骨骺软骨细胞的培养和保存方法

目的：建立大量生产骨骺软骨细胞的培养方法和保存方法，为组织工程骺软骨的培养提供种子细胞。方法：2周龄兔胫骨上端骨骺软骨经机械剪切和化学消化后，接种、培养及液氮冻存。通过显微镜观察其生物学表现，并通过蕃红花“0”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色对其生物学特征进行鉴定。结果：在体外观察到了骨骺软骨细胞从静止、增殖到肥大这个近似体内的生长过程，经多次传代后增殖能力降低，经过冻存的细胞生物学特征不变。蕃红花“0”和Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。结论：我们成功地建立了骨骺软骨细胞的培养和冻存方法，并证明培养出的细胞是骨骺软骨细胞。     

骨骺软骨细胞的培养和保存方法

目的建立大量生产骨骺软骨细胞的培养方法和保存方法,为组织工程骺软骨的培养提供种子细胞。方法2周龄兔胫骨上端骨骺软骨经机械剪切和化学消化后,接种、培养及液氮冻存。通过显微镜观察其生物学表现,并通过蕃红花“O”染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色对其生物学特征进行鉴定。结果在体外观察到了骨骺软骨细胞从静止、增殖到肥大这个近似体内的生长过程,经多次传代后增殖能力降低,经过冻存的细胞生物学特征不变。蕃红花“O”和Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。结论我们成功地建立了骨骺软骨细胞的培养和冻存方法,并证明培养出的细胞是骨骺软骨细胞。     

冻存复苏对胃肿瘤浸润淋巴细胞生物学特性的影响

本文对大胃肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）进行了系列冻存复苏研究，观察其生物学特性的改变，实验证明，ＴＩＬ冻存３０天和３６０天，两者之间其活细胞加嘏率无显著性差异，新鲜分离的ＴＩＬ与冻存一年的ＴＩＬ，其增殖速度没有显著性改变，新鲜培养的ＴＩＬ杀伤活怀与与冻存后培养的ＴＩＬ杀伤活性无特别显著性差别；ＴＩＬ冻存前和冻存后期ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８细胞表型比较，两者无显著改变。此研究为晚期肿瘤患者得到多次有效的     

人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏

背景：牙龈成纤维细胞是牙龈固有结缔组织层中主要的细胞,在许多生理和病理过程中起着重要作用。目的：对人牙龈成纤维细胞进行原代培养、鉴定、冻存及复苏。方法：采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。对人牙龈成纤维细胞进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果与结论：人牙龈成纤维细胞原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学鉴定抗波性蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。牙龈成纤维细胞冻存与复苏成功,细胞经2次传代后生物学性状与原代相似。提示采用组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞及冻存与复苏方法可行。     

冻存时间不同的成年动物肝细胞复苏后对重型肝炎胆红素代谢的效果比较

目的实验比较在液氮中冻存时间长短不同的成年动物肝细胞(adultanimalhepatocytes,AAH)复苏后对人体重型肝炎胆红素代谢的效果,探讨体外生物人工肝支持系统(extracorporealbioartificialliversupportsystem,EBLSS)使用冻存复苏AAH的实际意义。方法采用HE染色镜检肝细胞形态、台盼兰染色计数肝细胞成活率、肝细胞培养并贝克曼生化分析仪检测对重型肝炎胆红素的代谢效果。实验观察液氮中冻存1周、1个月、3个月复苏后的成年小白鼠肝细胞形态、存活率和对重型肝炎胆红素的代谢效果,同时设新鲜分离的肝细胞作对照组。结果冻存1周、1个月的肝细胞在光镜下形态无明显改变,冻存3个月的肝细胞胞质严重丢失;对照组、冻存1周、1个月、3个月的肝细胞成活率分别为91%、83%、76%、35%(与对照组比较,后三者分别P>0.05,P<0.01,P<0.01);四组肝细胞使重型肝炎总胆红素分别下降27.01%、23.02%、19.58%、2.33%,(与对照比较,后三者分别P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论EBLSS以使用新鲜分离的AAH为佳。     

雌性激素对骺生长板软骨细胞周期调节蛋白的作用

背景:长骨干骺端生长板是哺乳动物在生长发育期间实现线性生长的结构基础.激素及生长因子对生长板软骨细胞的调节作用与生长、生长板老化直至完全闭合具有决定性意义.目的:观察雌性激素对骺生长板软骨细胞周期蛋白表达的影响,及其在生长板闭合过程中的作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-07/2005-07在重庆医科大学动物实验中心完成.材料:健康雌性12周龄新西兰白兔30只,平均体质量1.57 kg.方法:30只新西兰白兔性发育前(12周龄)行双侧卵巢切除,4周后(16周龄)随机抽签法分为2组:雌二醇组每周苯甲酸雌二醇肌肉注射,140μg/kg;对照组:每蒯不含雌二醇的等体积火菌棉籽油肌肉注射(1.5 mL/kg).两组动物分别于处理后第4,7,10周(20,23,26周龄)取双侧股骨远端、胫骨近端干骺部分生长板作免疫组织化学染色.主要观察指标:两组动物不同年龄股骨和胫骨末闭合骺生长板软骨细胞细胞周期蛋白D1、P53、P21WAF1/CIP1及P16INK4A蛋白的表达.结果:①雌二醇组雌兔实验后4周相当于性发育早期(20周龄),胫骨近端、股骨远端骺生长板细胞周期蛋白D1表达水平显著高于同年龄期对照组(P<0.05);7周后(23周龄)胫骨近端骺生长板细胞周期蛋白D1表达仍高十对照组雌兔(P<0.05),股骨远端骺生长板细胞周期蛋白D1表达开始降低,与对照组雌兔无显著差异(P>0.05).②实验后4,7周(20-23周龄)雌二醇组雌兔股骨远端和胫骨近端骺生长板软骨细胞P53蛋白表达明显高于对照组(P<0.05).⑧雌二醇组P21WAF1/CIP1的表达增高则出现在实验后7周(23周龄),与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05).④两组雌兔骺生长板P16INK4A蛋白免疫组织化学检测均为阴性.结论:雌二醇具有加速生长板闭合过程的作用,可能与雌性激素长期作用于软骨细胞后诱导细胞周期抑制蛋白如P21WAF1/CIP1、P53有关.     

原代大鼠肝细胞冻存条件探索

目前，哺乳动物原代肝细胞的分离培养技术已被广泛应用于生物医学领域，为降低分离获取肝细胞的成本，提高获得肝细胞的利用率以及保证实验中肝细胞供体的一致性等，建立一种优化的冻存条件被认为是解决上述问题的有效力法。因此，我们以原代大鼠肝细胞为模型，探索简捷、实用的冻存条件，为原代肝细胞，尤其是原代人肝细胞的经济、高效利用奠定基础。１材料与方法１．１主要试剂：肝细胞冻存液Ｉ：ＲＰＭＩ１６４０＋３０％ ＦＢＳ＋双抗＋０．１Ｕ／ｍｌ胰岛素＋２％ＤＭＳＯ；肝细胞冻存液 Ⅱ：ＲＰＭＩ１６４０＋３０％ＦＢＳ＋双抗＋０…     

脐血造血细胞的分离冻存

目的 探讨不同条件对脐血造血细胞回收的影响。方法 运用6％羟乙基淀粉(HES)沉降法分离脐血，以程序降温法冻存脐 血造血细胞。结果 HES两次离心法分离脐血，造血细胞回收率高，活力好，费时短。脐血分离前在4℃或室温下可放置24小时而不影响细胞活力。HES终浓度以1％～2％为宜。以0．9％生理盐水 DMSO做保护剂对脐血造血细胞损伤小。复苏后脐血造血细胞可放置60分钟，洗涤会造成约10％的细胞损失，但能延长放置时间达120分钟以上。结论 HES两次离心法分离脐血简便实用。     

大胚龄人神经干细胞长期冻存后的复苏培养

目的探讨长期冻存后的大胚龄人胚神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的生长及其生物学特性。方法分别于冻存后6、12及24个月,快速解冻复苏胚龄为16～20周的胎脑细胞,采用无血清培养液悬浮培养,观察培养细胞的活性及成球时间,采用免疫细胞化学方法鉴定这些细胞球及其分化成熟后的细胞表面标志。结果培养传代的细胞透亮﹑成球时间短,与取自新鲜胎脑的神经干细胞无明显区别。细胞球Nestin染色阳性,成熟分化后神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及2＇,3＇-环腺苷酸-3＇-磷酸二酯酶（CNPase）抗原呈阳性。结论长期冻存后的人大胚龄神经干细胞仍具有较强增殖能力及多分化潜能。     

低浓度二甲基亚砜冰冻血小板的个性化研究

目的 探讨血小板(PLT)冰冻保存时保护剂二甲基亚砜(DMSO)的最佳浓度.方法 计算机随机选择2009年6月至2011年9月本血站机采室采集的120袋PLT作为研究对象.将不同质量浓度的DMSO作为保护剂加入PLT中,在-80℃条件下进行冰冻保存.检测冰冻前、后及不同离心条件下PLT计数、血浆中PLT第3因子(PF3)、PLT第4因子(PF4)、PLT体积分布宽度(PDW)及P-选择素(CD62P)的含量,并分析PLT的聚集、黏附、血块收缩功能的变化情况.结果 质量浓度为2％与5％的DMSO作为保护剂时,对冰冻PLT的各项功能指标影响不大,差异无统计学意义(P＞0.05).但1％的DMSO作为保护剂时,对PLT的各项功能指标影响较大.结论 PLT为无核细胞,结构简单,可用2％的DMSO作为保护剂进行冷冻保存.     

普通冰冻血浆与新鲜冰冻血浆部分血浆组分的比较

目的:比较普通冰冻血浆(FP)和新鲜冰冻血浆(FFP)中血浆组分的差异.方法:随机选择北京市红十字血液中心提供的FP和FFP各20份,血浆融化后即刻分别检测凝血因子、纤溶系统及抗凝蛋白指标等12种血浆组分,即活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性、凝血因子V(FV)活性、纤维蛋...     

机采成分献血者的招募及其保留措施

通过加大宣传力度,在固定献全血者、血站员工、在校大学生和青年志愿者、免费体检者、病人亲属中开展招募工作;采取营造温馨、整洁、安全、舒适的献血环境,加强管理,提高服务质量,重视献血者的回访和定期举办联谊活动等措施,使机采成分献血者队伍不断壮大,保证临床需要。     

护士站分时段现场预约在门诊管理中的应用

目的：探讨护士站分时段现场预约的优势及效果。方法通过采集医院护士站现场预约诊疗系统及网上预约系统数据，分析2013年10月1日—12月31日血液科门诊预约取号情况，比较患者通过护士站现场预约与网上预约的应诊率。结果护士站现场预约的应诊率为94．57％，明显高于网上预约的71．64％，差异有统计学意义（χ^2＝601．96，P＜0．05）。结论护士站分时段现场预约有效保证了患者预约后的应诊率，降低了爽约率。     

269例口腔患者对复诊预约需求的调查分析

目的调查口腔患者复诊预约需求,为深入开展优质护理服务提供依据。方法采用自行设计的问卷对269例口腔患者的复诊预约需求情况进行调查。结果 95.53%的患者有复诊预约需求,72.49%患者选择电话预约,18.96%患者选择短信预约;91.08%的患者复诊时可以等候的时间是30 min以内;不同职业的患者复诊预约依从性存在差异(P<0.05)。结论针对患者预约的不同需求,合理、科学的安排预约方式和时间,同时优化就医流程缩短患者等候时间,提高预约复诊成功率和患者满意度。     

内镜微创保胆术后结石复发患者胆囊中胆汁成分分析

目的 探讨胆囊胆汁成分与内镜微创保胆术后胆囊结石复发的关系。 方法 测定150例胆囊结石、80例非肝胆疾病患者的胆囊胆汁成分,该150例患者均行腹腔镜联合胆道镜保胆取石术,术后发现胆囊结石复发12例。测定所有患者胆汁成分。 结果 结石组和复发组胆固醇浓度均较正常组明显升高;复发组胆固醇浓度高于结石组;结石组及复发组糖蛋白含量浓度及钙离子浓度明显高于正常组,复发组糖蛋白含量浓度及钙离子浓度高于结石组;正常组PH值明显低于结石组和复发者,差异均有显著性。 结论 胆囊胆汁中胆固醇浓度升高是保胆取石术后胆囊结石复发的重要因素。糖蛋白及钙离子浓度可促使胆固醇结石的形成和发展,在保胆术后结石复发中起到一定作用。