高血糖对人红细胞醛糠还原酶活性的影响

目的 研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖学原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅＡＲ）活性的影响。方法 利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＦ－５２）柱层析法，将正常人，糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析，结果 （１）高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约为６～７倍；（２）糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；（３     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及ＤＥＡＥ－纤维素、羟基磷灰石、葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻找有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索。结果：纯化的酶经ＳＤＳ－ｐＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲＭｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

鼠醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及多步层析法将鼠睾丸醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）分离纯化，纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，ＡＲ分子量为３９０００±１０００，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心，盐析及ＤＥＡＥ－纤维素，羟基磷灰石，葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻长有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索，结果；纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲ，Ｍｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛；ＤＬ－甘油醛，Ｄ     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病SD大鼠神经传导速度的影响

利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了３种醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）Ｓｏｒｂｉｎｉｌ、黄岑甙、黄连素对大鼠神经传导过度的影响。结果发现糖尿病鼠用上述３种ＡＲＩｓ治疗后神经传导速度明显改善（糖尿病鼠为３８．４±３．５１ｍ／ｓ，３种ＡＲＩｓ分别为４５．６±５．５５ｍ／ｓ，４５．８±５．０２ｍ／ｓ和４２．０±３．７４ｍ／ｓ），结果提示ＡＲＩｓ对神经病变有效，使用ＡＲＩｓ防治糖尿病神经病变将是一条有希望的新路。     

知母等40种中药对猪晶体醛糖还原酶的抑制作用

醛糖还原酶（ＡＲ）在糖性白内障和其它糖尿病并发症的发病中起着关键性的作用。为从大量中草药及其化学成份中筛选有效低毒的醛糖还原酶抑制剂（ＡＲＩ），建立了猪晶状体ＡＲ的测定方法，其研究了知母等４０种中药水提取液对ＡＲ的抑制作用。发现知母对ＡＲ有较强的抑制作用，其ＩＣ５０为１９ｍｇ／Ｌ。     

高血糖与醛糖还原酶的激活

应用荧光法、Ｃ１８反相高压液相层析和气相色谱法分别测定１７例正常人和３２例Ⅱ型糖尿病患者（１７例有并发症）红细胞内的醛糖还原酶活性、某些核普酸和糖醇浓度。结果显示：Ⅱ型糖尿病患者红细胞内醛糖还原酶的活性高于正常人；有并发症患者的酶活性又高于无并发症患者，证明高血糖能激活醛糖还原酶，激活程度与血糖浓度呈正相关。患者红细胞内ＮＡＤＰ＋、山梨醇和果糖的浓度高于正常对照；ＮＡＤＰＨ和ＮＡＤ＋浓度低于正常对照，而此５项指标在两组患者间差异无显著性。     

4种药物对醛糖还原酶的抑制作用

筛选有效的醛糖还原酶抑制剂，用于糖尿病慢性并发症的防治。应用体外酶动力学抑制实验了／观察了４种药物对牛睾丸纯化醛糖还原酶的抑制作用，双倒数作图法确定抑制类型，Ｄｉｘｏｎ和Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ作图法求取药物对酶的抑制常数。     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病大鼠肾脏超微结构的影响

研究醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾脏病变的意义。利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了醛糖还原酶抑制剂ｓｏｒｂｉｎｉｌ对大鼠尿蛋白和肾脏超微结构的影响。结果：糖尿病鼠用ｓｏｒｂｉｎｉｌ治疗后尿蛋白呈下降趋势，肾小球基底膜厚度及系膜基质堆积明显减少。结论： ｓｏｒｂｉｎｉｌ对肾脏病变有明显疗效，使用醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾病将是一条有希望的新路。     

银染法与放射自显影法检测醛糖原还酶基因多态性的比较

目的：探讨银染法检测醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）基因５’端微卫生多态性的可靠性。方法：用银染法和放射自显影法分别检测相同样本ＤＮＡ的ＡＲ基因微卫星多态性，比较二结果。结果：两种方法均能楚判读基因型且结果一致。结论：银染法可以代替放射自显影方法检测ＡＲ基因的微卫星多态性。     

醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立

目的:建立醛糖还原酶抑制剂筛选模型,提供筛选醛糖还原酶抑制剂的方法。方法:从大鼠晶状体中提取醛糖还原酶,设定10 mmol/L DL-甘油醛为底物,0.15 mmol/L NADPH为辅酶等条件建立初始酶促反应体系,维持其它条件不变改变底物浓度、辅酶浓度、反应温度和反应时间,选择酶活性峰值点建立模型,通过比较槲皮素与芦丁对醛糖还原酶的抑制作用检验此模型。结果:醛糖还原酶酶促反应体系组成:总体积1 ml,各反应液的终浓度分别为:DL-甘油醛10 mmol/L,NADPH0.15 mmol/L,缓冲液PBS的pH=6.2,120 mmol/L,醛糖还原酶提取物100μl,反应温度37℃,反应时间3 min。IR50槲皮素相似文献   

中药水提取液对荧光法测定醛糖还原酶活性的干扰

目的：探讨中药水提液采用荧光法检测醛糖还原酶抑制作用的可行性，方法：激发光367nm，发射光410－470nm范围内扫描13种中药水提物荧光强度。结果：所观察13种中药含有较强的荧光物质，干扰体外酶反应荧光测定法检测醛糖还原活性的方法，结论：若水提液不适于采用此种筛选方法，可考察有机溶剂是否有干扰以确定实验条件或选择其它筛选方法。     

醛糖还原酶基因C-106T 多态性与原发性高血压易感性及其种族差异

目的：研究中国汉族人群中醛糖还原(AR)C-106T 基因多态性的分布情况,比较其频率分布是否存在种族差异,并探讨该多态性与原发性高血压易感性的相关性。方法：应用聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的分析方法,在148位原发性高血压病人和137 位正常受试者中,对AR 基因C-106T 多态性进行基因分型。频数分布的比较采用卡方检验,基因型与高血压的关联程度采用95% 置信区间评估。结果：对照人群中AR C-106T 等位的频率为13.9%(95% CI: 11.2%~16.6%), 远低于日本人群(n=712, 18.4%, P=0.0063), 澳大利亚人群(n=240, 37.9%,P<0.0001)和巴西人群(n=62, 34.7%, P<0.0001)。高血压病例和对照人群中AR-C106T 等位基因的频率分别为15.9%(95% CI: 11.6%~20.0%)和11.7%(95% CI: 7.9%~15.5%),两组间基因型分布差异无统计学意义(P=0.147)。结论：醛糖还原酶AR 基因C-106T 多态性的频率分布具有明显的种族差异,该多态性与中国人群原发性高血压的发病风险不相关。     

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及人肾小球肾炎中表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(tranforming growth factor-betal，TGF-β1)对其反应性基因产物醛糖还原酶(aldose reductase，AR)在大鼠系膜细胞中表达的影响及两者在人肾小球肾炎中的表达及其相互关系。方法 采用RT-PCR、Westem blot法观察外源性TGF-B1对大鼠系膜细胞中AR表达的影响；以12例肾小球轻微病变作为对照，对各种不同组织学类型的lgA肾病(15例)，膜性肾炎(14例)，局灶节段增生性肾炎(12例)，狼疮性肾炎(14例)，新月体性肾炎(9例)的人肾穿刺活检标本，应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF-β1和AR在肾炎组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1作用后，大鼠系膜细胞中AR的mRNA表达与蛋白水平升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。各型肾炎中TGF-β1的表达均显著高于对照组；除lgA肾病之外的各型肾炎中AR的表达均显著高于对照组，AR的表达与TGF-β1表达之间具有显著的相关性。结论 TGF-β1相关反应性基因产物AR的表达与TGF-β1的作用密切相关，其可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程。     

红细胞醛糖还原酶荧光法的建立及意义

目的建立一种准确测定醛糖还原酶（ＡＲ）活性的方法。方法利用ＮＡＤＰＨ、ＤＬ－甘油醛、磷酸缓冲液和适量红细胞溶血液组成的反应体系，以荧光法测定了红细胞ＡＲ活性，并对酶反应最佳条件进行了实验探讨。结果①血红蛋白浓度在１～１０μｌ范围内，随着所加量的增加，反应后的ＮＡＤＰＨ消耗也逐渐增加，两者之间有很好的相关性；②反应温度对测定结果的影响不很明显；③以ＮＡＤＰＨ作辅酶时测得酶活性约为ＮＡＤＰＨ的１／３，这两种辅酶测得的荧光读数有良好的相关性（ｒ＝０．９２）；④ｐＨ６．０～６．５时ＮＡＤＰＨ的消耗最大；⑤批内变异系数（ＣＶ）５．２７％；批间变异系数（ＣＶ）８．９８％；⑥该法测定２０例正常对照和４０例糖尿病人红细胞ＡＲ结果表明，糖尿病人ＡＲ活性显著高于正常人（Ｐ＜０．０１），且ＡＲ活性与血糖值正相关（Ｐ＜０．０１）。结论荧光法灵敏、准确、稳定、特异，为深入研究ＡＲ与慢性并发症（ＤＣＣ）的发生、发展的关系，提供了一个可靠的手段。     

醛糖还原酶基因(AC)n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选

研究了醛糖还原酶基因转录起始点上游 - 2 1kb处的微卫星DNA标记--- (AC)n二核苷酸串联重复序列 7种等位基因 (Z + 6,Z + 4,Z + 2 ,Z ,Z 2 ,Z 4和Z 6)的筛选方法。首先自人外周血提取基因组DNA后设计一对引物进行PCR扩增 ,获得长度为 13 2～ 14 4bp的DNA片段。选取等位基因为纯合子的个体DNA标本的PCR扩增产物 ,经纯化后直接测序以确定等位基因的种类 ;并以确定的等位基因为标准 ,用尿素 /甲酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色法对各种等位基因进行筛选。该法操作简便、快速、准确度高 ,利于大量标本的筛选 ,也适用于其它二核苷酸重复序列等位基因的筛选。