血管内皮生长因子对牛视网膜素上皮细胞DNA合成的影响和榄香烯抗增殖作用的研究

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）对牛眼视网膜色素上皮（RPE）细胞DNA合成的影响，并观察榄香烯注射液的抗增殖作用。方法：采用3H－TdR掺入法，在体外培养的牛眼RPE细胞中加入不同浓度的VEGF以及VEGF和榄香烯，应用液闪仪测定3H－TdR掺入的脉冲数（CPM）。结果：不同浓度的VEGF均使CPM值明显增加，且与VEGF学度呈剂量依赖关系，不同浓度的榄香烯均使RPE细胞的CPM值明显下降，且与榄香烯浓度呈剂量依赖关系。结论：VEGF有促进RPE细胞的DNA合成的使用，榄香烯可抑制生长因子诱导的RPE细胞的DNA合成。     

榄香烯联合紫杉醇抗Lewis肺癌血管生成的研究

目的研究榄香烯注射液联合紫杉醇注射液对Lewis肺癌小鼠肿瘤血管生成的影响。方法以C57BL/6雄性小鼠皮下接种构建Lewis肺癌小鼠模型。将50只Lewis肺癌小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,A组予生理盐水对照,B组予紫杉醇,C组予榄香烯低剂量+紫杉醇,D组予榄香烯高剂量+紫杉醇,E组予榄香烯高剂量。2周后摘除眼球取血,并处死动物,切除瘤灶,称瘤质量,计算抑瘤率,应用免疫组化染色检测移植肿瘤组织中CD34和血管内皮生长因子(VEGF)受体1(VEGFR1)、VEGF受体2(VEGFR2)的表达;用ELISA法测定小鼠血清血管内皮生长因子浓度。结果与A组比较,B、C、D、E组抑瘤率、微血管密度、VEGF受体1和2表达、血清VEGF浓度均有显著性差异(P<0.05或0.01),且D组与B、C、E组在抑瘤率、微血管密度、VEGFR1及VEGFR2表达、血清VEGF浓度比较也均有显著差别(P<0.05或0.01)。结论①榄香烯有抗肿瘤血管生成和肿瘤生长的作用。②榄香烯可增强紫杉醇抗肿瘤血管生成和肿瘤生长的效应。③榄香烯可能通过降低Lewis肺癌血管内皮生长因子的生成、抑制瘤体血管内皮生长因子受体的表达而抑制肿瘤血管生成及肿瘤的生长。     

莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序脱氧核糖核酸合成的影响

目的:探讨莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成的影响.方法:用3H-TdR掺入法测定了人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成(UDS).结果:莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.0g/ml时,由硫酸镍或硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞UDS基本恢复到阴性对照水平;莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.5g/ml时未见其抑制3H-TdR向人外周血淋巴细胞DNA的掺入.结论:莪术四君子汤对人外周血淋巴细胞非程序DNA合成无诱导效应,但对硫酸镍及硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞非程序DNA合成有明显抑制作用,且呈剂量效应关系.提示莪术四君子汤能有效减轻镍和紫外线对人外周血淋巴细胞DNA的损伤.     

绿舒筋对艾氏腹水癌细胞DNA、RNA及蛋白质合成代谢的影响

本文采用核素前体掺入法研究了绿舒筋对艾氏腹水癌(EAC)细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响。该药在0.1～5mg/ml范围内,不同程度地抑制~3H-TdR、~3H-UR和~3H-Leu掺入到EAC细胞的DNA、RNA和蛋白质中,呈浓度依赖性。去除绿舒筋后,~3H标记物掺入曲线呈递增型,与5-FUdR掺入曲线相似,提示绿舒筋是通过干扰癌细胞及蛋白质代谢发生抗癌作用的,而非损伤DNA模板药物。     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

榄香烯对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨榄香烯对内皮细胞增殖的影响和对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养内皮细胞,将不同浓度的榄香烯(1~200μg/ml)加入到细胞培养液中,用MTT法检测榄香烯对内皮细胞增殖的影响。将1 mmol/L H2O2作用于加入不同浓度的榄香烯预培养24 h的内皮细胞,继续培养1 h,以MDA、T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px、NO为检测指标。结果:榄香烯对内皮细胞的增殖呈剂量依赖性的抑制作用,而在抗氧化损伤方面,呈剂量依赖性降低MDA量,降低H2O2对抗氧化酶活力的影响,提高细胞内NO的含量,减少细胞调亡数量。结论:榄香烯可保护内皮细胞结果和功能的完整性,提高内皮细胞抗氧化能力。     

β-榄香烯注射液对人肝癌HepG2细胞微管系统的影响

目的:探讨β-榄香烯对人肝癌细胞HepG2生长抑制作用及微管系统的影响.方法:将实验分为对照组(未加药物)与实验组(不同浓度β-榄香烯注射液0.02,0.04,0.08 g·L-1组);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定β-榄香烯对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞技术分析肿瘤细胞周期时相分布,激光共聚焦显微技术观察β-榄香烯处理的HepG2细胞内微管的表达、分布;逆转录-多聚酶连反应技术(RT-PCR)观察微管蛋白βmRNA水平表达;采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)分析微管蛋白β蛋白水平的表达、聚合和未聚合微管蛋白含量的变化.结果:0.1,0.08,0.06,0.04,0.02,0.01 g·L-1的β-榄香烯注射液对HepG2细胞增殖具有抑制作用,抑制效应呈时间和浓度依赖性;将细胞阻滞在S期.激光共聚焦分析表明,β-榄香烯不同浓度作用的HepG2细胞微管网络异常;β-榄香烯注射液抑制HepG2细胞β微管蛋白mRNA表达,呈浓度依赖性.蛋白免疫印迹显示β-榄香烯能抑制微管蛋白β的表达,同时抑制细胞内微管蛋白的聚合,呈浓度依赖性.结论:β-榄香烯注射液能够抑制人肝癌细胞HepG2增殖,下调微管蛋白β的表达,抑制HepG2细胞内微管的聚合可能是造成HepG2细胞生长抑制的因素之一.     

粉防己碱对PDGF、TGF-β诱导瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的:探讨粉防己碱对血小板衍生生长因子(PDGF-BB)、转化生长因子β(TGF-β)诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的干预作用.方法:体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞加入PDGF-BB、TGF-β、粉防己碱, 用3H-TdR掺入法和3H-脯氨酸掺入法测定粉防己碱干预下PDGF-BB、TGF-β诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的变化.结果:粉防己碱在不抑制瘢痕成纤维细胞DNA合成的药物浓度(3μg/ml)时即可显著抑制其胶原合成,并可显著抑制PDGF-BB和TGF-β诱导的实验细胞DNA及胶原合成.结论:粉防己碱可抑制PDGF-BB、TGF-β诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成.     

β-榄香烯体内外对人肺癌细胞株的作用及其机制

目的:系统研究β-榄香烯体内外抗肺癌药理学作用及其作用机制。方法:体外抗肿瘤实验采用MTT法,检测浓度12.5~200μmol·L-1的β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1,A549及人正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5的细胞增殖抑制率;抗肿瘤机制研究采用Hoechst 33258染色,观察细胞凋亡时细胞核的形态学变化,流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶(PI)双标记染色法检测细胞凋亡率。体内以裸鼠移植瘤为模型,肿瘤生长抑制率为指标,检测β-榄香烯对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:β-榄香烯作用48 h时SPC-A-1,A549的50%抑制浓度(IC50)分别为126.0,134.1μmol·L-1,但对人胚胎肺成纤维细胞MRC-5有促进增殖作用,表明β-榄香烯对肺癌细胞具有选择性抑制作用。β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,干预24,48,72 h的IC50值分别为549.7,126.0,21.2μmol·L-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见β-榄香烯孵育后出现凋亡细胞核固缩,浓染,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,β-榄香烯可诱导SPC-A-1细胞出现不同程度的凋亡。给药剂量为45,135 mg·kg-1的β-榄香烯在体内对裸鼠移植性人肺癌SPC-A-1细胞的增殖抑制率分别为34.01%,49.57%。结论:β-榄香烯具有选择性抗肺癌作用,提示其在发挥抗肿瘤作用的同时其毒副作用小,而且该作用可能机制是通过诱导肺癌细胞凋亡实现的。     

β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响

目的探讨β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响。方法采用MTS法检测β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞活性的作用;Transwell检测细胞侵袭能力;细胞划痕检测细胞迁移能力;流式细胞检测细胞凋亡、细胞周期;Western blot检测上皮-间质转化相关标记分子(E-Cadherin、N-Cadherin、ZEB1、Vimentin)。结果榄香烯浓度在0～50μmol/L内对肺癌细胞(A549、H522、H1299、PC-9)活性无显著影响。与对照组比较,β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼(5μmol/L)能显著抑制A549细胞活性(P0.01);降低S期细胞比例(P0.05),但不影响A548细胞凋亡,抑制A549细胞的侵袭与转移(P0.05,P0.01),上调E-Cadherin蛋白表达,下调N-Cadherin、ZEB1、Vimentin蛋白表达(P0.01)。结论榄香烯(≥50μmol/L)能抑制肺癌细胞增殖,呈剂量依赖;β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼抑制肺癌细胞的侵袭、转移及上皮-间质转化(EMT)。     

阿魏酸钠对氧化LDL所致兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：以氧化低密度脂蛋白处理培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）致细胞增殖,观察阿魏酸钠（ＳＦ）对ＳＭＣ增殖的影响。方法：应用硫代巴比妥酸比色法测定脂质过氧化物（ＬＰＯ）水平,氚胸腺嘧啶核苷（^３Ｈ-ＴｄＲ）掺入实验观察ＳＭＣ的ＤＮＡ合成。结果：ＳＦ能明显降低培养液中ＬＰＯ水平的升高,并呈剂量依赖性地减少ＳＭＣ^３Ｈ-ＴｄＲ的掺入量。结论：ＳＦ能明显抑制ＳＭＣ增殖,其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。     

肾康注射液对系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)、p27~(KIP1)表达的影响

目的观察肾康注射液对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)(p21)、p27~(KIP1)(p27) mRNA及蛋白质表达的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为6组,分别为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加肾康注射液高、中、低剂量组,用[~3H]胸腺嘧啶核苷([~3H]TdR)及[~3H]亮氨酸([~3H] Leu)掺入法反应细胞DNA及蛋白质的合成情况,RT-PCR、Western blot检测p21mRNA及p21、p27蛋白质表达情况。结果高糖培养肾小球系膜细胞蛋白质合成增加,DNA合成减少,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达增加；肾康注射液组与高糖组比较,蛋白质合成减少,DNA合成增加,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达降低。结论肾康注射液可能部分通过降低p21、p27过表达来阻止高糖诱导肾小球系膜细胞的肥大反应。     

阿魏酸对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖作用

目的：观察阿魏酸对于培养人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,为治疗性血管新生的靶基因选择提供依据。方法：取对数生长期的内皮细胞,分为阿魏酸低、中、高浓度组,同步化于G0期,ELISA法检测BrdU的掺入;RT-PCR法检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA的表达情况。结果：与对照组相比,不同浓度阿魏酸均可显著提高BrdU的掺入量,上调VEGFmRNA的表达,且在10^2ng/ml～10^4ng/ml之间呈一定的量效关系。结论：阿魏酸能显著促进体外培养的ECV304细胞的增殖,可能具有血管新生的作用。     

莪术对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序脱氧核糖核酸合成的影响

以人外周血淋巴细胞非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）为观察指标，研究了莪术和硫酸镍的遗传毒性效应及莪术对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞ＵＤＳ的影响。结果表明，莪术对人外周血淋巴细胞ＵＤＳ无诱导效应，但当剂量达到１ｇ／ｍｌ时，可显著阻抑３Ｈ－ＴｄＲ向细胞ＤＮＡ的掺入。硫酸镍可大量诱发人外周血淋巴细胞ＵＤＳ，莪术对硫酸镍和紫外线诱导的人外周血淋巴细胞ＵＤＳ有明显抑制，且存在剂量效应关系。提示莪术在一定剂量时可明显减轻硫酸镍对人外周血淋巴细胞ＤＮＡ的损伤，而其本身无致突变作用。但当莪术剂量达到１ｇ／ｍｌ时，对ＤＮＡ的修复合成可造成抑制。     

蛇葡萄素的血管生成抑制作用

目的:探讨蛇葡萄素对内皮细胞及肿瘤细胞的生长及其血管生成的影响。方法:体外用MTT法对牛主动脉内皮细胞进行增殖抑制实验;用ELISA法、免疫组化染色法以及流式细胞仪观察蛇葡萄素对人肝癌细胞Bel-7402分泌VEGF、bFGF的抑制作用;体内观察蛇葡萄素对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制作用。结果:蛇葡萄素对牛主动脉内皮细胞的增殖在6.4~51.2μg/m l呈现浓度依赖性抑制作用,IC50=22.0±4.0μg/m l。ELISA法测定结果显示,12.8μg/m l、25.6μg/m l、38.4μg/m l蛇葡萄素对肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF的抑制率分别为14.2%、40.0%及49.6%。免疫组化染色结果显示,12.8μg/m l以上的蛇葡萄素能使细胞体积缩小,分泌VEGF、bFGF明显减少。流式细胞仪检测VEGF、bFGF结果,25.6μg/m l及38.4μg/m l蛇葡萄素对VGEF的抑制率分别为32.2%及57.4%,对bFGF的抑制率分别为54.9%及62.6%。蛇葡萄素浓度为100、150、200 mg/kg时对人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制率分别可达24.3%、41.4%及45.7%。结论:蛇葡萄素在体外能有效抑制内皮细胞增殖及人肝癌Bel-7402细胞分泌VEGF和bFGF,具有抑制血管生成的作用;体内能有效抑制人肝癌Bel-7402裸鼠移植瘤的生长,提示蛇葡萄素也许可作为一个肿瘤血管生成抑制剂用于肿瘤防治。     

羟基喜树碱对猪视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨10-羟基喜树碱（hydroxycamptothecin,HCPT）对培养的猪视网膜色素上皮（retinalpigment epithelium,RPE）细胞的抑制作用,并研究其发挥作用的适宜浓度。方法建立体外猪RPE细胞培养体系,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定对照组及不同浓度（0.75、1.5、3.0、6.0 mg/L）HCPT分别作用第24 h、72 h、120 h时的光密度,计算其对RPE细胞的增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同浓度不同时间作用后,各分裂周期RPE细胞的数量;通过倒置相差显微镜和电子显微镜技术观察RPE细胞形态及超微结构的变化,并用台盼蓝排除检测法计算活细胞百分比。结果 0.75 mg/L实验组在HCPT作用后第1天与对照组比较差异无统计学意义;其余各时间段各组与相应对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;抑制作用与药物浓度、作用时间均呈正相关（药物浓度及作用时间与RPE细胞增殖抑制率呈明显的线性关系）。终浓度为1.5 mg/L的HCPT作用72 h后,RPE细胞的增殖抑制率达47.95%,而细胞活性〉85%,细胞形态及超微结构改变轻微,RPE细胞的S期细胞增加了7.52%,G2/M期细胞减少。结论 HCPT对RPE细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖性;终浓度为1.5 mg/L的HCPT对RPE细胞的增殖具有明显的抑制作用,且细胞毒性小。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制。方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos,c-myc,p15,p16,p18,p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos,c-myc蛋白表达,但不影响p15,p16,p18,p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[³H]TdR参入。结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos,c-myc蛋白表达,而不是影响p15,p16,p18,p19蛋白表达来抑制VSMC增殖。