MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.     

bcl-2基因表达在人卵巢癌多药耐药现象中的作用

为探讨凋亡抑制基因bcl-2的表达在人卵巢癌顺铂耐药现象中的作用,采用DNA电泳,流式细胞仪技术及逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,分别对顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株COC1及耐药株COC1/DDP的细胞凋亡及其bcl-2基因表达进行研究.结果发现①不同浓度顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中均见凋亡梯度,且随顺铂浓度的增加凋亡梯度增大.②不同浓度顺铂作用下流式细胞仪分析结果显示耐药细胞株中凋亡率明显低于敏感细胞株(P＜0.05).③耐药细胞株中bcl-2基因表达明显强于敏感细胞株.在顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中bcl-2基因表达下调.结果表明顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡;凋亡抑制基因bcl-2在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因.     

Bcl-2参与的抗凋亡机制在白血病耐药中的作用

目的:肿瘤多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是目前肿瘤研究的难点及热点领域.本研究以人慢性粒细胞白血病细胞株K562和阿霉素(ADR)耐药细胞株K562/AO2为研究对象,观察两细胞株在ADR作用下Bcl-2的表达水平,借此探讨其参与的抗凋亡机制在白血病多药耐药中的作用.方法:MTT法测定K562和K562/AO2在ADR作用后的细胞活力(A值);DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况;FCM法测定细胞凋亡率、细胞周期及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT法测得ADR作用的K562细胞存活数下降,1.00μmol/LADR作用48h的K562细胞株A值最低,为0.803±0.032.DNA琼脂糖凝胶电泳及FCM法均显示ADR作用的K562细胞株有凋亡发生.FCM的结果表明,ADR作用的K562细胞株Bcl-2的阳性表达率低,1.00μmol/L ADR作用48 h的Bcl-2阳性表达率是(38.67±0.45)%.结论:耐药的主要机制是通过抑制细胞的凋亡途径完成,bcl-2是凋亡的主要调控基因,是一种耐药基因.     

干扰核仁磷酸蛋白对人白血病OCI/AML3细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨抑制核仁磷酸蛋白（nucleophosmin,NPM）１基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将空载慢病毒pGIPZ和NPM干扰慢病毒shNPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用qRT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞及NPM1 A型突变（NPM1-mA）基因和蛋白的表达,流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组凋亡相关蛋白（Bax/Bcl-2）和p-ERK信号分子表达;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路抑制剂（PD98059）处理后OCI/AML3的shNPM组以及Mock和pGIPZ组细胞凋亡率的改变。结果：干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-mA的mRNA水平（F=20.078;P=0.000,PMock vs. shNPM=0.001,PpGIPZ vs. shNPM=0.003,PMock vs. pGIPZ=0.333）和蛋白水平,伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱;干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率 （F=25.236,P=0.000,PMock vs. shNPM=0.001,PpGIPZ vs. shNPM=0.001,PMock vs. pGIPZ=0.729）,同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征。此外,干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和mRNA表达（F=7.649,P=0.000;PMock vs. shNPM=0.015,PpGIPZ vs. shNPM=0.015,PMock vs. pGIPZ=0.984）、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和mRNA表达（F=5.190,P=0.000;PMock vs. shNPM=0.034,PpGIPZ vs. shNPM=0.029,PMock vs. pGIPZ=0.909）;干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达,PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡（F=25.643,P=0.007）。结论：NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用,潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关。     

组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA对急性髓细胞白血病细胞的杀伤作用

目的:观察组蛋白去乙酰化抑制剂suberic bishydroxamate( SBHA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株的杀伤作用.方法:将不同浓度的SBHA分别作用于对数生长期的AML细胞24 h,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡率,Westernblot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变.结果:SBHA能显著抑制AML细胞株U937ˉ、KG-1及Kasumi-1细胞的生长.AnnexinV-PI双标记法及FACS分析结果证实,SBHA能显著诱导白血病细胞的凋亡,激活Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8,下调抗凋亡蛋白Bcl-2及Bcl-xl的表达,下调Survivin、XIAP及cIAP的表达.结论:组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA能显著抑制人AML细胞株的增殖、促进其凋亡,对凋亡相关蛋白的调控是其作用机制之一.     

姜黄素对原代急性髓性白血病细胞凋亡及调控蛋白Mcl—1、Bax、Bak表达的影响

为探讨姜黄素诱导急性髓系白血病（AML）原代细胞凋亡的作用及其机制,采用流式细胞术作细胞周期分析并检测Sub-G1峰值,SABC法检测Bcl-2家族Mcl,Bax和Bak蛋白表达。结果显示姜黄素不影响初治AML原代细胞周期进展,但使Sub-G1峰值升高（P＜0．05）。在初治AML原代细胞,同样处理可下调Mcl-1表达、上调Bax和Bak表达,且结果有显著性差异,提示姜黄素可诱导初治AML患者原代细胞凋亡,Bcl-2基因家族成员参与姜黄素诱导白血病细胞凋亡。     

毫米波辐射对白血病细胞的细胞结构、自由基和bcl-2基因表达的影响

目的 研究毫米波辐射对白血病细胞株的细胞结构、培养体系中的氧化自由基和抗氧化酶系,以及bcl-2基因表达的影响。方法 电镜显微技术研究细胞结构的变化,AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术分析细胞株凋亡和坏死,硫代巴比妥酸（TBA）法和邻苯三酚法测定细胞株培养体系中的脂质过氧化物（LPO）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量变化;流式细胞仪结合荧光标记抗体检测bcl-2基因表达。结果 毫米波辐射使白血病细胞株细胞结构产生显著的退行性变化,显著诱导细胞凋亡和坏死,抑制细胞活力,脂质过氧化物含量上升,SOD含量下降,bcl-2基因的表达显著下降。结论 毫米波辐射有明显的诱导白血病细胞凋亡的效应,其机制与辐射后氧化自由基水平上升、抗氧化酶系活性下降及bcl-2基因的表达下降有关。     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

乳香诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡中对Bcl-2基因调节

研究乳香诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡中对Bcl-2基因蛋白的影响。采用DNA片段百分率及免疫组化法检测30例急性非淋巴细胞白血病细胞及白血病细胞株HL60细胞经100μg/ml乳香处理前、后Bcl-2基因蛋白表达水平。结果：乳香具有诱导急性非淋巴细胞白血病细胞及HL60细胞凋亡^[1]及下调Bcl-2基因蛋白表达水平。结论：乳香具有诱导急性非淋巴细胞白血病细胞及HL60细胞凋亡作用及下调Bcl-2基因蛋白。Bcl-2基因蛋白表达水平下调可能是乳香提取物诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡重要机制之一。     

高三尖杉酯碱联合JQ1对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用

目的探讨高三尖杉酯碱（HHT）联合BRD4抑制剂JQ1对急性髓系白血病（AML）细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用。方法MTS法测HHT、JQ1单药及两药联合对AML细胞株的抑制作用,流式细胞仪检测两药联合对AML细胞株凋亡的作用,Westernblot法检测两药联合对凋亡相关蛋白（Bcl-2、Caspase-3、Parp）的作用。结果与HHT、JQ1单药比较,两药联合的抗白血病效应明显增强,能明显抑制AML细胞株Kasumi-1、Mv4-11的增殖;可促进细胞凋亡作用,并明显抑制Bcl-2蛋白表达,激活Caspase-3,促进Parp的裂解。结论HHT联合JQ1可以增强抗AML细胞株的作用,促进AML细胞株的凋亡,是有效的联合方案。