Cx43在神经管畸形发生中神经上皮的表达及意义

目的观察缝隙连接蛋白43(Connexin43, Cx43)在神经管畸形(neural tube defects, NTDs)发生中神经上皮的表达,以探讨Cx43与NTDs发生的关系。方法用过量RA建立小鼠胚胎NTDs模型。用SABC免疫组化方法和图像处理系统,分析比较实验组和对照组神经管发育情况以及Cx43蛋白表达的位置和强度。结果对照组神经管发育良好并适时闭合,实验组神经管发育不良而且不能闭合,脑泡不能发育;Cx43蛋白表达于神经上皮细胞的细胞膜和细胞质内,而且实验组明显高于对照组（P＜0.05）;Cx43蛋白的表达表现出时间的差异性。结论Cx43蛋白定位于神经管上皮细胞的胞膜和胞质内,且有时间差异性。Cx43蛋白的过高表达可能与RA致NTDs密切相关。     

Cx26在神经管周围间充质细胞的表达及意义

目的观察Cx26在神经管畸形发生中神经管周围间充质的表达,以探讨Cx26与NTDs发生的关系。方法用过量RA建立小鼠胚胎NTDs模型。用SABC免疫组化方法和图像处理系统,分析比较实验组和对照组神经管发育情况以及Cx26蛋白表达的位置和强度。结果Cx26蛋白表达于神经上皮细胞的细胞膜和细胞质内,而且实验组显著高于对照组(P<0.05);Cx26蛋白从E8 d到E11 d表达逐渐增多,E11 d达到高峰,然后逐渐下降。结论Cx26蛋白定位于神经管上皮细胞的胞膜和胞质内,其表达有一定的规律性。Cx26蛋白的过高表达可能与RA致NTDs密切相关。     

β-catenin在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

目的探讨高温致神经管畸形（neural tube defects,NTDs）的分子机制。方法在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后16、40、64 h（相当于胚龄第8.5、9.5、10.5 d）处死孕鼠,剖腹取鼠胚,应用免疫组织化学染色技术和Western-blot法检测NTDs发生过程中β-catenin在神经上皮细胞中的表达变化。结果免疫组化结果显示：β-catenin在各个时间点实验组和对照组的神经上皮细胞以及周围间充质细胞都有表达,高温处理后16 h和40 hβ-catenin与对照组相比表达减弱（P〈0.05）。Western-blot结果显示：高温处理后16和40 h,β-catenin在实验组神经上皮细胞内的表达均比对照组明显减弱;高温处理64 h,实验组与对照组表达无明显差异。结论β-catenin的表达变化与神经管的发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。     

Bcl-2、Bax在高温致神经管畸形发生中的表达

目的：探讨高温致畸中细胞凋亡的发生及其与bcl-2、bax基因表达的关系,进一步揭示高温致畸的机理。方法：在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上,用原位末端标记方法,观察神经管畸形发生过程中细胞凋亡的组织学改变,用免疫组织化学法对各期实验组和对照组鼠胚的神经上皮和周围间充质的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达进行了定性、定位和半定量观察。结果：①高温后8h鼠胚神经上皮和周围间充质的细胞凋亡迅速增加。至高温后16h达到高峰;②bel-2和bax蛋白正常分布于金黄地鼠胚胎的神经上皮和周围间充质中。高温后4h,实验组胚胎的神经上皮细胞的bcl-2、bax发生一过性表达增加,随后bcl-2均不同程度地低于对照组,bax则高于相应的对照组。结论：高温能干扰bcl-2和bax的表达,诱发神经上皮的凋亡,导致神经管畸形的发生。     

RAGE在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化

目的 在已建立高温致金黄地鼠神经管畸形(NTDs)模型的基础上,观察晚期糖基化终产物受体(RAGE)在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化,研究RAGE在高温致金黄地鼠NTDs发生过程中的作用,进一步探讨高温致NTDs作用的分子机制.方法 将孕鼠随机分为实验组和对照组,实验组孕鼠于妊娠第8天16～17时置42℃水浴持续20min,对照组于妊娠第8天16～17时置37℃水浴持续20min.分别于高温后8,16,24,40,64h(相当于胚龄第8,8.5,9,9.5,10.5天)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术方法检测RAGE在NTDs发生中神经上皮细胞的表达变化规律.结果 水浴处理后8,16,24,40h,实验组与对照组RAGE免疫荧光染色弥散分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞膜上;水浴处理后64h,实验组与对照组均未检测到RAGE阳性表达.8,16,24,40h,实验组与对照组相比,胚胎神经上皮细胞的RAGE阳性表达减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RAGE在高温致NTDs过程中表达降低,是高温致NTDs发生的重要途径之一.     

牡蛎提取物对高温致神经管畸形中凋亡细胞的保护作用

目的：探讨牡蛎提取物对高温致神经管畸形中凋亡细胞的保护作用。方法：取36只金黄地鼠孕鼠,随机分为4组：高温对照组和牡蛎保护Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,用核固红-结晶紫染色方法,观察各组鼠胚的神经上皮和周围间充质细胞的凋亡状况。用免疫组织化学法和图像分析技术对各组鼠胚的神经上皮和周围间充质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达进行定性、定位和半定量观察。结果：①高温后8h、16h,对照组鼠胚神经上皮和周围间充质细胞凋亡数较多,牡蛎保护组细胞凋亡数明显减少(P<0.05, P<0.01);②高温后8h、16h,对照组鼠胚神经上皮和周围间充质内可见Caspase-3阳性表达细胞,牡蛎保护组的相应部位Caspase-3呈弱阳性或阴性表达(P<0.05)。结论：牡蛎提取物对高温致神经管畸形中神经上皮及周围间充质的凋亡细胞具有一定的保护作用。     

层粘连蛋白及生长抑素在高温致神经管畸形发生中的作用

目的：探讨高温致畸中细胞凋亡的发生与层粘连蛋白（LN）及生长抑素（SS）的相关性，研究高温致畸的机理。方法：在高温致神经管畸形的动物模型上,用原位末端标记方法对畸形发生过程中细胞凋亡的时空分布进行定量分析,并用免疫组织化学方法，对各期鼠胚神经上皮和周围间充质的LN和SS表达进行定性、定位和相对定量分析。结果：LN主要位于神经上皮的基底膜,与神经管形成过程中的细胞凋亡呈负相关关系；SS位于神经上皮和周围间充质细胞的胞质内，其含量与神经管形成过程中的细胞凋亡呈明显正相关关系。高温后8～24 h胚胎神经上皮基膜LN含量明显低于对照组。高温后各期胚胎神经上皮和周围间充质细胞SS的含量均不同程度地高于对照组。结论：高温可促进胚胎SS的表达、短暂抑制LN的合成,从而诱导神经上皮和周围间充质细胞凋亡的发生，引起神经管畸形。     

c-myc 和p53基因与高温致神经管畸形中细胞凋亡发生的相关关系的研究

目的：探讨c-myc和p53基因与高温致神经管畸形中细胞凋亡发生的相关关系。方法：在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上，采用原位杂交和原位PCR技术，观察c—myc和p53 mRNA在各期实验组和对照组胚胎神经上皮和周围问充质中的分布和含量。结果：正常胚胎神经上皮和周围间充质细胞内c-myc基因随着神经管的发育其转录逐渐增加，于C16组和C24组达到高峰，以后各组c-myc基因转录减少。这与神经管形成过程中的细胞增殖规律相吻合。而p53的基因表达与神经管形成过程中的细胞凋亡规律基本一致。高温后c-myc和p53基因的转录均明显增加。结论：高温致神经管畸形中细胞凋亡的发生与c—myc和p53基因的过度表达密切相关。     

Connexin 43在超排卵后子宫内膜中的表达及意义

目的观察Connexin43(Cx43)在超排卵后子宫内膜中的表达,探讨Cx43与子宫内膜容受性降低的关系,为进一步提高IVF-ET的临床妊娠率提供实验依据。方法建立超排卵小鼠模型,用SABC免疫组化方法和图像处理技术,分析比较实验组和对照组子宫内膜发育情况以及Cx43蛋白表达的位置和强度。结果Cx43蛋白主要表达于子宫内膜腺上皮细胞,定位于细胞膜和细胞浆中,Cx43的表达有如下规律:①3个实验组用药后24 h、48 h Cx43的表达明显高于对照组(P<0.05);②实验Ⅱ、Ⅲ组Cx43的表达明显低于实验Ⅰ组(P<0.05);实验Ⅲ组与实验Ⅱ组Cx43的表达无明显差别(P>0.05);③在动情周期中Cx43的表达有明显时间差异(P<0.05)。结论Cx43蛋白定位于子宫内膜腺上皮细胞的胞膜和胞质内,且在动情周期中有时间差异性。Cx43蛋白的过高表达可能与超排卵后子宫内膜容受性降低密切相关。     

氯乙烯诱导小鼠胚胎神经管发育畸形的研究

目的观察孕早期不同剂量氯乙烯(VC)染毒后胎鼠神经系统发育以及神经上皮细胞增殖和凋亡的变化情况,明确VC对神经系统发育的致畸作用。方法将孕鼠21只按完全随机设计分组法分为实验组和对照组,实验组分别用不同剂量的VC对孕6.5 d的小鼠进行腹腔染毒,对照组注射花生油,均于E12.5取胚胎。观察胎鼠的表观发育情况,计算胚胎畸形率以及神经系统异常的发生率。运用PCNA免疫组织化学技术和TUNEL染色技术检测并观察神经管上皮细胞的增殖及其凋亡的变化。结果①中剂量VC组胎鼠活胎率下降,活胎中畸胎发生率高达51%,其中神经管畸形发生率占40%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量VC组胎鼠活胎率仅占55%,活胎中畸胎率明显增高占71%,其中神经管畸形发生率占50%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。②中剂量和高剂量VC组胚胎神经管上皮厚薄不一致;高剂量组神经管多数呈明显未闭合状,神经管周围的间充质细胞肿胀,轮廓不清。③正常小鼠神经管神经上皮内可见PCNA阳性细胞与TUNEL阳性细胞分布;实验组各型阳性细胞分布与对照组相似,但随着染毒剂量的增加,PCNA阳性细胞表达减少,而TUNEL阳性细...     

高血糖致畸小鼠胚胎Pax3与Cx43基因的表达及定量研究

目的　探讨高血糖是否是糖尿病致畸的原因及其致畸机理。方法　采用皮下注射高渗糖的途径制成高血糖小鼠模型 ,并设立敌枯双实验组和空白、5 %葡萄糖及敌枯双对照组 ,通过逆转录聚合酶链反应及免疫组化的方法检测各组小鼠胚胎体中Pax3及Cx4 3基因的mRNA及蛋白的表达。结果　皮下注射高渗糖可致孕小鼠高血糖 (13 4mmol/L± 0 8mmol/L) ,其明显高于空白和 5 %葡萄糖对照组 (两者分别为 4 9mmol/L± 0 4mmol/L及 4 8mmol/L± 0 4mmol/L) ;高糖组吸收胎、死胎及畸胎发生率均显著高于两对照组 (P <0 0 1) ,胎重明显低于两对照组 ;高糖组Pax3的表达明显低于两对照组 (P <0 0 1) ,而Cx4 3的表达则明显高于两对照组 (P <0 0 1)。敌枯双组Pax3的表达无明显改变 ,Cx4 3的表达则明显高于两对照组 (P <0 0 1)。结论　高血糖是糖尿病致畸的主要原因 ;高血糖可通过诱导Pax3基因突变 ,使其蛋白表达下降 ,进而使Cx4 3基因及其蛋白过表达而致畸。     

牛磺酸对神经管畸形小鼠Caspase-3、Caspase-8表达的影响

目的探讨维甲酸（RA）致神经管畸形（NTDs）中牛磺酸对神经细胞凋亡的影响。方法建立NTDs模型并给予牛磺酸拮抗,观察神经细胞中Caspase-3、Caspase-8表达的变化。结果各组Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达在E11d达高峰,以后逐渐下降。RA组神经上皮细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。各组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E10d达到高峰,以后逐渐下降。RA组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论牛磺酸可以拮抗RA引起的神经上皮细胞过度凋亡,其机理可能是通过下调Caspase-3、Caspase-8的表达实现的。     

乌鲁木齐市孕期妇女叶酸及神经管畸形认知现况调查

目的了解乌鲁木齐市孕期妇女叶酸及神经管畸形相关知识的知晓率及其影响因素,为更好地完成卫生部部署的叶酸项目推广工作提供依据。方法采用自行编制问卷对乌鲁木齐市人民医院、乌鲁木齐市妇幼保健院、新疆医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的300名孕期妇女进行调查,了解乌鲁木齐市孕期妇女对叶酸及神经管畸形相关知识的了解情况。结果叶酸知识的平均知晓率为60.18%,神经管畸形知识平均知晓率为39.74%;其中叶酸正确服用量及正确服用时间知晓率较低,分别为47.7%和46.3%;神经管畸形发生时间知晓率为36.7%,叶酸能够预防神经管畸形的知晓率仅为47.3%。不同年龄、民族、教育程度,家庭经济情况孕妇叶酸知识知晓情况差异有统计学意义(P<0.05)。不同民族、教育程度孕妇对神经管畸形知晓率差别有统计学意义(P<0.05)。结论叶酸预防神经管畸形知识的平均知晓率在乌鲁木齐的目标人群中很低,对少数民族、低文化程度及年龄较低孕妇人群有必要加大叶酸预防神经管畸形知识的宣传力度。     

MTHFR基因多态与神经管缺陷的关系

目的：探讨中国东北地区正常汉族人群中神经管缺陷（NTD）家庭中的亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因677C→T多态的分布,以证明其是否为NTD发生的危险因素。方法：采用PCR-RFLP技术研究了29个正常家庭58名父母及28个NTD家庭55名父母中MTHFR677C→T多态情况。结果：①正常组中等位基因频率为V：0.491;NTD组中等位基因频率为V：0.636。②正常组中VV基因型占19.0%,NTD组中VV基因型占30.6%,统计结果χ^2=3.46,P＜0.01,即VV基因型在正常组和NTD组间有一定的显著性差异。结论：MTHFR677C→T多态很可能是NTD的一个危险因素。     

预先服用灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形发生率

目的探讨预先服用灵芝孢子能否降低维甲酸诱导的胚胎神经管畸形的发生率。方法将胚胎(embryo,E)0d孕鼠随机分为正常对照组、溶剂组、模型组和灵芝孢子组,每组5只。灵芝孢子组孕鼠于E0d起即给予胃饲灵芝孢子溶液,溶剂组孕鼠胃饲等量溶剂。至E7.75d时,模型组和灵芝孢子组孕鼠一次性胃饲全反式维甲酸。E10.5d时取孕鼠胚胎,计算神经管畸形发生率及测量胚胎顶臀距。采用免疫荧光组织化学染色和流式细胞术检测胚胎神经管神经上皮细胞巢蛋白的表达及细胞周期分布,采用DNA定量荧光染色及RT-PCR技术检测胚胎神经管细胞周期素依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependentkinase2,Cdk2)和Cdk4mRNA的转录水平。结果孕鼠胚胎神经管畸形发生率模型组为79.41%,灵芝孢子组为21.67%;顶臀距模型组为(3.62±1.27)mm,灵芝孢子组为(5.84±0.92)mm。胚胎神经管神经上皮细胞巢蛋白表达阳性率模型组为32.44%,灵芝孢子组为77.65%。模型组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞G0/G1期比例为82.80%,灵芝孢子组为53.74%。灵芝孢子组Cdk4mRNA转录水平高于正常对照组和溶剂组,但未检测到Cdk2mRNA。结论预先服用灵芝孢子能够降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生率。     

Interaction between maternal 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase C677T and methionine synthase A2756G gene variants to increase the risk of fetal neural tube defects in a Shanxi Han population

Background  The 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and methionine synthase (MS) are attractive candidates for screening for risk of neural tube defects (NTDs). The aim of the current study was to investigate maternal MTHFR and MS polymorphisms and the interaction between them and their influence on children with NTDs in the Shanxi Province of northern China.     

Methods  Fifty-one mothers who previously had children with NTDs constituted the case group and 51 age-matched mothers with children that were unaffected by any birth defects constituted the control group. All subjects were genotyped for MTHFR C677T and MS A2756G polymorphisms. SPSS 11.5 software package was used for all analyses.

Results  There was a significant difference for MTHFR genotype distribution for one site (C677T) between the case and control groups. The T allele frequencies were significantly higher in the case group than in the control group (55.9% vs. 35.3%, P <0.05). A lack of association was observed for the MS A2756G polymorphism. There was an interaction between the maternal MTHFR C677T genotype and MS A2756G genotype.

Conclusion  Genetic interaction between MTHFR and MS genes raises the probability of neural tube defects.

     

高温致神经管畸形中bcl-2和bax变化的动物实验研究

目的 探讨高温致神经管畸形的分子机制。方法 在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上，利用免疫组织化学法(SABC法)染色，观察神经管畸形发生过程中凋亡相关基因bcl—2和bax在神经上皮细胞中的表达变化。结果 高温后8h开始，实验组鼠胚神经上皮细胞bcl—2的表达均不同程度低于对照组，尤以高温后16h差异最为显著，24h后实验组与对照组相比bcl—2的表达差异无显著性。高温后8h，16h，实验组鼠胚神经上皮细胞bax的表达均明显高于对照组，24h后实验组与对照组相比bax的表达差异无显著性。结论 高温抑制bcl—2的表达，促进bax的表达，诱发神经上皮细胞的凋亡，是导致神经管畸形发生的机制之一。