淋球菌外膜蛋白的研究进展

淋病奈瑟菌是人类性传播疾病淋病的病原菌,简称淋球菌。主要引起泌尿生殖系统粘膜的急性或慢性化脓性感染。近年研究发现,淋球菌外膜蛋白在致病过程及宿主免疫反应中起着重要作用。淋球菌的感染率相当高,并可导致反复感染,这与其逃避宿主防御系统的机制较完善有关。菌体表面主要抗原成分外膜蛋白抗原等,     

淋球菌外膜蛋白PI基因重组子的构建和表达

目的 扩增四株淋球菌外膜蛋白PI基因，构建pET30b-PI-NG重组子，在大肠杆菌中诱导表达外膜蛋白PI．方法 采集临床淋球菌四株，提取细菌基因组DNA，PCR扩增外膜蛋白PI基因，与克隆载体pBS-T连接，构建pBS-T-PI-NG重组子，测序，目的基因插入表达质粒载体pET30h中，构建pET30h-PING重组子，转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导蛋白质表达，SDS-PAGE初步分析．结果 成功构建了四株淋球菌的pET30b-PI大肠杆菌表达重组子，经IPTG诱导表达后，其中三株获得表达的目的蛋白PI。结论 本研究为PI蛋白免疫学特性的研究、抗体制备、以及预防淋病疫苗的研制莫定了基础。     

产生过氧化氢的乳酸杆菌抑制淋球菌生长物质的初步鉴定

目的研究产生过氧化氢的乳酸杆菌抑制淋球菌生长的作用机制。方法将产生过氧化氢的乳酸杆菌与淋球菌在体外混合培养并将其超声裂解,然后通过各种不同分子量可通过的滤过膜滤过,收集分离的不同分子量蛋白成分,分别测定其对淋球菌过氧化氢酶的影响。结果产生过氧化氢的乳酸杆菌在ｐＨ５．０情况下对淋球菌过氧化氢酶活性有明显的抑制作用,其裂解物也能有效抑制淋球菌过氧化氢酶活性。该裂解物加热１００℃１５ｍｉｎ后仍具备以上抑制作用,但经蛋白酶Ｋ处理抑制作用丧失。结论产生过氧化氢的乳酸杆菌能产生淋球菌过氧化氢酶的抑制物质,通过对这种酶的抑制,进而抑制淋球菌的生长。     

低氧与应激蛋白研究进展

无论单细胞生物还是多细胞生物，应激都是一种重要的对外界环境的一种适应性反应。应激反应使机体产生一些非特异性的产物，即应激蛋白(Stress response proteins，SRP)，对于机体适应外界环境起到重要的保护作用，其结构具高度的保守性。应激蛋白的分类也未统一，有学者把它分为热休克蛋白(Heat shock proteins，HSP)、糖调蛋白(Glucose—regulated proteins，     

淋球菌外膜蛋白NspA基因重组子的构建与表达

目的构建淋球菌标准株外膜蛋白NspA基因重组子,在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达外膜蛋白NspA。方法提取淋球菌标准株基因组DNA,PCR扩增其NspA基因,插入表达质粒载体pET-30c（＋）中,构建pET-NspA重组子,转化表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western Blot检测表达蛋白。结果成功构建了淋球菌标准株的pET-NspA大肠杆菌表达重组子,经IPTG诱导表达后,该蛋白在大肠杆菌中高效表达。结论淋球菌外膜蛋白NspA在大肠杆菌中的成功表达,为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防淋病的疫苗奠定了基础。     

热应激蛋白70的脑保护作用

<正> 热应激蛋白(HSPs)也称热休克蛋白,是组织细胞暴露于热环境时产生的一类蛋白的总称,是由细胞核内高度保守的热应激基因编码的蛋白质产物。热应激蛋白存在于所有植物、酵母菌、细菌和哺乳动物的细胞内。大量实验已证实,除热刺激外,许多因素如细胞缺氧、组织创伤、变性蛋白、细胞内pH降低和其它应激因素均可诱导其生成。热应激蛋白     

淋病病人精液中抗淋球菌抗体的作用

淋病病人精液中抗淋球菌抗体的作用郑和义近年来研究发现，人体血清中抗淋球菌外膜蛋白Ⅲ（ＰⅢ）抗体有阻断免疫血清杀灭血清敏感型淋球菌的作用［１］，并能增加人体对淋球菌感染的敏感性［２］。我们曾证实了淋病病人的精液存在多种抗淋球菌外膜蛋白的抗体［３］，本工...     

淋球菌主要外膜蛋白PIA原核重组质粒的构建及序列分析

目的：构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因的pET重组质粒，分析其编码序列。方法：根据PIA已知序列设计——对引物，用PCR技术从淋球菌捷克标准株中扩增PIA；将目的基因PCR产物和质粒pET28a( )同时用BamHI和Hind Ⅲ限制性内切酶进行双酶切，纯化回收后将其连接并将重组质粒转化大肠杆菌DH5α。将构建的重组质粒pET28a( )-PIA通过PCR、质粒双酶切、DNA测序证实获得正确的重组克隆。结果：成功构建PIA基因原核重组质粒pET28a( )-PIA。序列分析表明，其携带的PIA基因序列与GenBank中公布的淋球菌(AF090818)的PIA序列具有很高的同源性，其同源性达到99．9％。结论：成功构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因重组表达载体，有助于更深入地分析其基因功能，为后期淋球菌的临床检测和基因疫苗研制打下基础。     

应激免疫抑制蛋白的细胞来源

目的：研究应激免疫抑制蛋白（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｓｔｒｅｓｓ,ＩＳＰＳ）的细胞来源。方法：免疫荧光染色后,运用流式细胞仪和激光扫描共焦显微镜两种技术对ＩＳＰＳ进行定性和定量研究。结果：流式细胞仪结果发现无论在正常还是应激条件下,ＩＳＰＳ均在Ｔ淋巴细胞上表达,且应激后ＩＳＰＳ表达量在Ｔ淋巴细胞显升高至正常时的３倍。在激光扫描共焦显微镜下,直接观察到分离纯化的Ｔ     

淋球菌OmpA蛋白的克隆表达、保守性及抗原表位分析

目的 了解OmpA蛋白在不同型别淋球菌间的保守性,分析OmpA蛋白的B细胞抗原表位,并通过大肠杆菌表达系统获取其重组蛋白.方法 从Genebank数据库中获取不同型别淋球菌的OmpA蛋白氨基酸序列,利用ClustalX 2.1软件对序列保守性进行分析.利用DNASTAR软件预测分析OmpA蛋白B细胞抗原表位.构建ppSUMO-ompA重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达OmpA重组蛋白,以SDS-PAGE检测表达的重组蛋白.结果 OmpA蛋白在不同型别淋球菌菌株间保守性高达99.6％,OmpA蛋白抗原表位可能位于28-37、78-86、95-102、147-154、159-165、201-208、213-218等氨基酸区段.SDS-PAGE检测大肠杆菌中表达出OmpA蛋白,主要以包涵体形式存在.结论 成功构建ppSUMO-ompA重组表达载体,获得包涵体形式的OmpA蛋白,且OmpA蛋白可能是一种保守性较好的淋球菌蛋白疫苗候选分子.     

淋病奈瑟菌检测技术研究进展

随着基因组学、现代分子生物学理论与技术的发展以及新仪器的研发,淋病奈瑟菌的检测方法将向快速、准确、灵敏、特异的方向发展,特别是PCR、ELISA等现代分子生物学技术的联用及实时PCR的进一步完善,大大提高了淋病奈瑟菌的检测质量和效率。     

产青霉素酶淋病奈瑟菌的DNA检测

目的 了解产青霉素淋病奈瑟菌（PPNG）耐青霉素的分子机制。方法 收集常州地区50株淋病奈瑟菌，应用TEM基因通用引物套式聚合酶链反应（nPCR)和以TEM－1的3末端及与之相邻基因的5末端为靶基因的PPNG型特异引物nPCR两种方法进行配对检测。结果 TEM－1型的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、沙雷杆菌、不动杆菌经TEM通用引物nPCR扩增均能呈现535bp的目的条带，而经PPNG TEM－1基因型特异引物nPCR扩增无任何条带出现。50株淋病奈瑟菌检测结果：TEM通用引物nPCR与PPNG TEM－1基因型特异引物nPCR扩增结果一致，有32例呈阳性，阳性率均为64％。对31号菌株PPNG TEM－1基因型特异引物nPCR产物进行全自动DNA测序，测得的序列与NCBI已登录的3种质粒序列（gi 150362、gi 1777422、gi1777428)高度同源。结论 常州地区64％的淋病奈瑟菌为PPNG。由于PPNG TEM－1基因型特异的nPCR只能扩增含TEM基因的PPNG，因此本检测有望用于淋病患者病灶部标本的PPNG DNA流行病学研究和用药参考。     

南昌地区淋球菌对抗生素耐药性研究

目的 了解南昌地区淋球菌对抗生素的耐药性及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋球菌(TRNG)的流行状况。方法 采用琼脂稀释法测定5种抗菌药物对120株淋球菌的最低抑菌浓度(MIC)；用改良碘定量法检测PPNG菌株。结果 淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素及头孢三嗪的耐药率分别为74．17％，76．67％，38．33％，1．67％，3．33％。检出16株(13．33％)PPNG菌株，15株(12．5％)TRNG菌株；同时对青霉素、四环素、环丙沙星耐药的菌株占31．67％。结论 头孢三嗪、大观霉素仍可作为南昌地区治疗淋病的首选用药．但淋球菌对青霉素、四环素及环丙沙星耐药率较高。     

PCR检测淋球菌的临床应用价值

本文应用聚合酶链反应技术，快速检测淋病奈瑟菌，对高度疑似淋病的７２例检测中，４９例为阳性结果，同时作涂片配对检测，仅２７例为阳性结果（Ｐ〈０．００５）；其中，４２例用ＰＣＲ法和培养法配对检查，ＰＣＲ法阳性为２８例，培养法阳性为１２例（Ｐ〈０．００５）。１０９株淋球菌药敏试验结果表明，耐青霉素类药物菌株仅为２６．６％，仍不失为治疗淋病的首选药物。     

Epidemic plasmids in Neisseria gonorrhoeae isolated from high-risk population in Bangladesh

Gonorrhoea still remains as one of the most common venereal diseases, causing a wide range of morbidity among the sexually active people. Characterization of the circulating strains of gonococcus containing epidemic plasmids is important to formulate control strategy. Keeping in mind the above consideration, a total of 495 Neisseria gonorrhoeae isolates with known minimum inhibitory concentration (MIC) values and antimicrobial susceptibility to penicillin and tetracycline were investigated for plasmid content of either PPNG (penicillinase producing N. gonorrhoeae) or TRNG (tetracycline resistant N. gonorrhoeae) or both. Isolates of N. gonorrhoeae showing resistance to penicillin (penicillin MIC ≥ 2 μg/ml, n=255) and high-level tetracycline resistance (tetracycline MIC ≥ 8 μg/ml, n=396) were tested by polymerase chain reaction. The oligonucleotide primers developed to differentiate between three related, epidemic PPNG plasmids (Asia type, Africa type or Toronto/New Zealand type) were used to identify PPNG plasmids and the primers developed to distinguish between American and Dutch variants of Tet-M gene were used to identify TRNG plasmids. A total 169 (34.1%) of the N. gonorrhoeae isolates were found to carry PPNG plasmids and all of them were Africa type showing the amplified products of 3.1 kb. A total 382(77.2%) of the isolates were found positive for TRNG plasmids and almost all were Dutch type (377, 98.7%) with a few American type (5, 1.3%). Although the rate of plasmid infection of either PPNG or TRNG types were very high, because of the presence of only one variant, they are supposed to be endogenously acquired. Therefore, a control strategy, considering the sexual behaviour of the local high risk populations as well as the susceptibility pattern of the circulating N. gonorrhoeae-derived treatment regimen might suffice to control the disease in Bangladesh.     

Auxotypes of Neisseria gonorrhoeae isolated from localized and disseminated infections in Montreal.

A survey recently made in the United States on the regional distribution of auxotypes of Neisseria gonorrhoeae suggested that isolates from different geographic areas often differ in auxotype. A subsequent auxotyping study in Montreal of 901 isolates of N. gonorrhoeae, 15 from patients with disseminated gonococcal infection, proved interesting in many regards. Gonococcal genetic medium, modified by the addition of other amino acids, was used. Most (93%) of the strains isolated from patients with localized infection belonged to one of the following three phenotypes: arginine-, hypoxanthine- and uracil-dependent (44%); prototrophic (33%); and proline-dependent (16%). Of the 15 strains responsible for disseminated infection 14 required arginine, hypoxanthine and uracil for growth.