联合应用粉防已碱与甘草酸抗肝纤维化分子生物学机制研究

目的：探讨联合应用粉防已碱（tetrandrine,Tet）与甘草酸（glycyrrhizinic acid,Glz）抗肝纤维化的分子生物学机制。方法：采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型，同时给予不同剂量（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg体重)Tet、（50mg/kg体重）Glz及二者联合灌胃或腹腔注射，用RT－PCR法检测肝组织I型、Ⅲ型前胶原、c-fos及c-jun mRNA表达。结果：（10mg/kg、20mg/kg体重）Tet和Glz单独应用能够不同程度抑制肝纤维化大鼠肝组织I型、Ⅲ型前胶原、c-fos及c-jun mRNA表达，两种药物联合应用效果更为显著。结论：联合应用Tet与Glz能够更有效地在转录及其上游水平抑制肝脏胶原合成。     

激活素A对人肝星状细胞系LI 90细胞增殖的影响

目的：检测激活素（ACT）A对肝星状细胞（HSC）系LI90细胞增殖的影响。方法：采用基因重组人ACT A（0．025－250ng/ml）、转化生长因子－β1（TGF－β1）、镦泡抑素（FS）处理体外培养的人HSC系LI90，采用四唑盐比色法（MTT法）检测其对细胞增殖的影响。结果：ACT A浓度在0.025-250ng/ml范围内，均可刺激LI90细胞增殖，0.025-25ng/ml浓度范围内的ACT A作用轻微，而250ng/ml的ACT A作用明显增强（P＜0．01）；相反，TGF－β1（2．5ng/ml）对LI90细胞增殖无明显影响；0．315ng/ml FS与浓度为0.25ng/ml的ACT A共同孵育可阻断ACT A促进LI90增殖的活性（P＜0．05），而0．315ng/ml FS单独作用对LI 90细胞生长明显影响。结论：ACT可促进HSC增殖，在肝纤维化发病机制中发挥重要作用。     

血脂康对培养的家兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨调脂中经血脂康对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：在培养的家兔主动脉VSMC中加入不同浓度的血脂康共同孵育24h,分别采用细胞计数及^3H－胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入实验观察血脂康对VSMC增殖及MDA合成的影响。结果：血脂康明显抑制VSMC增殖（P＜0．05）和DNA合成（P＜0．01）。结论：血脂康既具有降低血脂作用,又可能通过抑制VSMC增殖而防止动脉粥样硬病变恶化及血管成形术后血管再狭窄等作用。     

阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞增生的信号转导机制

目的：探讨三羟基三甲基戊二酰辅酶A抑制剂阿托伐他汀(atorvastatin）抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的细胞内信号转导机制。方法：培养兔血管平滑肌细胞分组处理，设对照组，阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋羟甲戊酸（MVA）组。以细胞计数，噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力及线粒体脱氢酶（MD）活性。Wstern免疫印记定量蛋白激酶B表达水平，免疫沉淀，特异底物组蛋白H2Bγ^32P掺入量测定PKB活性，结果：阿托伐他汀（1 μmol/L）可显抑制细胞增殖活性，孵育72h后使细胞计数及MD活性分别较对照组减低26．3％，37．6％（均P＜0．01）。此作用可被胆固醇前体MVA完全逆转。阿托伐他汀对PKB蛋白表达无显影响。但是在浓度为0．05－1μm范围内可使PKB活性呈浓度依赖性降低（均P＜0．01）。结论：阿托伐他汀可能通过抑制PKB信号通路显抑制兔VSMC增殖，并且此作用与减少MVA的产生有关。     

醛固酮与螺内酯对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的　探讨醛固酮 (ALD)、螺内酯对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖、胶原合成的影响。方法　大鼠HSC培养 ,在不同浓度的ALD、螺内酯作用下 ,采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)、3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入法及流式细胞技术观察ALD、螺内酯对HSC增殖及胶原合成的影响。结果　ALD在 10 -4mol/L高浓度时3 H TdR、3 H Pro掺入量与对照组相比明显增多 (P <0 .0 5 ) ,螺内酯在浓度高于 10 -6mol/L时 ,HSC3 H TdR、3 H Pro掺入量明显减少 ,螺内酯阻止HSC于G1期 ,ALD +螺内酯组与对照组相比差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　高浓度ALD可以促使HSC增殖 ,其拮抗剂螺内酯明显抑制HSC的增殖及合成胶原。     

硝普钠对大鼠肾组织块细胞增生及蛋白合成的双向性作用以及环鸟核苷酸环化酶特异性抑制剂ODQ对其影响

目的,探讨一氧化氮（NO）对孵育的肾组织块细胞增生和蛋白合成的影响。方法：取正常Wistar大鼠肾组织块40－70mg,置于Krebs-Henseleit溶液中,放入37度恒温并带有摇床（频率100次／分）的孵 箱中孵育2h,孵育液中持续通入混合氧（O2：CO2＝95：5）,细胞增生和蛋白合成分别采用[^3H]－胸腺嘧啶和[^14]－亮氨酸掺入法测定。结果：本研究结果显示,低浓度硝普钠（SNP,0．5umol.L^-1)分别引起[^3H]－胸腺嘧啶和[^14C]－亮氨酸掺入增加（P＜0．01）,而高浓度SNP（50－500umol.L^-1)显著抑制[^3H]－胸腺嘧啶和[^14C]－亮氨酸掺入（P＜0．01）ODQ（1－H－[1,2,4]oxadiazolo[4,3-1]quinoxalin-1-one)可显著防止SNP对[^3H]-胸腺嘧啶和[^14H]－亮氨酸掺入的刺激作用（P＜0．01）,而对高浓度SNP所导致的[^3H]胸腺[嘧啶和－[^14C]－亮氨酸掺入抑制作用无影响。结论：本研究结果提示NO对肾脏细胞增生和蛋白合成有双向性调节作用,其刺激作用可能由cGMP介导。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ刺激人肾成纤维细胞增殖、胶原表达的抑制效应研究

目的：研究大黄素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人肾成纤维细胞（KFB）增殖、胶原表达等的抑制效应。方法：用^H-TdR掺入法，流式细胞仪及免疫组化化学技术观察了AngⅡ1对KFB增殖，细胞周期及I型胶原表达的影响以及大黄素对AngⅡ作用于KFB的保护效应。结果：①AngⅡ10^-10mol/L至10^-6mol/L增加KFB^3H-TdR掺入率，第1、3天呈计量依赖关系（r1=0.709,P＜0．01；r3=0.806,P＜0．01）；不同浓度的大黄素（30－100μg/ml）第1、3和5抑制了AngⅡ10^-6mol/L诱导的KFB^3H-TdR掺入率，呈剂量依赖性特点。②AngⅡ在10^-6mol/L明显促进KFBG1向S期转化（P＜0．01）；大黄素在100μg/ml抑制了KFBG1向S期转化（P＜0．01）。③AngⅡ在10^-6mol/L增加了KFBI型胶原表达（P＜0．05），大黄素明显降低了AngⅡ诱导的I型胶原表达（P＜0．05）。结论：大黄素可抑制AngⅡ诱导的KFB增殖，I型胶原表达，在预防肾间质纤维化可能起重要作用。     

DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC—T6激活、增殖及转分化的影响

目的：观察乙醛对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法：HSC—T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测I型胶原蛋白（TIMPI）、纤维粘连素（FN）的表达;Westernblottin譬检测细咆内效应蛋白0L—SMA的表达。结果：VG染色乙醛束Ij激明显促进HSC贴壁及重叠、明显促进HSC增殖和显著增加胶原纤维蛋白的表达;MTT检测结果发现乙醛刺激明显增强HSC活性（P〈0．05）;ELISA结果表明乙醛刺激组较对照组TIMPI和FN的表达明显上调（P〈0．05）;Western blotting检测结果显示,乙醛刺激明显促进仅一SMA表达（P〈0．05）。结论：乙醛刺激可明显激活HSC～T6细胞株,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。     

环氧合酶-2抑制剂联用姜黄素对肝星状细胞增殖抑制作用的观察

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398与姜黄素联用对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）增殖的影响。方法体外培养肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分别加入终浓度为20μmol／L的NS-398和姜黄素，两药物单独或联合应用与HsC共同培养，以M＇IT法检测NS-398、姜黄素单用或联用24h（n=4）对HSC生长的抑制情况。LDH法检测NS-398、姜黄素对HSC的毒性作用。结果NS-398、姜黄素及联合应用两药对HSC的增殖的抑制率分别为6．0％，20．5％，44．0％，与细胞对照组比较差异有显著性（P〈0．01），联合用药组优于单用药组（P〈0．05）。与对照组比较，各浓度组培养上清液中LDH活力差异无显著性（P〉0．05）。结论NS-398与姜黄素均可以抑制HSC增殖，联合用药的效果明显优于任一药物单用。     

汉防己甲素对血小板衍生生长因子促细胞增殖效应的阻断作用

目的研究血小板衍生生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）对人成纤维细胞（ＨＬＦ）、大鼠肝贮脂细胞（Ｉｔｏ细胞）增殖活性和胶原合成的影响及汉防己甲素（Ｔｅｔ）对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应的阻断作用。方法采用胶原酶灌流、密度梯度离心方法分离大鼠肝Ｉｔｏ细胞，并以Ｈ－ＴｄＲ、Ｈ－Ｌ－脯氨酸掺入法观察细胞增殖效应。结果在１％血清存在下，ＰＤＧＦ对ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞具有显著的促进ＤＮＡ合成和细胞增殖的作用，并随ＰＤＧＦ浓度的升高而作用增强；对无血清培养的ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞并无明显的促进增殖作用，但与胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）等联合应用时，则可促进细胞的增殖，并证实ＰＤＧＦ具有促进ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞胶原合成的作用。Ｔｅｔ在不抑制细胞ＤＮＡ合成的剂量范围内，即可拮抗ＰＤＧＦ的促细胞增殖及胶原合成作用。结论ＰＤＧＦ对肝纤维化相关细胞ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞增殖活性及胶原合成具有促进作用，Ｔｅｔ对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应具有阻断作用。     

肝细胞生长因子对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：研究重组人肝细胞生长因子（rhHGF）对常染色体显性遗传型多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成的影响。方法：用^3H-TdR掺入法测定不同浓度（0．5、1、2．5、5ng/ml)rhHGF作用48h以及最适浓度的rhHGF分别作用24、48、72h ADPKD囊肿衬里上皮细胞系细胞的增殖情况;并分别用^3H-脯氨酸掺入法和放免法测定最适浓度rhHGF作用最佳时间后ADPKD囊肿衬里上皮细胞系细胞胶原及层粘连蛋白的合成情况。结果：rhHGF促进了ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖及胶原和层粘连蛋白的合成,以1ng/ml持续作用48h最为显。结论：rhHGF对体外培养的ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成有明显的促进作用。     

瑞香狼毒水提物小鼠药物血清对小鼠白血病L1210细胞增殖、克隆形成和DNA合成的影响

目的;从整体水平探讨瑞香狼毒水提物（SCLA）的抗癌作用及机制。方法：以不同剂量SCLAig给药后,不同时间采集小鼠血清,处理体外培养的小鼠白血病L1210细胞,观察肿瘤细胞MTT还原,克隆形成能力和DNA合成的改变。结果;SCLA3,6,12g/kg给药1,2,4,8h后的药物血清处理肿瘤细胞后,其MTT还原及克隆形成率均显著降低;给药2h时的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用。SCLA小鼠药物血清也显著抑制[^3H]TdR掺入L1210细胞DNA。结论：直接抑制癌细胞增殖及DNA合成是瑞香狼毒的重要抗癌机制。     

二乙酰二脱水卫矛醇抗脑白血病的作用及机制

目的　研究二乙酰二脱水卫矛醇 (1,2 :5 ,6 -dianhydro - 3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制。方法　用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法和DNA掺入法 ,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L12 10细胞的作用 ,并探讨作用机制。结果　DADAG对DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L12 10细胞有明显的抑制作用 ;对体外白血病L12 10细胞同样有很强的抗增殖作用 ,其IC50 值为 2 4.6mg·L-1。DADAG不可逆地抑制L12 10细胞内DNA的生物合成。结论　DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖及DNA合成密切相关     

重组肝再生增强因子、苦参素和丹参对肝脏星形细胞株IG12的作用

目的 通过观察重组肝再生增强因子(rALR)、苦参素和丹参对大鼠肝脏星形细胞(HSC)株IGl2增殖及细胞外基质合成的影响，以研究其抗肝纤维化的疗效。方法 利用DNA重组、转导、诱导及纯化等一系列方法制备肝再生增强因子重组蛋白，利用胶原酶灌注及密度梯度离心法分离肝星形细胞，用有限稀释法建立大鼠HSC株IG12；于体外观察rALR、苦参素和丹参作用于IG12后IGl2酸性磷酸酶活力及细胞外基质合成的改变。结果 rALR、苦参素和丹参均可显著抑制IGl2的增殖，并选择性地抑制其细胞外基质的合成。结论 rALR、苦参素和丹参均具有抗肝纤维化的作用；IG12对于抗肝纤维化药物的筛选具有很大的价值。     

剔毒护肝方药物血清对大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨剔毒护肝方对大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响。方法：分离正常肝星状细胞，并传代培养；用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞；用^3H-TdR掺入法观察细胞增殖，TUNEL检测细胞凋亡。结果：剔毒护肝方药物血清能显抑制肝星状细胞增殖。并能促进肝星细胞凋亡。结论：剔毒护肝方具有抑制肝星状细胞增殖和促进其凋亡的作用。     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响

目的探讨肾上腺素激动剂（NA）和拮抗剂（PTL）对细胞因子刺激大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法HSC-T6的复苏和传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法（RIA）检测HSC-T6分泌透明质酸（HA）和前胶原的水平（PC）;糖原染色（PAS）用来检测HSC-T6内糖原水平。结果在体外实验中,NA（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能促进PDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能增强细胞内糖原的表达;PTL（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能抑制PDGF-BB诱导的HSC—T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能减弱细胞内糖原的表达。结论NA能促进HSC—T6增殖及基质的分泌,PTL则抑制HSC-T6的增殖及基质的分泌。     

大黄素抑制系膜细胞增生与周期素激酶抑制剂p27的关系

目的:探讨周期素激酶抑制剂p27在大黄素抑制肾系膜细胞(mesangial cell,MC)增生中的作用.方法:蛋白印迹(western 杂交)方法测定MC裂解液p27蛋白水平,3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)测定MC增生的情况,观察不同浓度大黄素(50 mg/L、100 mg/L )对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的MC中p27水平及增生程度的影响. 结果: TNF-α (20万U/L)使无血清培养24 h的MC中p27水平降低,同时使3HTdR掺入增加;大黄素提高TNF-α刺激的 MC中p27水平,同时使3HTdR掺入减少.大黄素的上述作用随剂量的增大而增强. 结论: 大黄素可能通过提高p27水平抑制 TNF-α诱导的MC增生.     

福尔肝6号对肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨福尔肝6号对肝星状细胞增殖影响的抗肝纤维化作用机理。方法：采用血清药理学实验方法作用于活化的大鼠肝星状细胞（HSC）,以^3H-TdR掺入法观察肝星状细胞增殖。结果：福尔肝6号和秋水仙碱药物血清能抑制肝星状细胞增殖,福尔肝6号药物血清组优于秋水仙碱药物血清组。结论：福尔肝6号药物血清能抑制HSC的增殖,从而减少胶原等ECM合成。     

吗啡对C6神经胶质细胞瘤P53及Bcl-2蛋白质水平的影响

目的： 研究吗啡对培养的大鼠胶质细胞瘤C6的增殖抑制作用及其机制。 方法：采用氮蓝四唑（MTT）比色法及³H-TdR掺入法研究吗啡对细胞增殖的作用,采用免疫组化方法研究吗啡对细胞P53及Bcl-2蛋白质水平的影响。 结果：不同浓度吗啡（0.01、0.1、1.0、10和100 mg•L^-1）作用于培养C6细胞24 h后,³H-TdR掺入量以剂量依赖的形式降低,不同浓度组之间及不同浓度组与对照相比较,差异均有显著性（P<0.01）,MTT法测得的细胞增殖抑制率达30%以上。免疫组化结果表明,10 mg•L^-1吗啡作用于培养的C6细胞24 h后,C6细胞的P53及Bcl-2蛋白质水平与对照组相比均减少（P<0.01）。结论：吗啡对胶质细胞瘤C6的增殖具有抑制作用,吗啡使细胞中P53及Bcl-2蛋白质水平均降低。