电磁场激活细胞外信号调节激酶通络在骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨中的作用

目的探讨电磁场作用于大鼠骨髓间充质干细胞对细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响，并进一步研究电磁场诱导所致ERK信号通路变化在骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨中的作用。 方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞，分为对照组、暴磁组、PD98059组和PD98059+暴磁组。采用Western blotting法检测ERK通路的活性变化，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞的增殖活性，按照碱性磷酸酶（ALP）试剂盒说明书步骤检测各组细胞ALP活性。 结果①暴磁后5 min，ERK1/2磷酸化水平即明显高于对照组，1 h后仍处于较高水平（P<0.01）；PD98059作用可明显抑制ERK1/2磷酸化水平的升高，提示PD98059可有效阻断ERK通路的激活。②MTT法检测结果提示，暴磁后细胞的增殖活性明显升高，PD98059可明显抑制这种效应。③暴磁组ALP活性明显高于对照组，PD98059+暴磁组ALP活性较暴磁组高（P<0.01），差异有统计学意义。 结论在15 Hz、1 mT的正弦波电磁场作用下，骨髓间充质干细胞ERK信号通路很快被激活，引起细胞增殖活性和ALP活性的改变，这为进一步研究磁场对骨髓间充质干细胞的促增殖和分化成骨机制提供了指导意义。     

三七总皂甙通过细胞外信号调节蛋白激酶1／2信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向神经样细胞的增殖与分化

背景：三七总皂甙对骨髓基质细胞向神经样细胞分化的效应及相关信号通路目前尚不明确。目的：探讨细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路对三七总皂甙调节大鼠骨髓基质细胞向神经细胞增殖、分化的作用。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-05／10在汕头大学医学院分子生物学实验室完成。材料：4-6周龄雄性SD大鼠9只,由汕头大学医学院实验动物中心提供。三七总皂甙为,一两梧州制药集团股份有限公司产品,细胞外信号调节蛋白激酶的抑制剂PD98059为CellSignalingTech公司产品。方法：全骨髓法体外分离纯化大鼠骨麓基质细胞,取传至第3代细胞进行诱导分化,设立3组：单纯诱导组向培养液中加入10ug／L碱性成纤维细胞生长因子,预诱导24h后全量换为正式诱导液（含10P-g／L碱性成纤维细胞生长因子、2％DMSO、200μmol／L丁羟回醚的α-MEM培养基）,每24h半量换诱导液1次;三七总皂甙组向预诱导液和正式诱导液内加入终浓度100mg／L三七总皂甙;PD98059组在三七总皂甙组培养液基础上加入10μmol／LPD98059。主要观察指标：细胞形态学观察,MTT法检测细胞增殖情况,免疫组织化学方法鉴定细胞Nestin的表达。 结果：诱导6h后,少数细胞呈锥形,细胞突起增多伸长,类似神经元,继续诱导培养后细胞突起增多,突起相互连接成网状。与单纯诱导组、PD98059组比较,诱导6,12,24h三七总皂甙组细胞均明显增殖（P〈005）,且随诱导时间延长呈递增趋势（P〈0．05）：单纯诱导组、PD98059组间比较无明显差异（P〉0．05）。与单纯诱导组比较,诱导24h后三七总皂甙组Nestin阳性率明显升高（P〈0．05）,PD98059组Nestin阳性率明显降低（P〈0．05）。 结论：三七总皂甙可以促进骨髓基质细胞的神经分化和分化后增殖,细胞外信号调节蛋白激酶1／2的特异性抑制剂PD98059能够拈抗三七总皂甙促增殖分化作用,提示细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路是三七总皂甙促进骨髓基质细胞向神经细胞分化和增殖的重要环节。     

丁酸钠诱导人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1分化作用中细胞外信号调节激酶通路的改变

本研究探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路在丁酸钠（NaB）诱导人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1分化中的作用,阐明丁酸钠诱导SKM-1细胞分化的分子机制.用Western blot方法检测总ERK和磷酸化ERK的表达水平;将ERK特异性的抑制剂PD98059与丁酸钠联合应用,观察它们对SKM-1细胞生长曲线的影响及分化效应,并用Western blot方法检测P21和组蛋白脱乙酰酶（HDAC）蛋白质的表达水平.结果表明：SKM-1细胞经1mmol/L的丁酸钠作用后,总ERK的表达水平未发生变化,而磷酸化ERK的表达水平下降;丁酸钠及丁酸钠＋PD98059均可以上调P21和HDAC蛋白质的表达水平,且丁酸钠联合PD98059的作用强于丁酸钠单用.结论：ERK通路抑制是丁酸钠诱导SKM-1细胞分化的重要分子机制.     

骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化中电磁场激活ERK通路的作用

背景：研究表明电磁场可调节骨髓间充质干细胞的增殖和分化,但其具体机制尚不清楚。目的：从ERK信号途径探讨电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨的作用。方法：取第3代生长良好的大鼠骨髓间充质干细胞,暴磁组给予15Hz、1mT的正弦波电磁场刺激,PD98059＋暴磁组在电磁场刺激前给予20μmol/L ERK阻断剂PD98059,PD98059组仅给PD98059不进行电磁场刺激,对照组正常培养。电磁场刺激后,收集各组细胞,Western blot法检测ERK通路的活性,MTT法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论：电磁场刺激后,细胞ERK1/2磷酸化水平、细胞的增殖活性、及碱性磷酸酶活性均明显升高（P〈0.01）;PD98059可明显抑制ERK1/2磷酸化水平及细胞增殖活性的升高（P〈0.01）,而在一定程度上提高细胞的碱性磷酸酶活性（P〈0.01）。说明电磁场刺激可通过激活骨髓间充质干细胞ERK信号通路,并且主要通过该途径促进骨髓间充质干细胞的增殖;而在脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞分化成骨的过程中,激活ERK信号通路所起的作用较小。     

联合抑制Notch2和MEK/ERK通路对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨Notch2和MEK/ERK信号通路在胃癌细胞SGC-7901中是否存在交叉作用。方法采用体外化学合成的特异性针对Notch2的siRNA(Notch2siRNA)和丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的抑制剂PD98059,分别单独和联合处理体外培养的胃癌SGC-7901细胞,以转染阴性对照siRNA(control siRNA)细胞作为siRNA对照组,并设不给予任何转染的空白对照组。免疫印迹(Western Blotting)法检测磷酸化ERK1/2(p-ERK)1/2和Notch2蛋白的表达水平。比色法(MTT)检测癌细胞增殖抑制率。结果Notch2siRNA能降低蛋白Notch2的表达水平,并抑制癌细胞增殖[(38.26±1.82)%],而p-ERK的表达水平则较对照组增加。PD98059能降低p-ERK的表达水平,并抑制癌细胞的增殖[(30.05±3.16)%],Notch2水平则无明显变化,联合应用Notch2siRNA和PD98059能明显降低p-ERK和Notch2蛋白的表达水平,与Notch2siRNA或PD98059单独应用比较,显著抑制癌细胞增殖率,差异有统计学意义[(72.55±5.30)%,P0.01]。结论特异性抑制Notch2信号通路,且抑制MEK/ERK通路可进一步增强抑制Notch2通路的抗肿瘤增殖效果,提示MEK/ERK和Notch2 2条信号通路在胃癌SGC-7901细胞中存在交叉作用。     

骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化中电磁场激活ERK通路的作用

背景:研究表明电磁场可调节骨髓间充质干细胞的增殖和分化,但其具体机制尚不清楚.目的:从ERK信号途径探讨电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨的作用.方法:取第3代生长良好的大鼠骨髓间充质干细胞,暴磁组给予15 Hz、1 mT的正弦波电磁场刺激,PD98059+暴磁组在电磁场刺激前给予20 μmol/L ERK阻断剂PD98059,PD98059组仅给PD98059不进行电磁场刺激,对照组正常培养.电磁场刺激后,收集各组细胞,Western blot法检测ERK通路的活性,MTT法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性.结果与结论:电磁场刺激后,细胞ERK1/2磷酸化水平、细胞的增殖活性、及碱性磷酸酶活性均明显升高(P < 0.01);PD98059可明显抑制ERK1/2磷酸化水平及细胞增殖活性的升高(P < 0.01),而在一定程度上提高细胞的碱性磷酸酶活性(P < 0.01).说明电磁场刺激可通过激活骨髓间充质干细胞ERK信号通路,并且主要通过该途径促进骨髓间充质干细胞的增殖;而在脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞分化成骨的过程中,激活ERK信号通路所起的作用较小.     

脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成

本研究探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明：BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子（VEGF）相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论：BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

哇巴因诱导白血病细胞增殖的信号通路研究

本研究通过检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂联用对多种白血病细胞株生长的影响,探讨哇巴因诱导白血病细胞增殖及凋亡的信号传导途径。采用MTT法检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂对多种白血病细胞株存活率的影响,用RT-PCR与Western blot检测白血病细胞株钠钾ATP酶α1亚单位表达水平的变化。结果显示：在低浓度的哇巴因（10nmol/L）作用下,Jhhan和M07e细胞株存活率均呈上升趋势,细胞株中钠钾ATP酶α1亚单位表达升高,PP2、PD98059能不同程度地抑制哇巴因对白血病细胞株的促增殖作用。结论：钠钾ATP酶具有重要的信号传导功能,它能通过特异性结合哇巴因激活多种信号通路调节白血病细胞的生长。哇巴因对白血病细胞的促增殖效应与Src激酶、ERK1／2等信号通路活化有关。     

丝裂原激活蛋白激酶信号转导系统对维甲酸诱导NB4细胞分化的影响

本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制。采用MTT法测定细胞增殖活性，用流式细胞术分析细胞周期，NBT还原实验检测粒系分化，底物磷酸化法测定细胞外调节激酶（ERK）活性。结果显示：0．01—0．1μmol／L的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖，并诱导NB4细胞向粒系分化；在这过程中ATRA激活ERK活性，ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用。p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用。结论：ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径，并且对该途径有依赖作用。     

脑室周围白质软化症的体外模型中磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响

目的观察体外构建脑室周围白纸软化症（Periventricular leukomalacia,PVL）模型的发病过程中磷酸化细胞外信号调节激酶（phosphorylated extracellular signal regulated kinase,p-ERK）的表达变化及应用ERK通路抑制剂PD98059后对其表达的影响,以探讨ERK通路是否参与PVL的发病过程。方法共分为三种干预方法：给予CG4细胞糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）6,12,24hr,以构建PVL体外模型,检测p-ERK蛋白表达变化;给予CG4细胞OGD6,12,24hr后诱导分化3davs,以构建PVL后分化发育的体外模型,检测p-ERK蛋白表达变化;PD98059干预后给予OGD12,24hr,检测p-ERK表达的变化。以上蛋白检测均采用蛋白免疫印迹方法。结果与对应时间点的正常对照组比较,OGD实验组p-ERK在OGD6,12,24hr后均出现明显的下降（P〈0．01）;OGD后诱导分化3days实验组,p-ERK在OGD6hr后诱导分化先出现暂时性的表达升高,随后在12和24hr时间点,p-ERK表达均出现明显的下降（P〈0．01）;应用PD98059后OGD12,24hr实验组,p-ERK反而出现明显的升高（P〈0．01）。结论在构建的PVL和随后的分化发育的体外疾病模型中,ERK信号转导通路参与其中。此外,PD98059作为ERK通路的抑制剂在OGD过程中反而起到激活的作用。     

VEGF通过细胞外信号调节激酶途径促进骨髓源间充质干细胞的增殖

本研究旨在探索血管内皮生长因子(VEGF)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响及其可能的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以培养的第3代MSC(P3MSC)为实验材料,采用MTT法分析20ng/ml的VEGF作用12、36、72小时对MSC增殖的影响;随后以细胞外信号调节激酶(ERK1/2)阻断剂50μmol/L PD98059或丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂30μmol/L SB203580等分别处理P3MSC,观察VEGF是否通过p38MAPK或ERK1/2途径影响MSC的增殖。结果表明:培养的P3MSC表达PDGFR-α、PDGFR-β和NRP1,不表达VEGF-R(Flk1和Flt1)。P3MSC呈现CD90(96.7%)和CD29(94.6%)强阳性以及CD34(0.79%)和CD45(0.84%)阴性特征,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;20ng/ml VEGF作用于MSC后,随着时间的延长,MSC增殖也逐渐增强,在72小时达峰值。在50μmol/L PD98059或30μmol/L SB203580处理后,VEGF所介导的MSC增殖效应被阻断,且在对照水平以下。PD98059阻断效应明显强于SB203580的阻断效应。结论:VEGF可能主要通过细胞外信号调节激酶途径调节MSC的增殖。     

Mechanical compression of articular cartilage induces chondrocyte proliferation and inhibits proteoglycan synthesis by activation of the ERK pathway: implications for tissue engineering and regenerative medicine

Articular cartilage is recalcitrant to endogenous repair and regeneration and is thus a focus of tissue engineering and regenerative medicine strategies. A prerequisite for articular cartilage tissue engineering is an understanding of the signal transduction pathways involved in mechanical compression during trauma or disease. We sought to explore the role of the extracellular signal‐regulated kinase 1/2 (ERK 1/2) pathway in chondrocyte proliferation and proteoglycan synthesis following acute mechanical compression. Bovine articular cartilage explants were cultured with and without the ERK 1/2 pathway inhibitor PD98059. Cartilage explants were statically loaded to 40% strain at a strain rate of 1/s for 5 s. Control explants were cultured under similar conditions but were not loaded. There were four experimental groups: (a) no load, without inhibitor; (b) no load, with the inhibitor PD98059; (c) loaded, without the inhibitor; and (d) loaded, with the inhibitor PD98059. The explants were cultured for varying durations from 5 min to 5 days and were then analysed by biochemical and immunohistochemical methods. Mechanical compression induced phosphorylation of ERK 1/2, and this was attenuated with the ERK 1/2 pathway inhibitor PD98059 in a dose‐dependent manner. Chondrocyte proliferation was increased by mechanical compression. This effect was blocked by the inhibitor of the ERK 1/2 pathway. Mechanical compression also led to a decrease in proteoglycan synthesis that was reversed with inhibitor PD98059. In conclusion, the ERK 1/2 pathway is involved in the proliferative and biosynthetic response of chondrocytes following acute static mechanical compression. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

低氧模拟剂氯化钴对人单核细胞白血病细胞株SHI-1化疗敏感性的影响

【目的】研究氯化钴（CobaltChloride,CoCl2）模拟的化学性低氧是否能增强人单核细胞白血病细胞株SHI—l细胞对依托泊苷（VP-16）的敏感性,并探讨及其分子机制。【方法】在培养基中加入低氧模拟剂CoCl2（终浓度为100umol／L）模拟化学性低氧环境（低氧组）,并用正常培养基作对照（对照组）。分别在对照组和低氧组中加入不同浓度的VFL16（0．5,1．0,2．0μg／mL）,即VP16组和低氧＋VP-16组。检测各组的细胞的增殖抑制率（四甲基偶氮唑盐法）,细胞凋亡率（流式细胞术）,FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcl-2及Pax基因mRNA表达（实时定量PCR方法）。【结果】①低氧组SHF-1细胞增殖受到抑制,并随作用时间延长而逐渐增强。②低氧模拟剂CoCl2也可在一定程度上诱导SHI-1细胞凋亡,并对VP-16诱导的SHI-1细胞凋亡有促进作用（P〈0．05）。③低氧模拟剂CoCl2可以增强FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcb2及Pax基因mRNA表达（P〈0．05）,且Bax／Bcl-2比值升高更为明显。CoCl2并不能使VP-16作用24h后SHF1细胞内FAK、AKT和Beg2基因mRNA表达发生明显变化,但可以使ERK、HIF-1α和PaxmRNA表达量增加（P〈0．05）,且Pax／Bcl-2比值升高。【结论】CoCl2模拟化学性低氧对SHI-1细胞生物学活性有一定的抑制作用并能增强其对VP-16的化疗敏感性,其分子机制可能涉及ERK介导的信号通路对HIF_1a表达的调控作用,以及HIF-1α介导的信号传导通路对Pax和Bcl-2基因表达的不均衡调控。     

ERK1/2信号传导通路介导碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达

背景：碱性成纤维细胞生长因子在各种白内障形成中都起着重要的作用,可促进晶状体上皮细胞的增殖并化生为纤维细胞,但其信号通路尚不清楚。目的：探讨ERK1/2信号转导通路在碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞环氧合酶2表达中的作用。方法：使用10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子干预培养的人晶状体上皮细胞0,1,3,6,12,24h,RT-PCR检测刺激不同时间人晶状体上皮细胞环氧合酶2mRNA的表达,Western blot检测细胞中环氧合酶2及磷酸化ERK1/2的表达。在阻断实验中应用特异性ERK1/2的阻断剂PD98059阻断ERK信号转导通路1h,再用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞6h,Western blot检测细胞中环氧合酶2的表达。结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子刺激后的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2mRNA及其蛋白的表达显著增加（P〈0.01）,同时碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞磷酸化ERK1/2活性增强,表达水平随作用时间而增加,30min时达到最高峰（P〈0.01）,6h后恢复至基线水平;PD98059可抑制人晶状体上皮细胞环氧合酶2的表达（P〈0.01）。说明ERK1/2信号转导通路参与了碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达,在后发性白内障的形成过程中起着重要作用。     

ERKl／2信号通路在高糖诱导的HK-2上皮间质转分化中的作用

目的：观察高糖诱导的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路活化在上皮间质转分化中的作用,从而探讨延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养HK-2细胞,随机分为正常对照组、高糖组、ERK1/2通路抑制剂PD98059＋高糖组和高渗组,处理72 h后收集细胞,应用免疫细胞化学方法检测α-SMA、CK18的表达;应用Western blot法检测磷酸化ERK1/2、总ERK1/2表达水平的变化。结果（1）正常对照组胞质有大量CK18蛋白阳性表达,而α-SMA蛋白表达呈阴性;高糖组胞质中可见大量α-SMA蛋白强阳性染色,而CK18蛋白呈阴性表达;经PD98059处理后,CK18表达较高糖组染色深,而α-SMA表达较高糖组染色浅;高渗组胞质中CK18呈阳性表达,α-SMA表达呈阴性。（2）正常对照组可见少量总ERK1/2表达,p-ERK1/2蛋白仅有微量表达;经高糖刺激48 h后,总ERK1/2表达较正常对照组无明显差异,p-ERK1/2蛋白表达明显增加（P＜0.05）;而使用PD98059处理后,总ERK1/2的变化不大,但p-ERK1/2蛋白的表达却显著降低（P＜0.05）;高渗组与正常对照组无显著差异。结论 ERK1/2信号通路可能参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化过程,阻断 ERKl/2可部分抑制人近端肾小管上皮细胞的转分化,进而延缓肾小管间质纤维化的发生和发展。     

Interleukin 1beta-induced production of H2O2 contributes to reduced sigmoid colonic circular smooth muscle contractility in ulcerative colitis

We have shown that neurokinin A-induced contraction of human sigmoid circular muscle (HSCM) is reduced in patients with ulcerative colitis and that interleukin (IL)-1beta may play a role in this change. We now examine changes in the signal transduction pathway mediating neurokinin A-induced contraction of HSCM and explore the role of IL-1beta and of H(2)O(2) in these changes. In Fura 2-AM-loaded ulcerative colitis HSCM cells, neurokinin A- and caffeine-induced peak Ca(2+) increase and cell shortening were significantly reduced. In normal cells, neurokinin A-induced contraction was decreased by protein kinase C inhibitor chelerythrine and by calmodulin inhibitor CGS9343B [1,3-dihydro-1-[1-[(4-methyl-4H,6H-pyrrolo[1,2-a][4,1]-benzoxazepin-4-yl)methyl]-4-piperidinyl]-2H-benzimidazol-2-one (1:1) maleate]. In ulcerative colitis muscle cells, contraction was inhibited only by chelerythrine but not by CGS9343B. IL-1beta treatment of normal HSCM strips and cells reproduced the changes observed in ulcerative colitis. IL-1beta-induced reduction in caffeine-induced peak Ca(2+) increase and contraction was reversed by catalase, suggesting a role of H(2)O(2). IL-1beta-induced H(2)O(2) production was inhibited by mitogen-activated protein kinase (MAPK) kinase inhibitor PD98059 (2'-amino-3'-methoxyflavone) and by cytosolic phospholipase A2 (cPLA(2)) inhibitor AACOCF3 (arachidonyltrifluoromethyl ketone), but neither by p38 MAPK inhibitor SB203580 [4-(4-fluorophenyl)-2-(4-methylsulfinylphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole] nor by nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) inhibitory peptide NF-kappaB SN50 (H-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Val-Gln-Arg-Lys-Arg-Gln-Lys-Leu-Met-Pro-OH). IL-1beta significantly increased the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1 (ERK1)/ERK2 MAPKs and cPLA(2) and IL-1beta-induced cPLA(2) phosphorylation was blocked by PD98059. We conclude that Ca(2+) stores of HSCM cells may be reduced in ulcerative colitis and that the signal transduction pathway of neurokinin A-induced contraction switches from calmodulin- and protein kinase C-dependent in normal cells to protein kinase C-dependent in ulcerative colitis cells. IL-1beta reproduces these changes, possibly by production of H(2)O(2) via sequential activation of MAPKs (ERK1/ERK2) and cPLA(2).     

MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎的影响

目的： MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎（AP）病程及相关炎症因子的影响。方法72只雄性KM小鼠被随机分为4大组,每大组再根据时间段的不同再分3小组,每小组6只小鼠,即（1）雨蛙肽＋10%二甲基亚砜（DMSO）（AP 组）6 h、12 h、18 h 组,（2）雨蛙肽＋PD98059（干预组）6 h、12 h、18 h 组,（3）NS＋PD98059（对照一组）6 h、12 h、18 h 组,（4）NS＋10%DMSO（对照二组）6 h、12 h、18 h组。雨蛙肽以100μg/kg体重给予小鼠腹腔内注射诱导AP模型,1次/h,共6次。需注射PD98059的两大组在AP诱导前30 min与诱导后1 h将 PD9805910 mg/kg体重溶解于10%的DMSO （1 mg/ml）中,然后进行腹腔注射。作为对照的两大组则腹腔内注射相应剂量的生理盐水以代替雨蛙肽或10%DMSO以代替PD98059。检测各6 h组血清淀粉酶,整个胰腺组织湿干比,各12 h组胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）浓度,采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰腺组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-l） mRNA的表达和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清可溶性ICAM-l （sICAM-1）,肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度,并观察各18 h组胰腺组织的病理学改变。结果在PD98059干预的6 h组,其淀粉酶浓度及湿干比均明显低于AP组[（19783±263）U/L vs.（10919±547）U/L,8.702±0.445 vs.6.800±0.600,P＜0.05];在PD98059干预的12 h组,MPO吸光度值及血清sICAM-1与血清TNF-α水平均低于AP组[（0.171±0.014） U/g vs.（0.040±0.009）U/g,（212.85±22.03）pg/ml vs.（169.31±15.16）pg/ml,（70.9±7.8）pg/ml vs.（50.8±9.8） pg/ml,P＜0.05],ICAM-1 mRNA 也较AP组要低很多（0.42±0.04 vs.0.22±0.03,P＜0.05）;在PD98059干预的18 h组,其病理组织学评分经过Kruskal-Wallis秩和检验检测后,其H值＝18.120,P＜0.05,表明AP 组小鼠病理改变最大,PD98059的干预可减轻炎症程度。各项数据表明 PD98059的干预并不能使胰腺炎病程降到正常。结论 MAPK通路抑制剂PD98059能在一定程度上改善雨蛙肽诱导的小鼠AP,其保护机制可能与抑制部分MAPK信号通路及下调黏附分子的表达有关。