蛋白激酶C抑制剂在防治家兔脑血管痉挛中对核因子-кB的影响

目的探讨蛋白激酶C抑制剂对核因子-кB在实验性家兔脑血管痉挛中表达变化的影响机制及对脑血管痉挛的防治作用.方法中国白兔60只,体重1.5～2 kg,其中45只经枕大池2次(间隔72 h)注入自体动脉血(1 ml/kg)制成脑血管痉挛模型,再随机分为4组(1)单纯2次注血组(15只);(2)给药组(15只),动物每次经枕大池注血前注射蛋白激酶抑制剂等渗盐水稀释液0.1 ml,剂量为100 μg/kg;(3)等渗盐水组(15只),每次经枕大池注血前注射等量等渗盐水代替蛋白激酶抑制剂;(4)假穿刺组(15只).于第4、7、10天将动物分批处死,取基底动脉进行形态学观察,应用免疫组化、蛋白印迹及电泳迁移率改变分析等方法检测核因子-кB、кB抑制蛋白活性表达变化,评价不同剂量蛋白激酶抑制剂对其影响程度.结果单纯2次注血组家兔较假穿刺组在4～10 d基底动脉出现明显管腔狭窄、炎性浸润等改变,7 d时最明显;核因子-кB的活性于4～10 d也明显增高,与炎性变化一致;抑制蛋白кB表达下降,与核因子-кB呈负相关.给药组家兔与单纯注血组相比,基底动脉痉挛程度和炎性浸润明显减轻,抑制蛋白кB表达明显上升,核因子-кB活性下降,而等渗盐水组较单纯注血组则无明显差异.结论蛋白激酶抑制剂不仅能够显著减轻脑血管痉挛的程度,而且可减轻其管壁炎性浸润程度,其作用可能是通过抑制кB抑制蛋白的磷酸化作用减弱核因子-кB的表达来实现的.     

基于NF-κB信号通路分析桔梗多糖对咳嗽变异性哮喘老龄大鼠的干预作用

目的 研究基于核转录因子(NF)-κB信号通路分析桔梗多糖(PGP)对咳嗽变异性哮喘(CVA)老龄大鼠的干预作用。方法 选取SD雄性老龄大鼠45只，随机分为空白组、模型组、低剂量桔梗多糖组与高剂量桔梗多糖组，模型组老龄大鼠15例，在建模中死去5只，其余3组各10只。检测各组咳嗽次数、炎性细胞数，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP组织抑制因子(TIMP)-1、嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)水平，Western印迹检测转化生长因子(TGF)-β1、NF-κBp65、抑制蛋白(IκB)蛋白表达。结果 模型组、低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达明显高于空白组，IκB蛋白表达明显低于空白组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达均明显低于模型组，IκB蛋白表达明显高于模型组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组咳嗽次...     

复方黄柏液通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路逆转大鼠溃疡性结肠炎

目的 探讨复方黄柏液逆转溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法 免疫复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，将50只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、复方黄柏液组，治疗14 d后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清及结肠黏膜白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平，Western印迹检测大鼠结肠黏膜磷酸化核转录因子(NF)-κB、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平。结果 复方黄柏液可有效抑制p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB蛋白的表达，通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的异常激活减轻炎症反应。结论 复方黄柏液能通过调节NF-κB介导PI3K/Akt信号通路逆转溃疡性结肠炎的炎性病变，化瘀解毒法是其起效关键。     

厄贝沙坦与咪达普利对高血压大鼠心肌核因子-κB的影响

目的比较自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠心肌核因子-κB的表达以及厄贝沙坦和咪达普利对SHR心肌核因子-κB的影响.方法将21只雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分成3组,每组7只.其中2组分别灌喂厄贝沙坦50 mg/kg/d、和咪达普利3 mg/kg/d;另一对照组给正常饮水,并与雄性同周龄Wistar Kyoto大鼠(WKY)6只比较.共13周,免疫组织化学方法检测四组大鼠心肌核因子-κB的表达.结果 SHR对照组心肌核因子-κB表达明显高于WKY组;用厄贝沙坦和咪达普利后核因子-κB表达下降、血压均显著抑制,明显低于高血压对照组(P<0.01),两治疗组的心脏湿重/体重(HW/BW)也显著低于对照组(P<0.01).结论厄贝沙坦和咪达普利在抑制血压和左室肥厚的同时也明显抑制心肌核因子-κB的激活,提示AT1拮抗剂和ACEI对核因子-κB的抑制在抗高血压靶器官损伤过程中起一定的作用.     

NLRP3炎症小体及其相关炎症因子在高脂血症颈动脉样硬化家兔中的表达

目的 探究高脂血症颈动脉粥样硬化家兔NLRP3炎性小体及相关炎症因子的表达水平。方法将20只新西兰大白兔随机分为对照组和模型组,每组10只,适应性喂养一周后模型组行颈动脉空气干燥术,并予高脂饲料饲喂养,对照组予普通饲料喂养。4周后处死2组家兔,取血清及颈动脉组织进行相关检测并进行统计分析。结果 模型组血清胆固醇、三酰甘油较正常组显著上升;模型组颈动脉组织蛋白p-P65核因子-κB(NF-κB)、NLRP3、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)及白介素-18(IL-18)较正常值组表达显著上升,差异有统计学意义(P均0.001);模型组血清蛋白NF-κB、IL-1β及IL-18的表达较正常值组表达显著上升,差异有统计学意义(P均0.001)。结论高脂血症颈动脉粥样硬化家兔模型存在NLRP3及进相关炎症因子如caspase-1、IL-1β和IL-18的高表达,且活化NLRP3炎症小体促进动脉粥样硬化(AS)机制可能与NF-κB磷酸化有关。     

大豆肽通过抑制氧化应激和NF-κB信号通路保护力竭运动大鼠心脏功能

目的观察大豆肽对力竭运动大鼠心脏的保护功能,并探讨其抑制氧化应激和核因子(NF)-κB信号通路相关分子信号机制。方法 50只大鼠随机分为正常对照组、力竭运动组及大豆肽高、中、低组,每组10只,采用强迫游泳法建立大鼠力竭运动模型,同时给予相应剂量的大豆肽进行干预,每天1次,连续4 w。末次力竭运动后,取大鼠血清,采用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及CK同工酶(CK-MB)等含量;取大鼠心肌组织采用RT-PCR和Western印迹法检测核因子(NF)-κB、NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)-β及NF-κB抑制蛋白(IκB)-α等因子m RNA和蛋白表达水平。结果与力竭运动组比较,大豆肽高组可显著增加力竭运动大鼠血清SOD、GSH-Px及CAT活性,降低MDA、LDH、CK及CK-MB含量(P<0. 05,P<0. 01);显著下调心肌组织NF-κB、IKK-βm RNA和蛋白表达水平,显著上调IκB-αm RNA和蛋白表达水平(P<0. 05,P<0. 01)。结论大豆肽对力竭运动大鼠心脏具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化应激和抑制NF-κB信号通路有关。     

阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经元炎性损伤的保护作用研究

目的观察阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经炎性反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(1L-1β)、核因子κB(NF-κB)/p65核蛋白和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKB-α)总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用。方法取孕龄17~18 d SD大鼠的海马神经元,将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20μmol/L的Aβ_(25-35);(2)低剂量阿司匹林组:加入终浓度为50μmol/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(3)高剂量阿司匹林组:加入终浓度为100μmoL/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(4)空白对照组:加入等量维持培养基。继续培养48 h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Western-Blot法检测NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β的含量明显升高(P0.01),NF-κB/p65核蛋白和pIKB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P0.01);(2)与Aβ组比较,低剂量和高剂量阿司匹林均可降低TNF-α和IL-1β的含量(P0.05),并减少NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平(P0.05);(3)低剂量和高剂量阿司匹林组两组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论阿司匹林可能通过抑制NF-KB的激活来减轻Aβ_(25-35)诱导神经元的炎性损伤。     

厄贝沙坦与咪达普利高血压大鼠心肌核因子—κBr jykt

目的：比较自发性高血压大鼠（SHR）和WKY大鼠心肌核因子－κB的表达以及厄贝沙坦和咪达普利对SHR心肌核因子－κB的影响。方法 将21只雄性自发性高血压大鼠（SHR）随机分成3组，每组7只。其中2组分别灌喂厄贝沙坦50mg/kg/d，和咪达普利3mg/kg/d，另一对照组给正常饮水，并与雄性同周龄Wistar Kyoto大鼠（WKY）6只比较。共13周，免疫组织化学方法检测四组大鼠心肌核因子－κB的表达。结果 SHR对照组心肌核因子－κB表达明显高于WKY组；用厄贝沙坦和咪达普利后核因子－κB表达下降，血压均显著抑制，明显低于高血压对照组（P＜0．01），两治疗组的心脏湿重／体重（HW／BW）也显著低于对照组（P＜0．01）。结论 厄贝沙坦和咪达普利对抑制血压和左室肥厚的同时也明显抑制心肌核因子－κB的激活，提示AT拮抗剂和ACEI对核因子－κB的抑制在抗高血压靶器官损伤过程中起一定的作用。     

硫化氢对自发性高血压大鼠血管炎症反应的调节作用

目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对自发性高血压大鼠(SHR)血管炎症反应的调节作用.方法 4周龄Wistar-Kyoto(WKY)雄性大鼠和SHR雄性大鼠分为4组:WKY大鼠对照组、SHR对照组、SHR+硫氢化钠(NaHS,H2S供体)组及SHR+炔丙基甘氨酸(PPG,H2S生成关键酶抑制剂)组,饲养至9周.尾容积法测清醒时大鼠血压,免疫组织化学方法检测主动脉内皮细胞膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和核转录因子抑制因子-α(IκB-α)的蛋白表达,原位杂交分析检测主动脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达.结果 SHR对照组血压显著高于WKY对照组(P<0.05),主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65明显高(P均<0.01),胞浆IκB-α蛋白表达明显低(P<0.01).SHR+NaHS组血压显著低于SHR对照组,主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达明显低(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达明显增高(P<0.05),SHR+PPG组主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达更高(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达显著低(P<0.05).结论 H2S可通过抑制SHR血管炎症发挥抗高血压效应.H2S的抗血管炎症效应可能通过上调IκB-α的表达,降低NF-κB p65的表达,抑制ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达实现.     

Genistein对内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和核因子κB表达的影响

目的探讨植物雌激素Genistein对氧化型低密度脂蛋白干预的内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和核因子κB表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)干预内皮细胞的基础上,不同浓度的Genistein(10、50和100nmol/L)孵育,MTT法观察Genistein对细胞活力的影响,实时定量逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达,Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶和核因子κB蛋白的表达。结果与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)明显抑制细胞活力,下调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,上调核因子κB蛋白表达(P0.05);Genistein明显增高细胞活力,上调内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,抑制核因子κB蛋白表达(P0.05),且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 Genistein能够促进内皮型一氧化氮合酶的表达,抑制核因子κB的表达。     

杞蓟制剂对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织核转录因子-κB/IκB的影响

目的 观察非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织P65(NF-κB亚型)、核转录因子-κB抑制因子(IκB)-α(IκB亚型)蛋白和mRNA表达情况及杞蓟制剂对其影响.方法 采用高脂饮食复制大鼠NASH模型.实验分正常组对照、模型组、杞蓟制剂组、复方蛋氨酸胆碱片组.测定肝组织P65、IκB-α蛋白和mRNA的表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠肝组织P65、IκB-α蛋白和mRNA表达明显增强(P＜0.01),且P65蛋白主要在胞核分布;与模型组相比,杞蓟制剂组大鼠肝组织P65、IκB-α蛋白和mRNA的表达明显降低(P＜0.05).复方蛋氨酸胆碱片组大鼠肝组织P65、IκB-α蛋白和mRNA的表达虽有所降低,但与模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NF-κB蛋白和mRNA表达增强及NF-κB蛋白活化增强参与了NASH的发病.杞蓟制剂能够抑制NF-κB(P65)蛋白和mRNA的表达,从而能防治NASH.     

羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清炎性因子及心肌组织NF-κB表达的影响

目的探讨羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清炎性因子及心肌组织核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)、尼莫地平组(阳性药对照组,20 mg/kg)、羟基红花黄色素A高剂量组(20 mg/kg)、羟基红花黄色素A低剂量组(10 mg/kg),每组10只。所有大鼠均灌胃给药,每日1次。给药14 d后,以结扎SD大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型。各组大鼠缺血30 min再灌注120 min后,检测各组大鼠心脏功能,并采集颈总动脉血液,测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子,同时取大鼠心肌组织,光镜下观察心肌组织结构,并采用Western Blotting法检测心肌NF-κB、NF-κB抑制蛋白激酶α(IκBα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(Iκκβ)等表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠左室舒张末期压力(LVEDP)升高,左室收缩压(LVSP)降低,血清TNF-α、IL-6、CRP炎性因子水平升高,心肌组织NF-κB蛋白表达升高,IκBα、Iκκβ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,羟基红花黄色素A高剂量组、低剂量组及尼莫地平组大鼠LVEDP降低,LVSP升高,血清TNF-α、IL-6、CRP炎性因子水平均降低,心肌组织NF-κB蛋白表达均降低,IκBα、Iκκβ蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控炎性因子及NF-κB信号通路有关。     

免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓单个核细胞NF-κB表达变化

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制中的作用.方法:将35只BALB/C小鼠随机分为2组,其中正常对照组15只,模型组20只.复制免疫介导AA小鼠模型,采用Q-PCR、免疫组织化学等方法检测小鼠骨髓单个核细胞NF-κB mRNA水平、蛋白表达及活性变化.结果:与正常对照组相比,AA小鼠骨髓单个核细胞NF-κB mRNA水平未见明显改变(P>0.05),NF-κB/p65蛋白表达增加,而p-κBα表达明显下降(P<0.01).结论:NF-κB蛋白表达异常及活性改变在AA的发病机制中具有一定的意义.     

沙利度胺对大鼠急性胰腺炎肺损伤核因子-κB信号通路的作用

目的观察沙利度胺抗大鼠急性胰腺炎相关性肺损伤的疗效和对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 5%牛磺胆酸钠胰胆管注射制备急性胰腺炎模型,治疗组于造模前用沙利度胺100 mg/kg灌胃8 d。观察胰腺和肺组织病理学改变,检测肺组织的湿/干比率、血淀粉酶及血氧分压水平,Western blotting检测肺组织NF-κBp65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达,RT-PCR检测肺组织NF-κBp65、TNF-αmRNA表达。结果沙利度胺治疗组大鼠胰腺组织及肺组织病理学评分显著低于模型组(P0.01);其肺组织的湿/干比率、血淀粉酶、NF-κBp65和TNF-αmRNA及蛋白表达,均显著低于模型组(P0.01);而血氧分压水平和IκBα蛋白表达高于模型组(P0.01)。结论沙利度胺可以有效地抑制急性胰腺炎相关性肺损伤的进展,通过抑制NF-κB信号通路对TNF-α表达的诱导可能是其发挥作用的重要机制之一。     

基于NF-κB通路探讨鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎的保护作用机制

目的观察鹿角壮骨胶囊对兔膝骨关节炎模型核因子(NF)-κB通路的影响,探讨其对膝骨关节炎的保护作用机制。方法采用木瓜蛋白酶右侧膝关节腔内注射诱导建立兔膝骨关节炎模型,将24只长耳大白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予鹿角壮骨胶囊0.3 g/(kg·d)灌胃,治疗4 w后,采用Western印迹法检测各组膝关节滑膜组织中NF-κB抑制蛋白(IκB)α、NF-κB p65、骨桥蛋白(OPN)的表达,采用免疫组化法观察各组膝关节软骨组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(HIF)-2α、NF-κB p65的阳性表达水平。结果 Western印迹结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节滑膜IκBα、NF-κB p65、OPN的蛋白相对表达量明显升高(P<0.05),而治疗组IκBα、NF-κB p65、OPN的蛋白相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组兔膝关节软骨VEGF、HIF-2α、NF-κB p65的表达明显升高(P<0.05),而治疗组VEGF、HIF-2α、NF-κB p65的表达明显低于模型组(P<0.05)。结论鹿角壮骨胶囊可能通过抑制NF-κB信号通路的激活发挥缓解膝骨关节炎的作用。     

姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少类风湿关节炎破骨细胞生成

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞生成的影响及可能机制。方法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导培养为破骨细胞,不同浓度Cur(0、2.5、5和10μmol/L)进行干预。培养14 d后行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色标记成熟破骨细胞并计数;Western blot法检测各组细胞中核因子-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达;Western blot法检测细胞质和细胞核中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的表达。结果 Cur2.5、5和Cur 10μmol/L组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)分别为103.00±4.36、89.33±4.93和67.33±4.16,与Control组146.67±6.11相比均明显减少(P0.05);IκBα蛋白表达水平明显升高,p-IκBα的表达水平明显下降(P0.05);细胞质中NF-κB p65表达水平明显升高,细胞核中NF-κB p65表达水平明显下降(P0.05)。结论姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少RA破骨细胞生成。     

甘草酸抑制PI3K/AKT/NF-κB减轻胶原诱导型类风湿关节炎大鼠炎症反应

目的探讨甘草酸对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核转录因子(NF)-κB轴的影响,阐明甘草酸的抗炎调节机制。方法随机选取雄性SD大鼠分为空白组、模型组、甘草酸低剂量组(60 mg/kg)、中剂量组(80 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)、美洛昔康组(2 mg/kg),每组10只。CIA建模后连续给药6 w,检测动物足跖容积变化;免疫组化法检测脾脏内IKK-α、IκB-α、NF-κBp65蛋白表达;Western印迹法检测关节滑膜PI3K、磷酸化(p)-AKT、p-NF-κBp65蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL)-1β、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果与模型组比较,空白组、美洛昔康组、甘草酸各剂量组足跖部肿胀程度均明显下降;免疫组化法显示空白组、美洛昔康组、甘草酸各剂量组脾脏内IKK-α、IκB-α、NF-κBp65蛋白平均光密度值表达均较模型组明显下调;Western印迹显示与模型组比较,美洛昔康组、甘草酸各剂量组关节滑膜内PI3K、p-AKT、p-NF-κBp65蛋白表达受到不同程度抑制;ELISA结果显示空白组与各给药组血浆IL-1β、CRP、TNF-α表达均明显下调。结论甘草酸可能通过抑制血液中IL-1β、CRP、TNF-α过表达进而抑制PI3K/AKT/NF-κB通路减轻CIA发展。     

微小RNA-206减轻结肠上皮NCM-460细胞炎症反应的机制研究

目的 探究微小RNA(miR)-206对人结肠上皮NCM-460细胞炎症反应及核转录因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 体外培养人结肠上皮NCM-460细胞，根据不同干预手段将其分为Con组、脂多糖(LPS)组、Inhibitor NC+LPS组和miR-206 inhibitor+LPS组，每组3次重复。分别采用实时荧光定量PCR、倒置显微镜、细胞计数试剂盒(CCK)-8、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)对miR-206表达水平、细胞形态、细胞活力、增殖率、凋亡率、炎性细胞因子及相关蛋白表达水平进行分析。结果 与Con组比较，LPS组细胞生长受到抑制，细胞活力及增殖率、IL-10、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达水平均显著降低，而miR-206表达水平、细胞凋亡率、肿瘤坏死因子(TNF)-α、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著增加；与Inhibitor NC+LPS组相比，miR-206 i...     

苦瓜蛋白通过阻止核因子κB核转位抑制炎性因子生成

目的 研究苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠炎症因子核因子κB(NF-κB)蛋白核转位的影响,探讨苦瓜蛋白抗炎的分子机制.方法 40只6周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组、高脂高胆固醇组、高脂高胆固醇苦瓜蛋白组、普食苦瓜蛋白组.12周后眼球采血,ELISA测定血浆中炎性因子NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)及抗炎因子IL-10的水平,免疫组织化学检测主动脉壁IκB表达,RT-PCR和Western blot检测NF-κB和IκB表达.结果 ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后,血液中炎症因子NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平均显著高于普食组(P＜0.01,n=5),但抗炎因子IL-10仍维持较高水平.经苦瓜蛋白干预后,血清中炎症因子水平下降,而抗炎因子IL-10水平并不上升.RT-PCR以及Western blot检测结果表明,苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁细胞核内NF-κB蛋白水平,阻止其核转位.与普食组比较,高脂高胆固醇组IκB被显著降解(0.19±0.05比0.74 +0.15,P＜0.05,n=5),但其经苦瓜蛋白干预后,这种降解作用得到显著的抑制(0.19±0.05比0.36±0.07,P＜0.01,n=5).结论 苦瓜蛋白通过减少IκB降解抑制NF-κB蛋白核转位而发挥抑制炎性因子生成的作用.