谷氨酸引起星形胶质细胞核形态改变

谷氨酸是中枢神经系统中最主要的兴奋性神经递质,参与脑细胞问兴奋性信息的传递。星形胶质细胞表面丰富的谷氨酸转运蛋白可以有效清除细胞外谷氨酸,以终结谷氨酸的信号传递作用,但谷氨酸摄取的潜在生物学功能尚不明确。本研究首次证明谷氨酸进入星形胶质细胞后,直接引起细胞核发生形态改变。细胞核形态改变是谷氨酸的特异反应,与细胞外谷氨酸浓度密切相关。细胞膜表面的谷氨酸转运蛋白直接参与细胞核形态调节,而与离子型、代谢型谷氨酸受体,细胞内钙离子浓度改变无关。我们进一步证实水通道蛋白-1（AQP1）分布于星形胶质细胞核膜表面,并直接参与了谷氨酸引起的核形态调节。本项目证明细胞外谷氨酸通过转运蛋白和AQP1直接调节星形胶质细胞核形态,提示神经元兴奋性调节细胞核形态功能的潜在机制。     

孕酮对Aβ所致星形胶质细胞炎症小体表达的影响及机制研究

目的研究神经甾体孕酮对Aβ所诱导星形胶质细胞NLRP3炎症小体表达的调节作用及潜在的分子机制。方法正常培养新生鼠原代脑皮质星形胶质细胞,分别应用ELISA、免疫荧光、Western blot等试验方法检测孕酮对于星形胶质细胞IL-1β分泌水平,以及pro-IL-1β和NLRP3炎症小体表达的影响,并研究调节星形胶质细胞NLRP3表达活化与内质网应激的可能关系。结果与Aβ干预组相比,孕酮处理能够显著性抑制Aβ所致星形胶质细胞IL-1β、pro-IL-1β合成分泌,并能够显著降低炎症小体NLRP3表达。另外,应用内质网应激诱导剂处理星形胶质细胞发现,其能明显促进星形胶质细胞IL-1β、pro-IL-1β合成分泌。与之相反,内质网应激抑制剂能够明显阻断孕酮对于Aβ所致NLRP3表达的抑制作用。结论孕酮能够通过调节星形胶质细胞内质网应激水平,显著抑制Aβ所致炎症小体NLRP3表达活化。     

S—100B与神经系统疾病

S-100蛋白是一类能与钙和锌相结合的蛋白质家族,广泛分布于不同组织,分子量较小（9—13kD）,主要定位于中枢神经系统的星形细胞和少突神经胶质细胞及周围神经系统的雪旺细胞。目前已发现该家族已有19个成员,1965年Moore首次自牛脑组织中分离出一种亚细胞组分,被认为是含有神经系统特异的蛋白质因为这个成分在中性pH时能溶解在100％的饱和硫酸溶液中而得名,叫做S-100蛋白。它是一种酸性的钙离子结合蛋白,相对分子质量为21000,在哺乳动物细胞合成和分泌,特别是星形胶质细胞和少突胶质细胞合成和分泌。     

金钗石斛生物总碱对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响

目的观察金钗石斛生物总碱对外源性内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠大脑皮层星形胶质细胞(astrocyte)及诱导其产生和释放炎症介质的影响,探讨石斛生物总碱对星形胶质细胞的抗炎作用。方法通过MTS检测细胞存活率,ELISA法检测TNF-α炎性因子蛋白的表达,实时定量多聚酶链反应(real time RT-PCR)检测炎症相关基因TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结果①LPS刺激星形胶质细胞后,MTS检测吸光度明显升高,与正常组比较差异有显著性;②金钗石斛生物总碱能够降低LPS所致的TNF-α蛋白的高表达(P<0.05);③金钗石斛生物总碱能够降低LPS诱导的星形胶质细胞吸光度的升高,同时明显抑制LPS所致的TNF-α、IL-6 mRNA的高表达。结论金钗石斛生物总碱能够拮抗LPS所引起的炎症反应,其作用与抑制星形胶质细胞的激活及其炎症因子的释放密切相关。     

大鼠脑梗死早期星形细胞胶质化及其与神经营养因子的关系

目的 探讨星形南细胞（ＡＳ）在脑梗死早期的变化及与神经营养因子的关系。方法 运用免疫组织化学技术检测Ｍｉｄｋｉｎｅ（ＭＫ）、星形胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的动态变化。结果 梗死后１天，梗死边缘开始表达ＧＦＡＦ。梗死后２天，ＧＦＡＰ表达达高峰。ＭＫ于梗死后１天表达，随后其阳性梗死后２￣４天表达逐步增强。结论 脑梗死早期星形胶质细胞增生可能与分泌神经营养因子及损伤后的修复有关。     

新的疼痛分子机制：星形胶质细胞内的强啡肽和DREAM蛋白

阿片受体及其内源性肽配体可调节疼痛。在慢性疼痛过程中，强啡肽既表现出由阿片受体介导的镇疼性效应，又表现出由未知机制介导的促疼性效应，此二者效应的产生完全依赖于强啡肽的浓度，但其调节机制还不清楚。单纯的神经元研究未能给出令人信服的解释，因而研究星形胶质细胞是否参与这一过程具有极其重要的意义。[第一段]     

异钩藤碱对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性介质释放的抑制作用

目的:观察异钩藤碱对LPS诱导的星形胶质细胞炎性介质释放的影响.方法:分离并鉴定新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞,用1μg·mL<'-1>LPS激活原代星形胶质细胞,刺激其分泌IL-1β、TNF-α和NO,并大量表达iNOS mRNA.用不同浓度的异钩藤碱和LPS与星形胶质细胞共孵育.检测异钩藤碱处理后细胞培养液中这些炎性因子释放的含量.结果:异钩藤碱有效地抑制了LPS诱导的星形胶质细胞炎性介质释放,并降低了iNOS mRNA的表达水平.结论:异钩藤碱具有较好的中枢炎症抑制作用,为传统中药钩藤作为治疗缺血性脑病药物提供了科学依据.     

exendin-4对Aβ介导的星形胶质细胞炎症反应的改善作用及与NLRP2相关通路的研究

目的探究exendin-4对Aβ介导的星形胶质细胞的改善作用,并探讨其与NOD2受体家族蛋白(NLRP2)信号通路的相互关系。方法以体外原代培养的SD大鼠星形胶质细胞为研究对象,以MTT检测最佳Aβ、exendin-4的干预浓度、时间;流式细胞术检测细胞氧化应激ROS表达水平;ELISA检测炎症因子IL-1β和TNFα;RT-q PCR和Western印迹检测exendin-4预处理后Aβ损伤的星形胶质细胞中NLRP2的表达水平;使用腺病毒过表达星形胶质细胞NLRP2基因后,Western印迹检测NLRP2相关通路蛋白的变化情况。结果 Aβ干预后星形胶质细胞增殖活性明显下降,氧化应激水平明显升高,炎症因子IL-1β,TNF-α表达量显著升高;NLRP2基因的表达升高(P<0.05);使用exendin-4预处理后显著提高Aβ介导的星形胶质细胞增殖活性,降低氧化应激的水平及炎症因子的表达(P<0.05),NLRP2基因的也表达下降(P<0.05)。使用腺病毒过表达NLRP2基因后,其下游凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、人胱天蛋白酶1、IL-1β表达、ROS水平及炎症因子水平相比于空白组明显升高(P<0.05);使用exendin-4干预后,炎症相关蛋白NLRP2,ASC,胱天蛋白酶1和IL-1β的表达显著下调,同时ROS与炎症因子的水平明显降低(P<0.05)。结论 exendin-4能够改善Aβ介导的星形胶质细胞中炎症反应,可能是通过NLRP2信号通路参与到阿尔茨海默病的神经细胞的保护。     

槐定碱对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响

摘要：目的:研究槐定碱（sophoridine）对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响及机制。方法:星形胶质细胞分成对照组、缺氧复氧（H/R）组、sophoridine低、中、高剂量组(10,20,40 mg·L-1)、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA(阴性对照载体组、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA-Toll样受体4（TLR4）（TLR4过表达载体）组。CCK-8法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4蛋白表达,ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）变化。结果:与对照组比较,H/R组星形胶质细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多,TLR4蛋白水平升高（P<0.05）。与H/R组比较,sophoridine低、中、高剂量组星形胶质细胞增殖活性逐渐升高,细胞凋亡率逐渐降低,细胞中Bax蛋白表达逐渐减少,Bcl-2蛋白表达逐渐增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6逐渐减少,TLR4蛋白水平逐渐降低（P<0.05）,且呈剂量相关性（P<0.05）。与sophoridine+pcDNA组比较,sophoridine+pcDNA-TLR4组星形胶质细胞中TLR4蛋白表达增多,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多（P<0.05）。结论:槐定碱通过下调TLR4从而抑制缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子的释放和细胞凋亡     

P物质对星形胶质细胞胞内钙离子浓度和白细胞介素10释放的作用观察

目的探讨P物质对星形胶质细胞的直接作用。方法利用原代培养的星形胶质细胞,P物质孵育后,采用免疫细胞化学的方法观察细胞形态的变化,采用细胞内钙离子成像方法记录P物质作用前后胞内钙荧光强度的变化。采用酶联免疫吸附试验检测细胞释放白细胞介素(IL)-10的情况。结果 P物质孵育后,星形胶质细胞表现出激活态的形态学改变,P物质孵育后引起星形胶质细胞内Ca2+浓度增加,星形胶质细胞释放抗炎因子IL-10减少。结论脊髓水平传递痛信号的神经递质P物质可刺激活化脊髓星形胶质细胞,活化的星形胶质细胞通过抑制抗炎因子IL-10的释放,最终导致慢性疼痛的发生。     

AQP4与星形胶质细胞胀亡之间的关系

细胞胀亡是不同于细胞凋亡的一种死亡方式,主要是因为细胞内ATP合成障碍,胞膜离子泵功能丧失,导致水及离子进入细胞内,引起细胞器及细胞肿胀,最终细胞死亡。有研究发现缺血缺氧状态下星形胶质细胞的死亡属于胀亡。AQP4是大脑内重要的水通道蛋白之一,主要在星形胶质细胞的足突表达,其主要作用为通过对水的转运．维持细胞内外水平衡。细胞胀亡与水通道的功能有关,星形胶质细胞的胀亡也与AQP4有密切关系,在缺血缺氧的情况下,星形胶质细胞的AQP4表达会出现上调或下调,从而导致星形胶质细胞内外水平衡被破坏．引起星形胶质细胞肿胀,最终出现细胞胀亡。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

珠子参总皂苷通过上调miR-325-3p抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症因子释放

摘要：目的:探讨珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症因子表达的影响及可能机制。方法:体外培养大鼠星形胶质细胞,不同剂量(50,100,200μg·ml-1)的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的星形胶质细胞24 h、脂多糖处理转染miR-325-3p模拟物的星形胶质细胞24 h或200μg·ml-1的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的的转染miR-325-3p抑制剂的星形胶质细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved-caspase3）和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved-caspase9）蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平,实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测细胞中微小RNA-325-3p（miR-325-3p）表达。结果:珠子参总皂苷可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌（P<0.05）,促进miR-325-3p表达（P<0.05）,且呈剂量依赖性。过表达miR-325-3p可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌（P<0.05）。敲减miR-325-3p逆转珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡及TNF-α和IL-6表达的抑制作用（P<0.05）。结论:珠子参总皂苷可能通过上调miR-325-3p表达抑制脂多糖诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡和炎症反应。     

胰岛素分泌机制

在胰岛B细胞的粗面内质网中,前胰岛素原mRNA经转录而合成分子量为11500的前体分子,即前胰岛素原,其寿命极短,约30～60秒。它合成后即刻在胰岛BN胞中经过微粒体酶的作用将其裂解为分子量为9000的胰岛素原,然后转运至Golgi复合体,形成被成笼蛋白包被的囊泡,内含胰岛素原。分泌颗粒成熟后去除成笼蛋白包被,胰岛素原经蛋白水解酶的酶切转化为胰岛素和C肽,并逐步形成分泌颗粒,储藏在小囊泡内。当胰岛B细胞受到刺激后,分泌颗粒与胞浆膜融合并将其内容物释放,该过程被称为胞吐作用。     

星形胶质细胞-神经元的相关关系研究进展

星形胶质细胞在神经系统中的作用类似于调控者,信息传递者和区域划分者,更多时候它是感受神经元活动并作出相应反应,比如监控并摄入多余神经递质并把信息传递给小胶质细胞和少突胶质细胞,对这部分神经元进行选择,是否突触修剪、是否完成髓鞘化、使电传递稳定和筛选出优势传导通路。它类似于外周的纤维细胞,支持与营养作用是被动的。星形胶质细胞和神经元的关系已成为神经生物学中的热点。目前对星形胶质细胞和神经元相互作用主要包括能量代谢、突触可塑性和谷氨酸循环等。星形胶质细胞在一定应激条件下,由静息性星形胶质细胞向反应性星形胶质细胞转变;还可以通过特定的转录因子(例如Neuro D1,Sox2等)在体外以及体内转变为神经细胞。神经元分泌的Sonic hedgehog(Shh)、星形胶质细胞分泌的TGF-β1和Chrdl1等均相互影响彼此。神经连接蛋白(Neuroligin)如蛋白NL1,NL2和NL3的水平与星形胶质细胞的大小和形状成正向调节。因此,本文主要从星形胶质细胞和神经元之间的关系,包括相互作用、转化作用、分泌物和其蛋白相互影响等进行综述。     

山茱萸活性成分对D-半乳糖致衰星形胶质细胞影响的实验研究

目的研究山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰大鼠星形胶质细胞的保护作用。方法常规方法体外培养乳大鼠大脑皮层星形胶质细胞,采用免疫荧光方法进行星形胶质细胞鉴定;MTT法对比不同浓度D-半乳糖对星形胶质细胞的增殖抑制作用,以及马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰星形胶质细胞活力的影响;以超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)为观察指标,观察马钱苷、莫诺苷对D-半乳糖致衰星形胶质细胞的影响;ELISA法检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量变化;Western blot法检测Bax、caspase-3、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/ERK激酶(p-MEK1/2)的表达水平,以做进一步机制研究。结果马钱苷、莫诺苷组与模型组比较,细胞的增殖能力提高,SOD含量增加,MDA活性降低,且差异有显著性(P<0.05);马钱苷、莫诺苷组生长因子(GDNF、bFGF)的分泌高于模型组;Western blot结果表明,D-半乳糖致衰老的星形胶质细胞中Bax、caspase-3蛋白表达无明显变化,模型组pERK1/2、p-MEK1/2蛋白表达降低,马钱苷、莫诺苷增加pERK1/2、p-MEK1/2蛋白的表达。结论山茱萸活性成分马钱苷、莫诺苷可通过提高D-半乳糖致衰星形胶质细胞的增殖能力,提高衰老细胞的抗氧化能力,发挥抗衰老作用,其机制可能与MEK/ERK介导的信号通路调控有关。     

EGFR siRNA通过阻碍STAT3磷酸化抑制大鼠星形胶质细胞活化

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在脑出血后血肿周围脑组织中的表达,及其对大鼠星形胶质细胞活化的影响与分子机制。方法收集临床脑出血后实施血肿清除术的血肿周围脑组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为<1 d组、1~5 d组、6~10 d组及>10 d组,每组20例,同时取20例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过免疫组织化学染色及Western blot测定EGFR表达。分离培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别给予培养液(对照组)、睫状神经营养因子(CNTF,用于活化星形胶质细胞)、Scramble siRNA+CNTF、EGFR siRNA+CNTF处理24 h,荧光实时定量PCR检测神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA表达,并采用Western blot分析GFAP、信号传导蛋白和转录激活物3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果随着脑出血时间的延长,EGFR阳性信号指数及蛋白表达水平逐渐升高,6~10 d达到高峰,10 d后仍处于较高水平,两两比较差异均有显著性(P<0.01)。CNTF单独处理明显增加GFAP mRNA与蛋白、p-STAT3表达水平,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01),EGFR siRNA转染几乎完全逆转CNTF诱导的上述变化(P<0.01),但各组STAT3蛋白表达水平无区别(P>0.05)。结论 EGFR在脑出血后血肿周围脑组织中表达升高,EGFR基因沉默有助于抑制大鼠星形胶质细胞活化,其机制可能与阻碍STAT3磷酸化有关。     

淀粉样β蛋白25-35诱导大鼠星形胶质细胞表达单胺氧化酶B(英文)

目的:观察淀粉样β蛋白25-35(Aβ 25-35)对大鼠星形胶质细胞内单胺氧化酶活性及表达的影响。方法:用免疫组织化学方法观察Aβ25-35对大鼠星形胶质细胞形态的影响;用荧光分光光度法检测MAO的活性;用RT-PCR观察A β25-35对MAO表达的影响。结果:Aβ 25-35可诱导星形胶质细胞呈现激活形态,伴有胶质原纤维酸性蛋白染色增强。Aβ25-35可使星形胶质细胞内MAO-B活性增强,并呈剂量和时间依赖性。经RT-PCR检测发现,MAO-B活性增强是由于MAO-B mRNA表达升高所致。结论:Aβ25-35可选择性上调大鼠星形胶质细胞内MAO-B的表达,该作用在阿尔采末病的病理过程中可能具有重要意义。     

吡格列酮对脂多糖刺激的星形胶质细胞白介素-1β的抑制作用及机制

目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞白介素-1β(IL-1β)抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法 ELISA法测定培养液中IL-1β的含量;免疫荧光染色法观察星形胶质细胞IL-1β的蛋白表达;Western blot检测星形胶质细胞磷酸化JNK1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变。结果星形胶质细胞在LPS(10 mg.L-1)刺激下IL-1β的含量、蛋白表达以及磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun蛋白水平与正常对照组比较均增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10.0μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的IL-1β产生增加;Pio(0.1、1.0、10.0μmol.L-1)则可降低IL-1β产生,抑制IL-1β的蛋白表达及下调p-JNK1、p-c-Jun蛋白水平。结论 Pio能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞IL-1β表达增加,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。     

知母皂苷对脂多糖引起星形胶质细胞炎症因子释放的影响及机制

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AC)炎症因子释放的抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法实验设对照组、LPS组、SAaB组和阻断剂组。ELISA法和Griess法分别测定各组AC培养液中TNF-α和NO的含量;Western blot检测AC磷酸化JNK和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变;免疫荧光染色法观察AC的磷酸化ATF-2蛋白表达水平。结果 AC在LPS(10mg.L-1)刺激下TNF-α和NO的分泌、磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的TNF-α和NO产生增加以及磷酸化ATF-2蛋白表达水平;SAaB(1、10、100μmol.L-1)则可明显降低TNF-α和NO产生,下调磷酸化JNK、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2的蛋白表达水平。结论 SAaB能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层AC炎症因子的释放,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。