中诱导树突状细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4刺激活化,经人肝癌细胞株MHCC97-H肿瘤抗原致敏后,诱导肿瘤抗原特异性CTL,经腹腔注射,以自然杀伤样T淋巴细胞(CIK)和磷酸盐缓冲液为对照,研究其对LCI-D20肝癌治疗和预防转移作用。结果肿瘤抗原特异性CTL组、CIK 组和对照组肝癌肿块重量、血清甲胎蛋白含量、肝癌肝内转移率和存活期依次为(1．11±0．63)g、(1．12±0．36)g 和(2．68±0．53)g;(52．1±9．7)μg／L、(48．6±5．2)μg／L和(82．2±7．2)μg/L;16．7％、16．7％和58．3％; (79．0±5．0)d、(73．3±7．0)d和(52．3±5．2)d。对照组与前两组比较差异均有统计学意义(P值均<0．01)。结论肿瘤抗原特异性CTL可以预防LCI-D20模型肝癌发生转移,延长动物存活时间。     

肝癌抗原肽冲击转染p53的树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的专职性抗原呈递细胞，它们能高效摄取、处理抗原，并将多肽呈递给静息型T细胞，引起针对此抗原的特异性免疫反应。我们将全长野生型p53基因（wt—p53）转染小鼠骨髓来源的DC，然后用肝癌抗原肽修饰已转染野生型p53的DC（wt—p53DC），利用这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。     

Preventive antitumor activity against hepatocellular carcinoma (HCC) induced by immunization with fusions of dendritic cells and HCC cells in mice

BACKGROUND: The prevention of recurrence of hepatocellular carcinoma (HCC) after treatment is very important for improvement of the prognosis of HCC patients. Dendritic cells (DCs) are potent antigen-presenting cells that can prime naive T cells to induce a primary immune response. We attempted to induce preventive antitumor immunity against HCC by immunizing BALB/c mice with fusions of DCs and HCC cells. METHODS: Murine bone marrow-derived DCs and a murine HCC cell line. BNL cells, were fused by treatment with 50% polyethyleneglvcol (PEG). Fusion efficacy was assessed by the analysis of fusions of BNL cells stained with red fluorescent dye and DCs stained with green fluorescent dye. Mice injected intravenously with DC/BNL fusions were challenged by BNL cell inoculation. RESULTS: About 30% of the PEG-treated non-adherent cells with both fluorescences were considered to be fusion cells. The cell fraction of DC/BNL fusions showed phenotypes of DCs, MHC class II, CD80, CD86, and intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, which were not expressed on BNL cells. Mice immunized with the fusions were protected against the inoculation of BNL tumor cells, whereas injection with a mixture of DCs and BNL cells not treated with PEG did not provide significant resistance against BNL cell inoculation. Splenocytes from DC/BNL fusion-immunized mice showed lytic activity against BNL cells. CONCLUSIONS: These results demonstrate that immunization with fusions of DCs and HCC cells is capable of inducing preventive antitumor immunity against HCC.