多种转移潜能不同的人前列腺癌细胞“上皮细胞间质转化态”特性鉴定及其意义

目的:对多种转移潜能不同的人前列腺癌细胞“上皮细胞间质转化态”(EMT)特性进行鉴定,并从粘附因素和细胞骨架蛋白角度分析其骨转移潜能获得的分子机制。方法:用W estern印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、C4-2和ArCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、Du145等细胞中上皮型钙粘素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和波形纤维蛋白(V im entin)的表达差异情况,并分析其在前列腺癌转移过程中的作用。结果:E-cad-herin在PC-3、LNCaP、C4、C4-2中表达较高,但在Du145、IF11、IA8中表达极低;而V im entin的表达情况恰恰与E-cadherin相反;N-cadherin在IF11、IA8细胞中呈现显著的高表达状态。结论:转移潜能不同的人前列腺癌细胞株之间存在EMT表型的表达差异,其中PC-3、LNCaP、C4、C4-2是未发生EMT改变的细胞,Du145、IF11、IA8却是EMT化的细胞。EMT表型差异蛋白在解释前列腺癌转移机制方面占据着重要地位。     

TGF-β/Smads通路关键蛋白在5种前列腺癌细胞株中表达的鉴定及意义

目的:对多种不同人前列腺癌细胞株TGF-β/Smads信号通路的"开放"或"关闭"状态进行鉴定,初步探讨此通路在前列腺癌侵袭、转移中的作用及可能的机制。方法:用Western印迹法检测LNCaP、PC-3、DU145及AR-CaP亚细胞系IF11、IA8细胞中TGF-β/Smads通路的关键蛋白TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、Smad2/3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4的差异表达。结果:TβRⅡ在PC-3、DU145、IF11、IA8中表达较高,在LNCaP中表达极低;Smad2/3在所有细胞中表达均较高,但活性成分p-Smad2仅在PC-3、DU145中表达;Smad4在LNCaP、PC-3、DU145中表达较高,IF11、IA8中表达缺失。结论:不同转移潜能的前列腺癌细胞株TGF-β/Smads通路的"开闭"状态存在差异,仅PC-3、DU145细胞处于开放状态;前列腺癌细胞可能通过不同的方式改变TGF-β/Smads通路状态参与晚期肿瘤的侵袭、转移过程。     

粘附分子E-钙粘素/β-连环素在LNCaP和ARCaP亚细胞系中的差异性表达及意义

目的:检测粘附分子E-钙粘素/β-连环素(E-cadherin/β-catenin)复合体在LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中的差异性表达,以探讨E-cadherin/β-catenin复合体与前列腺癌转移侵袭的关系。方法:用Western印迹及免疫荧光鉴定LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中E-cadherin、β-catenin的表达以及分布情况。结果:Western印迹显示E-cadherin在LNCaP细胞系中表达较高,在IF11、IA8中表达缺失,β-catenin在IF11、IA8中表达显著高于LNCaP(P<0.01)。免疫荧光显示β-catenin在LNCaP细胞系中主要分布在细胞膜上,而在ARCaP亚细胞系IF11、IA8中,主要分布于细胞核中;E-cadherin在LNCaP细胞中主要分布在细胞膜上。结论:不同上皮细胞间质转化态(EMT)特性的前列腺癌细胞系中E-cadherin/β-catenin表达以及分布存在差异,β-catenin的核转位可能是诱发前列腺癌细胞系发生EMT改变的机制之一。     

Wnt/β-catenin信号通路在多种人前列腺癌细胞系中的表达研究及意义

目的:检测多种不同上皮细胞间质转化(EMT)特性的人前列腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,对细胞中Wnt/β-catenin信号通路的功能状态进行鉴定,分析其在前列腺癌EMT现象中可能的作用。方法:用Western印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B和ARCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、DU145细胞中β-连环素(β-catenin),糖原合成酶3β(t-GSK3β),磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)的表达差异情况。结果:β-catenin和p-GSK3β在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中表达较高,在PC-3中表达较低,在DU145中表达缺失,t-GSK3β在上述所有细胞中表达无明显差异。p-GSK3β/t-GSK3β比值在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中较高,在PC-3和DU145中较低。结论:8种不同EMT特性的前列腺癌细胞系中,Wnt/β-catenin信号通路的功能状态存在差异。     

Smad4在人前列腺癌细胞系LNCaP和ARCaP中的差异表达及意义

目的:探讨TGF-β/Smads信号转导的核心Smad4在前列腺癌转移潜能获得中的作用及可能的机制。方法:用Millicell体外侵袭试验观察LNCaP和ARCaP系IF-11、IA-8细胞株转移潜能的差异情况,分别应用Western印迹法和逆转录PCR鉴定这3种细胞株中Smad4蛋白及mRNA的差异表达。结果:ARCaP系IF-11、IA-8细胞株的体外侵袭潜能明显高于LNCaP细胞(P<0.01);但Smad4蛋白在低转移潜能的LNCaP细胞中高表达,而在高转移潜能的IF-11、IA-8中表达缺失(P<0.01),Smad4 mRNA表达结果与蛋白一致。结论:Smad4在转移潜能不同的前列腺癌细胞系间存在差异表达,Smad4表达缺失可能是晚期前列腺癌发生侵袭转移的机制之一。     

前列腺癌细胞株LNCaP和IA8中转移相关蛋白的差异表达及意义

目的:从粘附因素及细胞骨架蛋白角度初步探讨前列腺癌细胞骨转移潜能的分子机制。方法:用Western印迹法鉴定转移潜能不同的两个前列腺癌细胞株(LNCaP和IA8)中E钙粘素和波形蛋白的表达差异情况,并初步分析其在前列腺癌转移过程中所发挥的作用。结果:E钙粘素在低转移细胞株LNCaP中高表达、在高转移细胞株IA8中缺失;而波形蛋白在这两种细胞中的表达情况恰与E钙粘素相反。结论:人前列腺癌高、低转移株之间确实存在转移表型(E钙粘素和波形蛋白)的表达差异,而这两种表达差异蛋白可能在促进或抑制前列腺癌转移的过程中发挥重要作用。     

转化生长因子β对前列腺癌LNCaP细胞株侵袭转移相关蛋白表达的影响及意义

目的:研究在体外培养条件下转化生长因子β(TGF-β)对前列腺癌LNCaP细胞株侵袭转移相关蛋白表达的影响,初步探讨TGF-β在前列腺癌侵袭、转移过程中的作用及可能的机制。方法:利用TGF-β干预处于对数生长期的前列腺癌LNCaP细胞,Western印迹法分别检测不同时间段细胞上皮型钙粘素、神经型钙粘素及波形蛋白的表达情况。结果:LNCaP细胞在TGF-β干预后,细胞侵袭转移的标志性蛋白神经型钙粘素、波形蛋白表达显著上调,以干预后12h最为明显;而上皮型钙粘素表达无明显改变。结论:TGF-β可能通过诱导低转移潜能的前列腺癌LNCaP细胞发生上皮细胞间质性转化,增强PCa的侵袭、转移能力。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

缺氧诱导因子1α诱导人前列腺癌细胞上皮间质化改变的研究

目的:研究人前列腺癌细胞在缺氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导下能否发生上皮细胞间质转化态(EMT)改变,进而致侵袭能力增强,并初步分析其分子机制。方法:应用RT-PCR技术检测LNCaP细胞及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B这4种EMT阴性的人前列腺癌细胞中波形蛋白(vimentin)mRNA表达情况,并凭此筛选出适合于进一步作转染诱导试验的细胞。用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α和pCD-NA3.1(-)空质粒后,分别转染上步试验所挑选出的人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/mLG418筛选抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α表达,Western印迹法检测EMT标志蛋白——上皮型钙粘素(E-cadherin)和vimentin的表达,Transwell验证转染后LNCaP细胞侵袭能力的改变。结果:RT-PCR证实4种EMT阴性的细胞中,仅LNCaP表达有vimentin编码基因,适合作转染诱导试验。免疫荧光也观察到HIF-1α转染细胞胞质中荧光亮度较空质粒转染细胞和未转染细胞明显增强。Western印迹法证实HIF-1α转染细胞发生了EMT转化,其E-cad-herin表达缺失,而vimentin表达增加。同时,Transwell体外侵袭试验也发现,LNCaP/HIF1α细胞的体外侵袭能力显著高于LNCaP细胞和LNCaP/pCDNA3.1(-)细胞。结论:HIF-1α过表达可以通过调节两种EMT相关蛋白诱导人前列腺癌细胞LNCaP发生EMT改变并致其侵袭能力增强。     

细胞株源人前列腺肿瘤干细胞的分选与鉴定

目的:论证人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞株中是否存在干细胞亚群。方法:分别用免疫表型法和侧群(side population,SP)细胞法从5种人PCa细胞株(Du145、IA8、LNCaP、TSU-PrL和PC-3)中富集类干细胞,再应用软琼脂克隆形成试验初步验证类干细胞亚群的体外生长方式及成瘤能力。选择LNCaP源SP细胞(LNCaP/SP),依次采用免疫细胞化学技术、Transwell、MTT以及裸鼠致瘤试验,分别检测其干细胞标记物的表达情况、鉴定其体外增殖和侵袭能力以及动物体内的致瘤和转移潜能。结果:5种细胞株中均难以分选出免疫表型为CD133+CD44+的细胞亚群。除PC-3外,其余4株细胞可分选出呈现典型克隆性生长特点的SP细胞。体外克隆形成率在IA8、LNCaP和TSU-PrL源SP细胞与非侧群(non-side population,NSP)细胞间有显著性差异(P<0.05)。与LNCaP/NSP相比,LNCaP/SP的体外增殖和侵袭能力显著增强,同时阳性表达整合素α2、Nanog、CD44、OCT4以及ABCG2等5种干细胞标记物。而且,LNCaP/SP的皮下成瘤率、骨转移率及瘤体体积亦显著高于LNCaP/NSP(P<0.01)。结论:SP分选法更适合富集人PCa细胞株中类干细胞,LNCaP/SP细胞是PCa细胞株LNCaP中的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)。     

柯萨奇腺病毒受体在人PCa细胞Du145和LNCaP中的差异表达及意义

目的:探讨柯萨奇腺病毒受体(CAR)在PCa转移潜能获得机制中的可能作用。方法:用TransweⅡ技术鉴定两种PCa细胞株(Du145和LNCaP)的不同转移潜能,进而应用Western印迹法鉴定这两种细胞株中的CAR表达差异情况,并初步分析其在PCa转移过程中所发挥的作用。结果:Du145的体外侵袭潜能显著高于LNCaP细胞(P<0.05);同时,CAR在低转移细胞株LNCaP中高表达,而在高转移细胞株Du145中表达缺失(P<0.01)。结论:CAR在转移潜能不同的PCa细胞株之间确实存在着有意义的差异表达,而这种表达差异可能在影响PCa转移过程中发挥重要作用。     

Changes in beta-2 microglobulin expression in prostate cancer

Increased shedding of beta-2 microglobulin (B2m, 11.8 kDa), a component of the major histocompatibility complex class I (MHC I), by tumor cells has significance with regard to escape from immune-surveillance, cellular proliferation, and tumor development and progression. Aberrant expression of MHC I is known to occur in prostate cancer (PCa) but not in benign prostatic hyperplasia. We have determined B2m released by PCa cells in culture and in the urine of 101 patients with advanced PCa by Western blotting and radioimmunoassay. B2m levels in the conditioned medium of human PCa cell lines and primary cultures derived from distant metastasis as well as in the urine of patients with bone and visceral metastasis were higher than normal and also higher than those from patients with local/regional extensions of the disease. In the group of patients with bone metastasis (66 patients), high urine B2m was associated with significantly shortened survival. In addition to the 11.8 kDa B2m, a high molecular weight B2m immunoreactivity of approximately 38 kDa was found in highly tumorigenic PC-3 cell line, but not in the relatively indolent DU-145 and LNCaP human PCa cell lines. The approximately 38 kDa B2m was found in the urine of several PCa patients but not of healthy controls examined by Western analysis. The conditioned medium of a prostatic small cell carcinoma cell line, NCI-H660, had high levels of chromogranin A and B2m, but prostate specific antigen was absent. In conclusion, increased B2m shedding was associated with distant metastasis of PCa and an abnormal B2m immunoreactivity was found in PCa.