Use of autologous bone marrow transplantation in pediatric malignant diseases--results and conclusions

Ultrahigh-dose myeloablative antineoplastic therapy followed by autologous bone marrow transplantation (ABMT) has become an attractive therapeutic option for patients without HLA compatible bone marrow donors. Autologous bone marrow was harvested in 9 patients. In four cases the bone marrow was also treated ex vivo with a stable derivative of 4-hydroperoxycyclophosphamide, ASTA-Z 7654, to eliminate residual tumour cells. Altogether 5 patients, namely a patient with metastatic neuroblastoma, a patient with malignant histiocytosis, a patient with recurrent sacrococcygeal malignant teratoma and two patients with acute myelogenous leukaemia in first remission are in continuous remission so far from 125 + to 821 + days (median 657 + days). These patients were transplanted at the time of minimal tumour load (first remission) and in good clinical condition 3-7 months after diagnosis, while 3 of the four patients who died were transplanted in first or repeated relapse after one to several years of chemotherapy. It is concluded that the earliest possible recognition of a refractory therapeutic situation is of utmost importance for successful ABMT. Patients with an unfavourably responding neoplasm should, therefore, be already primary candidates for ABMT.     

化疗药物对骨髓间充质干细胞的损伤作用

背景：多种化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时会产生骨髓抑制的不良反应,不仅仅损伤造血细胞,也对骨髓间充质干细胞造成损伤,明确各种化疗药物对骨髓间充质干细胞的作用有利于合理选择、搭配化疗药物,实现高效、低毒的临床疗效。目的：探讨不同化疗药物对骨髓间充质干细胞增殖、分化和支持造血能力的影响。方法：获取正常成人骨髓间充质干细胞（n=8）,用不同剂量化疗药物（环磷酰胺、马利兰、阿糖胞苷、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙、甲氨蝶呤、地塞米松）对骨髓间充质干细胞进行处理。检测化疗药物对骨髓间充质干细胞的增殖、凋亡作用及化疗药物撤除后骨髓间充质干细胞的恢复能力;体外诱导药物处理后骨髓间充质干细胞向脂肪细胞和骨细胞分化,通过油红O和Von Kossa染色鉴定;RT-PCR检测药物处理后骨髓间充质干细胞造血因子的表达;集落形成实验检测药物处理后骨髓间充质干细胞支持造血的功能。结果与结论：两种剂量的长春新碱、柔红霉素、足叶乙甙、阿糖胞苷和地塞米松不同程度诱导骨髓间充质干细胞凋亡,并且抑制骨髓间充质干细胞的增殖,其中长春新碱和地塞米松的抑制作用可以逆转,而柔红霉素、足叶乙甙和阿糖胞苷对间充质干细胞的抑制作用持续存在。化疗药物处理后骨髓间充质干细胞仍具有多向分化能力,可以在体外分化为脂肪细胞和成骨细胞。化疗药物处理后骨髓间充质干细胞同正常细胞一样表达造血相关因子：干细胞因子、单核细胞集落刺激因子、白细胞介素6和粒细胞集落刺激因子。柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙和阿糖胞苷处理后骨髓间充质干细胞支持造血能力明显下降。结果显示临床常用的一些化疗药物（长春新碱、柔红霉素、足叶乙甙、阿糖胞苷）可以影响骨髓间充质干细胞的增殖和支持造?     

Bone mineralization and immediate function of six dental implants in patients with Klinefelter syndrome

Patients with Klinefelter syndrome face many challenges in oral treatment and bone mineralization due to multiple systemic dysfunctions. This case report follows the geometrical treatment with immediate implant loading of an adult male patient with Klinefelter syndrome. Satisfactory results were demonstrated in clinical follow‐up.     

GW003对骨髓细胞体外形成粒-巨噬细胞集落能力的影响

本研究旨在观察重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白（GW003）对骨髓造血细胞体外形成粒系集落能力的影响。分别抽取正常恒河猴、缓解期和化疗中pLLL患者骨髓并分离有核细胞,分别加入系列浓度的GW003、吉粒芬、G-CSF突变体,在培养12d后计数粒-巨噬细胞系集落（CFU-GM）。结果表明,GW003具有提高正常恒河猴骨髓有核细胞体外形成CFU-GM的能力,效果明显优于相同摩尔浓度的吉粒芬 及G-CSF突变体;在-定的浓度范围内,GW003浓度与恒河猴骨髓细胞形成CFU-GM的数量呈明显的剂量效应关系（r=R2=0．965,P=0．003）;GW003能提高ALL患者骨髓细胞粒系集落体外形成能力,对化疗中患者的效果更为显著,可有效缓解化疗引起的骨髓抑制。结论：GW003可显著提高骨髓细胞体外形成粒细胞集落的能力,可有效缓解骨髓抑制。     

NHL患者骨髓细胞DNA含量分析与患者临床生物学特性的关系

目的 探讨NHL患者骨髓细胞DNA含量参数与患者临床生物学行为之间的关系。方法 采用流式细胞术对400例NHL患者骨髓细胞DNA指数、倍体类型、SPF和Apo进行了检测和分析。结果 NHL患者骨髓细胞的DI值、异倍体检出率、SPF均显著高于正常对照组(P<0.01)。NHL化疗者DI值和异倍体检出率显著低于未化疗者(P<0.05),而Apo却显著高于未化疗者(P<0.01)。随患者临床分期的增加,DNA异倍体检出率逐渐增加,Apo水平逐渐降低。结论 NHL能引起患者骨髓细胞生物学特性发生明显改变。而这些变化与患者临床生物学行为的关系十分密切。NHL患者骨髓细胞Apo水平变化可作为患者化疗效果和预后判断的客观指标。     

骨髓基质细胞对白血病细胞株的保护作用

目的研究原代正常骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡的关系。方法应用Percoll分离骨髓基质细胞14份,设实验组体外与白血病细胞共培养组,模拟骨髓微环境功能,另设单独悬浮培养组;同时没自发凋亡组做对照。AnnexinV/PI双标法检测3组白血病细胞凋亡率。结果共培养后骨髓基质细胞抑制药物诱导的白血病细胞凋亡率较对照组显著降低(P<0.005)。结论骨髓基质细胞对白血病细胞有保护作用。     

多药耐药基因在骨髓移植模型中的表达

目的 探讨多药耐药基因（mdrl)在骨髓移植小鼠模型中表达情况，及转染mdrl的骨髓细胞对化疗中骨髓保护的可行性。方法 以小鼠骨髓细胞为靶细胞，通过逆转录病毒介导，将mdrl转入骨髓细胞，通过将转染基因的骨髓细胞回输同种小鼠体内的骨髓移植动物模型，观察不同时期移植小鼠骨髓细胞中mdrl的表达及功能，结果 （1）成功地将mdrl导入小鼠骨髓细胞中，转染率达到35%；（2）采用程序性移植方法成功建立了mdrl转基因鼠骨髓移植模型；（3）mdrl在移植小鼠细胞内稳定，有效地表达，观察1-5个月mdrl转染的细胞在受体鼠骨髓单个核细胞中所占比例分别为8.0%，8.0%,7.5%,4.0%,3.0%;(4)mdrl转染的骨髓细胞在化疗中有明显的骨髓保护作用。结论 从一个侧面证实了通过mdrl转染骨髓细胞在化疗中进行骨髓保护是一种长期，稳定，有效的方法。     

克氏综合征胚胎干细胞的建系及鉴定

背景：克氏综合征是一种染色体异常引起的先天性疾病,对于该疾病发生和染色体异常的分子机制还未明确。目的：建立克氏综合征的胚胎干细胞系,并鉴定其是否具有正常胚胎干细胞特性。方法：胚胎培养至囊胚,经免疫外科法分离内细胞团培养获得人胚胎干细胞系。Giemsa染色鉴定核型,免疫荧光染色及体外、体内分化实验鉴定其生物学特性。结果与结论：从5个胚胎中获得1株克氏综合征胚胎干细胞系,该细胞系具有47,XXY核型。经鉴定该细胞具有碱性磷酸酶活性,并表达Nanog、OCT-4、SSEA-4、Sox2、TRA-1-60等胚胎干细胞特异标记物,可形成拟胚体,并在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。该细胞株的建立为研究该遗传病的发病机制及性染色体的功能提供了一个良好的细胞模型。     

白首乌C21甾体苷对Heps小鼠抑瘤作用和对造血功能影响

目的探讨自首乌C21甾体苷对肝癌Heps荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用和对造血功能的影响。方法建立小鼠Heps肝癌移植肿瘤模型,随机分为模型组、白首乌C21甾体苷组、环磷酰胺组和联合组,进行抑瘤率计算;通过检测外周血象和骨髓细胞凋亡,观察其对荷瘤小鼠造血功能的影响。结果白首乌C21甾体昔有Heps肝癌抑制作用,且荷瘤小鼠体质状态不受影响,可促进荷瘤小鼠骨髓增殖,与化疗药合用可减轻化疗的骨髓抑制作用。结论白首乌C21甾体苷具有抗癌、刺激造血的双重作用,与化疗药合用可减轻其骨髓抑制作用。     

骨髓基质细胞移植加快化疗小鼠造血与免疫功能恢复的实验研究

目的 探讨骨髓基质细胞移植对化疗小鼠造血和免疫功能的影响。方法 BABL／C小鼠骨髓基质细胞体外扩增培养,然后移植化疗后的同系小鼠,观察不同时点外周血象、骨髓集落形成单位、骨髓细胞增殖指数和脾细胞增殖反应的变化。结果 输注扩增培养的骨髓基质细胞无毒副反应,移植了骨髓基质细胞的小鼠各项指标到第7天就已恢复至正常水平,而对照组则需14d,两组间差异有统计学意义（P〈O．05）。结论 骨髓基质细胞移植不仅能够加快化疗小鼠造血功能的重建,而且有助于免疫功能的恢复。     

骨髓间充质干细胞对肾病综合征大鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

背景：CD4＋CD25＋调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是肾病综合征患儿免疫失调的重要表现。骨髓间充质干细胞具有免疫调节功能,可上调CD4＋CD25＋调节性T细胞,抑制淋巴细胞增殖,并已在许多免疫性疾病方面成功应用。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对原发性肾病综合征大鼠外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响。 方法：自SD大鼠分离骨髓间充质干细胞,经体外传代培养及鉴定后制备细胞悬液。30只SD大鼠随机均分为3组,生理盐水组和干细胞移植组尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,干细胞移植组注射阿霉素当日尾静脉射干细胞1＆#215;107;正常组不做处理。 结果与结论：①与正常组比较,生理盐水组大鼠均出现肾病综合征表现,以腹水、大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症为特征;干细胞移植组较生理盐水移植组则有明显改善（P〈0.05）。②造模第28天,干细胞移植组和生理盐水组大鼠造模后外周血CD4＋ CD25＋Treg/ CD4＋ Treg均明显高于正常组（P〈0.05）;干细胞移植组与生理盐水组比较差异无显著性意义（P〈0.05）。③造模第28天,干细胞移植组大鼠外周血单个核细胞FoxP3mRNA的表达显著高于生理盐水组和正常组（P〈0.05）。提示骨髓间充质干细胞移植对阿霉素肾病综合征模型有一定的治疗作用,其机制可能与上调FoxP3在组织局部的表达而诱导CD4＋CD25＋Treg产生有关。     

靶向骨髓微环境治疗急性白血病的研究进展

急性白血病(AL)是一类起源于白血病干细胞(LSC)的恶性克隆性疾病,且死亡率高.尽管联合化疗和造血干细胞移植明显改善了AL患者的完全缓解率和总体生存期,但耐药和复发仍是治疗的难题.越来越多的研究表明,白血病耐药和复发的原因之一是骨髓微环境对LSC的保护作用,LSC隐蔽在骨髓微环境中从而逃避化疗药物的杀伤,并在骨髓微环境内自我更新,还可通过改变骨髓微环境而促进AL的发展.因此,通过靶向调控骨髓微环境与LSC间的相互作用,有望找到治疗AL的新方法.     

噬血细胞综合征临床分析

目的探讨噬血细胞综合征（HPS）的临床特点及骨髓细胞形态特点。方法对15例确诊为HIS患者的临床症状、体征、实验室资料及骨髓细胞形态进行分析。结果15例患者均有发热和不同程度的肝、脾、淋巴结肿大及肝功能异常,外周血细胞减少;骨髓涂片均可见组织细胞增生并伴有吞噬血细胞现象。结论HPS的临床特点和骨髓细胞形态具有一定的普遍性和特异性,有助于临床诊断。     

Successful infusion of 40 cryopreserved autologous bone-marrows. In vitro studies of the freezing procedure

Cryopreservation of human bone marrow may be helpful to use supralethal chemoradiotherapy in order to cure malignant diseases. We report here a cryopreservation procedure from large volumes of human bone marrow which can be applied in routinal use. Whole bone marrow in 10% Dimethylsulfoxide (ME2SO) was frozen at an 1 degree C/min. controlled rate and was stored into liquid nitrogen. After thawing and before infusion, both ME2SO and free hemoglobin were removed. The in vitro recovery of nucleated cells and the myeloid stem cell assay (CFC) were performed as quality control. About 60% of the marrow cells and 40% of the total CFC number were recovered at the end of the procedure. Using this technique, 40 patients (25 children with malignant lymphoma and 15 adults with lymphoma and solid tumors) were transplanted with autologous cryopreserved bone marrow after receiving intensive chemotherapy. Three of them received both chemotherapy and a total body irradiation. Engraftment was achieved in all patients. Rise in leucocyte count (greater than 1.10(9)/l) occurred within an average of 17 days. In conclusion, in autologous bone marrow transplantation, this method of cryopreservation is effective to obtain rapid hematological reconstitution in patients treated for malignant diseases by intensive cytoreductive regimens.     

Skeletal tissue engineering using mesenchymal or embryonic stem cells: clinical and experimental data

Introduction: Mesenchymal stem cells (MSCs) can be obtained from a wide variety of tissues for bone tissue engineering such as bone marrow, adipose, birth-associated, peripheral blood, periosteum, dental and muscle. MSCs from human fetal bone marrow and embryonic stem cells (ESCs) are also promising cell sources.

Areas covered: In vitro, in vivo and clinical evidence was collected using MEDLINE® (1950 to January 2014), EMBASE (1980 to January 2014) and Google Scholar (1980 to January 2014) databases.

Expert opinion: Enhanced results have been found when combining bone marrow–derived mesenchymal stem cells (BMMSCs) with recently developed scaffolds such as glass ceramics and starch-based polymeric scaffolds. Preclinical studies investigating adipose tissue–derived stem cells and umbilical cord tissue–derived stem cells suggest that they are likely to become promising alternatives. Stem cells derived from periosteum and dental tissues such as the periodontal ligament have an osteogenic potential similar to BMMSCs. Stem cells from human fetal bone marrow have demonstrated superior proliferation and osteogenic differentiation than perinatal and postnatal tissues. Despite ethical concerns and potential for teratoma formation, developments have also been made for the use of ESCs in terms of culture and ideal scaffold.     

白血病成骨细胞屏蔽共培养AML细胞化疗杀伤作用的研究

目的探讨白血病成骨细胞对急性髓性白血病(AML)细胞屏蔽化疗杀伤的作用,及其与促血小板生成素/血小板生成素受体(TPO/c-MPL)信号通路的关系。方法分离培养白血病骨髓间充质干细胞并行成骨诱导,ELISA法检测成骨细胞分泌血小板生成素(TPO)水平,流式细胞仪检测人红白血病细胞株(HEL)c-MPL表达。成骨细胞与HEL细胞共培养,观察在化疗药物柔红霉素干预下HEL细胞存活率。结果白血病骨髓成骨细胞培养d7、d14 TPO表达分别为(176.84±15.32)ng/mL和(198.24±13.49)ng/mL,明显高于正常对照的TPO水平,分别为d7(140.13±20.12)和d14(157.66±18.82)ng/mL。应用柔红霉素干预后,AML成骨细胞与HEL细胞共培养组半抑制浓度(IC50)为(3.320±0.218)μg/mL,高于HEL+正常来源成骨细胞组(2.236±0.167)μg/mL和HEL+hFOB1.19组(2.254±0.111)μg/mL。生长曲线研究发现,在不同浓度DNR干预下,AML成骨细胞与HEL细胞共培养组中HEL细胞的细胞存活率最大,均高于其他HEL共培养组。结论白血病成骨细胞能有效屏蔽化疗药物对白血病细胞的杀伤作用,这种作用可能与白血病骨髓微环境内TPO/c-MPL信号通路相关。     

噬血细胞综合征临床分析

目的探讨噬血细胞综合征(HPS)的临床特点及骨髓细胞形态特点。方法对15例确诊为HPS患者的临床症状、体征、实验室资料及骨髓细胞形态进行分析。结果15例患者均有发热和不同程度的肝、脾、淋巴结肿大及肝功能异常,外周血细胞减少;骨髓涂片均可见组织细胞增生并伴有吞噬血细胞现象。结论HPS的临床特点和骨髓细胞形态具有一定的普遍性和特异性,有助于临床诊断。     

地西他滨对骨髓增生异常综合征/急性髓系白血病患者外周血及骨髓中调节性T细胞相对含量的影响研究

目的:通过分析应用地西他滨(DAC)治疗以及非DAC化疗的骨髓增生异常综合征(MDS)及急性髓系白血病(AML)患者外周血及骨髓中的调节性T细胞(Treg)的相对含量,探讨Treg在MDS及AML发病及缓解过程中的免疫调节功能,及DAC对其的影响。方法:收集2018年10月-2019年2月在昆明医科大学第一附属医院血液科就诊的MDS患者15例,AML患者49例,对照组14例(标本来自确诊的缺铁性贫血或巨幼细胞贫血患者,经系统检查排除恶性肿瘤及自身免疫性疾病)。采集入组患者的骨髓液及外周血进行流式检测Treg的相对含量,同时收集临床资料。结果:在初诊时MDS及AML患者外周血及骨髓中Treg相对含量较对照组升高(P=0.05,P=0.043)。经DAC治疗的AML患者外周血中Treg相对含量较初诊组及非DAC化疗组均明显降低(P<0.05)。DAC治疗缓解组骨髓及外周血中Treg含量较未缓解组降低(P<0.05)。DAC治疗组与对照组Treg含量无差异。结论:DAC可能通过消耗体内Treg含量,减少对机体抗肿瘤免疫的抑制,增强机体免疫功能对肿瘤细胞的识别及杀伤,从而促进患者疾...     

AML1／ETO融合转录子在白血病患者化疗及骨髓移植后的追踪观察

利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术分别检测49例初治病人及12例化疗、8例BMT后病人不同时期骨髓细胞AML1/ETOmRNA的表达,结果显示：（1）AML1/ETOmRNA可表达于AML-M2,AML-M4及MDS-RAEB-T中;（2）9例病人化疗后、5例Allo-BMT及1例Auto-PBSCTrg RT-PCR结果分别转为阴性并处于持续完全缓解状态,2例化疗病人由阴性转为阳性而后复发,1例化疗开门见山人持续弱阳性后转阳性并复发,2例Allo-BMT病人移植后持续阳性并分别死于复发及GVHD,研究结果提示,化疗及骨髓移植可以使RT-PCRAML1/ETOmRNA转为阴性。由阴性转阳性或持续阳性可能预示复发,因而定期监测是必要的。     

原发性粒细胞肉瘤15例临床分析

本研究旨在探讨原发性粒细胞肉瘤（primarygranulocyticsarcoma,PGS）的临床特点、诊断、治疗方法。回顾性分析我院2008年1月至2013年3月收治15例PGS患者,按治疗方法分为化疗组8例（包括单纯化疗、化疗加放疗、化疗加手术、化疗加异基因造血干细胞移植）和非化疗组7例（手术、手术加放疗）。化疗均采用急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia,AML）方案。结果表明：化疗组与非化疗组PGS患者进展成骨髓广泛受累的发生率分别为25％和85．7％（P〈0．05）,化疗可以显著减少进展为骨髓广泛受累的发生率。化疗组与非化疗组平均生存时间分别为26．06±14．97个月和12．21±6．83个月（P〈0．05）,化疗可以延长PGS患者的生存时间,特别是2例经过化疗结合异基因造血干细胞移植患者目前尚活存,生存时间分别为39个月和45个月。结论：采用AML化疗方案治疗PGS,可以降低进展为骨髓广泛受累的发生率,延长患者生存时间,化疗结合异基因造血干细胞移植有望能延长患者生存时间。