钩吻总生物碱中钩吻素子的提取与分离

目的 研究钩吻中总生物碱的提取、总量测定方法及其中主要成分钩吻素子的分离、鉴定方法。方法 采用加热回流提取与氯仿萃取相结合的方法提取总生物碱；采用碱性硅胶柱层析、梯度洗脱法分离钩吻素子并用薄层层析法和紫外分光光度法定性鉴别。结果 从钩吻中分离得到了无色棱柱状钩吻素子晶体。结论 本实验所采用的提取钩吻总生物碱及分离钩吻素子的方法行之有效。     

粤东产钩吻生物碱提取物的红外光谱与核磁共振谱分析

目的 研究粤东产钩吻生物总碱提取物的结构。方法 采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、核磁共振氢谱(¹H NMR)与碳谱(¹³C NMR)、无畸变极化转移增益(distortionless enhancement by polarization transfer,DEPT)波谱分析及元素分析阐明该提取物的化学结构。结果 在4000.0~400.0cm^-1区域内FTIR谱图显示各基团的特征吸收峰;样品的¹H NMR与¹³C NMR指纹图均有高度的特征性和重现性;元素含量与理论值接近。结论 提取物的结构分析与已知化合物钩吻素子结构相符。对粤东产钩吻总生物碱的结构鉴定将为将钩吻开发为安全有效的单体临床制剂、建立中药指纹图谱打下基础。     

钩吻素子注射液的一般药理学研究

目的 观察钩吻素子注射液对实验动物精神神经、呼吸及心血管系统的影响。方法 用光电计数仪测定钩吻素子注射液对小鼠自发活动的影响,用CYS-0.5型压力换能器测定犬股动脉血压,用TB-611型张力换能器记录犬呼吸曲线,针型电极刺入四肢皮下测二导联心电图。上述指标通过MPA2000多功能信号处理器输入到计算机,由计算机自动采样并处理。实验共观察了小鼠一般行为、15min内自发活动次数,犬的心率、心电电压最大值、最小值及平均值,犬的平均动脉压、呼吸频率及呼吸深度等9项指标,其中后7项指标观察了给药前及给药后10、20、30、60、90及120min共6个时间点的变化。结果 钩吻素子注射液中、高剂量可显著减少实验小鼠的自发活动次数;对实验犬的呼吸系统及平均动脉压、心电电压最大值、最小值及平均值均无影响。钩吻素子注射液低剂量对犬的心率无影响,但中、高剂量给药前后犬的心率有显著性差异。结论 钩吻素子注射液对实验小鼠有一定的镇静作用;而除了对实验动物心率有一定影响外,对呼吸及心血管系统无影响。     

高速逆流色谱分离纯化钩吻中钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱

目的 建立高速逆流色谱技术分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱的方法。方法 采用高速逆流色谱分离技术分离纯化钩吻生物碱单体,以氯仿-甲醇-0.1 mol/L HCl(4∶4∶2)为溶剂体系;高效液相色谱技术分析所提产物的质量分数;核磁共振谱、质谱分析确证单体的化学结构。结果 从300 mg钩吻总碱中经过一次高速逆流色谱技术分离纯化获得19.4 mg钩吻素己和21.2 mg 1-甲氧基钩吻碱,质量分数分别为95.4％、98.6％;经过电喷雾质谱及核磁共振的结构鉴定分析,证实分离得到的两种生物碱分别是钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱。结论 高速逆流色谱技术可高效分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱,为钩吻生物碱的研发提供了制备技术。     

pH区带精制逆流色谱制备钩吻素子工艺参数的研究

目的 研究pH区带精制逆流色谱制备钩吻素子的工艺参数.方法 在选定的溶剂体系下,采用pH区带精制逆流色谱分离钩吻总生物碱,以钩吻素子的得率、纯度以及分离时间为指标,分别研究主机螺旋管转速、流动相流速、恒温循环器温度对钩吻素子制备的影响,选择适合的工艺参数.结果 当溶剂体系为甲基叔丁基醚-乙腈-水(3∶1.5∶4,V/V...     

钩吻素子治疗银屑病样动物模型的疗效观察

目的 观察钩吻素子(Kou)对银屑病动物模型的疗效.方法 采用鼠尾鳞片表皮和鼠阴道上皮实验模型,不同组别的小鼠给以甲氨蝶呤或不同浓度的Kou,分别观察其对上皮细胞分裂和表皮细胞分化的影响,以及对血清IL-2含量的影响.结果 Kou中、高剂量组能显著抑制阴道上皮细胞有丝分裂、促进鼠尾鳞片表皮颗粒层的生成;Kou低、中、高剂量组均可明显降低小鼠血清IL-2的水平.结论 提示Kou可能通过抑制小鼠表皮细胞增殖与促进其分化并减少炎性因子的生成而发挥作用,为其用于银屑病的治疗提供了实验依据.     

闽产钩吻质量标准研究

目的：对闽产钩吻进行系统的质量标准研究。方法：采用经验和显微鉴别法对闽产钩吻进行药材性状鉴别和显微鉴别;参照中国药典附录相关方法,对药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及钩吻素子含量等进行测定。结果：对闽产钩吻的药材性状和显微鉴定进行了描述,该方法具有较强的专属性。10批样品钩吻素子的平均含量为0.34%,平均水分含量10.0%,平均总灰分6.9%,平均酸不溶性灰分1.2%,平均醇溶性浸出物13.7%。结论：生药学鉴定及质量检查结果可为闽产钩吻的鉴别、质量标准制订及资源的开发利用提供科学依据。     

钩吻素子抗外周神经损伤导致诱发痛的效应

目的：观察钩吻素子抗外周神经损伤致神经病理性疼痛中诱发痛的效应及其时效关系,分析脊髓是否为钩吻素子抗神经病理性疼痛的可能作用部位。方法在大鼠坐骨神经慢性束缚损伤（CCI）致神经病理性疼痛模型上,以热痛觉过敏为指标,观察连续皮下注射给予钩吻素子（0．28、7．0mg/kg,CCI术后第3～9d,每天2次）对CCI大鼠诱发痛的效应;观测单次皮下注射给予7．0mg/kg钩吻素子后第0．5,1,2,4,6h对CCI大鼠诱发痛的效应及时效关系;Dixon序贯法分别测定钩吻素子皮下和鞘内注射抗CCI大鼠诱发痛作用的ED50,分析脊髓是否为钩吻素子抗神经病理性疼痛的可能作用部位。结果连续皮下注射7．0mg/kg钩吻素子组在术后第3d首次给药后,痛阈即显著高于溶剂对照组,术后第9d效应最显著（翻转率为93．8％,有效率达100％）。单次皮下注射给予7．0mg/kg钩吻素子0．5h术侧足痛阈显著高于溶剂对照组（翻转率达62．9％,有效率达55．6％）;1h痛阈最高（翻转率达70．8％,有效率达77．8％）,随后痛阈有所下降,但6h仍显著高于CCI＋saline组。单次皮下注射钩吻素子抗CCI大鼠诱发痛作用的ED50为1．074mg/kg,单次鞘内注射的ED50为每只41．4μg,远低于皮下注射的ED50。结论钩吻素子具有抗外周神经损伤致神经病理性疼痛中诱发痛的效应,单次给予0．5h内起效,持效约5．5h;脊髓可能是其发挥抗神经病理性疼痛效应的作用部位。     

闽产钩吻资源分布及药用部位的研究

目的 调查福建省钩吻资源的分布情况,并确定钩吻的最佳药用部位. 方法 依据文献记载和实地考察闽产钩吻的生境与分布;正交设计试验优化超声提取钩吻素子的工艺条件,采用高效液相色谱法测定钩吻根、茎和叶中的钩吻素子含量. 结果 闽产钩吻资源主要集中分布于23°84′N～26°92′N、116°36′E～120°05′E、海拔800 m以下光照良好的山坡、路旁.超声提取钩吻素子的最佳条件为超声功率250 W、时间20 min、温度50℃、料液比1∶20.闽产钩吻根和茎的钩吻素子含量高,叶的含量较低. 结论 闽产钩吻分布较广,资源丰富;钩吻的入药部位以根和茎为佳.     

钩吻非生物碱不同极性部位的急性毒性实验研究

目的观察钩吻非生物碱不同极性部位的急性毒性,为进一步开发充分利用钩吻药材提供依据。方法用钩吻茎醇提取物制备非生物碱不同极性部位,经一次灌胃ICR小鼠,观察小鼠的毒性反应及死亡情况。结果钩吻乙醇总提取物取物的LD50为88.04 mg/kg。钩吻非生物碱的LD50为40.64 mg/kg。钩吻母液的LD50为4.09 g/kg。结论钩吻非生物碱不同极性部位均具有一定毒性,毒性大小顺序为:非生物碱脂溶性部位,醇总提取物,非生物碱水溶性部分。     

Comparative study of uniform design and orthogonal design in the extraction of Gelsemium alkaloids]

OBJECTIVE: To develop a simple and efficient method for extracting Gelsemium alkaloids. METHODS: Uniform design and orthogonal design were respectively utilized to optimize the 3 factors in the extraction process, namely the type of solvent used, the solid-to-liquid ratio in the extraction system and the reflux time. RESULTS: Both of the design methods adopted trichloromethane as the solvent, with the solid-to-liquid ratio of 1:7.5 and reflux time of 3 h with 3 repetitions for the highest yield of alkaloids. CONCLUSION: Similar results are obtained from the two design methods for extracting Gelsemium alkaloids.     

均匀设计与正交设计在钩吻生物总碱提取工艺筛选研究中的应用

目的优选简便高效的钩吻生物总碱的提取工艺,考察不同提取条件下的提取率。方法分别用均匀设计和正交设计两种方法对钩吻生物总碱的提取工艺中溶剂种类、提取系统中固液比例和回流时间3个因素进行优选。结果两种方法的结果均为采用氯仿作为溶剂、固液比例为1.0∶7.5、回流时间3 h×3,所得总碱含量最高。结论正交设计与均匀设计试验所得结果相近,结论基本一致。     

钩吻素子对小鼠自主行为、协调平衡和巴比妥阈下催眠作用的影响

目的 目的 观察钩吻素子对小鼠自主行为、协调平衡和巴比妥阈下催眠等中枢神经系统作用的影响. 方法 小鼠灌胃给予钩吻素子2,10,50 mg/kg,分别观察其在2h内的自主行为活动和协调平衡运动能力的影响,以及对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的催眠协同作用. 结果 50 mg/kg钩吻素子增加小鼠的自主行为活动（P＜0.05）,10 mg/kg钩吻素子促进阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠作用（P＜0.05）,钩吻素子对小鼠协调平衡运动能力无影响. 结论 钩吻素子在治疗范围的较高剂量下能引起小鼠中枢神经系统的抑制作用,超过治疗剂量范围的一定时间内则产生兴奋作用.     

钩吻提取液对HL-60细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨钩吻提取液对HL 6 0细胞生长和增殖以及细胞周期的影响。方法 :采用XTT法分析细胞殖 ,Timelapse倒置显微镜摄取细胞影像形态学分析 ,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期状态 ,综合评价钩吻提取液抗HL 6 0细胞生长和增殖的作用。结果 :钩吻醇提水沉组分具有明显的抑制HL 6 0细胞增殖的作用 ,且存在明显的剂量和时间 -反应关系 ;经钩吻醇提水沉组分处理的HL 6 0细胞周期状态发生明显变化 ,表现为G0 G1期细胞比例降低 ,S期细胞比例增加 ,并出现较明显的亚二倍体细胞峰型。结论 :钩吻醇提水沉组分对HL 6 0肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用 :引起细胞死亡和抑制细胞增殖 ;诱导细胞周期阻滞 ,干扰细胞G1期向S期转化 ,并在此阶段诱发凋亡     

钩吻提取液对Hela细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 探讨钩吻(Gelsemium elegang Benth)提取液对Hela细胞生长增殖以及细胞周期的影响。方法 采用XTT法分析细胞增殖，Timelapse显微镜形态观察，流式细胞仪检测凋亡和细胞增殖状态，综合评价钩吻提取液抗Hela细胞生长和增殖的作用。结果 钩吻B组分具有明显的抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡。且存在明显的剂量和时间-效应关系。经钩吻B处理的Hela细胞周期发生明显变化，G0／G1期细胞比例降低，S期细胞比例增加，而G2/M期细胞比例变化不明显。结论 钩吻B组分可抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡，具有明显的抗肿瘤细胞的作用；钩吻B组分主要阻止细胞由G1期向S期转化，并在此阶段诱发凋亡。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4^＋T细胞体外增殖的影响

OBJECTIVE: To assess the separation efficiency of magnetic-activated cell sorting in the purification of CD4+ T cells from murine spleen, and observe the effects of koumine on the proliferation of the separated cells. METHODS: CD4+ T cells were isolated from murine spleen by magnetic-activated cell sorting (MiniMACS). Fluorescence-activated cell sortering was employed to determine the purity of CD4+ T cells before and after the separation procedure followed by evaluation of the cell viability using trypan blue staining. Concanavalin A- (ConA, 5 microg/ml) or phytahematoagglutinin (PHA,1 mg/ml)-induced murine T cells were treated with different concentrations of koumine (10-320 microg/ml), and their proliferation was determined by MTT colorimetry, and enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure IL-2 level in the cell culture supernatant. RESULTS: The purity of CD4+ T cells reached (90.3+/-5.8)% after the purification with a cell viability of (94.9+/-3.6)%. Koumine (20-320 microg/ml) dose-dependently inhibited ConA- or PHA-induced proliferation of murine lymphocytes as compared with the controls (P<0.05). Koumine (20, 100, and 200 microg/ml) significantly decreased the level of IL-2 in comparison with the control group (P<0.05). CONCLUSIONS: CD4+ T cells of high purity can be obtained from murine spleen using MiniMACS without impairing the viability of the cells. Koumine significantly inhibits the proliferation of murine CD4+ T cells due to its immunosuppressive effect and inhibition of IL-2 secretion.     

Infrared spectrum and nuclear magnetic resonance analysis of the alkaloid extract of Gelsemium produced in east Guangdong province]

OBJECTIVE: To identify the structure of the alkaloid extract of Gelsemium from east Guangdong province of China. METHODS: Fourier transform infrared (FTIR) absorption spectrometry, hydrogen and carbon spectra of nuclear magnetic resonance (NMR) and distortionless enhancement by polarization transfer (DEPT) analysis were used for the structural identification of the alkaloid exstract of Gelsemium. RESULTS: The frequency, intensity and shape of the extract's characteristic peaks in infrared absorption spectra (4,000.0-400.0 cm(-1)) and (1)H NMR, (13)C NMR were recognized and compared. The molecular structure of the sample was consistent with the theoretically derived model. CONCLUSION: The extract is structurally identical to koumine, which may provide evidence for its safe clinical application and establishment of Chinese medicine fingerprint database of Gelsemium.