多重巢式聚合酶链反应在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的探讨应用多重巢式聚合酶链反应(PCR)技术在β地中海贫血(简称β地贫)植入前遗传学诊断(PGD)中的应用。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞多重巢式PCR检测技术,可同时检测β珠蛋白基因及与β珠蛋白基因紧密连锁的HumTH01基因,并对4例已出生的重型β地贫患儿及双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用多重巢式PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞多重巢式PCR,可以同时检测中国人常见的16种β地贫突变类型,单个淋巴细胞平均扩增效率为91．3％,平均等位基因脱扣(ADO)率为17．0％。对4对夫妇进行4个周期PGD,共活检33个胚胎,获得33个卵裂球,其中30个卵裂球扩增成功,扩增效率为90．9％,ADO率为13．3％。26个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了8个胚胎,获得1例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生1名正常女婴。结论应用单细胞多重巢式PCR技术可对β地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

α-地中海贫血胚胎植入前遗传学诊断获临床妊娠1例报告

目的 探讨有效避免妊娠遗传病患儿的方法 .方法 采用常规黄体期长方案促排,用卵胞浆内单精子显微注射法授精,72 h后采用机械打孔法从每个优质胚胎中取一个卵裂球进行活检,采用gap-PCR检测α-地贫东南亚缺失型(α-SEA).结果 获宫内单胎妊娠.结论 PGD技术的临床应用为重型地贫的预防提供了一个可供选择的方法 .     

对β-地中海贫血携带者进行胚胎植入前遗传学诊断

目的 探讨对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断的方法。方法 对4例β-地中海贫血携带者进行超排卵和体外受精-胚胎移植治疗,胚胎活检后应用全基因组扩增技术,巢式-PCR及反向点杂交进行胚胎植入前遗传学诊断,根据诊断结果选择健康的胚胎移植入子宫。结果 4例患者共获卵97个,受精率为83%,可供活检的胚胎47个,总扩增效率为84.8%。平均等位基因脱扣发生率为14.9%。共移植10个健康胚胎,获得1例三胎妊娠（其中1个为空囊）,现已分娩健康双胎。结论 对β-地中海贫血进行植入前遗传学诊断可使β-地中海贫血患者实现生育健康后代的愿望,达到优生的目的。     

TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在β地中海贫血植入前诊断中的应用研究

目的建立单细胞MGB探针荧光PCR检测β地贫的方法以及在β地贫PGD中的应用研究。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立稳定的单细胞MGB探针荧光PCR检测技术,并对2例双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用MGB探针荧光PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞MGB探针荧光PCR检测了β地贫基因携带者的200个单个淋巴细胞的基因型,平均扩增效率为94%,平均等位基因脱扣(ADO)率为2.5%。对两对夫妇进行4个周期PGD,共活检16个胚胎,获得16个卵裂球,其中15个卵裂球扩增成功,扩增效率为93.8%,ADO率为6.2%。14个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了4个胚胎,获得1例临床妊娠。孕11周时经腹吸取绒毛,证实为完全正常胚胎,最终分娩了一正常女婴。结论应用单细胞MGB探针荧光PCR技术可对β地贫以及其它单基因遗传病进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血基因

[目的]应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性.[方法]获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因.[结果]160个淋巴细胞进行荧光PCR扩增,β地贫基因的平均扩增效率为92.5%,等位基因脱扣(ADO)率为8.8%;240个淋巴细胞进行巢式PCR扩增,β地贫基因的扩增效率为91.7%,ADO率为15.8%.两种方法的扩增效率没有统计学差异,但荧光PCR的ADO发生率显著低于巢式PCR的ADO发生率(P＜0.05).[结论]本研究建立的单细胞荧光PCR技术具有较高的扩增效率,可显著降低ADO发生率,可望用于β地贫的临床植入前诊断.     

α—地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

目的 探讨种植前基因诊断的临床应用。方法 对1例夫妇均为东南亚缺失型α－地中海贫血携带者，经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检，吸取的单个卵裂球采有针对α－SEA基因的gap－PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断，将诊断不致病的3个胚胎进行宫腔内移植。结果 胚胎移植后7击B超诊断单胎妊娠，18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。结论 应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检，活检的单个儿裂球用荧光定量PCR技术进行诊断，获得国内首例α－地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。     

α-地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

【目的】探讨种植前基因诊断的临床应用。【方法】对 1例夫妇均为东南亚缺失型α 地中海贫血携带者 ,经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检 ,吸取的单个卵裂球采用针对α SEA基因的 gap PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断 ,将诊断为不致病的 3个胚胎进行宫腔内移植。【结果】胚胎移植后 7周B超诊断单胎妊娠 ,18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。【结论】应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检 ,活检的单个卵裂球用荧光定量PCR技术进行诊断 ,获得国内首例α 地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。     

缺失型α—地中海贫血的基因诊断新技术研究

目的：建立切实可行的诊断我国最常见的三种缺失型α－地中海贫血（简称α－地贫），即东南亚型缺失（－－^SEA)、右侧缺失（－α^3.7)和左侧缺失（－α^4.2)的PCR技术。方法：设计三组PCR引物，优化PCR反应条件，运用优化的PCR条件，琼脂糖凝胶电泳，UVP凝胶成像仪，根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α－地贫。结果：运用本研究建立的PCR技术能够成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子，结果与Southern blotting分析一致。完成42例α－地贫样本的基因诊断。结论：本研究所建立的三种检测α－地贫缺失型的技术方法准确简便，可重复性好，便于推广应用。     

海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究

目的 研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失（--^SEA）、右侧缺失（-α^3,7）和左侧缺失（-α^4.2）三种-α地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失（--^SEA）、右侧缺失（-α^3.7）和左侧缺失（-α）三种α-地中海贫血缺失突变。结果 在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为12、69％；三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0．0635，其中--^SEA、-α^3.7和-α^4.2的基因频率分别为0．0127、0．0305、0．0203，共发现--^SEA／αα-α^3.7／αα和-α^4.2／αα三种基因型，其中--^SEA／αα5例，-α^3.7／αα12例，-α^4.2／αα8例。在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，携带率为56．72％，三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为0．3607，其中--^SEA、-α^3.7和-α^4.2的基因频率分别为0．3607、0．0075、0．1891，共发现--^SEA／αα、-α^3.7／αα、-α^3.7／-α^3.7、-α^3.7／-α^4.2,-α^4.2/αα、和-α^4.2/-α^4.2六种基因型，其中--^SEA／αα3例，-α^3.7／αα39例，-α^3.7／-α^3.76例，-α^3.7／-α^4.2 18例，-α^4.2/αα38例，-α^4.2／-α^4.2 10例。结论 海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体。     

胚胎植入前遗传学诊断的进展

植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)是指利用聚合酶链式反应技术(Ploymerase Chain Reaction．PCR)和荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization，FISH)对植入前胚胎进行遗传物质的分析。诊断该胚胎是否携带致病基因，并将健康的胚胎移入母体继续发育。广义上说,PGD还包括对配子的诊断和选择。     

应用荧光PCR技术对单个体细胞进行多囊肾病的基因诊断

目的建立单细胞水平的荧光PCR技术,探讨该技术对临床开展着床前遗传学诊断的可行性。方法分离单个颊黏膜细胞,利用荧光PCR技术扩增微卫星D16S423位点,扩增产物在ABI3730上电泳,结果用Genemarker软件分析。结果单个颊黏膜细胞的PCR扩增成功率为93.3%,等位基因脱扣率为10.7%,诊断正确率为89.3%。结论利用单细胞荧光PCR技术进行着床前遗传学诊断是可行的。     

细胞裂解法对植入前诊断中聚合酶链反应扩增效率的影响

目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基因 (ALD基因 )的 3号外显子 ,比较其扩增效率。结果 :三种裂解液组对人淋巴细胞的扩增效率分别为 90 % ,74 % ,87% ,对人单卵裂球的扩增效率分别为 98% ,77% ,96 %。结论 :在植入前诊断中 ,采用碱裂解液及改良的蛋白酶K裂解液优于蛋白酶K裂解液     

聚合酶链反应技术用于缺失型α─地中海贫血的分子筛查和产前诊断

用血液学方法筛查育龄夫妇８４３２人，检出α一地中海贫血（α一地贫）６４６例，从中随机取出典型阳性样本１００例，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）直接分析法进行基因诊断，结果９６例“标准型”α一地贫和３例血红蛋白（Ｈｂ）Ｈ病的ＤＮＡ样品均可检测到（－－ＳＥＡＩ）突变，另１例α一地贫复合ＨｂＱ样品未检测到该突变。此外，采用本法完成了７个重症α一地贫高风险胎儿的产前诊断。     

植入前遗传学诊断技术研究的新进展

近二十余年来人类对自身生殖过程的认识有了巨大的进步.而同期发展起来的辅助生殖技术与分子遗传学技术的有机结合,使人们能够在种植之前的早期胚胎中取出部分细胞检测疾病,从而筛选出正常胚胎进行宫腔内移植,即植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD).     

结肠镜及结肠造影检查前口服甘露醇清洁肠道的体会

结肠镜及结肠造影检查前口服甘露醇清洁肠道的体会晋城市郊区人民医院（０４８０００）正巧梅，李秀玲，常莲俊惠丰机械厂职工医院王敏１资料结肠镜检查及Ｘ线结肠造影是临床上诊断结肠疾患的主要方法，检查前必须彻底清洁肠道，才能保证检查的成功。过去我们在检查前常用...     

男性罗氏易位的临床特点及其胚胎着床前遗传学诊断

目的：分析男性罗氏易位的生育期临床特点,探讨胚胎着床前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD）技术在男性罗氏易位携带者中的临床应用。方法：2005年1月至2011年10月,共对80例男性罗氏易位携带者进行了96个PGD周期,选择正常或罗氏易位核型的胚胎移植。分析男性罗氏易位携带者的临床特点及其PGD周期的临床特点。结果：80对男性罗氏易位者夫妇中,62对夫妇因男方严重少、弱精症而致原发不孕,占77.50%（62/80）;8对夫妇因男方继发少、弱精症而出现继发不孕,占10%（8/80）;10对夫妇因反复自然流产就诊,占12.50%（10/80）。80例男性罗氏易位携带者中,（13;14）易位有50例,占62.50%（50/80）;（14;21）易位有15例,占18.75%（15/80）。96个PGD周期中,17个周期无胚胎可以移植,79个周期进行了胚胎移植,25个PGD周期获得临床妊娠,妊娠率31.65%（25/79）。至目前,共有18对夫妇分娩了21个健康子代,3对夫妇持续妊娠中。结论：少、弱精症是男性罗氏易位携带者不育的主要原因,辅助生育技术可以解决其不育问题。PGD技术可以为男性罗氏易位携带者获得健康的子代提供帮助,减少了女方流产及分娩畸形儿的发生率。     

实时荧光定量聚合酶链反应技术在肾结核病理诊断中的应用价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术在肾结核病理诊断中的应用价值。方法回顾性收集我院泌尿外科通过后腹腔镜技术或开放技术行肾切除术后石蜡组织标本55例患者的临床资料,以术前尿结核分枝杆菌培养结果为金标准,并结合术后病理诊断结果,将研究对象分为结核肾病组25例(阳性组),非结核肾病组30例(阴性组)。采用Taqman探针法实时荧光定量PCR技术和抗酸染色技术检测每个石蜡组织标本,对比分析两种检测技术在肾结核病理诊断中的诊断效能,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估两种方法在肾结核病理诊断中的价值。结果实时荧光定量PCR技术检测的敏感度与抗酸染色技术检测的敏感度分别为80.0%(20/25)和48.0(12/25),前者相比后者敏感度提高了32.0%,差异有统计学意义(χ²=5.556,P=0.018)。荧光定量PCR检测的特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于抗酸染色检测的结果,但两者比较差异均无统计学意义(P>0.05)。荧光定量...     

Rapid prenatal diagnosis of trisomy 21 by fluorescent quantitative multiplex polymerase chain reaction

Trisomy 21, also named Down syndrome was the most frequent autosomal aneuploidy and the most common cause of mental retardation. Fifty percent patients had congenital heart malformation. Every 20 minutes one case of trisomy 21 was born, and the incidence rate was 1 in 600 to 800 newborns in China.1 In two thirds of cases with trisomy 21, there was a spontaneous abortion, so the actual incidence was higher than that obtained postnatally. Trisomy 21 usually occurred due to meiotic non-disjuncti…