稳定过表达XAF1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

目的 构建稳定过表达XAF1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察XAF1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法 分别将质粒pcDNA3.1（+）和pcDNA3.1（+）-XAF1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记（遗传霉素G418）筛选得到阴性对照细胞株（A2780/Negative control, A2780/NC）和稳定表达XAF1的细胞株（A2780/XAF1）;通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果 成功构建了稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1,细胞形态无明显变化;与A2780/NC相比,A2780/XAF1克隆形成能力能力更低（P= 0.0016）,细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低（P=0.009,0.0035）,两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义（P< 0.0001）,两两比较结果显示A2780/XAF1组G2-M期细胞百分比显著增加（P<0.001）。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下,A2780/XAF1的凋亡率均比A2780/NC更高（P<0.001）;在不同紫杉醇浓度作用下,A2780/XAF1的增殖活性均显著低于A2780/NC（P<0.001）,且A2780/XAF1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论 成功构建稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1;XAF1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期,并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。     

沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞A2780顺铂耐药性的影响

目的：研究RNA干扰切除修复交叉互补基因1（ERCC1）的表达后,卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的变化。方法：A2780细胞分别转染ERCC1基因的siRNA和GFPsiRNA,并给予顺铂（使其终浓度达到3μmol／L）,蛋白质印迹法分别检测顺铂给药前后ERCC1蛋白的表达,并用MTT法检测顺铂不同浓度下A2780细胞的存活率。结果：①转染ERCC1 siRNA后,实验组蛋白质表达量较对照组显著降低;@ERCC1 siRNA＋顺铂组的ERCC1蛋白表达要弱于ERCC1 siRNA＋PBS组,而GFPsiRNA＋顺铂组的蛋白表达要弱于GFPsiRNA＋PBS组;③顺铂（浓度在0．75—12μmol／L之间）呈浓度依赖性地降低A2780细胞的存活率;④在相同浓度顺铂的作用下,与GFPsiRNA组相比,ERCC1 siRNA组的顺铂量效曲线左移。结论：顺铂能抑制沉默ERCC1基因后A2780细胞的生长,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性;ERCC1是参与顺铂耐药性产生的重要因素之一。     

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的 观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthoeyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72 h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变.流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高.Western blot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加.结论 原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COCl/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞HO-8910生长的抑制作用

目的观察蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞HO-8910生长的抑制作用。方法卵巢癌细胞HO-8910分为空白对照组和蝎毒抗癌多肽处理组(终浓度分别为1、100、200、400、800 mg/L),采用细胞毒试验(MTT)法检测蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞HO-8910生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果1、100、200、400和800 mg/L组HO-8910细胞生长抑制率分别为2.56%、12.47%、28.53%、47.93%和66.92%,200、400和800 mg/L组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01);在400和800 mg/L组,与空白对照组比较,400 mg/L组HO-8910细胞S期细胞数明显减少(P<0.01),G2 M期细胞明显增多(P<0.01),800 mg/L组HO-8910细胞G2 M期细胞数明显减少(P<0.01),G1期细胞数有增多趋势;与空白对照组比较,400和800mg/L组HO-8910凋亡细胞数明显增加(P<0.01)。结论在一定范围内蝎毒抗癌多肽可明显抑制卵巢癌细胞HO-8910的生长,其机制与蝎毒抗癌多肽抑制HO-8910细胞DNA合成、诱导HO-8910细胞发生G2 和G1期阻滞及诱导HO-8910细胞凋亡有关。     

抑癌基因p27对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的：探讨p27基因对肾癌GRC－1细胞系生长的抑制作用,为肾癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法 采用基因转染技术,将p27 cDNA转染到肾癌GRC－1细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果 转染p27基因的肾癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0－G1期的细胞由32．2％增加到66．9％,经Dot blot和Western blot杂交证实,p27 mRNA表达有明显差异（P＜0．01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P＜0．01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1－S。结论 提高肾癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗肾癌的新途径。     

RNA干扰靶向沉默FLIP基因对卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用

目的探讨靶向FLIP基因的小干扰RNA（siRNA）对人卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用。方法设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体（LipofectamineTM2000）介导下转染人卵巢癌细胞株A2780。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP siRNAs转染前后A2780细胞FLIP基因mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用最强的FLIP-siRNA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Annexin-V-PI双染法流式细胞术（FCM）分别检测FLIP-siRNA转染对A2780细胞的生长抑制作用和对凋亡的影响。结果特异性FLIP-siRNAs片段能有效降低A2780细胞中FLIP的 mRNA和蛋白水平（P＜0.01）,最大抑制率分别为77.4％和66.1％;转染FLIP-siRNA后,A2780细胞的生长活力明显下降（P＜0.05）,RNA干扰组的细胞凋亡也显著增加（P＜0.05）。结论靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP基因表达;并可抑制卵巢癌A2780细胞生长,促进其凋亡。     

融合型自杀基因Fcy::Fur/5-FC对人卵巢癌细胞杀伤作用的研究

目的 研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)的杀伤作用.方法 构建含有融合型自杀基因Fcy∶∶Fur的荧光真核表达质粒,转染SKOV3细胞,筛选稳定表达的细胞株,RT-PCR和Western blot检测Fcy∶∶Fur表达.以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy∶∶Fur转基因细胞的杀伤效应.结果 测序鉴定证实插入片段正确.细胞转染24 h后,60%转染细胞发出绿色荧光.经G418筛选,RT-PCR和Western blot法检测到Fey::Fur 表达.加入5-FC后,MTT法检测到明显杀伤效应,FCM法检测到显著凋亡峰.结论 融合型自杀基因Fey::Fur联合5-FC驿人卵巢癌细胞SKOV3有明显的刹伤作用.     

三氧化二砷对卵巢癌细胞抑制作用及机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对卵巢癌细胞HO-8910体外生长的影响及其相关机制.方法：用倒置显微镜对细胞进行观察,用免疫细胞化学染色法检测p53基因表达.结果：（1）三氧化二砷作用浓度在0～12.0 μmol/L时,随着剂量的增加对卵巢癌细胞抑制作用增强.（2）卵巢癌细胞p53基因表达增强.结论：较高浓度三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO-8910细胞有生长抑制作用并呈剂量-时间依赖效应 As2O3作用引起卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的机制与p53基因表达增强有关.     

广西眼镜蛇毒细胞毒素对人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞的抑制作用研究

目的：研究广西眼镜蛇毒细胞毒不对体外培养的人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的抑制作用。方法：通过SephadexG-50,GM-Sepharose,CL-6B柱层析从广西眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素,应用四素氮唑蓝（MTT）法测定其对人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的体外细胞毒作用及其最效关系,并与粗毒的抑瘤作用进行比较,结果：从广西眼镜蛇毒中分离到一种细胞毒素（CTX CM－5）,其对体外培养的人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的抑制作用呈明显的剂量依赖关系。抑制率随剂是增加而呈迅速上升培养的人卵巢 细胞和宫颈癌细胞株具有较强的抑制作用。     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1表达的影响

目的 通过观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）表达的影响,探讨肝复康抗肝纤维化的可能机制。方法采用10％四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周给予肝复康治疗12周。通过测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及白蛋白和总蛋白的含量来反映肝脏功能,HE染色法观察肝组织病理学变化,免疫组化方法观察肝组织TIMP-1的表达。结果经肝复康治疗后,中剂量治疗组与模型组相比较,肝脏的组织学和血清学指标均明显改善,肝组织TIMP-1蛋白的表达显著减少（P〈0．01）。结论肝复康对肝纤维化有疗效,其作用机制可能与降低肝组织TIMP-1蛋白的表达有关。     

透邪通络法对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1的影响

目的：研究“主客交”理论指导下透邪通络法抗肝纤维化的机制及效果。方法：选用SD雄性大鼠,40％CC4。腹腔注射造模,正常组和模型组予生理盐水灌胃,对照组予秋水仙碱灌胃,透邪通络组予加减三甲散灌胃,8周后处死大鼠,显微镜下观察肝组织形态,免疫组化法检测MMP-1、TIMP-1的表达,用图像分析软件和统计软件处理结果。结果：与模型组相比,透邪通络组升高MMP-1表达与降低TIMP-1表达均有显著差异（P〈0．01）,对照组升高MMP-1表达有差异（P〈0．05）、降低TIMP—1表达有显著差异（P〈0．01）;与对照组比较,透邪通络组提高MMP-1表达、降低TIMP-1表达均有差异（P〈0．05）。结论：透邪通络法能明显改善HF大鼠的病理,具有显著的抗肝纤维化,其机制可能与提高MMP-1表达、降低TIMP-1表达而调控ECM的代谢有关。     

丹参对人粘连组织成纤维细胞MMP-1与TIMP-1mRNA表达的影响

目的 考察丹参及其化学成分对人粘连组织成纤维细胞（ATF）MMP-1与TIMP-1 mRNA表达的影响。方法 使用组织块培养的方法获取ATF,分别加入丹参提取物、丹参素钠、丹参酮IIA磺酸钠与地塞米松培养48 h,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用Real-time PCR法检测各组MMP-1与TIMP-1 mRNA的表达水平。结果 与空白对照组比较,丹参提取物与丹参素钠10、40 μg？mL-1剂量组MMP-1 mRNA水平差异有统计学意义（p〈0.01）,丹参素钠40 μg？mL-1剂量组TIMP-1 mRNA水平差异有统计学意义（p〈0.01）,其余各组差异均无统计学意义（p〉0.05）。结论 上调MMP-1 mRNA水平是丹参抑制ATF胶原过度合成,防止粘连产生的作用机制之一,丹参素在其中起主要作用。     

子宫内膜异位症中TIMP-1基因表达的研究

目的研究TIMP-1基因在子宫内膜异位症发生中的作用。方法采用免疫组织化学SP法研究25例内异症和22例正常子宫内膜组织中TIMP-1的蛋白表达情况;采用RT-PCR方法研究33例内异症的异位子宫内膜组织和30例正常子宫内膜组织中TIMP-1基因的mRNA表达情况。结果子宫内膜异位症组中的TIMP-1的蛋白表达水平和mRNA表达水平与正常子宫内膜对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论TIMP-1主要是以一种与MMPs保持平衡的状态来维持正常子宫内膜环境,只有与MMPs的比例失去平衡时,才可能会导致子宫内膜异位症。     

MMP-2、MMP-9及TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达

目的 探讨金属基质蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达.方法 取皮肤癌手术切除标本40份,进行免疫组化检测MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1的表达.结果 MMP-2、MMP-9在非黑色素皮肤癌中的表达的阳性率、染色强度、表达强度均显著高于正常皮肤.TIMP-2、TIMP-1在非黑色素皮肤癌中的表达的阳性率、染色强度、表达强度均显著低于正常皮肤.结论 基质金属蛋白酶（MMP）在非黑色素性皮肤癌中呈高表达,基质金属蛋白酶组织抑制因子呈低表达,两者比例失衡与皮肤癌的浸润和转移有关.     

TIMP-1在喉癌中的表达及其临床意义

①目的探讨TIMP-1在喉癌中的表达及其临床意义。②方法应用流式细胞术检测50例原发喉癌患者新鲜手术切除癌组织及50例相应癌旁组织（距肿瘤边缘0.5cm）与16例非喉部疾病患者的正常喉黏膜组织的TIMP-1的表达。③结果TIMP-1的表达量及阳性表达率在喉癌组织中明显低于癌旁组织和正常喉黏膜组织，差异均具有统计学意义；癌旁组织和正常喉黏膜组织间的表达差异无统计学意义；临床Ⅲ、Ⅳ期组明显低于临床Ⅰ、Ⅱ期组。TIMP-1在不同性别、年龄中的表达量和阳性表达率均差异无统计学意义。④结论TIMP-1在喉癌组织、癌旁组织及正常喉黏膜组织中均有表达，在喉癌组织中的定量及定性表达均明显低于癌旁组织和正常喉黏膜组织，癌旁组织和正常喉黏膜组织的表达无差别。这种差异与临床分期有关，但其表达与患者年龄及性别无关。     

TIMP-1在肝纤维化形成过程中的作用

目的 研究TIMP-1在肝纤维化形成过程中的作用。方法 皮下注射CCl4建立小鼠肝纤维化模型;RTPCR扩增TIMP-1cDNA片段,定向克隆到转录载体pSPF18上,构建pSPF18／TIMP-1重组质粒,转化E-coli JM109,进行质粒提取、酶切鉴定、序列分析、体外转录合成探针、原位杂交。结果 成功建立小鼠肝纤维化模型;获得的TIMP-1目的基因片段大小为262bp,与预期结果相同;经酶切鉴定和序列分析证实成功构建了pSPT18/TIMP-1重组质粒;原位杂交结果显示,TIMP-1主要在激活的肝星型细胞、内皮细胞、间质细胞以及正常肝细胞中表达,且随着肝纤维化的逐步形成,TIMP-1的表达逐渐升高。结论 TIMP-1参与肝纤维化的形成过程,并与肝纤维化的程度成正相关。     

MMP-11及TIMP-1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-11（MMP-11）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测MMP-11及TIMP-1在结直肠癌和正常结直肠黏膜组织中的表达。结果结直肠癌组织中MMP-11和TIMP-1的表达与正常结直肠黏膜组织比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。MMP-11的表达与浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关（P〈0.05）;TIMP-1的表达与淋巴结转移、Dukes分期有关（P〈0.05）。MMP-11表达与TIMP-1表达呈正相关关系（P〈0.05）。结论 MMP-11和TIMP-1参与了结直肠癌的发生、发展,可以作为预测结直肠癌浸润和转移的指标。     

波生坦对肺纤维化大鼠肺胶原沉积与MMP－9、TIMP－1的影响

目的：探讨波生坦对肺纤维化大鼠肺胶原沉积与MMP－9、TIMP－1的影响。方法将48只成年雄性Wistar大鼠随机均分为6组：对照2周组、4周组（ C2组、C4组）,模型2周组、4周组（ M2组、M4组）及治疗组（ T1组、T2组）。予博莱霉素建模, T1、T2组分别于第2 d、第15 d始每天予波生坦灌胃至第28 d。Masson 染色观察肺胶原沉积情况,用酶联免疫反应法测定肺泡灌洗液的MMP－9、TIMP －1浓度。结果（1）C2组、C4组大鼠肺间质胶原稀少;M2组可见大量淡蓝色胶原沉积,M 4组明显加重伴部分纤维化;T1组较 M4组显著减少,T 2组较 M4组无差异。（2）造模后MMP－9浓度随时间升高：C2组、C4组、M2组、M4组分别为（1．15±0．27）μg／mL、（1．23±0．31）μg／mL、（1．98±0．35）μg／mL、（2．38±0．47）μg／mL,T1组较M4组显著下降（P＜0．05）。（3） M2组、M4组TIMP－1浓度明显高于C2组、C4组,T1组较M4组明显下降,差异有统计学意义。结论波生坦可减少肺纤维化大鼠肺组织的胶原沉积,可能是通过早期抑制MMP－9、TIMP－1途径起作用。