利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流,以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性,在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考,并指导下一步通道药理学的研究。     

利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流，以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性，在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考，并指导下一步通道药理学的研究。     

顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响

目的探讨耳毒性药物顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响,了解顺铂耳毒性的离子机制。方法选择状态良好培养2—14d的耳蜗螺旋神经节细胞在电压钳制条件下记录的钾电流作为对照组,浴液中分别加入100,500,1000,5000μM不同浓度的顺铂溶液后记录的电流为实验组,观察其对钾通道电流电生理学特性的影响,并观察冲洗后电流的恢复情况。结果实验显示耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性受不同浓度顺铂溶液的影响,并具有浓度依赖性,表现在其活化动力学和电流幅度的改变。本实验中顺铂的50％的电流被抑制时的浓度（IC50）为294μM,冲洗后钾通道电流逐渐恢复。结论顺铂可以改变耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性,这种变化在短期内可逆,揭示其耳毒性的形成具有一定的离子机制。     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞瞬时外向钾电流的研究

螺旋神经节细胞膜上的瞬时外向钾电流通道,对于听觉动作电位的形成和调节具有重要的作用。本实验以小鼠耳蜗螺旋神经节细胞为材料,应用全细胞构型电压钳制技术对此通道电流进行了研究,拟为听觉形成的离子机制提供可靠的电生理学实验依据。一、材料和方法1.主要材料、试剂、仪器及溶液成分见文献[1]。2.组织培养及实验:取新生1~5D的昆明种乳小鼠的耳蜗螺旋神经节组织,按部位分为顶、中、底回,将顶、底回耳蜗螺旋神经节组织分别转移至装有培养液的培养皿中,置37℃,5%CO2孵箱内贴壁培养。取培养2~14D的培养物,在显微镜下找到理想细胞,安装电…     

听力学

20020267小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究/孙伟…//中华耳鼻咽喉科杂志一2001,36(3)一178~182 目的:了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法:采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果:采用出生后。至5d的C57BL/IOJ小鼠(n=30),耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出,培养8一48h后,基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好,便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别,健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细…     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究

目的了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果采用出生后0至5d的C57BL/10J小鼠(n=30)，耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出，培养8～48h后，基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好，便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别，健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细胞平均静息电位(     

速尿对小鼠螺旋神经节神经元细胞钾、钠通道电流的影响

目的 探讨速尿对小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion neuron,SGN)细胞延迟整流钾通道和钠通道电流的影响.方法 分离并酶解生后1~6 d的15只小鼠耳蜗SGN细胞,利用全细胞膜片钳技术记录外向延迟整流钾通道和内向钠通道,并观察速尿对钾、钠离子通道的影响.结果在SGN细胞外加入速尿以后,延迟整流钾电流可被阻滞到+200~+300 pA左右,钠电流可被阻滞到速尿作用前峰电流幅值的30%左右.在速尿作用稳定后的1、5、10 min时开始洗脱速尿,延迟整流钾电流和钠电流分别可以恢复到速尿作用前峰电流幅值的98%、64%、25%和96%、76%和54%.结论 速尿可在不同程度上阻滞SGN细胞的延迟整流钾通道和钠通道,并随着速尿作用时间的延长,其对离子通道的损害越大.     

豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道特性的研究

目的 研究单个豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞的基本电生理特性。方法 应用耳蜗血管纹组织块培养技术和全细胞膜片钳技术，观察单个培养的豚鼠血管纹边缘细胞在电压钳模式下的电流特性。结果 边缘细胞上记录到钾离子电流，该钾通道有以下特性：①具有电压依赖性；②通道的活动可被4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）和四乙铵（tetraethylammonium，TEA）在相对高浓度下阻滞；③细胞外钙离子浓度的减少可导致该钾通道电流的降低。结论 豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道电流包括钙离子依赖性钾电流、外向延迟整流钾电流和A型钾电流。     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

豚鼠耳蜗单离Hensen细胞钾电流特性及三磷酸腺苷对其影响

目的　研究豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的钾离子电流及其特性以及三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate ,ATP)对Hensen细胞电生理特性的影响。 方法　采用传统全细胞膜片钳技术 ,对单离Hensen细胞进行记录。ATP通过压力注射仪对单离Hensen细胞给药。结果　Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性 ,只有延迟整流性钾电流 (delayedrectificationpotassiumcurrent,IK) ,没有瞬间外向性钾电流 (transientoutwardpotassiumcurrent ,IA)。低浓度 ( 0 1 μmol/L ,1 μmol/L ,1 0μmol/L)ATP可以使Hensen细胞的钾电流的幅度明显降低 ,且呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,降幅越大。高浓度ATP( 1 0 0 μmol/L ,1mmol/L ,1 0mmol/L)可以引起Hensen细胞的内向离子流 ,呈浓度依赖性 ,浓度越高 ,升幅越大。ATP的这两种作用均可被ATP受体拮抗剂 ( 1 0 0 μmol/L舒拉明 )所逆转。结论对Hensen细胞不同电压的刺激可以诱发出延迟整流性钾电流 ,低浓度ATP对Hensen细胞的钾电流有明显抑制作用 ,且呈浓度依赖性。高浓度ATP可以引起Hensen细胞的非选择性内向离子流 ,为钾离子依赖性 ,而且是通过ATP受体起作用     

庆大霉素对小鼠螺旋神经节神经元电生理特性的影响

目的 探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节神经元细胞电生理特性的影响及其意义。方法 应用全细胞电压钳技术研究庆大霉素对急性酶分离小鼠螺旋神经节神经元细胞膜上的钾、钠离子通道电流的峰值的影响．与细胞外液中庆大霉素浓度的关系，以及庆大霉素洗脱后电流的恢复情况。结果 庆大霉素能抑制电压依赖性钾通道，但不能抑制电压依赖性钠通道，其钾通道抑制作用与细胞外液中庆大霉素的浓度呈剂量依赖性，庆大霉素洗脱后电流恢复不完全。结论 庆大霉素通过抑制螺旋神经节神经元细胞的钾离子通道而产生耳毒性。     

Study on voltage-sensitive current of spiral ganglion cells in mice organ of Corti culture]

OBJECTIVE: To investigate the property of voltage-sensitive current in cochlear spiral ganglion cells of the C57BL/10J mice, an inbred strain which develops early onset hearing loss. METHODS: Organotypic cultures of organ of Corti were prepared from neonatal mice 0-5 days of age. Whole-cell current and voltage clamp techniques were used to study Na+, K+ and Ca2+ currents of the spiral ganglion cells in culture. RESULTS: Cultures were maintained for 8-48 hours before use. Ganglion cells were identified first through their anatomical positions and finally through fast negative Na+ current. Spontaneous action potentials were recorded from some ganglion cells (4 out of 39). When present, spontaneous rates were around 20 spikes/sec, and might be as high as 135 spikes/sec. The mean resting potential was (-55 +/- 5) mV (n = 39). Under voltage clamp conditions, transient inward currents (negative) and outward (positive), steady-state voltage-dependent currents were recorded in normal HBSS. Rapid inward currents were totally blocked by 300 nM TTX applied locally to the culture. Inward currents recovered quickly after TTX wash out suggesting that the transient inward current was carried by Na+. The mean maximum amplitude of Na+ current was (-2.0 +/- 1.1) nA (n = 39) recorded in HBSS. Adding TEA (10 mmol/L) and 4-AP (0.15 mmol/L) to the bath solution or replacing K+ with Ca+ in the pipette solution partly blocked the sustained outward current. This suggests that the outward current was carried by K+. The mean maximum amplitude of K+ was (3.0 +/- 1.3) nA (n = 39) with 140 mM K+ in the pipette. Inward Ca2+ current was recorded in Ba2+ solution which mean peak amplitude was (-1.0 +/- 0.7) nA (n = 20). Ca2+ currents were reversibly blocked by 100 microM Cd2+. CONCLUSION: Whole cell recordings from spiral ganglion neurons can be obtained from organotypic cultures of the organ of Corti. Fast Na+ current, sustained K+ current and L-type Ca2+ current were recorded in the spiral ganglion cells cultured for 1-2 days. Whole cell recording showed that cochlea spiral ganglion cells can generate spontaneous action potential one day after birth and the firing rates could reach levels equal to those recorded in vivo.     

利诺吡啶对豚鼠耳蜗外毛细胞和支持细胞钾电流的影响

目的 观察KCNQ家族钾通道特异性阻滞剂利诺吡啶(linopirdine)对豚鼠耳蜗单离外毛细胞和Deiters细胞(支持细胞)总钾电流的影响，初步探讨KCNQ家族钾通道在耳蜗外毛细胞和Deiters细胞的分布。方法 运用膜片钳技术，在全细胞模式下记录正常细胞外液中8个外毛细胞和5个Deiters细胞的总钾电流，并观察100μmol／L利诺吡啶对外毛细胞和Deiters细胞总钾电流的影响。结果 在正常细胞外液中，单离外毛细胞可记录到四乙基二乙胺敏感的外向性钾电流和静息膜电位附近激活的内向性钾电流(the K^ current activated at negative potential，IKn)两种钾电流，而单离Deiters细胞中只记录到外向整流性钾电流。加入100μmol／L利诺吡啶后，外毛细胞中的四乙基二乙胺敏感的钾电流减小，IKn被完全抑制；而Deiters细胞中的外向整流性钾电流大小无变化。结论 KCNQ家族钾通道存在于豚鼠耳蜗外毛细胞，其介导的钾电流是四乙基二乙胺敏感的钾电流的组成部分，并构成全部的IKn；但KCNQ家族钾通道不存在于豚鼠耳蜗Deiters细胞。     

大鼠耳蜗切片螺旋神经元的红外可视膜片钳技术

目的建立大鼠离体耳蜗切片技术，结合红外可视膜片钳技术探讨耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neuron，SGN）的电生理特性。方法0～2日龄、3～6日龄及7～14日龄的健康SD大鼠各10只，快速制作耳蜗切片，应用红外微分干涉相差技术，结合膜片钳记录，观察SGN的基本电生理特性，并分析影响耳蜗切片制作质量及膜片钳记录成功的因素。结果3～6日龄大鼠耳蜗切片的成功率最高，每只耳蜗可制备2～4张切片；保持部分颅骨与耳蜗的连接及耳蜗骨壳的完整是影响切片成功的关键，切片时蜗轴与刀片的位置及切片取材的时间也是影响切片质量和细胞活性的重要因素。红外可视膜片钳技术可准确找到状态良好的SGN，有助于对封接过程的判断。全细胞记录SGN静息膜电位平均为（-45．6±5．3）mV（x±s，n=52），可记录到Na^＋和K^＋电流。结论耳蜗切片技术能够较完整地保持耳蜗结构以及各种构成细胞的活性及其相互之间的联系，红外可视膜片钳技术具有实时、直视的特点，可操作性强，二者结合能为深入研究SGN的电生理特性及听觉传导机制提供良好的手段和平台。     

Ionic currents in isolated vestibular hair cells from the guinea-pig crista ampullaris

Ionic currents have been recorded under whole cell patch clamp in cells isolated from the guinea-pig vestibular system. Type I and type II cells were separately identified. Type II cells were further classified as short (less than 15 microns in length) or tall (greater than 15 microns). Under whole cell voltage clamp, cells showed an outward current which activated at potentials above about -50 mV, and tail currents which reversed near the potassium equilibrium potential. The outward current was reduced in the presence of external 10 mM tetraethylammonium or cadmium ions and when calcium was removed from the external medium. A small cadmium-sensitive transient inward current, a putative calcium current, was observed in cells loaded with caesium from the patch pipette. In 27 out of 64 cells a component of the recorded outward current inactivated. Such current components were most common in tall type II cells. This inactivating component was blocked by 4-aminopyridine and removed by depolarizing prepulses consistent with it being an A-type potassium current. Type I cells, on the other hand, showed mainly a non-inactivating outward current which slowly relaxed on repolarization to resting potentials. When membrane potentials were measured under current clamp, injections of less than 100 pA produced a single, highly damped transient followed by a plateau in Type II cells. No such transient was present in Type I cells. There is thus little evidence for an electrical resonance in these cells.     

豚鼠耳蜗单离Deiters细胞的钾电流

目的 研究豚鼠耳蜗单离Ｄｅｉｔｅｒｓ细胞的钾电流及其特性。方法 运用膜片钳技术,在全细胞模式下记录正常细胞外液中钾电流,不同Ｋ＾＋浓度的细胞外液对细胞反转电位和外向钾电流的影响,四氨基吡啶（４－ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ,４－ＡＰ）和四乙工胺（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ,ＴＥＡ）对钾电流成分的阻滞作用,探讨外向钾流通道的激活和失活动力学。结果 单离Ｄｅｉｔｅｒｓ细胞具有电压依赖的外向整流