氯乙烯暴露工人淋巴细胞P53基因mRNA表达

目的探讨氯乙烯(VCM)暴露工人外周血淋巴细胞P53mRNA表达的变化,分析P53基因表达与VCM暴露量以及P53基因多态的关系。方法以VCM1年的75名工人为暴露组,以43名无VCM以及其他毒物接触史的本地志愿者为对照组,实时定量PCR嵌合荧光法(SYBR Green I染料法)检测P53基因mRNA表达量。结果VCM暴露组和对照组P53 mRNA相对表达量(2-△Ct×102)的中位数及上、下四分位数分别为0.467(0.097,1.816)和1.640(0.960,2.680),经稳健线性回归分析排除年龄因素的影响,2组表达量差异有统计学意义(χ2=53.42,P0.000 1)。按累计接触剂量将暴露人群分为高接触组和低接触组,2组P53基因表达差异无统计学意义(P=0.966)。P53基因3个多态位点不同基因型对其mRNA表达量无明显影响(P0.05)。结论VCM暴露会引起机体P53mRNA表达量降低。     

cdk5、p35和p53基因在砷诱导的神经细胞凋亡中的改变

目的 研究cdk5、p35和p53基因表达量在As2O3诱导的神经细胞凋亡中的改变,为探讨As2O3神经毒性的机制提供基础资料.方法 将原代培养的大鼠神经元分为未处理对照组,DMSO溶剂对照组,1、5、10 μmol/L As2O3染毒组,分别用1、5、10 μmol/L As2O3溶液染毒,未处理对照组只加入培养液.染毒8h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测神经细胞活力,用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测cdk5、p35、p53基因的表达.结果 1、5、10 μmol/L As2O3染毒组神经细胞活力抑制率分别为16.77％、19.72％、27.81％.与未处理对照组和溶剂对照组相比,5和10μmol/L As2O3染毒组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组cdk5、p35、p53基因的表达量随着染毒剂量的增加而升高,各组间p35基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05);cdk5和p53基因表达量的组间差异有统计学意义(P＜0.05),5和10 μmol/L As2O3染毒组cdk5基因表达量明显高于未处理对照组和溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、5和10 μmol/L As2O3染毒组p53表达量明显高于未处理对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);其中10 μmol/L As2O3染毒组p53基因表达量明显高于DMSO溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cdk5、p35和p53可能参与了As2O3诱导的神经细胞凋亡过程.     

肝癌p53基因等表达异常及相关性研究

目的：从分子生物学及病理学角度对肝癌中抑癌基因p53和肿瘤志标志物AFP（甲胎蛋白）、CEA（癌胚抗原）的表达及相关性进行研究。方法：收集40例肝细胞（HCC）患癌组织连带部分癌旁组织，用免疫组织化学法检测p53基因、AFP、CEA等。结果：p53基因癌内表达率为80％，癌旁组织为50％；AFP癌内表达率为87．5％，癌旁组织为80％；CEA癌内表达率为55％，癌旁组织表达不明显。结论：检测p53基因，并与其它肿瘤标志物和相关基因一起，在基因水平诊断肝癌，估计预后及制定术后治疗方案等有着重要作用。     

砷的致癌性与p53基因

本首先概念了砷致癌机制的研究进展，综合讨论了砷的致癌性，p53基因的作用机制和砷与p53基因关系等方面的研究进展，为进一步深入研究砷的致癌作用机制和临床合理有效使用砷制剂提供依据。     

苯接触工人外周血中淋巴细胞p53基因mRNA表达的研究

目的探讨苯接触工人外周血中淋巴细胞p53基因mRNA的表达,分析p53基因表达与苯接触量以及p53-Mdm2-p14ARF通路基因多态的关系。方法选取职业苯接触工龄≥1a的77名工人为接触组,37名无职业性苯及其他毒物接触史的本地志愿者为对照组,采用实时定量PCR嵌合荧光法检测其外周血中淋巴细胞p53基因mRNA表达量。同时采用限制性长度多态检测法对接触组工人p53-Mdm2-p14ARF通路中8个基因多态进行检测。结果接触组和对照组p53基因mRNA相对表达量(2-△Ct×103)的中位数及上、下四分位数分别为1.85(0.57,4.04)和15.41(9.29,25.56),经稳健线性回归分析排除年龄、性别等因素的影响,两组表达量差异有统计学意义(P0.01)。根据苯累计接触剂量将接触组分为低、中、高苯累计接触组,各组p53基因表达水平均明显低于对照组(P0.01),其相对表达量随累计接触剂量的增加而降低(P0.01)。携带p14ARF基因rs3731245多态突变型个体p53基因mRNA表达水平则明显低于野生纯合型(P0.05)。结论苯接触可引起机体外周血中p53基因mRNA表达量降低。     

p53基因在胃癌、胃炎和正常组织中的表达

目的从基因角度探讨胃癌、胃炎的发病机理的差别.方法用免疫组化Sp法检测35例进展期胃癌、8例早期胃癌、17例萎缩性胃炎、15例浅表性胃炎及14例正常组织标本中抑癌基因p53蛋白的表达.结果p53基因的表达在进展期胃癌标本中最高,其次是早期胃癌和萎缩性胃炎,而浅表性胃炎和正常组织标本中,p53均无表达.高分化腺癌中p53的表达要低于低分化腺癌和中分化腺癌,有统计学差异(P＝0.02和P＝0.02),p53基因表达在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组之间无统计学差异(P＝0.57).结论p53基因异常与胃粘膜细胞癌变过程密切相关,可用于高危个体筛查或癌前病变危险的预测,从而在基因水平对胃癌的早期诊断及治疗提供帮助.     

酒精性股骨细胞凋亡及其p53等基因的表达

目的　探讨细胞凋亡抑癌基因 (p5 3)和细胞凋亡抑制基因 (Bcl 2 )基因在酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞凋亡中的作用。方法　家兔 6 0只 ,随机分为 2组。灌胃法建模 ,实验组给予含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给予等量生理盐水 ,1～ 6个月分批处死。原位末端标记法 (TUNEL法 )检测骨细胞凋亡 ,免疫组化检测 p5 3和Bcl 2基因表达。结果　第 2 ,3,6个月 ,实验组出现大量骨细胞凋亡 ,以软骨下区最为明显 ,骨细胞凋亡数明显高于对照组 (P <0 0 1) ;两组间骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数、p5 3基因阳性细胞数均有显著性差异 (P <0 0 1) ,实验组骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数与细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 75 ,P <0 0 1) ,实验组骨细胞 p5 3基因阳性细胞数与细胞凋亡指数呈明显正相关性 (r=0 6 8,P <0 0 1)。结论　酒精性ANFH中骨细胞存在明显凋亡现象 ,且受 p5 3基因上调与Bcl 2基因下调影响 ,p5 3与Bcl 2共同调节骨细胞凋亡。     

p53蛋白在苯并(a)芘诱导的p21、E2F-1表达及细胞周期改变中的作用

目的 探讨p53蛋白在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用及其与p21、E2F-1的关系.方法 转染p53 siRNA质粒(p53-H)和载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)无血清培养48 h后,加入2 μmol/L B(a)P作用24 h.用流式细胞仪检测细胞周期的变化.用Western blotting检测细胞中p53、p21蛋白含量的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位.用免疫荧光法观察E2F-1蛋白含量及细胞核、细胞浆分布.利用p53 siRNA质粒和化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察p53与p21、E2F-1的上下游关系以及其在B(a)P引起的细胞周期改变中的作用.结果 2 μmol/L B(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±5)%减少为(39±4)%;p53、p21以及E2F-1蛋白含量增加,并且主要分布在细胞核内.用p53 siRNA质粒和PFT抑制p53表达后,B(a)P诱导的p21高表达被抑制,细胞核内的含量明显减少;B(a)P诱导的E2F-1蛋白含量增加以及细胞周期的改变没有明显变化.结论 B(a)P通过p53非依赖的信号通路引起HELF细胞周期的改变;p53对p21的表达具有调节作用,而对E2F-1的表达不具有调节作用.     

宫颈癌中突变型p53和野生型p53的表达

目的:探讨突变型p53(mt-p53)蛋白和野生型p53(wt-p53)在宫颈癌的发生发展中的作用。方法:对51例标本应用免疫组织化学染色检测mt-p53蛋白表达,应用原位杂交法检测wt-p53 mRNA。结果:随着宫颈癌分化程度降低,突变型p53蛋白表达有升高趋势,在各级间比较均有统计学差异,随着癌前病变的发展,宫颈癌的分化程度降低,野生型wt-p53表达程度明显降低,均有统计学差异(P<0.05)。结论:在宫颈的癌前状态到癌性增殖过程中,mt-p53蛋白在逐渐积累,造成肿瘤的恶性程度逐渐增高,wt-p53具有抑制肿瘤细胞的作用,wt-p53表达程度越低,肿瘤的恶性度越高。而mt-p53表达水平越高,wt-p53表达水平就越低。     

大肠癌患者p53基因的表达与预后的关系

目的探讨p53基因在大肠癌组织中的表达及与预后的相关性.方法应用免疫组织化学SP法检测了120例大肠癌组织中p53蛋白的表达.结果p53蛋白在本组大肠癌组织中阳性表达率为62.50%(75/120).p53蛋白的表达与大肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、大体分型、肿瘤部位、组织学分级、淋巴结转移、浸润深度、Dukes'分期均无关(P＞0.05).p53蛋白的表达与大肠癌预后有关,p53蛋白阳性表达组术后生存率明显低于阴性表达组(P＜0.000 1).结论p53基因可能是影响大肠癌患者生存的一个重要预后指标.     

高分辨率熔解曲线技术对苯作业人员MDR1 C3435T检测的应用

目的 探讨MDR1 C3435T对苯作业人员外周血白细胞(WBC)计数的影响.方法 检测121例苯作业人员和110例正常对照组MDR1基因的多态性,并对苯作业人员中携带不同基因型个体的WBC计数进行比较.结果 对照组MDR1 3435 C/C基因型分布频率为37.27%,C/T基因型为46.36%,T/T基因型为16.37%;接触组C/C基因型分布频率为38.84%,C/T基因型为41.33%,T/T基因型为19.83%,两组比较,差异无统计学意义(P=0.686).接触组携带T/T基因型者WBC计数为(5.46±1.51)×109/L,明显低于携带C/C+C/T基因型者[WBC计数为(6.08±1.28)×109/L],差异有统计学意义(P=0.044).结论 苯血液系统毒作用机制中可能涉及多药耐药基因编码产物P-糖蛋白的参与,携带MDR1 3435T/T基因型个体接触苯,可增高中毒风险.

Abstract：

Objective To explore the effects of MDR1 C3435T on the peripheral white blood cell counts in workers exposed to benzene. Methods One hundred and twenty-one benzene-exposed workers and 110 healthy controls without benzene exposure were enrolled in this study. White blood cell counts influenced by the polymorphism of MDR1 gene were analyzed. Results The frequency of MDR1 3435 C/C, C/T, T/T in healthy controls was 37.27%, 46.36%, 16.37%, respectively,and it was 38.84%, 41.33%, 19.83% in the benzene-exposed workers, respectively. The frequency of the MDR1 gene was also not significantly different between benzene exposed workers and controls. Subjects exposed to benzene with MDR1 3435 mutation genotype (T/T) had the significantly lower WBC[(5.46±1.51 )×109/L] than those carrying wild type(C/C) and heterozygous (C/T), whose WBC were (6.08±1.28)×109/L(P=0.044). Conclusion P-glycoprotein encoded by MDR1 gene may be implicated into the hematotoxicity of benzene. Subjects carrying MDR1 3435 T/T genotype may have a higher risk of benzene poisoning.     

MDR1 C3435T基因多态性对苯作业人员外周血白细胞计数的影响

目的 探讨MDR1 C3435T对苯作业人员外周血白细胞(WBC)计数的影响.方法 检测121例苯作业人员和110例正常对照组MDR1基因的多态性,并对苯作业人员中携带不同基因型个体的WBC计数进行比较.结果 对照组MDR1 3435 C/C基因型分布频率为37.27%,C/T基因型为46.36%,T/T基因型为16.37%;接触组C/C基因型分布频率为38.84%,C/T基因型为41.33%,T/T基因型为19.83%,两组比较,差异无统计学意义(P=0.686).接触组携带T/T基因型者WBC计数为(5.46±1.51)×109/L,明显低于携带C/C+C/T基因型者[WBC计数为(6.08±1.28)×109/L],差异有统计学意义(P=0.044).结论 苯血液系统毒作用机制中可能涉及多药耐药基因编码产物P-糖蛋白的参与,携带MDR1 3435T/T基因型个体接触苯,可增高中毒风险.     

Cytogenetics and cytokinetics of cultured lymphocytes from benzene-exposed workers

Summary Cytogenetic and cytokinetic changes were examined using the differential staining method for sister chromatids in cultured lymphocytes from 16 female workers who had been occupationally exposed to up to 40 ppm of benzene for 1–20 years. While no increases in the number of structural and numerical chromosome aberrations nor any changes in cell-cycle kinetics were observed, a slight decrease in the frequency of sister-chromatid exchanges was detected. This apparently reverse finding of decreased sister-chromatid exchanges may be a manifestation of the subtler effect of the environmental chemical on the DNA replication mechanism. Possible dose-effect relationship in benzene-induced chromosome aberrations was discussed.     

不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复相关基因转录水平的影响

目的 阐明不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞中DNA损伤修复相关基因(hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D)转录水平的影响。方法 抽取志愿者外周静脉血约30 mL，分置于7支肝素锂抗凝管中，以剂量率为0.38 mGy·min^-1的⁶⁰Co γ射线（剂量分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 Gy）对人外周血照射后培养12 h，分离外周血淋巴细胞，提取总RNA并进行定量和纯度分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)的方法分析不同剂量电离辐射诱导DNA损伤修复相关基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D基因转录水平的变化。结果 hOGG1基因、MGMT基因和PPP2R2D基因的mRNA转录水平均在0.1 Gy时达到峰值。PPP2R1A基因的mRNA转录水平在0.2 Gy剂量时达到峰值。hOGG1基因转录水平在0.1 和0.2 Gy剂量组均较对照组显著增高，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。MGMT基因转录水平在0.1 、0.2 和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。PPP2R1A基因转录水平在0.2 Gy剂量组比对照组明显增高，在3.2Gy剂量组比对照组明显降低，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。PPP2R2D基因转录水平在0.1 、0.2 、0.4 和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组，3.2 Gy剂量组比对照组明显降低，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 不同剂量电离辐射均可诱导DNA损伤修复相关的应答基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D的转录水平改变，适宜剂量的电离辐射（0.1～0.2 Gy）可诱导细胞产生辐射兴奋效应或适应性反应。     

p53和热休克蛋白70在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的 探讨p53和热体克蛋白70(HSP70)在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达、与GIST临床病理学特征的关系及两者表达的相关性.方法 应用免疫组织化学SP法检测48例GIST组织中p53和HSP70的表达情况,分析其与临床病理特征的关系,并比较两指标在GIST中表达的相关性.结果 48例GIST中,p53和HSP70阳性表达率分别为60.42%(29/48)和64.58%(31/48).p53和HSP70的表达与GIST的部位、患者性别、年龄无关(P>0.05),与组织学分级有关(P<0.05),p53与HSP70的表达呈正相关(X2=4.075,P<0.05).结论 p53和HSP70在GIST中均有表达,两者均随着GIST侵袭程度的增高其表达明显增加.提示p53和HSP70在GIST的发生、发展中发挥作用,两者可作为判断肿瘤侵袭危险性的客观指标.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the expression of p53,heat shock protein 70(HSP70)and clinieopathologie eharacteristies in gastrointestinal stromal tumor(GIST),and the correlation between p53 and HSP70 expression.Methods p53 and HSP70 expression of 48 cases with GIST was detected by immunohistechemieal SP method.Analyzed the correlation between p53 and HSP70 expression.Results Among 48 cases with GIST,the positive rate for p53 and HSP70 were 60.42%(29/48) and 64.58%(31/48)There was no significant difference in the gender,age of patients.localization of tumor (P>0.05).but there was significant difference in the histological grade (P<005).There was positive correlation between the expression of p53 and HSP70(X2=4.075,P<0.05).Conclusions The positive rate of p53 and HSP70 in GIST is high,especially in hish risk patients.The expressions of p53 and HSP70 play an important role in the pathogenesis and development of GIST,which may be used as an objective parameter for distinguishing malignant GIST from benign cases.     

Oxidative DNA damage in peripheral blood lymphocytes of coal workers

Reactive oxygen species are important mediators of both mineral dust-induced (malignant) lung disease and in vitro DNA damage. Therefore, we studied in vivo oxidative DNA damage in coal workers who had been chronically exposed to silica-containing dust. In peripheral blood lymphocytes of 38 retired coal miners (eight with coal workers pneumoconiosis, 30 references) and 24 age-matched, non-dust-exposed controls 7-hydro-8-oxo-2-deoxyguanosine (8-oxodG) was determined by reversed phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. The ratio of 8-oxodG residues to deoxyguanosine (dG) was related to individual cumulative dust exposure estimates and pneumoconiotic stage as established by chest radiography. The ratio of 8-oxodG to dG(x 10^–5) in lymphocytes did not differ between miners with coal workers' pneumoconiosis (2.61 ± 0.44) and miners without coal workers' pneumoconiosis (2.96 ± 1.86). However, oxidative DNA damage in all miners was higher than in the non-dust-exposed controls (1.67 ± 1.31). 8-oxodG/dG ratio was not related to individual cumulative coal dust exposure, age or smoking (pack years) when evaluated by multiple linear regression. We suggest that oxidative damage to the DNA of peripheral blood lymphocytes may be introduced by increased oxidative stress responses in subjects chronically exposed to mineral dusts. Whether this is an important pathway in the suggested carcinogenicity of silica is still an open question.     

p53表达在石英诱导的细胞周期改变及DNA损伤修复中的作用

目的 探讨p53表达在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变及DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)修复中的作用.方法 3种方式分组处理细胞:(1)不同浓度(0、25、50、100、200、300、400μg/ml)的石英刺激HELF细胞12 h;(2)200 μg/ml石英刺激HELF细胞O、1、2,6、12、24 h;(3)200μg/ml石英刺激H-CMV和H-p53细胞O、12、24 h.用中性彗星试验检测石英所致的DSBs损伤强度,并计算DNA修复能力(DNA repair compentence,DRC),用免疫印迹法检测蛋白表达和磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 (1)200μg/ml的石英作用HELF细胞不同时间,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平随着作用时间的延长逐渐升高,12 h达峰值,24 h较12 h略有降低;不同浓度的石英作用HELF细胞12 h,随着石英浓度的增加,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平逐渐增强,呈现剂量-反应关系.(2)石英作用于p53 siRNA的阴性对照细胞H-CMV,DRC为57.19%:石英作用沉默p53表达的H-p53细胞后,DSBs的修复能力增强,DRC为87.68%.(3)石英作用p53siRNA的阴性对照细胞24 h后,S期细胞比例由(24.3±3.8)%增加到(31.8±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默p53表达后,石英诱导的HELF细胞S期细胞比例[(41.4±0.6)%]与同期对照组[(25.4±1.9)%]相比有明显增加.差异有统计学意义(P<0.05).结论 石英可诱导p53表达及磷酸化水平的增加,p53表达上调可抑制石英所致S期细胞百分比的增加及石英所致DNA双链断裂的修复.