大鼠肝癌高表达基因cDNA序列的克隆

目的克隆出大鼠肝癌高表达EST片段相关基因的cDNA完整表达序列,为进一步揭示其生物学功能奠定基础。方法通过基因芯片检测出DEN诱发的大鼠肝癌高表达的EST片段;其中部分高表达的EST片段,采用电子克隆与PCR相结合的方法,克隆出其cDNA完整表达序列。结果与正常大鼠肝组织比较,肝癌组织中明显高表达的EST片段有34个。采用EST电子克隆技术与PCR技术相结合的方法,成功克隆出4个EST片段的cDNA序列,经进一步BLAST对比分析,证明G15、G20、G36、G40等4个基因为新基因,并进行GenBank登录,登录号分别为DQ480746、DQ480747、DQ480744、DQ912022。结论利用大鼠基因芯片高通量地筛选出DEN诱发的肝癌组织高表达的有关基因,并在充分利用生物信息学资源的基础上,成功克隆出4个新基因的cDNA序列,为今后进一步深入观察这些基因的功能及其在肝癌发生、发展过程中的作用机制打下良好的研究基础。     

喜滴克对肝癌相关基因及AFP表达的调节

[目的]观察细胞分化剂喜滴克对肝癌相关基因及血清AFP水平的调节。[方法]人移植性高转移肝癌裸鼠模型LCI D20,随机分为对照组(C组) ,喜滴克低剂量组(L组) ,喜滴克中剂量组(M组) ,喜滴克高剂量组(H组)和喜滴克高剂量 +5 Fu组(H +CT组)。接种后第11天给药 ,连续20天 ,计算抑瘤率 ,测定血清AFP水平和观察腹腔转移。应用RT PCR方法 ,研究基因的表达。应用Western印迹检测整合素β1和E 钙粘素的表达 ,观测高转移人肝癌细胞株MHCC97对纤维连接蛋白的粘附抑制作用。[结果]不同剂量组的喜滴克均呈现一定的抑瘤作用。喜滴克治疗组血清AFP水平比对照组有明显下降 ;对原癌基因c myc、N ras、c jun、c fos及mmp 9基因的表达有明显的下调作用(P<0.01)。喜滴克亦能下调整合素β1蛋白表达和增加E 钙粘素的表达 ;有抑制高转移人肝癌细胞株MHCC97对纤维连接蛋白粘附的能力。[结论]喜滴克对肝癌相关基因及AFP表达的调节可能是其抑制肿瘤生长和转移的分子基础。     

人原发性肝癌中基因的表达

上海市肿瘤研究所对9例人原发性肝癌,1例癌旁组织,1例正常肝的Poly(A)~+RNA进行了分析。用各种基因探针作分子杂交,发现在6例原发性肝癌中,有二条增强表达的区带:2.2Kb和5.6Kb。肝癌组织较正常的mRNA在2.2Kb处有明显的增强。提示人N-ras基因的转录产物明显增强。癌旁,正常肝中N-ras基因的专一的mRNA很弱或低于检测水平。由于癌的发生是通过癌基因产物发生作用,因此N-ras基因在多数的人原发性肝癌中的表达明显增强,提示了N-ras基因是人原发性肝癌的重要转化基因之一。     

细胞色素超家族基因在DEN诱发大鼠肝癌过程中的表达特征

[目的]探讨细胞色素基因在肝癌发生过程中表达的特征。[方法]对正常大鼠肝组织以及DEN诱癌后大鼠第4周、8周、16周、20周（肝癌形成）含肝癌组织Affymetrix Rat 230A GeneChip芯片所检测数据标准化处理后，进行差异分析。[结果]从芯片中共筛选出与细胞色素有关的基因81个，其中已知的细胞色素超家族成员58个，包括40个细胞色素P450（Cyp）基因家族成员和11个细胞色素C氧化酶（cytochrome c oxidase，Cox）基因家族成员，以及7个其它成员；其次，在整个DEN诱癌过程中，表达有显著性变化的细胞色素基因有19个，包括9个明显上调的基因和10个明显下调的基因。[结论]细胞色素、尤其是细胞色素P450家族成员可能在大鼠肝癌发生过程发挥重要作用，值得注意的是Cypla1、Cypla2、Cyp3a3、Cyp4bl和Cyp27bl等人类癌症相关基因．以及Cyp26al、Cyba和CoxVa等人类共有基因．变化显著．可能有助于对人类肝癌发生过程的研究及肝癌的诊治。     

CYP2D家族基因在大鼠肝癌组织中的表达及突变研究

背景与目的:观察二甲氨基偶氮苯(Dimethylaminoazobenzene,DAB)诱导大鼠形成肝癌后细胞色素CYP2D家族基因的表达水平及突变并分析其意义。材料与方法:用DAB诱导大鼠形成肝癌,RT_PCR定量分析CYP2D1、CYP2D2和CYP2D4mRNA在肝脏中的表达水平,并对各PCR产物测序分析,观察是否有点突变。结果:CYP2D2和CYP2D4的mRNA表达水平在肝脏癌组织中及癌旁组织中明显低于正常组织,两者在癌组织中的表达水平低于在癌旁组织;CYP2D1在肝脏癌组织中及癌旁组织中的的表达水平虽低于正常组织,但之间无明显的差异性。CYP2D2在肝脏癌组织的PCR产物经测序分析存在碱基插入突变。结论:DAB可以不同程度降低CYP2D家族基因在肝脏的表达,并可以诱发CYP2D2基因点突变,CYP2D家族基因差异性与肝癌形成有密切关系。     

CCT亚基γ基因在AFB1诱发大鼠肝癌过程中表达的变化

目的探讨AFB1诱发肝癌过程中CCT亚基γ基因蛋白的表达及其意义。方法45只Wistar大鼠随机分为AFB。组和对照组,AFB1组以200ug／kg体重腹腔注射AFB1,第13周、第33周和第53周对大鼠进行肝活检,第73周处死全部动物并取肝组织。用免疫组化法检测AFB1诱发肝癌过程中不同时期CCT亚基γ基因蛋白的表达情况。结果在第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。同一组不同时段比较,随着诱癌的进行,CCT亚基γ基因蛋白表达上调,第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白的表达水平不仅明显高于第13周,而且亦高于第33周（P〈0．01）。其余各组和同组不同时段之间CCT亚基γ基因蛋白的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。AFB。组中发生肝癌的动物肝组织CCT亚基γ基因蛋白表达率为100％（10／10）,显著高于同期对照组CCT亚基γ基因蛋白的表达率30％（3／10）（P〈0．05）。结论AFB,诱癌过程中CCT亚基γ基因蛋白表达上调,CCT亚基γ基因蛋白有可能参与了肝细胞癌的发生和发展。     

CCT亚基γ基因在AFB_1诱发大鼠肝癌过程中表达的变化

目的探讨AFB1诱发肝癌过程中CCT亚基γ基因蛋白的表达及其意义。方法 45只Wistar大鼠随机分为AFB1组和对照组,AFB1组以200μg/kg体重腹腔注射AFB1,第13周、第33周和第53周对大鼠进行肝活检,第73周处死全部动物并取肝组织。用免疫组化法检测AFB1诱发肝癌过程中不同时期CCT亚基γ基因蛋白的表达情况。结果在第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。同一组不同时段比较,随着诱癌的进行,CCT亚基γ基因蛋白表达上调,第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白的表达水平不仅明显高于第13周,而且亦高于第33周(P<0.01)。其余各组和同组不同时段之间CCT亚基γ基因蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。AFB1组中发生肝癌的动物肝组织CCT亚基γ基因蛋白表达率为100%(10/10),显著高于同期对照组CCT亚基γ基因蛋白的表达率30%(3/10)(P<0.05)。结论 AFB1诱癌过程中CCT亚基γ基因蛋白表达上调,CCT亚基γ基因蛋白有可能参与了肝细胞癌的发生和发展。     

大鼠肝癌形成过程MCM7基因动态变化

目的：4g讨MCM7基因在黄曲霉毒素B1（AFB1）实验诱发大鼠肝癌过程中的动态变化及意义。方法：将70只雄性4周龄Wistar大鼠随机分为AFB1组（50只）和对照组（20只）,AFB1组腹腔注射AFB1,对照纽则给予溶媒二甲基亚砜。在诱发肝癌过程中,分别于第13、33和53周对大鼠进行肝活检;实验至第73周处死全部大鼠取肝组织;采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组化方法检测肝组织中MCM7rnRNA和蛋白的表达情况。结果：AFB1组肝细胞癌发生率为44．1％（15／a4）,对照组为0（0／16）,AFB1组显著高于对照组,χ^2=8．093,P〈0．001。随着大鼠肝癌的形成,MCM7mRNA和蛋白的表达水平逐步升高,AFB1组第53和73周显著高于第13和33周,F值分别为55．632和207．253,P值均〈0．001;对照组各时间点的表达较低且变化不大。免疫组化结果显示,AFB1组第53周McM7蛋白阳性表达率为26．7％且以弱阳性为主,第73周MCM7蛋白阳性表达率为100％且多为强阳性,阳性表达率和表达强度均比其他时间点的高,两者比较差异均有统计学意义,P值均〈0．001。结论：MCM7表达水平随着肝癌的形成逐渐上升,且在肝癌组织中表达最高,MCM7有可能是参与肝癌形成的关键基因,但其详细机制有待进一步探讨。     

ALCAM基因在肝癌中的表达及其临床意义

[目的]探讨活化白细胞黏附分子（ALCAM）基因在原发性肝细胞癌（HCC）中表达的特征及其临床意义。[方法]应用RT—PCR及免疫组化Elivision法检测ALCAM基因在42例肝癌组织及相应42例癌旁组织中的表达,分析其与HCC临床病理特征的相关性。[结果]RT—PCR显示HCC中ALCAM mRNA水平显著高于癌旁组织．Elivision法显示HCC中ALCAM蛋白的表达较癌旁组织明显升高．ALCAM mRNA表达水平及ALCAM表达与HCC组织分化程度及肝内转移有关,与患者性别、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤包膜、肿瘤大小、癌肿数目无关。[结论]HCC中ALCAM基因的表达能促进HCC的发生、发展和转移,可作为判断HCC恶性程度、评价预后的指标。     

Bak基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

目的：本文旨在研究ｂｃｌ－２基因家族促凋亡蛋白Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中的作用,同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法：免疫组织化学法研究Ｂａｋ在ＨＣＣ组织中的分布,并结合ＴＵＮＥＬ染色,分析Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用ＭＴ－Ⅱ调节系统,通过加锌离子（ＺｎＳＯ４,１００μｍｏｌ／Ｌ）诱导Ｂａｋ基因表达。ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系作为靶细胞,获得表达Ｂａｋ基因的稳定转染子。结果：在Ｈ     

MDR1基因的表达与肝癌生物学行为指标的关系

目的:通过对肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中多药耐药基因(multid-rug resistance gene 1,MDR1)表达和生物学行为指标HBV、AFP、AST的检测,探讨肝癌中MDR1的表达特点及其与肝癌生物学行为的相互关系。方法:运用荧光定量PCR(flurescence quantitative-PCR,FQ-PCR)技术检测MDR1基因在51例肝癌组织和10例正常肝组织中的表达,分析MDR1基因的表达与肝癌生物学特性之间的关系。结果:MDR1在肝癌中的表达为0.55±0.27,正常肝组织中的表达为0.23±0.10,(P<0.05)。表达与肿瘤Ed-mondson分级呈正相关(P<0.05)。HBV感染、AFP阳性、AST升高与MDR1基因表达明显呈正相关(r=0.463、0.473、0.299)。结论:肝癌中存在原发性耐药的现象,MDR1基因高表达在肝癌原发性耐药中可能起重要作用;HBV的检测可以作为肝癌化疗耐药的参考指标之一,血浆中AFP水平、AST变化可以作为动态监测MDR1表达的参考指标。     

肝癌组织中PTEN基因蛋白表达的研究

目的 探讨肝癌组织中抑癌基因PTEN蛋白的表达情况及其临床病理意义。方法 应用免疫组织化学S－P法检测41例肝细胞癌、5例胆管细胞癌及其相应的癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况，同时结合患者的临床病理资料进行分析。结果 46例癌旁组织PTEN全部阳性表达，癌组织中PTEN阳性表达率为36．9％，阴性表达率为63．1％。PTEN蛋白在肝癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄及组织类型无明显相关性，但与组织分化程度明显相关。结论 肝癌组织中PTEN蛋白阴性表达率较高，说明PTEN基因失活在肝癌的发生发展中起着重要作用，PTEN阳性表达有一定的预后意义。     

肝癌DKK1基因的表达及突变分析

目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。     

稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株。方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆。RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况。采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异。结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18SmRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P<0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P<0.05。结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础。     

抑凋谢基因bcl—2蛋白在大鼠实验性肝癌发病过程中的表达

目的动态观察大鼠实验性肝癌形成过程中抑凋谢基因ｂｃｌ－２蛋白表达与γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）活性和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活性改变的关系以及刺五加多糖的抑癌作用。方法用ｂｃｌ－２单抗进行免疫组化ＳＡＢＣ检测,用酶学动力学方法检测酶活性。结果饲喂致癌剂３－甲氨基偶氮苯（３′－ＭｅＤＡＢ）的早期（１５天）,ｂｃｌ－２蛋白表达已明显增高,实验结束时３′－ＭｅＤＡＢ组阳性率为８９．５％（１７／１９）,刺五加组为６４．７％（１１／１７）。ｂｃｌ－２的过量表达与肝组织中γ－ＧＴ活性升高和ＧＳＴ活性降低相一致。结论ｂｃｌ－２蛋白过度表达出现,对实验性肝癌的早期阶段,很可能在肿瘤的发生发展中起着促进作用。刺五加多糖对实验性肝癌的形成有一定抑制作用     

miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌

  目的  miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量,并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用,并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程,本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。  方法  应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c,miR-30b和miR-30e表达水平,另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测,分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。  结果  本研究发现miR-30c(P < 0.001)、miR-30b(P=0.004)和miR-30e(P < 0.001)与癌旁正常组织相比,癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.007)。MiR-30c(P=0.032)和miR-30e(P=0.015)在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。  结论  miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA,并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。      

人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义

目的：探讨人肝癌组织糖调节蛋白94(glucose-regulated protein-94，GRP94)的表达及意义。方法：采用SABC法检测人肝癌组织GRP94的表达．镜下观察GRP94在癌组织中的表达特点。结果：免疫组化显示，40例肝癌组织中38例(95．0%）存在GRP94的表达．不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异：癌旁组织亦存在较弱的表达。结论：人肝癌组织存在GRP94的表达异质性．呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异．GRP94在人肝癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。     

Cx32基因在肝癌细胞株中的表达与甲基化调节作用

[目的]了解Cx32基因在肝癌细胞株（HepG2）中的表达及甲基化调节作用。[方法]采用不同药物浓度的甲基化转移酶抑制剂（5-杂氮脱氧胞甘5-Aza-CdR）分三组培养细胞株，免疫组化分析Cx32蛋白表达，甲基化特异性PCR检测Cx32基因的甲基化状态。[结果]肝癌细胞株Cx32蛋白表达减少，去甲基化后Cx32基因表达增加且定位异常．细胞生长减慢，三组细胞总阳性率分别为18．5％、77％、88％，具有显著性差异（P〈0．01）。三组细胞Cx32基因甲基特异性PCR结果分别为甲基化、部分去甲基化及完全去甲基化。[结论]肝癌细胞株（HepG2株）中Cx32表达减少，受甲基化抑制，去甲基化可增加Cx32表达。     

人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义

目的 :探讨人肝癌组织糖调节蛋白 94(glu cose regulatedprotein 94,GRP94)的表达及意义。方法 :采用SABC法检测人肝癌组织GRP94的表达 ,镜下观察GRP94在癌组织中的表达特点。结果 :免疫组化显示 ,40例肝癌组织中 3 8例 ( 95 0 % )存在GRP94的表达 ,不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异 ;癌旁组织亦存在较弱的表达。结论 :人肝癌组织存在GRP94的表达异质性 ,呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异 ,GRP94在人肝癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。