应用环磷酰胺构建C57BL/6J小鼠免疫抑制模型

背景：在免疫增强剂的研究中,常用到免疫抑制模型,如何建立免疫抑制模型成为免疫增强剂作用评价的关键。目的：应用环磷酰胺构建C57BL/6J小鼠免疫抑制模型。方法：将小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺50mg/kg5d组,环磷酰胺80mg/kg3d组,环磷酰胺80mg/kg5d组,环磷酰胺100mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg隔天给药组。正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.1mL,连续5d。环磷酰胺50mg/kg5d组,环磷酰胺80mg/kg3d组,环磷酰胺80mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg5d组小鼠分别以环磷酰胺50,80,80,100mg/kg腹腔注射连续5,3,5,5d。环磷酰胺100mg/kg隔天给药组小鼠腹腔注射100mg/kg环磷酰胺,隔天1次,共注射3次。结果与结论：与正常对照组比较,腹腔注射环磷酰胺可导致小鼠外周血中CD3＋T,CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T细胞明显下降（P〈0.05）;谷丙转氨酶（除环磷酰胺50mg/kg5d、80mg/kg3d组）、谷草转氨酶、尿素显著升高（P〈0.05）,其中环磷酰胺80mg/kg5d组、环磷酰胺100mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg隔天给药组对肝肾功能的影响更为明显。提示腹腔注射环磷酰胺可建立CD3＋T,CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T细胞明显下降的免疫抑制模型,其中以环磷酰胺50mg/kg5d和80mg/kg3d方式对肝肾功能的损伤较小。     

CD4~+ CD25~+ T细胞在脂多糖诱导多器官功能障碍综合征小鼠中的保护作用研究

目的探索CD4+CD25+T细胞在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)小鼠中的作用。方法选择雄性BALB/c小鼠,以LPS 9.0 mg/kg腹腔注射制备小鼠MODS模型作为建模组(60只),对照组小鼠(10只)同法注射0.9%氯化钠注射液,应用流式细胞术在第2、5天分别检测两组小鼠体内CD4+CD25+T细胞水平;选择180只小鼠,于-2 d分别腹腔注射磷酸盐缓冲液、IgG1及200μg Anti-CD25 mAb,再于0 d注射LPS分别建立LPS组、IgG1+LPS组和Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠模型,每组60只,计算各组CD4+CD25+T细胞百分比,并取各组小鼠肺脏组织行HE染色,观察组织细胞学改变;再建立LPS组小鼠54只,IgG1+LPS组小鼠34只,Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠32只,观察3组小鼠的生存率。结果建模组小鼠CD4+CD25+T细胞比例与对照组相比,在2 d时下降(t=2.873,P=0.006),在5 d时上升(t=2.963,P=0.004)。Anti-CD25 mAb+LPS组注射LPS后2 d、5 d CD4+CD25+T细胞比例均下降,与其余两组比较差异均有统计学意义(P均0.01)。肺组织HE染色结果提示中和CD4+CD25+T细胞会加重LPS诱导MODS小鼠的肺部损伤,并增加小鼠的死亡率。结论 CD4+CD25+T细胞在LPS诱导的MODS中起保护作用。     

不同剂量环磷酰胺对正常ICR小鼠外周血象的影响

目的:探讨制备白细胞减少症ICR小鼠模型时环磷酰胺(CTX)的给药剂量。方法:96只正常ICR小鼠分为CTX80、CTX100、CTX120、CTX150和CTX300 5组,前4组用CTX 80、100、120和150 mg/kg,每天1次,连续3 d腹腔注射;第5组CTX 300 mg/kg单次腹腔注射,观察给药前和给药后不同时间外周血象的变化。结果:CTX首次注射后4 d外周血白细胞数检测值最低,在CTX80、CTX100、CTX120、CTX150和CTX300组分别为CTX前检测值的35.0%、26.7%、12.6%、12.7%和27.9%,表明CTX80组CTX剂量偏小,白细胞数最低值30%,而CTX120和CTX150对造血损伤太重。结论:连续3 d每天1次腹腔注射CTX 100 mg/kg可制备较理想的化疗ICR小鼠模型。     

淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的:观察验方淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响。方法:实验于2005-09/10在三峡大学医学院天然药物实验室完成。①选用昆明系雄性小鼠30只,鼠龄三四个月,体质量(20±2)g。将昆明系雄性小鼠随机分为3组:空白对照组、模型组和中药复方治疗组,每组10只。②空白对照组:实验进程中正常饲养不作任何处理;模型组:腹腔内注射80mg/kg环磷酰胺造成免疫力低下模型,1次/d,同时灌服生理盐水25mL/(kg·d);中药复方治疗组:腹腔内注射80mg/kg环磷酰胺造成免疫力低下模型,1次/d,同时灌胃淫羊藿、鹌鹑复方粉剂溶解液(复方粉末来源于淫羊藿、鹌鹑复方胶囊,由三峡大学第一临床医学院和长阳县人民医院制备,其主要成分为淫羊藿、鹌鹑、肉苁蓉等中药材。淫-鹑胶囊为医院制剂,2g/粒)25g/(kg·d)。3组均连续干预10d。③用药10d后,取其脾制成脾细胞悬液,采用流式细胞仪检测脾组织T细胞亚群。④组间计量结果差异比较采用t检验。结果:30只小鼠均进入结果分析。①模型组小鼠脾脏CD3 ,CD4 T细胞亚群百分比和CD4 /CD8 明显低于空白对照组[(36.95±2.17)%,(26.27±2.58)%,1.61±0.21;(47.11±1.72)%,(36.14±1.95)%,1.89±0.12,P<0.05～0.01];中药复方治疗组明显高于模型组[(44.04±2.02)%,(28.20±1.37)%,2.23±0.11,P<0.05～0.01]。②模型组小鼠脾脏CD8 T细胞亚群百分比明显低于空白对照组[(16.34±1.72)%,(19.16±2.02)%,P<0.05],高于中药复方治疗组[(12.65±1.12)%,P<0.01]。结论:淫羊藿、鹌鹑复方能够显著改善免疫力低下小鼠的免疫功能。     

免疫抑制大鼠MRSA定植模型的构建

目的应用环磷酰胺(CTX)构建免疫抑制大鼠耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鼻黏膜定植模型。方法将Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,雌雄各半。模型组大鼠在细菌定植前3d连续肌内注射CTX(40mg/kg),造成大鼠免疫抑制,红霉素软膏处理大鼠鼻腔固有菌群,通过滴鼻方式滴入10μL新鲜MRSA悬液,连续滴注3d。对照组大鼠鼻腔红霉素软膏处理后连续3d滴入10μL的新鲜MRSA悬液。免疫抑制前后分别对模型组大鼠外周血血象及免疫学指标进行监测,并且对免疫抑制及细菌定植后大鼠鼻黏膜组织进行检测。结果模型组大鼠肌内注射CTX 6d后(CTX组),与肌内注射CTX前1d(空白组)比较发现,大鼠外周血血象,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞,B淋巴细胞,以及NK细胞较给药前均明显下降(P0.01)。小剂量高浓度的MRSA悬液鼻腔滴注,细菌定植一段时间后,经免疫组化染色可见金黄色葡萄球菌分布于鼻黏膜组织中。结论成功构建了免疫抑制大鼠MRSA定植模型,该模型可用于进一步研究宿主免疫抑制状态对MRSA毒力及耐药性的影响及机制。     

夏枯草提取物对小鼠T淋巴肿瘤细胞EL-4原位凋亡的干预作用

目的:观察夏枯草提取物体内抗肿瘤的活性,初步分析其抑瘤的作用途径。方法:实验于2005-04/11在郑州大学肿瘤研究中心实验室完成。选择BALB/C小鼠50只,建立小鼠T淋巴瘤细胞EL-4肿瘤模型。按随机数字表法随机分为5组,每组10只,腹腔注射给药。①夏枯草400,200,100mg/(kg·d)组小鼠分别注射夏枯草提取物400,200,100mg/(kg·d),连续给药8d。②环磷酰胺组小鼠注射环磷酰胺100mg/(kg·d),仅第1天给药。③阴性对照组小鼠注射等容量无菌生理盐水,连续注射8d。观察夏枯草提取物对荷瘤小鼠的抑瘤率以及对平均生存时间的影响。肿瘤组织病理学切片苏木精-伊红染色后进行形态学观察;应用DNA琼脂糖凝胶电泳法和原位末端标记法检测肿瘤细胞的凋亡情况,计数1000个癌细胞中的表达阳性数作为凋亡指数。结果:50只小鼠全部进入结果分析。①各组小鼠的抑瘤率比较:夏枯草100,200,400mg/(kg·d)组及环磷酰胺组的抑瘤率均显著高于阴性对照组[22.70%,67.75%,28.44%,91.09%,0(P<0.05)],夏枯草200mg/(kg·d)组抑瘤率最大,400mg/(kg·d)组反而降低。②各组小鼠的生存期比较:环磷酰胺及夏枯草100,200,400mg/(kg·d)组荷瘤小鼠的生存期均显著长于阴性对照组[(53.6±4.9,27.8±3.9,34.1±3.5,28.4±4.4,23.1±3.5)d(P<0.05)]。夏枯草400mg/(kg·d)组对荷瘤小鼠生存期的延长作用最为明显。③各组小鼠肿瘤EL-4细胞的凋亡指数比较:夏枯草200mg/(kg·d)组小鼠肿瘤细胞凋亡指数显著高于阴性对照组[10.86±1.73,2.31±0.94(P<0.05)]。结论:夏枯草提取物具有较强的体内抗肿瘤作用,促进肿瘤细胞凋亡可能是其作用途径。但其作用并不呈剂量依赖性,夏枯草200mg/(kg·d)组疗效最为显著,而400mg/(kg·d)剂量组可能打破了肿瘤细胞与小鼠机体之间的免疫平衡,反而造成疗效下降。     

静脉输注过氧化氢溶液上调小鼠脾脏和外周血CD4+Fox03+调节性T细胞

背景:现已证实,天然生成的调节性T细胞在维护机体免疫稳态、抑制炎性反应、抗移植排斥、抑制抗肿瘤免疫应答以及防治自身免疫病中都有重要的功能和作用.目的:探讨静脉输注过氧化氢对BALB/c小鼠CD4+CD25+Foxo3+调节性T细胞的影响.方法:取BALB/c小鼠12只,随机分为两组.H2O2处理组小鼠尾静脉注射含有H2O2的PBS;PBS组小鼠静脉注射无菌PBS.分别在注射2周后处死小鼠,采集小鼠外周血、脾脏和胸腺,采用流式细胞仪检测其中CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例.结果与结论:H2O2处理组小鼠外周血和脾脏CD4+Foxp3+T细胞比例、CD4+Foxp3+/CD4+细胞比例均高于对照组小鼠(P<0.05).提示静脉注射H2O2能上调小鼠外周血和脾脏内CD4+Foxp3+调节性T细胞的比例.     

玉竹多糖对衰老模型鼠细胞及体液免疫功能的影响

目的:观察玉竹多糖对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠免疫功能的影响,分析玉竹多糖抗衰老的可能作用途径。方法:实验于2004-07/2005-05在锦州医学院免疫实验室完成。取昆明小鼠50只,按随机数字表法分为5组,即正常对照组、衰老模型组和0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组。除正常对照组外,其余各组每只颈背部皮下注射50g/LD-半乳糖0.5mL,连续6周。同时0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组分别腹腔注射0.5g/kg,1g/kg,2g/kg,0.5mL的玉竹多糖给予治疗,正常对照组和衰老模型组腹腔注射生理盐水0.5mL/只。6周后,将小鼠称重并麻醉剖取小鼠胸腺和脾脏,计算脾指数穴mg/g雪=脾质量穴mg雪/小鼠体质量穴g雪,同法计算胸腺指数。应用MTT法测定脾淋巴细胞转化指数。用免疫荧光法测定脾T淋巴细胞亚群细胞数,观察其对免疫功能的影响。结果:50只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①与正常对照组比较,衰老模型组小鼠胸腺指数和脾指数显著下降(P<0.05～0.01);脾T,B淋巴细胞转化刺激指数显著降低(P<0.05～0.01);CD8 细胞数减少穴P<0.01雪,CD4 /CD8 比值增加穴P<0.01雪。②与衰老模型组比较,0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组小鼠的脾指数、胸腺指数、B淋巴细胞转化指数及CD8 细胞数均显著提高(P<0.05～0.01),而CD4 /CD8 比值显著降低穴P<0.01雪,但3个剂量组之间差异无显著性意义穴P>0.05雪。结论:玉竹多糖可明显改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的细胞及体液免疫功能,提高胸腺指数和脾指数,增加脾T,B淋巴细胞转化刺激指数和CD8 细胞的数量,恢复CD4 /CD8 比值的失衡状态,从而延缓机体的免疫衰老。玉竹多糖不同剂量组间无明显的剂量依赖性。     

环磷酰胺对小鼠急性百草枯中毒细胞因子的影响

目的:探讨环磷酰胺处理后对小鼠急性百草枯中毒细胞因子的影响。方法:100只小鼠,雌雄各半,随机分为4组,分别为生理盐水组(N组)、百草枯对照组(P组)、环磷酰胺对照组(C组)及环磷酰胺干预组(T组),N组给予生理盐水×2d,P组给予百草枯20 mg/kg染毒1次,第2天给予生理盐水,C组给予环磷酰胺80mg/kg×2d,T组先给予百草枯20mg/kg染毒1次,2h后给予环磷酰胺80mg/kg×2d,给药方式均为腹腔注射。给药后第1、3、5天检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的含量,及血清中的TNF-α及IL-6的含量。组间及组内比较采取单因素方差分析。结果:百草枯染毒后肺组织MPO的含量短期内显著升高,第3天时开始逐渐下降;T组小鼠MPO第1天即开始显著下降,第3、5天时显著低于中毒组,但仍高于正常;百草枯染毒后小鼠血清IL-6及TNF-α含量很快达峰值,随后逐渐下降;T组小鼠血清IL-6及TNF-α含量显著低于P组,第5天时与P组比较差异无统计学意义。结论:环磷酰胺干预可通过抑制炎性细胞因子的分泌减轻炎症反应。     

霉酚酸酯诱导Balb/c小鼠调节性T细胞的分化和增殖

目的:观察霉酚酸酯对Balb/c小鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)分化和增殖的影响,进一步探讨其可能的免疫耐受诱导机制。方法:取8周龄的SPF级Balb/c小鼠24只,随机分为3组,霉酚酸酯组(MMF组):每只灌胃霉酚酸酯40mg/(kg·d),环孢素组(CsA组):每只灌胃CsA10mg/(kg·d),对照组:灌胃每天予等体积生理盐水。3周后眼眶静脉取血,无菌条件下分离脾脏,制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾细胞CD4+CD25+Treg细胞,免疫组化法检测小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达。结果:霉酚酸酯组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(6.35±0.09)%和(11.62±1.10)%,CsA组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(2.57±0.09)%和(5.46±0.75)%,对照组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(4.64±0.13)%和(7.61±0.73)%,差异均有显著性(P<0.01)。霉酚酸酯组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有显著性(P<0.01),CsA组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显低于对照组。结论:霉酚酸酯能够明显诱导Balb/c小鼠体内CD4+CD25+Treg细胞的增殖,并能提高Foxp3蛋白的表达,有利于免疫耐受的形成,其免疫抑制机制与CsA不同。