壳聚糖固定胰蛋白酶的研究

目的：从蟹壳中提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在从蟹壳中提取的壳聚糖上。方法：以自制壳聚糖为载体，戊二醛为双官能团交联剂，将胰蛋白酶固定化。结果：０．２ｇ壳聚糖（干）与４％戊二醛交联后再与５．０ｍｇ胰蛋白酶固定结合，效果较好。固定化酶的表现米氏常数Ｋ′ｍ＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，而天然酶Ｋｍ＝７．６ｍｍｏｌ／Ｌ；固定化酶最适温度为８０℃，比天然酶提高了２０℃；固定化酶最适ｐＨ为７．０．而天然酶为８．０。该载体来源广，易提取，固定化酶的贮存稳定性很好，２个多月重复使用，酶活力未见明显下降     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的研究

目的虾蛄壳提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在该壳体聚糖上，方法以自制壳聚糖为载体，一氯醋酸为交联剂，将胰蛋白酶固定化，结果，固相酶的最适温度为５０℃，原酶为４５℃固相酶最适ｐＨ值为７．０，原酶为８．０，固相酶的表面米氏常数Ｋｍ＝１２ｍｍｏｌ／Ｌ，原酶Ｋｍ＝２３ｍｍｏｌ／Ｌ，结论该固定化酶活力较高，抗酸能力强，热稳定性和储存稳定性好，是良好的检验试剂。     

α－淀粉酶在壳聚糖上的固定化研究

报道从蟹壳中提取壳聚糖的方法。以壳聚糖为载体，戊二醛为双官能团交联剂，将α－淀粉酶固定化。结果表明固定化α－淀粉酶与原酶的最适ｐＨ值基本相同，且均有２个最适ｐＨ值，分别为５和６．５；固定化酶的表观米氏常数ｋｍ′＝０．３３×１０￣（－２）ｍｇ／ｍｌ，而原酶ｋｍ＝１×１０￣（－２）ｍｇ／ｍｌ；固定化酶的热稳定性明显高于原酶，固定化酶的最适温度为６５℃，原酶为５０℃。     

固定化牛肾氨基酰化酶拆分法制备D—丙氨酸

研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分ＤＬ－Ａｌａ制备Ｄ－Ａｌａ及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明,固定化酶反应的最适ｐＨ为７．０,最反应温度为３０￣３５℃;固定化酶拆分反应的酶量选择为５ｍｇ／ｍｌ,时空体积ＳＶ＝１．０,在ｐＨ７．０,３０℃条件下的全拆分底物浓度为０．１ｍｌ／Ｌ。固定化酶常温１周内拆分率稳定,但对热不稳定,４０℃条件下放置３０ｍｉｎ活力下降３０％。     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

固定化胰蛋白酶水解酪蛋白及亲合吸附提取磷肽的研究

采用固定化胰蛋白酶水解酷蛋白,在ｐＨ８．０的硼酸缓冲液中４０℃恒温水浴２０ｈ,得到含有磷肽的溶液;然后用壳聚糖交联珠在ｐＨ３．６的ＨＣＬ－甘拟酸缓冲液中亲和吸附磷肽,再用ｐＨ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ缓冲液洗脱,计算平均磷肽吸附量。结果显示,壳聚糖交联珠亲合吸附法与常规的硫氨络铁琼脂糖珠提取法的磷肽吸附量基本相同,但壳聚糖交联珠亲合吸附法操作简便,特异性高,价格低廉。     

固定化木瓜蛋白酶的制备及性质

用硫酸铵分级沉淀法从木瓜粉提取液中分离木瓜蛋白酶，将其偶联在对氨基苯磺酰乙其次 联琼脂上，制得固定化木瓜慢白酶。实验结果表明；木瓜蛋白酶与ＡＢＳＥ－交联琼脂的最佳结合量是每克干交联琼脂１４．０μｍｏｌ／ｓ，固定化酶的最适反应ｐＨ为８．０，最适反应温度为７５℃，Ｋｍ为６７．６ｍｍｏｌ／Ｌ。     

色氨酸酶基因工程菌固定化及其培养条件的研究

目的 :对色氨酸酶基因工程菌ＷＷ 11进行固定化及培养条件研究 ,为工业化生产Ｌ 色氨酸奠定基础。方法 :通过色氨酸酶活力测定 ,考察三种固定化材料及温度、ｐＨ、单价阳离子降乙醇对固定化ＷＷ 11色氨酸酶活力的影响。结果 :以聚乙烯醇作为ＷＷ 11的固定化载体 ,其活力回收为 6 0 9%。固定化ＷＷ 1色氨酸酶降解反应最适 ｐＨ为 9 0、最适温度为 5 0℃ ;固定化ＷＷ 1色氨酸酶合成反应最适 ｐＨ为 7 5、最适温度为 45℃。Ｋ 、ＮＨ 4对固定化工程菌色氨酸酶有明显激活作用 ,而Ｎａ 则有一定的抑制作用。结论 :固定化工程菌色氨酸酶对温度…     

固定化酶催化合成半乳糖寡糖

以壳聚糖固定化米曲霉β－半乳糖苷酶,连续催化合成半乳糖寡糖（ＧＯＳ）,在填充床固定化酶反应器中,研究底物浓度、ｐＨ,反应温度和停留时间对ＧＯＳ连续合成的影响,最佳反应条件为：底物浓度４００ｇ／Ｌ,反应温度５０℃,ｐＨ５．８,停留时间３５ｍｉｎ,产物的最高得率为６２％。     

基因工程菌CTB2的固定化及其制备L—苯丙氨酸的研究

对以卡拉胶为载体固定化基因工程菌ＣＴＢ２制备Ｌ－苯丙氨酸进行了研究。比较了固定化细胞的最适温度和最适ＰＨ,考察了该固定化细胞的柱以应特性以及产物Ｌ－苯丙氨酸的分离方法。结果表明,固定化细胞的最适温度为３０℃,最ＰＨ为７．０,柱反应最佳空时速度ＳＶ＝０．１９ｈ＾－１底转化率为２０％,固定化酶半衰期大于３０ｄ。     

壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

目的　从虾蛄壳提取壳聚糖 ,将α-淀粉酶固定在壳聚糖上。　方法　以自制壳聚糖为载体 ,一氯乙酸或三氯乙酸为交联剂 ,将α-淀粉酶固定化。　结果　三氯乙酸是较好的交联剂。固定化酶与原酶的最适 p H及最适温度基本相同 ,均为 6.5 ,5 0℃ ;固定化酶在 65℃仍有较高热稳定性 ,而原酶活力明显下降 ;固定化酶的表观米氏常数 Km =0 .6× 10 -2 g/ml,原酶 Km =1.1× 10 -2 g/ml;一定浓度 Cl-、Br-离子有助提高固定化酶活力。　结论　该固定化酶活力较高 ,热稳定性和贮存稳定性好 ,是良好的检测试剂。     

抗癌酶制剂L—天冬酰胺酶在甲壳素上的固定化

研究了以甲壳素为载体固定化Ｌ－天冬酰胺酶的最适条件,探讨了固定化Ｌ－天冬酰胺酶的一系列理化性质。交联剂用量、缓冲液ｐＨ值和载体活化时间均对Ｌ－天冬酰胺酶的固定化有一定影响,得到的固定化Ｌ－天冬酰胺酶的活力回收可达２５．４％。固定化Ｌ－天冬酰胺酶理化性质的实验研究表明,酶经固定化后,对蛋白水解酶的稳定性及存贮稳定性均较游离酶有很大程度的提高。     

高效液相色谱法测定人血浆中尼卡地平及药代动力学参数

建立了反相高效液相色谱法检测正常人口服尼卡地平片剂后的血药浓度。样品经硼酸缓冲液（ｐＨ９０）碱化后,用正己烷 正丁醇混合溶剂（１２∶１,Ｖ／Ｖ）提取,以Ｃ１８化学键合硅胶为固定相,乙腈 ＫＨ２ＰＯ４缓冲液（００１５ｍｏｌ／Ｌ,ｐＨ＝５５） 三乙胺为流动相,尼莫地平为内标,在２３６ｎｍ波长定量检测。血药浓度在５～２００ｎｇ／ｍｌ范围内线性良好,最低检测浓度为２５ｎｇ／ｍｌ。日内（ｎ＝７）及日间（ｎ＝５）测定相对标准偏差分别小于５４％和６４％,血样测定回收率为９２８％１００８％。用本法监测了１０名健康人口服盐酸尼卡地平片剂后不同时间的血药浓度变化,测得血浆中尼卡地平浓度在１６±０３ｈ达到峰值１０９８±３８７ｎｇ／ｍｌ,Ｔ１／２＝５３５±２２８ｈ,血药浓度曲线下面积为３２２１±６９６ｎｇ·ｈ／ｍｌ。     

固定化脂肪酶的动力学研究

以壳聚糖为载体，用物理吸附固定化脂肪酶，对影响固定化过程的各种因素进行了考察，确定了最优条件，并比较了游离酶和固定化酶的最适温度、pH、酶的热稳定性以及表观Km。固定化酶水解的最适pH(pH7．0)稍低于游离酶(pH8．0)，最适温度为50℃(游离酶为40℃)。固定化酶在50℃的半衰期(0．96h)是游离酶(0．32h)的3倍，在4℃的冰箱中贮存3个月活力变化很小。     

人肝谷胱甘肽过氧化物酶的动力学性质

从人肝中分离获得谷胱甘肽过氧化物酶，其最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。该酶以Ｈ２Ｏ２或ＧＳＨ为底物时表现Ｋｍ值分别为０．２７ｍｍｏｌ／Ｌ和１．３ｍｍｏｌ／Ｌ。酶与多分子底物作用的动力学研究表明人肝谷胱甘肽过氧化物酶的作用为乒乓机制。并观察了一些金属离子和烷化剂对该酶具有不同程度的抑制作用。     

中性蛋白酶对壳聚糖的降解

用粘度测定法和还原糖测定法,研究了中性蛋白酶非专一性降解壳聚过程中温度,ｐＨ值,反应时间,酶浓度,底物浓度,金属离子及壳聚糖的脱乙酰度对中性蛋白酶降解壳聚糖反应速度的影响,确定了以壳聚糖为底物的中性蛋白酶的一些催化特性：最适温度为５０℃;最适ｐＨ值为６．０;米氏常数Ｋｍ值为１．１×１０＾－２ｇ／ｍＬ;一定浓度的Ｃｕ６２＋,Ｂａ＾２＋,Ｍｎ＾２＋抑制该酶的活性;     

国产力康结核片在健康人体内的药代动力学

目的：采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）,对８名男性健康志愿者顿服国产力康结核片（ｐａｓｉｎｉａｚｉｄｅ）与进口力排肺疾片（ｄｉｐａｓｉｃ）１２００ｍｇ后的药代动力学进行研究。方法：采用ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ１８（１０μｍ４６×２５０ｍｍ）色谱柱,甲醇∶００２ｍｏｌＮａ２ＨＰＯ４＝５∶９５（ｐＨ７．４Ｖ∶Ｖ）为流动相,流速０８ｍｌ／ｍｉｎ,检测波长２５４ｎｍ进行测定。结果：力康结核片和力排肺疾片的主要动力学参数分别为：消除半衰期：Ｔ１／２６８２±０２５ｈ和６６６±０１７ｈ;峰浓度Ｃｍａｘ：８０３±０２６ｍｇ／ｍｌ和８０８±０３ｍｇ／ｍｌ;达峰时间Ｔｍａｘ：３３９±０１０ｈ和３７７±０３１ｈ;血药浓度－时间曲线下面面积为：１１８８２±１０２８ｍｇ／Ｌ．ｈ和１２１０７±１１６８ｍｇ／Ｌ．ｈ。结论：国产力康结核片与进口力排肺疾片的主要药动学参数基本相似。两者的相对生物利用度为９８１４％,属生物等效。     

NaOCL／H2O2协同氧化制备壳寡糖

研究了ＮａＯＣＬ／Ｈ２Ｏ２协同氧化制备壳寡糖的适宜工艺条件,即用０．６ｍｏｌ摩尔配比为０．２５的ＮａＯＣＬ／Ｈ２Ｏ２协同氧化剂氧化降解６０ｇ壳聚糖,反应ｐＨ为６,温度为５５℃,时间８ｈ,可使９８％的壳聚糖转化为壳寡糖。通过对降解产物的氨基含量及红外图谱分析,证明该氧化反应主要是以开裂壳聚糖的β（１,４）糖苷键来进行 了,并对该反应的机理进行了讨论。     

可溶性固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质研究

目的 制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶并对其部分酶学性质进行研究.方法 将木瓜蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(AS-L)上制备得到水溶性固定化木瓜蛋白酶.在相同的条件下测定游离的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木瓜蛋白酶的活力,得到两种状态的酶的最适作用pH值和最适作用温度,再于它们各自的最适条件下测定活力,得到各自的Km值;在相同的条件下测定两种状态的酶的热稳定性、酸碱稳定性、低温稳定性和回收稳定性.结果 游离木瓜蛋白酶和可溶性固定化木瓜蛋白酶的最适作用pH值分别为6.0和5.0,最适作用温度分别为60℃和70℃,Km值分别为2.53、3.07mg·ml-1;可溶性固定化木瓜蛋白酶在60℃条件下,保温12h,仍有62%的活性;在4℃条件下,30d后活性保留达90%以上;在pH6.0时稳定性最好,在pH4.0-7.0范围内也比较稳定(相对活性＞80%).结论 可溶性固定化木瓜蛋白酶能够在pH5.5以上的溶液中完全溶解,最适作用pH值范围变窄,最适作用温度和Km值升高;热稳定性和酸碱稳定性均明显增强.     

固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选,并将其固定化,海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好,其浓度为１％,包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致,分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ;但最适反应温度比游离细胞高５℃,为３０℃;最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位,为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中,转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。