益智健脑颗粒对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响

目的 运用蛋白质组学技术观察益智健脑颗粒对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响,从而探讨益智健脑颗粒治疗阿尔茨海默病(AD)的部分作用机制.方法 将6月龄SAMP8 20只随机分为治疗组(n=10)和对照组(n=10),治疗组以益智健脑颗粒浓缩液灌胃,对照组以等剂量双蒸水灌胃.8 w后,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分别分离治疗组和对照组SAMP8海马区组织总蛋白,经胶体考马斯亮蓝染色,利用ImageScanner图像扫描仪及ImageMaster双向凝胶电泳软件对图像进行扫描分析,将有意义的差异蛋白质点经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析得到肽质量指纹图谱(PMF),经 MSDB和NCBI数据库查询,鉴定差异蛋白质点.结果 鉴定出治疗组13个差异表达大于2倍的蛋白质,其中有8个上调,5个下调.结论 益智健脑颗粒可调节SAMP8小鼠海马组织的多种蛋白质表达,提示该药具有多靶点治疗的作用.     

开心散对SAMP8小鼠神经递质的影响

目的观察开心散对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8神经递质的影响。方法将40只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、开心散高剂量组、开心散低剂量组、艾地苯醌组,每组10只,选10只SAMR1小鼠为正常组。灌胃给药干预8 w后,取血浆及组织上清,采用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织及血浆5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量。结果与正常组比较,各组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,开心散高剂量组和低剂量组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01)。结论开心散可以通过改善快速老化痴呆模型小鼠单胺类神经递质的含量,调整神经递质的不平衡状态,进而改善阿尔茨海默病(AD)的行为和精神症状。     

补肾活血法对阿尔茨海默病患者认知功能改善的影响

目的 观察补肾活血法干预对阿尔茨海默病(AD)患者认知功能的改善作用,并探讨其作用机制.方法 将入选的80例AD患者,随机分为针刺组、中药组、针刺+中药组、多奈哌奇对照组,每组20例.分别采用补肾活血针刺法、补肾活血中药益智健脑颗粒、多奈哌奇,治疗8 w,采用简易精神状态量表(MMSE)方法观察治疗效果,采用酶联免疫吸附法测定患者治疗前后血浆、尿液中异构前列腺素(8-IPF2α)含量变化. 结果 针刺、中药、针刺+中药、多奈哌奇干预均能够明显改善AD患者认知行为能力,提高MMSE得分(P<0.001);补肾活血法能够显著降低AD患者血浆、尿液8-IPF2α水平(P<0.001). 结论补肾活血法能够改善AD患者的认知功能与其能降低AD患者体内脂质过氧化状态、抗氧化应激损伤能力相关.     

益肾化浊方及拆方对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察益肾化浊方及拆方对7月龄SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响.方法 将40只7月龄SAMP8小鼠随机分成SAMP8(P8)组、益肾化浊方(YSHZ)组,益肾(YS)组和化浊(HZ)组,每组10只,选择10只抗快速老化小鼠(SAMR1)作为对照(R1)组;益肾化浊方、益肾方与化浊方分别按照6.24、4.68、1....     

二甲双胍对快速老化模型SAMP8小鼠行为学及生存率的影响

目的探讨二甲双胍对SAMP8小鼠行为学及生存率的影响。方法 40只雄性SAMP8小鼠分为二甲双胍低、中、高剂量实验组及空白对照组,实验组每日按小鼠体重灌胃不同浓度的二甲双胍,空白对照组每日灌胃生理盐水,观察小鼠的行为学指标及12月龄生存率。结果二甲双胍低、中、高剂量实验组小鼠行为学指标无明显变化;低、中、高剂量实验组12月龄小鼠生存率均高于空白对照组(P<0.05)。结论二甲双胍对改善SAMP8小鼠学习记忆能力无显著影响,但可延长SAMP8雄性小鼠的12月龄生存率。     

补肾活血化痰法对血管性痴呆大鼠SOD、MDA的影响

目的:探讨补肾活血化痰方药对血管性痴呆大鼠的作用机制，为临床运用提供依据。方法：Wistar大鼠采取双侧颈总动脉持久结扎，复制慢性脑灌注不足模型，术后第3天取存活大鼠作穿梭箱实验，测定每只大鼠的潜伏期。凡潜伏期＞11．3s者均认为是血管性痴呆大鼠。在此基础上观察血管性痴呆大鼠学习记忆能力，测定血清及脑组织雪氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果：血管性痴呆大鼠学习记忆能力明显障碍，SOD活性显著下降，MDA含量明显升高，而经治疗后各灌药组MDA含量明显降低，SOD活性升高。结论：（1）补肾活血化痰方药能对血管性痴呆起防护作用，其机制可能是改善大脑局部的血循环，使神经细胞和神经胶质细胞能够得到充分的供血和供氧，减少梗死面积，减少毒性物质的释放和抗原的产生。（2）抗衰益智，提高SOD活性以及减少MDA的合成，提高下丘脑中单胺类神经递质水平，改善学习、记忆行为，抑制脑及全血胆碱酯酶的活性。     

补肾活血法治疗糖尿病肾病效果的临床观察

目的观察补肾活血法治疗糖尿病肾病的效果。方法该院选取2013年1月—12月将60例糖尿病肾病患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组给予基础治疗,治疗组在对照组的基础上使用补肾活血法拟中药方剂进行治疗。结果治疗组患者中,显效15例,有效11例,无效4例,总有效率86.7%;对照组患者中,显效8例,有效13例,无效9例,总有效率70.0%,两组患者疗效差异具有统计学意义（（Zc=2.03,P〈0.05）,治疗组优于对照组。结论基础治疗联合补肾活血法治疗糖尿病肾病疗效满意,值得临床推广应用。     

补肾活血方对血管性痴呆小鼠行为学及脑海马自由基代谢的影响

目的 探讨补肾活血方对血管性痴呆小鼠学习记忆能力及自由基代谢的影响.方法 采用脑缺血再灌注法复制血管性痴呆小鼠模型,对补肾活血方与补肾方、活血方三组及对照组、模型组小鼠水迷宫法行为学及脑海马超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化进行对比观察.结果 与对照组比较,模型组小鼠学习与记忆能力下降,表现为游全程时间延长,错误次数增加(P＜0.01),脑海马SOD活性明显降低,MDA含量明显升高(均P＜0.01);与模型组比较,各治疗组学习成绩和记忆成绩均有明显提高(P＜0.01),脑海马SOD活性明显升高,MDA含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01);各治疗组比较,补肾活血组的学习成绩与记忆成绩以及改善SOD活性和MDA含量方面均优于其他治疗组(P＜0.05或P＜0.01).结论 补肾中药、活血中药、补肾活血中药均可促进自由基代谢,改善血管性痴呆小鼠学习与记忆能力,且补肾中药与活血中药具有协同作用,补肾活血方疗效显著.     

针灸对SAMP8小鼠皮层神经干细胞增殖分化的影响

目的 探讨针刺、艾灸对快速老化小鼠(SAMP8)皮层NSC增殖分化的影响.方法 选用8月龄SAMP8雄性小鼠随机分为模型组、针刺组、艾灸组,以同龄雄性正常老化小鼠(SAMR1)为对照组.针刺组、艾灸组选用"百会"进行治疗,每天治疗1次,7 d为1个疗程,共治疗3个疗程.对照组和模型组每天在相同时间给予相同方式的抓取.处死前1 w开始给予BrdU腹腔注射,50 mg/kg ;治疗结束后,取皮层,用免疫荧光双标方法检测神经干细胞(NSC)增殖、分化.结果 (1)各组小鼠均存在皮层NSC增殖.与对照组比较,模型组、针刺组、艾灸组阳性细胞数减少(P＜0.01,P＜0.05);但模型组与针刺组、艾灸组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)各组小鼠均存在皮层NSC分化.与对照组相比,模型组NSC分化为神经元较少(P＜0.01,P＜0.05)、分化为胶质细胞较多(P＜0.01,P＜0.05);与模型组相比,针刺组NSC分化为神经元较多(P＜0.05)、分化为胶质细胞较少(P＜0.01,P＜0.05);艾灸组NSC分化为未成熟神经元较多(P＜0.05)、分化为成熟星形胶质细胞(P＜0.01)和少突胶质细胞较少(P＜0.05).结论 针刺、艾灸治疗3个疗程后,主要反映在促进NSC向不同方向分化的差异.其中,针刺主要促进SAMP8皮层NSC向神经元分化,抑制向胶质细胞分化;艾灸主要是促进其向未成熟神经元分化、抑制向成熟星形胶质细胞和少突胶质细胞分化.     

Effects of dihydrotestosterone on synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice

The senescence-accelerated-prone mouse 8 (SAMP8) has been proposed as a suitable, naturally derived animal model for investigating the fundamental mechanisms of Alzheimer's disease (AD). In addition, the serum testosterone levels decrease quickly in the natural growth process of this model. This study investigated the effect of androgen deficiency on the synaptic plasticity of hippocampus in male SAMP8 mice after castration and dihydrotestosterone (DHT) administration. We observed the dendritic spines and synapses using Golgi staining and transmission electron microscope. Androgen deficiency after castration significantly reduced the number of apical dendritic thorns, and the abnormal ultrastructure of excitatory synapses was more obvious. Androgen replacement therapy reversed this change. To explore the protective mechanisms and neurological basis of DHT, we researched the changes of expression of GluN1 subunit-containing N-methyl-d-aspartate receptors (NMDARs) and synaptophysin (SYN), which are closely related to synaptic plasticity. Comparisons were made among results observed with immunohistochemistry techniques, Western blots analysis and RT-PCR analysis. The GluN1 and SYN regulation at the protein and mRNA levels probably be related to the DHT-induced morphological synaptic plasticity. This study will be helpful for understanding the function of androgen, and it provides a valuable theoretical basis about the protective and therapeutic targets of androgen in AD.     

快速老化小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及APP17肽的影响

目的　观察快速老化小鼠SAMP10 (senescenceacceleratedmouse / prone 10 )海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及淀粉样前体蛋白 (APP) 17肽对其表达的影响。　方法　 4月龄的SAMP10小鼠 18只被随机分为模型组和APP17肽治疗组 ,正常对照组采用 9只同月龄的抗快速老化小鼠SAMR1。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽 ,每只每次 0 3 4 μg ,每周 3次 ;模型组和正常对照组给予等量的生理盐水 ;2 8周后成模。然后进行免疫组织化学染色 ,观察各组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的表达。　结果　与正常对照组比较 ,模型组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白TrkA、Akt /PKB和bcl 2阳性染色细胞数分别减少 6 3 %、5 0 %和4 5 %(P <0 0 1) ,经APP17肽治疗后上述各种蛋白的表达明显上调 (P <0 0 5 ) ;而神经生长因子(NGF)和抗cAMP应答元件结合蛋白 (CREB)的表达无明显差异 (P >0 0 5 )。　结论　SAMP10小鼠海马脑区存在神经细胞存活信号转导通路的障碍 ,此改变可能是导致海马神经细胞变性死亡的重要机制 ;而APP17肽能激活这一通路 ,部分纠正这些蛋白的异常表达。     

Evidence for involvement of dysfunctional teeth in the senile process in the hippocampus of SAMP8 mice

In order to evaluate the involvement of dysfunctional teeth in age-related deficits in hippocampal function, we examined the effect of removal of molar teeth (molarless condition) on neuronal degeneration and glial fibrous acidic protein (GFAP) expression in the hippocampus and on learning ability in a water maze test in young, middle-aged, and aged accelerated senescence-prone mice (SAMP8). The molarless condition enhanced an age-dependent decrease in both learning ability and the number of neurons in the hippocampal CA1 subfield and the age-dependent increase in the number and hypertrophy of GFAP-labeled astrocytes in the same subfield. These observations suggest that the molarless condition may be involved in the senile process in the hippocampus in SAMP8 mice.     

益肾化浊方对快速老化小鼠认知功能与海马神经元形态学的影响及机制

目的探讨益肾化浊方对阿尔兹海默病模型快速老化鼠(SAMP)8空间记忆能力、海马神经元形态学的影响及其作用机制。方法将48只9月龄健康雄性SMAP8采用双盲法随机分为SAMP8组、安理申组、益肾化浊方组,每组16只,另取16只SAMR1作为对照组。各组小鼠分别灌胃给予安理申(30 mg/kg)、益肾化浊方(20 g/kg)或等体积0.9%生理盐水,2次/d,连续14 w。分别采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力,尼氏染色观察细胞凋亡情况,电镜观察神经元超微结构,RT-PCR、Western印迹检测β-淀粉样蛋白前体(APP)、早老蛋白(PS1)基因和GSK-3β蛋白表达。结果与对照组比较,SAMP8组游泳总路程、逃避潜伏时间、海马CA1区神经元凋亡数目和APP、PS1基因及GSK-3β蛋白表达量均显著增加(P0.01),穿越平台次数显著减少(P0.01),游泳速度显著降低(P0.01),超微结构损伤明显;与SAMP8组比较,安理申组与益肾化浊方组游泳总路程明显缩短(P0.01),穿越平台次数明显增加(P0.01),游泳速度亦显著加快(P0.01),同时显著减轻神经元超微结构损伤;此外,安理申可显著下调GSK-3β蛋白表达(P0.01),益肾化浊方可显著减少神经元凋亡数目(P0.01),同时下调APP、PS1基因表达(P0.01);组别和训练天数对逃避潜伏时间、总路程、穿越平台次数有明显影响(P0.01)。结论益肾化浊方可有效提高SAMP8的空间记忆能力,抗神经元凋亡并保护神经元超微结构,其作用机制可能与下调APP、PS1基因和GSK-3β蛋白的表达相关。     

电针对SAMP8小鼠海马神经元凋亡蛋白Caspase-3,Caspase-9及凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响及凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响,探讨电针治疗AD的作用机制。方法以SAMP8小鼠为研究对象,依据“补肾通督,醒神益智”的治疗原则,电针“百会”、“涌泉”,每日一次,连续治疗21d。用Morris水迷宫测试小鼠学习记忆能力的变化,评价电针对AD的治疗效应;用免疫组化法检测海马神经元中凋亡蛋Caspase-3、-9及凋亡抑制蛋白XIAP的表达。结果与空白组小鼠相比较,模型组小鼠平均逃避潜伏期明显延长和原平台像限停留时间明显缩短,海马神经元中Caspase-3、-9表达明显增高,XIAP表达明显减少;与模型组小鼠相比较,模针组小鼠治疗后平均逃避潜伏期缩短和原平台像限停留时间延长,学习记忆能力有所提高,海马神经元中Caspase-3、-9表达减少,而XIAP表达增高。结论电针对AD治疗效应的发挥可能与抑制凋亡蛋白表达和增加凋亡抑制蛋白的表达两个环节,抑制细胞凋亡线粒体途径的级联反应,减少细胞凋亡有关。     

间歇低氧对大鼠海马神经细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的发病特征,建立大鼠间歇性低氧(IH)模型,观察IH后大鼠海马CA1区神经细胞线粒体自噬及相关蛋白的表达。方法 72只雄性Wistar大鼠随机分为对照组36只和间歇低氧(5%IH)组36只,对照组向低氧箱内持续注入压缩空气,5%IH组每天放入低氧箱内IH暴露7h,模型完成后分别于1、3、5、7、10和14d采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞线粒体超微结构的改变;免疫组织化学法检测Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果与对照组比较,5%IH组3d开始出现线粒体超微结构的明显改变,可见线粒体自噬体形成;1、3、5、10和14dBeclin-1及LC3蛋白表达均明显升高(P<0.05),于10d达高峰(P<0.05),14d开始下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IH早期可诱导大鼠海马神经细胞线粒体发生自噬及自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达。     

神经肽Y对癫痫大鼠海马齿状回内FOS蛋白表达的影响

采用海人藻酸（ＫＡ）癫痫模型,观察侧脑室内注射神经肽Ｙ（ＮＰＹ）对癫痫大鼠海马齿状回内ＦＯＳ蛋白表达的影响,结果发现脑室内注射ＮＰＹ后海马齿状回内ＦＯＳ蛋白的表达较对照组降低,有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。认为ＮＰＹ能抑制ＦＯＳ蛋白的表达,具有抗癫痫作用。     

卡托普利和氯沙坦对血管性痴呆模型大鼠海马神经元凋亡和蛋白表达的影响

目的 观察卡托普利和氯沙坦对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区神经元凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨卡托普利和氯沙坦抗脑缺血损伤改善VD的作用机制.方法 取SD大鼠,采用不同时间点分别结扎左、右颈总动脉建立VD模型,将建模成功大鼠随机分为卡托普利组(卡托普利,2.5 mg/kg)、氯沙坦组(氯沙坦,2.0 mg/kg)、模型组(生理盐水)和假手术组(生理盐水),每组lo只,灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药4w后,用TUNEL法检测各组海马神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其Bcl-2及Bax蛋白表达情况.结果 模型组大鼠海马可见大量凋亡神经元;模型组Bcl-2及Bax蛋白表达明显增加,与假手术组比较差异均有显著意义;而卡托普利组和氯沙坦组大鼠凋亡神经元和Bcl-2及Bax蛋白表达有明显改善.结论 卡托普利及氯沙坦均可通过减少海马神经元凋亡,影响Bcl-2及Bax蛋白表达来改善VD模型大鼠学习记忆能力.     

去铁酮对脑缺血再灌注大鼠海马区铁跨膜转运蛋白表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后去铁酮(DFP)对铁跨膜转运蛋白包括铁跨膜转入蛋白和铁跨膜转出蛋白表达的影响。方法将48只大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组(I/R组)和去铁酮(DFP)+脑缺血再灌注组(DFP+I/R组)。各组大鼠术前1 h预处理灌胃,再行大脑中动脉线栓法脑缺血再灌注模型制备术,术后连续灌胃给药2天。术后72 h采用Longa神经行为学评分标准记录大鼠活动;普鲁士蓝染色检测海马区铁聚集情况;Western blot检测各组大鼠海马组织铁跨膜转运蛋白的表达,包括铁跨膜转入蛋白:转铁蛋白受体(TFR)和二价金属离子转运体1(DMT1);铁跨膜转出蛋白:膜铁转运蛋白(Fpn)、膜铁转运辅助蛋白(Heph)、人类猫白血病C亚类病毒受体(FLVCR)和胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)。结果与I/R组比较,DFP+I/R组神经行为学评分显著下降(P0.01),神经元内铁聚集颗粒明显减少,TFR和DMT1蛋白表达明显减少(P0.05或P0.01),Heph、FLCVR和BCRP蛋白表达明显增加(P0.05或P0.01)。结论去铁酮可以下调铁跨膜转入蛋白TFR和DMT1的表达,上调铁跨膜转出蛋白Heph、FLVCR和BCRP的表达,促进血红素铁和非血红素铁外排,降低脑铁沉积,从而减轻脑缺血再灌注后神经损伤,改善疾病预后。