黄芪甲苷对棕榈酸诱导的小鼠RAW264.7细胞铁死亡的调控作用

目的：探讨黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法：选取对数生长期的RAW264.7细胞,加入终浓度为0、50、100、150和200 mg/L的ASIV,或0、100、200和400μmol/L的PA,细胞成像仪培养48 h后计数分析,观察ASIV和PA对RAW264.7细胞活力的影响。再将RAW264.7细胞分为对照组、PA(200μmol/L)组和PA(200μmol/L)+ASIV(100 mg/L)组。油红O染色观察RAW264.7细胞脂质沉积情况;细胞免疫荧光染色观察RAW264.7细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的蛋白表达水平;RT-qPCR和Western blot测定GPX4、FTH1、P53和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的mRNA和蛋白表达水平;活性...     

黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。 目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。 方法：实验分为4组。2.5 μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞 24 h,建立肾小管细胞损伤模型(顺铂损伤组);将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养(脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);利用Transwell小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养(黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);以正常肾小管上皮细胞做对照(正常对照组)。 结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高(P < 0.05);Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加(P < 0.05)。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

三七总皂苷对马兜铃酸Ⅰ诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨三七总皂苷(total saponins of panax notoginseng,PNS)对马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid Ⅰ,AAI)诱导的人肾小管上皮细胞株HK-2转分化的影响.方法:应用倒置相差显微镜观察HK-2细胞形态学变化;免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,a-SMA)的表达;ELISA法测定培养细胞上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量.结果:AA I诱导组HK-2细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;胞浆内大量表达α-SMA,其积分光密度值增加(P<0.05);细胞培养上清液中TGF-β1含量均增加,且呈时间依赖性(P<0.05).不同剂量PNS治疗可减轻从Ⅰ诱导的细胞形态学改变,不同程度的抑制α-SMA的表达和TGF-β1的分泌,且呈剂量依赖性(P<0.05).PNS对照组HK-2细胞形态学、α-SMA表达和TGF-β1分泌与空白对照组比较均无明显变化.结论:AA I可通过促进TGF-β1的分泌诱导肾小管上皮细胞转分化,促进细胞外基质α-SMA的合成;PNS可抑制AA I诱导的肾小管上皮细胞转分化作用,减少α-SMA的表达,该作用可能是通过抑制TGF-β1表达实现的.     

急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43表达的影响及黄芪甲苷的拮抗作用

目的:观察急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨黄芪甲苷的保护机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、镉处理组、镉加黄芪甲苷处理组,取心室肌组织,分别作光镜、透射电镜观察和免疫组织化学检测.结果:与正常组相比,镉组心肌细胞连接蛋白43的表达量明显降低,心肌纤维和闰盘超微结构破坏严重;而镉加黄芪甲苷组心肌细胞连接蛋白43的表达量较镉组显著增加,心肌纤维和闰盘超微结构的损伤也明显减轻.结论:镉能破坏心肌细胞闰盘超微结构,影响连接蛋白43的表达及分布,黄芪甲苷能在一定程度上拮抗镉对心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43的毒性损伤.     

黄芪甲苷通过toll样受体4/核因子κB通路介导辐射所致肾损伤的防护作用

目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)是否通过toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-KB)介导的信号通路对辐射诱导肾脏损伤起到保护作用.方法 将小鼠分为正常对照组、DMSO溶剂组、辐射组(IR)、IR+AS-Ⅳ20 mg/kg组和IR+AS-Ⅳ 40 mg/kg组.小鼠给予AS-Ⅳ腹腔注射1个月后,以8Gy的60Co...     

黄芪甲苷对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及氧化应激损伤的影响

目的:探讨黄芪甲苷对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及氧化应激损伤的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对照达英-35(0.3392 mg/kg)组、黄芪甲苷低剂量(12.5 mg/kg)组和黄芪甲苷高剂量(50 mg/kg)组,每组12只。采用来曲唑(1 mg/kg)灌胃诱导PCOS模型,造模成功后灌胃给药,每天1次,连续3周。给药结束后,通过阴道涂片观察各组大鼠动情周期,计算卵巢指数,HE染色观察卵巢组织病理学变化,ELISA法检测血清性激素睾酮(T)、雌二醇(E₂)、促黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平,比色法检测血清及卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Western blot检测卵巢组织中甾类激素合成急性调节蛋白(St AR)及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢指数增加,卵巢呈多囊样改变,血清中T、LH和MDA含量显著增加(P<0.05),E_2...     

负载黄芪甲苷的心脏—线粒体双靶向递药纳米胶束改善急性心肌梗死后心脏损伤

急性心肌梗死 (Acute Myocardial Infarction,AMI) 因其高患病率和致死率严重威胁人类健康,尽管药物、介入治疗和外科手术极大程度地降低了AMI的死亡率,但AMI后仍存在持续的心肌损伤。黄芪甲苷 (Astragaloside Ⅳ,AST) 是中药黄芪的主要活性成分之一,但由于AST的疏水性特征限制了其生物利用度。在本实验中,我们开发了一种血小板膜修饰的 poly (d, L-lactic-Co-Glycolic Acid) -block (PLGA-b) -poly (Ethylene Glycol)(PEG) -Triphenylphosphonium (TPP)(PLGA-b-PEG-TPP) 聚合物纳米胶束用于包裹AST,从“器官—细胞器”层面实现“心脏—线粒体”的双重靶向功效。我们首先通过透射电镜、动态光散射、药物释放、稳定性考察等方法对载药纳米胶束进行了表征;采用活体成像法证实了载药纳米胶束的心脏靶向功效;运用小动物心脏超声、组织学、血清酶学考察了载药纳米胶束对缺血再灌注 (Isch‐ aemia/Reperfusion,I/R) 后心脏功能和心肌损伤的影响;通过考察线粒体形态、膜电位、活性氧 (Reactive Oxygen Species, ROS) 以及血清和心脏中炎症因子水平,评价了载药纳米胶束对心脏线粒体功能和炎症的影响,实验结果显示,相较于游离的黄芪甲苷,载药纳米胶束显著改善了I/R后心脏功能、心肌损伤、线粒体损伤以及心脏炎症,提示载药纳米胶束显著改善了AST的生物利用度和心脏保护活性。本实验的开展为疏水性中药活性单体的递送提供了一种全新策略。     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

黄芪甲苷对IgA肾病大鼠脾免疫细胞的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对IgA肾病(IgAN)大鼠脾免疫细胞和肾功能的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、IgAN组、AS低剂量组和高剂量组(n=10)。免疫组化和体视学方法测脾CD3~+、CD4~+T细胞和CD20~+B细胞数密度,免疫荧光法测肾IgA沉积,全自动生化分析仪测24h尿蛋白,显微镜下镜检尿红细胞数。结果与对照组比,IgAN组脾淋巴细胞数密度升高,肾IgA沉积明显,出现血尿、蛋白尿。AS两组与IgAN组比,淋巴细胞数密度下降,肾IgA减少,血尿、蛋白尿减轻。结论 AS有效下调IgAN大鼠脾免疫功能亢进,减轻症状。     

黄芪甲苷降低结肠巨噬细胞比例减缓溃疡性结肠炎发生发展

目的：观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）中的保护作用并初步探究其保护机制。方法：将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组和AS-Ⅳ组,AS-Ⅳ组连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。证实AS-Ⅳ对小鼠体质量和结肠长度均无影响后,将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组、DSS组、DSS+AS-Ⅳ组,DSS组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液7 d,DSS+AS-Ⅳ组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液的同时连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;qRT-PCR检测小鼠结肠组织细胞因子mRNA表达;流式细胞术检测小鼠外周血和结肠固有层单核/巨噬细胞比例。结果：与Control组相比,AS-Ⅳ组小鼠体质量和结肠无明显变化,DSS组小鼠体质量明显减轻、结肠长度缩短,肠黏膜组织结构破坏,炎症细胞浸润增多,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CCL2、CCR2 mRNA表达显著升高;与DSS组相比,DSS+AS-Ⅳ组小鼠结肠缩短程度和结肠组织炎症细胞浸润水平降低,Ly6C+MHCⅡ...     

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P 0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P 0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P 0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P 0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。     

黄芪甲苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻重症急性胰腺炎大鼠肝损伤

目的:探讨黄芪甲苷对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠相关急性肝损伤的影响及作用机理。方法:将96只健康SD大鼠随机分成假手术组、模型组(SAP组)、黄芪甲苷治疗组和AG490干预组,每组24只。对大鼠采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 m L/kg)建立SAP模型。黄芪甲苷治疗组和AG490干预组大鼠于造模前2 h分别腹腔注射20 mg/kg黄芪甲苷和8.0 mg/kg AG490,假手术组和模型组各自注射对应量的0.9%生理盐水。处理结束后每组分别于12 h、18 h和24 h各组随机取8只大鼠检测其腹水量,下腔静脉穿刺采血检测血淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平。HE染色观察各组大鼠肝脏组织病理变化。Western blot检测各组大鼠肝脏组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:各时点模型组大鼠腹水量和血清中AMY、ALT、AST以及IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显高于假手术组,黄芪甲苷和AG490干预组大鼠这些指标明显低于模型组。同时,模型组大鼠与假手术组相比,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平明显上调。黄芪甲苷和AG490预处理则明显改善大鼠肝损伤,并抑制JAK2和STAT3的磷酸化水平。结论:黄芪甲苷能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路的活化从而减轻重症急性胰腺炎大鼠急性肝损伤。     

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

 目的:观察黄芪甲苷 (AS-IV)对糖尿病肾病(DN)肾脏的保护作用及其机制。方法:38只清洁级雄性SD 大鼠分成正常组（10只）、模型组（14只）和AS-IV 干预组（14只）,用链脲佐菌素造模,成功后1 周开始治疗,期间每 4周动态观测血糖及尿微量白蛋白,治疗12周后处死大鼠取材及采血,取肾皮质行 HE 和Masson染色观察,并检测β 1整合素、整合素连接激酶(ILK)和α-actinin-4的蛋白表达水平。结果:干预8周末AS-IV 组血糖水平较模型组明显降低（P<0.01）。干预12周末AS-IV 组与模型组相比,尿微量白蛋白明显下降（P<001）,并使因造模引起的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平的变化产生逆变（P<0.05）。与正常组比较,模型组的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平均有明显差异（P<0.05）。结论:AS-IV 对DN 肾脏有明显保护作用,能降低血糖和尿白蛋白排泄量,改善足细胞黏附功能,从而延缓DN 的进展。     

螺内酯对马兜铃酸所致大鼠肾间质纤维化防治作用的研究

目的探讨螺内酯对马兜铃酸(Aristolochic Acid,AA)所致大鼠肾间质纤维化的防治.方法大白鼠随机分成3组,正常对照组、木通组、木通螺内酯组.在实验前及实验的第2、4周,分别从各组大鼠眼内眦静脉采血,测定血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血钾、血钠等生化指标以及Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)等放免指标,42d时从心脏直接采血复查上述各指标,而后处死动物取肾脏进行组织形态学及特殊染色检查.结果1、木通螺内酯组和木通组用药前后自身比较血生化、放免指标有统计学意义.2、木通螺内酯组和木通组用药后组间比较血生化、放免指标有统计学意义.3、木通螺内酯组和木通组用药后组间比较免疫组化指标有统计学意义.结论1、醛固酮抑制对AA所致的慢性肾间质纤维化有一定的防治作用.2、在AA所致的慢性肾间质损伤时血电解质紊乱以钾、钠表现为明显,血氯和血钙变化不明显.3、血放免指标PC Ⅲ、HA、LN可以作为早期慢性肾间质纤维化的重要临床观察指标.     

黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化及能量代谢的影响

目的:研究黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化的影响,初步探讨其具体机制。方法:采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立大鼠慢性心衰模型,建模成功后随机分为模型组、缬沙坦组及黄芪甲苷组,另建立假手术组。缬沙坦组和黄芪甲苷组分别给予2 mg·kg~(-1)·d~(-1)的缬沙坦及30 mg·kg~(-1)·d~(-1)的黄芪甲苷灌胃,假手术组及模型组给予生理盐水灌胃。8周后收集心脏结构及血流动力学参数,留取心肌染色后观察心肌细胞形态学变化Western blot和RT-qPCR检测长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的蛋白及mRNA表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的左室质量指数(LVMI)、胶原容积分数(CVF)、左室后壁厚度(LVPWD)、PFK1蛋白及mRNA表达均升高(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达均下降(P0.05)。与模型组相比,缬沙坦组及黄芪甲苷组LVMI、CVF、LVPWD、PFK1蛋白及mRNA表达均下降(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:黄芪甲苷可以抑制慢性心衰大鼠心肌纤维化,其机制可能是通过上调LCAD、下调PFK1、纠正能量代谢异常实现的。     

马兜铃酸Ⅰ-DNA加合物合成及电喷雾质谱法检测

目的建立体外合成及检测马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid I,AAⅠ)-DNA加合物的方法。方法分别采用酶活化法和化学活化法活化AAⅠ后与脱氧腺苷酸反应以合成AAⅠ-DNA加合物,优化各种反应条件,使用液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)法对合成的AAⅠ-DNA加合物进行结构鉴定。结果两种方法均可制得AAⅠ-DNA加合物,质谱负离子采集模式下测得其准分子离子峰m/z621,电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)谱图提供了丰富的结构信息。结论AAⅠ活化后能与腺嘌呤形成AAⅠ-DNA加合物,LC/MS/MS技术能够快速方便准确地检测AAⅠ-DNA加合物。     

连翘苷拮抗环磷酰胺所致小鼠免疫抑制的实验研究

目的:研究连翘苷对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的影响。方法:以腹腔注射环磷酰胺法复制小鼠免疫抑制模型,试验组小鼠分别按50、100、150 mg/ kg 剂量灌胃连翘苷,同时设模型组和对照组(等体积生理盐水灌胃),连续处理7 d。常规方法测定胸腺和脾的脏器系数,FITC 微球法测定腹腔巨噬细胞吞噬功能,ELISA 法检测外周血IL-2、IL-4 和外周血淋巴细胞cAMP 含量,分析不同剂量的连翘苷对免疫抑制小鼠上述指标的影响。结果:7 d 后成功建立免疫抑制小鼠模型。连翘苷能够不同程度地提高免疫抑制小鼠的免疫器官指数、巨噬细胞吞噬能力和血清中免疫因子含量,降低外周血淋巴细胞中cAMP 含量。结论:连翘苷能够抵抗环磷酰胺的免疫抑制作用,具有一定的免疫调节功能。