溶栓颗粒含药血清对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF表达影响的研究

目的：探讨溶栓颗粒含药血清对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF表达的影响。方法：用TNF-α损伤大鼠脑皮质微血管内皮细胞（BMECs）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒和中等剂量阿托伐他汀的大鼠血清干预受损的BMECs,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。结果：TNF-α可以造成BMECs损伤,表现细胞数量下降、皱缩;受损细胞的VEGF表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒和阿托伐他汀的大鼠血清能减少VEGF表达,阿托伐他汀的这一作用与大剂量溶栓颗粒相当。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞的VEGF表达,可能是其减缓动脉粥样硬化形成的作用机制之一。     

髓清丸对内皮细胞增殖影响的血清药理学研究

目的研究中药复方髓清丸是否对内皮细胞的增殖有影响。方法采用血清药理学方法,以含髓清丸药物兔血清,体外培养观察内皮细胞系 ECV304的增殖、细胞周期及 DNA 含量等细胞学指标变化。结果与正常胎牛血清对照组和兔血清对照组比较,含髓清丸低、高剂量组的活细胞百分率、活细胞浓度均降低(P<0.05,P<0.01);含髓清丸血清低、高剂量组的培养液孵育的内皮细胞 OD 值呈不同程度的降低(P<0.01),高剂量组细胞毒活性>20%;髓清丸高、低剂量组内皮细胞 G_1期百分率均明显高于胎牛血清和正常兔血清组(P<0.01),而 S 期和 G_2期百分率也均较胎牛血清组和正常兔血清组有减低趋势。结论髓清丸体外有一定的抑制内皮细胞增殖的活性。     

冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞细胞周期及其分泌VEGF的影响

目的:探讨冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞周期和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响.方法:离体培养人脐静脉内皮细胞,设空白组、含药血清大、中、小剂量组和bFGF组.流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法及逆转录聚合酶链反应(RT - PCR)观察各组内皮细胞分泌VEGF及VEGF-mRNA表达量的变化.结果:冠心合剂含药血清可以增加细胞周期中S期细胞数目,以小剂量组作用明显(P＜0.01);可以促进细胞分泌VEGF,并使VEGF-mRNA表达增加,其中小剂量组作用明显(P＜0.05).结论:冠心合剂促血管新生作用可能与促进血管内皮细胞VEGF的表达与释放有关.     

搜风祛痰中药对Ang II诱导人脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA及NF-κB mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰中药对AngⅡ诱导体外培养人脐静脉内皮细胞凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）与核因子-κB基因表达的影响。方法制备家兔中药复方活心汤含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs2-3代用于实验。采用RT-PCR法测定脐静脉血管内皮细胞LOX-1 mRNA水平。随机分为正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋低剂量中药血清组、AngⅡ＋中剂量中药血清组、AngⅡ＋高剂量中药血清组。用中药先孵育2h后再加入0.5μmol／L AngⅡ刺激2h,取出细胞盖玻片固定。结果与对照组比较,活心汤含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤,减少LOX-1 mRNA及NF-κB mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

清热消积方含药血清对人胃癌细胞SGC-7901及牛血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的：观察清热消积方舍药血清对人胃癌细胞SGC-7901及牛血管内皮细胞增殖和迁移的影响。方法．帮l备清热消积方含药血清，SCC-7901细胞和牛血管内皮细胞体外培养，不同浓度含药血清进行干预，采用MTr法检测含药血清对SGC-7901细胞和牛血管内皮细胞增殖的影响；琼脂糖刮除法检测含药血清对牛血管内皮细胞迁移的影响。结果：清热消积方含药血清对人胃癌细胞SGC-7901的增值有明显的抑制作用，低、中及高剂量组的增值抑制率分别是7．4％、8．6％和16．3％，与对照组比较均有非常显著差异（P〈0．01）。并能抑制牛血管内皮细胞的增殖和迁移，低、中及高荆量组对牛血管内皮细胞增殖和迁移的抑制率分别为10．8％、11．2％、20．1％和15．5％、19．7％、30．2％，与对照组比较均有非常显著差异（P〈0．01）。结论：抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤血管生成可能是清热消积方抗肿瘤和转移的作用机制之一。     

灵芝孢子油对血管生成作用的研究

目的观察灵芝孢子油(GSO)对血管生成的作用。方法应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养三维血管生成模型和鸡胚尿囊膜(CAM)模型,观察灵芝孢子油含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响;及对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果灵芝孢子油含药血清,使CAM血管生成减少、变细,其中较大剂量组中、小血管生成数量明显减少。对血管内皮细胞的出芽和管腔形成有抑制作用,较大剂量组抑制作用明显。结论灵芝孢子油具有抑制血管内皮细胞的增殖,抑制新生血管的形成的作用。     

痰瘀同治方对高脂血清损伤体外培养细胞保护作用的研究

目的 :观察痰瘀同治方保护高脂血清损伤体外培养细胞的作用。方法 :采用高脂血清损伤内皮细胞 ,再给不同浓度中药血清 ,观察生化指标及细胞形态。结果 :痰瘀同治方小、中剂量组明显调节NO、ET、MDA、SOD、TNF含量 ,抑制细胞过度凋亡 ,对损伤的内皮细胞有明显的保护作用。     

养阴生津方抗血管内皮细胞凋亡的分子机制研究

目的：研究养阴生津方抗血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法：采用血清药理学方法，以大肠杆菌内毒素(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)调亡模型，观察含药血清对HUVEC的抗凋亡作用及对一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)等活性物质的影响。结果：养阴生津方能显著减少LPS诱导的HUVEC凋亡，其机理与减少NOS产生，抑制催化NO合成有关。结论：养阴生津方具有抗HUVEC调亡作用，对治疗温病瘀热证有重要意义。     

川芎嗪诱导血管内皮细胞的凋亡及对VEGF表达的影响

目的：研究川芎嗪对血管内皮细胞生长的影响及分子机制。方法：不同浓度的川芎嗪作用体外人体脐静脉内皮细胞，MTT法检查血管内皮细胞的生长、细胞周期检查其凋亡和Western blot检测VEGF的表达。结果：不同浓度的川芎嗪作用VEC-30424h后，可显著抑制VEC-304的生长；诱导细胞发生凋亡，凋亡单20．97—81．83％，与对照组比较P〈0．01。Westorn blot结果提示川芎嗪能使血管内皮细胞的VEGF的表达下调。结论：川芎嗪抑制血管内皮细胞生长并诱导其凋亡及VEGF表达下调是川芎嗪抗肿瘤的机制之一。     

人参黄芪含药血清对人脐静脉内皮细胞活性的影响

目的:通过观察养心汤中君药(人参、黄芪)对人脐静脉内皮细胞增殖率的影响,探讨其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制。方法:实验细胞分为空白血清组、模型组、参芪低剂量组、参芪中剂量组、参芪高剂量组5组。应用MTT法检测细胞活性。结果:H2O2培养液可使人脐静脉内皮细胞收缩变圆,细胞间隙增宽,部分细胞脱落。随参芪含药血清浓度的增加,细胞越成片贴壁生长,细胞形态和间隙越接近正常。经MTT法检测,与空白血清组相比,模型组增值率明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);各参芪组间比较,参芪高剂量组增殖率显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:参芪含药血清能预防H2O2对人脐静脉内皮细胞造成的损伤,并能够促进内皮细胞增殖,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的作用机制之一。     

舒心方对缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：探讨对舒心方缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期。结果：舒心方能够明显促进缺氧环境下内皮细胞的增殖,增加细胞周期中S期细胞的数目。结论：舒心方对缺氧环境下内皮细胞增殖和DNA合成有促进作用,提示舒心方在缺血心肌新生血管生成过程中可能具有一定作用。     

化通脉注射液对人脐静脉血管内皮细胞ECV304增殖的影响

[目的]以血清药理学的方法观察血化瘀通脉注射液(HYTM)对于培养人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,为治疗性血管新生的靶基因选择提供线索。[方法]取对数生长期的内皮细胞,同步化于G0期,2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(CCK-8)检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测5溴-2脱氧尿苷(BrdU)的掺入。[结果]与空白血清对照组相比,10%的HYTM含药血清体积添加分数可显著提高细胞增殖活性。[结论]10%的HYTM含药血清体积添加分数通过促进细胞DNA合成,可能具有保护血管内皮的作用。     

黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的：探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：以离体培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,,HUVEC)为模型,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果：黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数目,尤以复方作用明显(P<0．05或P<0．001)。同时,各给药组均能上调VEGF的表达,而对照组VEGF仅有微弱表达(P<0．05或P<0．01)。结论：黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用,两药配伍应用时具有协同效应,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。     

卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

 目的 观察卷柏总黄酮、穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 不同质量浓度的卷柏总黄酮（1、5、10、15、20 μg·mL-1）和穗花杉双黄酮（0.3,1,2,4,5 μg·mL-1）可以剂量依赖地促进HUVEC细胞增殖,其中卷柏总黄酮10 μg·mL-1、穗花杉双黄酮1 μg·mL-1在36 h时显著促进细胞增殖,提高S期细胞比例,VEGF蛋白表达明显升高。结论 细胞实验结果提示卷柏中黄酮类物质可能具有促血管新生的作用。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

黑果枸杞花色苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

 目的 探讨黑果枸杞花色苷对体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法 利用体外培养人脐静脉血管内皮细胞,建立了氧化低密度脂蛋白氧化损伤模型。将细胞分为6组：正常组、氧化低密度脂蛋白组、辛伐他汀组、花色苷低剂量+氧化低密度脂蛋白组,花色苷中剂量+氧化低密度脂蛋白组和花色苷高剂量+氧化低密度脂蛋白组。各剂量组经实验处理后进行细胞计数及形态观察,利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖能力,运用流式细胞术（FCM）检测内皮细胞增殖周期及凋亡率,并对细胞代谢中的超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)、丙二醛（MDA）、过氧化物酶（POD）的活性进行检测。结果 中高浓度的花色苷可以有效的抑制氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的损伤,减缓被损伤细胞的G₀/G₁比率及凋亡率,增高S期细胞比率、G₂/M 比率;同时提高细胞代谢中超氧化物歧化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化酶的活性,降低丙二醛的含量。结论 黑果枸杞花色苷对氧化低密度脂蛋白所损伤的人脐静脉内皮细胞具有保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关。     

地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTT法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响。结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用。结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。