TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠中表达的初步分析

目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏中Toll样受体（TLRs）中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高（P〈0.01）,均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用.     

华支睾吸虫感染对野生型和Tlr2-/-C57BL/6J小鼠肝胆管损伤差异的研究

目的 观察C57BL/6J野生型、Tlr2-/-两种小鼠感染华支睾吸虫后肝脏的病理变化,探讨Toll样受体2(TLR2)对华支睾吸虫感染致胆管损伤的影响.方法 建立野生型、Tlr2-/-小鼠华支睾吸虫感染模型即每只小鼠灌胃45只华支睾吸虫囊蚴,对照组灌胃等量生理盐水.感染第4周安乐死法处死小鼠,采用比色法检测小鼠血清中...     

TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析 TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析

目的 分析小鼠华支睾吸虫感染后小鼠肝脏中Toll样受体5（TLR5）的表达情况.方法 随机选取C3H/HeN雌性小鼠,经口感染35个华支睾吸虫囊蚴建立感染模型.分别在感染0（对照组）、1、7、28、56、84天处死小鼠,取肝脏组织行如下处理：①苏木精-伊红（H-E）染色观察小鼠肝脏病变;②采用免疫组织化学染色观察小鼠肝脏组织TLR5表达情况;③采用逆转录聚合酶链反应（RT-PC R）检测肝脏中TLR5的表达水平.结果 ①肝脏病理结果显示,与对照组小鼠相比,感染第1、7天小鼠肝脏汇管区出现炎症细胞浸润,第28天可观察到肝细胞排列紊乱,出现纤维组织增生和胆管增生;②免疫组织化学染色显示,TLR5在感染华支睾吸虫第1天、7天、28天的小鼠肝内表达增高,其主要表达于汇管区肝细胞、肝胆管上皮细胞和纤维化区域的成纤维细胞;③RT-PCR结果显示,小鼠肝脏中TLR5 mRNA表达量在感染第1天、7天、28天明显高于对照组.结论 C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫可上调肝脏组织TLR5的表达,提示TLR5可能在宿主抵抗华支睾吸虫感染中起着一定的作用。     

Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究

目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。     

华支睾吸虫病血清酶学及肝脏病理学实验研究

华支睾吸虫病为华支睾吸虫寄生于肝胆管内所致的疾病,由于其临床症状复杂及以往的诊断方法滞后,故临床上常有误诊。2004-2006年,我院以犬为实验模型,在人工感染华支睾吸虫后,分别就不同感染程度、不同病程的实验犬进行了血清酶学及肝脏病理学观察,现报告如下。     

血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究

目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。     

华支睾吸虫感染小鼠肝组织细胞因子动态变化的初步观察

目的观察小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后肝脏病理学特征及IFN-γ、IL-4、IL-12表达情况,探讨IFN-γ、IL-4、IL-12在免疫调控中的作用及意义。方法分别在感染后的不同时段剖杀小鼠,取其肝脏,采用石蜡切片,H—E染色,光镜观察肝脏病理变化情况;采用SABC免疫组织化学染色法测定IFN-γ、IL-4、IL-12在华支睾吸虫感染小鼠肝脏组织中表达水平的动态变化。结果H—E染色：感染后1天,小鼠肝脏无明显变化。感染后4天,小鼠肝脏轻度肿胀,肝脏汇管区表现为轻度炎症反应。随着病程的发展病理改变趋于严重。免疫组织化学结果：Th1细胞凶子IL-12和IFN-γ的表达呈现大致相同的趋势,在感染后1周开始上升,在4周达高峰,随后下降,至第12周仍高于正常组水平（P〈0．05）。而IL-4的表达水平则自感染后第1周开始持续上升,-直持续至感染后第12周实验观察结束,且随感染时问延长而明显升高。结论免疫组织化学检测结果提示细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-4的阳性表达主要在汇管区、肝小叶坏死区的淋巴细胞和巨噬细胞的胞质,肝细胞未见阳性表达。华支睾吸虫感染的免疫应答发生了由Th1免疫应答向Th2免疫应答转变的趋势;华支睾吸虫病前期Th1细胞免疫应答占优势,后期Th2细胞免疫应答占优势。     

华支睾吸虫致病与巨噬细胞极化的相关性

目的探讨华支睾吸虫感染宿主过程中,华支睾吸虫感染致肝脏病变(肝细胞损伤、肝纤维化)与巨噬细胞极化之间的相关性。方法构建华支睾吸虫感染BALB/c小鼠模型,Masson染色检测感染小鼠肝脏胶原沉积情况;检测感染小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,了解肝细胞损伤情况;实时荧光定量PCR检测α-平滑肌蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶(Arg1)、抵抗素样分子α(Retnlα)、白细胞介素-10(IL-10),了解感染小鼠肝纤维化状况和巨噬细胞M1、M2极化类型变化。结果感染小鼠肝脏胶原沉积在感染后第8周最为明显。ALT、AST和α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ均在感染后1~2周处于较高水平,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。i NOS、Arg1、Retnlα及IL-10的转录水平在感染后第4周均处于较高水平,Arg1的转录水平在感染后8~10周仍处较高水平。i NOS与α-SMA、Collagen-Ⅰ水平呈显著正相关(r=0.57,P0.05),Arg1与胶原沉积状况(Ishak评分)呈显著正相关(r=0.45,P0.05),差异均有统计学意义。结论华支睾吸虫感染致肝细胞损伤、肝纤维化状况可能与巨噬细胞不同极化类型之间具有相关性。     

江门市新会区华支睾吸虫病流行现状调查与分析

目的 了解江门市新会区华支睾吸虫病的流行现状,确定华支睾吸虫病的高危人群,提供当地华支睾吸虫病感染因素的线索.方法 采用免疫酶联吸附法检测血清中华支睾吸虫特异性抗体;采用改良加藤氏法检测粪便虫卵;采用消化法检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴;进行问卷调查华支睾吸虫感染相关的生活和行为方式;同时采用病例对照方法分析影响华支睾吸虫感染的相关流行因素.结果 共调查1 720人,华支睾吸虫平均感染率为18.14%,男性感染率高于女性(P<0.001).各年龄组均有感染,感染率差异有统计学意义(P<0.001).共调查常见淡水鱼6种共273尾,6种淡水鱼体内均查到华支睾吸虫囊蚴.病例对照研究显示,吃半熟鱼习惯及外出饮食等行为是最重要的危险因子.结论 新会区华支睾吸虫病流行范围广,感染率高,已经成为一个严重的公共卫生问题,应积极开展综合性防控工作.     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

华支睾吸虫感染致肝损伤的机制研究进展

华支睾吸虫病是一种食源性寄生虫病,其成虫寄生后通常会侵犯人体胆道,最终对肝脏造成损伤。本文浅析了华支睾吸虫感染人体后,通过活化肝星状细胞并最终导致肝损伤的机制,对活化肝星状细胞的有关信号通路、相关的蛋白和细胞因子进行了归纳总结,以期为华支睾吸虫致肝损伤的治疗提供参考。     

淡水鱼华支睾吸虫囊蚴实验检测及感染状况

目的:了解顺德区淡水鱼华支睾吸虫感染状况,为该病的预防和治疗提供科学的依据。方法:取6种常见的淡水鱼593条,选用压片法和消化法检测华支睾吸虫囊蚴感染情况分析。结果:检测出华支睾吸虫囊蚴有4种鱼,其中鲫鱼检出率最高,为17%,其余依次:鳙鱼为13.6%、鲩鱼为8.2%、鲮鱼3.4%,平均为10.5%,罗非鱼、武昌鱼等鱼类没有检测出。结论:部分淡水鱼存在华支睾吸虫囊蚴感染,对华支睾吸虫防治应该予以高度的重视。     

华支睾吸虫病大鼠肝细胞凋亡的实验研究

目的 研究感染华支睾吸虫的大鼠肝细胞是否存在凋亡。方法 分离获得采自疫区麦穗鱼体内的囊蚴，分别以50个、100个和200个囊蚴经口饲法感染3组实验大鼠，同时设立对照组。于感染后第45天宰杀动物，取肝脏作组织切片。采用TUNEL法检测肝细胞的凋亡率。结果 观察有典型细胞凋亡形态学特征的肝细胞。感染组大鼠肝细胞凋亡率显著高于正常对照组。结论 感染华支睾吸虫的大鼠肝细胞存在凋亡，且囊蚴感染量可能对肝细胞凋亡率有影响。     

我的肝上生小虫,是不是什么病?

正医生,肝脏能长虫?是的,在肝脏的感染性疾病中就包含了寄生虫感染。肝脏感染寄生虫后是会带来不同程度的肝损害。常见的寄生虫感染包括华支睾吸虫(肝吸虫)、肝片形吸虫、血吸虫、肝毛细线虫、细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫幼虫等。什么是肝吸虫?华支睾吸虫,即肝吸虫。肝吸虫病是有肝吸虫寄生于人体肝胆管中引起的肝胆病变为主的一种人兽共患寄生虫病。人     

华支睾吸虫病流行区流行病学研究

目的 为了解广州市番禺区华支睾吸虫流行情况，于2000年6月～2002年10月在番禺沙湾镇的紫坭村和石基镇的前锋村开展了华支睾吸虫病流行病学调查。方法 采用改良加藤氏厚涂片法粪便检查人群华支睾吸虫卵；华支睾吸虫感染静脉采血作转氨酶、乙肝表面抗原、核心抗体检测和腹部B超检查；开展中间宿主和保虫宿主调查。结果 华支睾吸虫总感染率13．7％。其中紫坭村感染率18．2％；前锋村感染率8．O％；男性感染率为22．3％，女性感染率为6．6％，以20～50岁年龄组最高。华支睾吸虫感染HBsAg阳性率为20．9％，HBeAb阳性率为40．3％；42．4％感染出现不同的肝胆道病变；在当地鱼塘的鱼苗中找到华支睾吸虫囊蚴；解剖当地犬、猫中，均发现华支睾吸虫成虫。结论 番禺区是华支睾吸虫重点流行区之一，且华支睾吸虫已对当地群众的身体健康造成了严重危害。     

珠海市农村地区2010年华支睾吸虫感染情况调查及其危险因素分析

目的了解珠海市农村地区华支睾吸虫感染和流行现状,为制定防治规划提供科学依据。方法采用改良加藤厚涂片法(kato-katz法)检查华支睾吸虫虫卵,并进行华支睾吸虫知晓和防治状况调查。结果本次抽样调查斗门区5个乡镇共1000人,检出华支睾吸虫感染者63人,以中年男性为主,总感染率为6.3%(63/1000)。被调查者对于肝吸虫防治知识的知晓率为87.8%,生熟食品砧板分开成为感染华支睾吸虫病的保护性因素(OR=0.11,OR95%C.I.(0.02-0.62)。结论珠海市农村地区华支睾吸虫感染率低于全省平均水平,肝吸虫防治知识知晓率较高,生熟食品砧板分开是感染华支睾吸虫病的保护因素。     

广州市某医科院校学生华支睾吸虫感染情况调查

目的了解广州某医学院学生华支睾吸虫的感染状况。方法分别采用直接涂片法和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对学生的粪便和血清进行检查。结果粪便检查4438人,华支睾吸虫卵阳性5人,感染率约为0．11％;ELISA法检查415人,血清华支睾吸虫IgG抗体阳性10人,阳性率约为2．41％。结论广州市医科大学生华支睾吸虫感染率低于广州市平均水平,但仍需注意高校学生华支睾吸虫感染的防治工作。     

ESA刺激华支睾吸虫感染小鼠脾细胞分泌Th1／Th2的动态观察

目的 观察华支睾吸虫分泌排泄抗原（ESA）刺激感染小鼠脾脏单个核细胞Th1／Th2细胞因子的动态变化。方法双抗体夹心ELISA法检测华支睾吸虫感染后不同时间小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ,IL-4的动态变化。结果自感染后1w起IFN-1的表达量开始上升,第4w达高峰（P〈0．05）,此后开始下降,至第12w水平接近正常。与IEN-γ不同,IL4的表达自感染后第1w起持续升高,直至观察结束的12w（P〈0．05）。结论初步结果提示华支睾吸虫感染后急性期转向慢性期的过程中Th1／Th2细胞因子的表达经历了由Th1优势应答向Th2优势应答的转变。     

TLR4在华支睾吸虫感染致小鼠肝纤维化作用的研究

目的探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用。方法建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化。结果 C3H/HeN小鼠肝脏大体病变从2W开始,随感染时间延长而加重;C3H/HeJ小鼠从2W开始,4W加重,至8W已明显减轻。观察HE、Masson染色肝脏切片示随感染时间的延长,C3H/HeN小鼠前期肝纤维化逐渐加重,至8W起趋于稳定;2W~12W纤维化评分均高于感染前(P0.01)。C3H/HeJ小鼠肝纤维化评分2W升高,4W达高峰并显著高于感染前(P0.01),至8W明显下降。与C3H/HeN比较,感染后2W、4W、8W、12W C3H/HeJ小鼠肝纤维化程度轻(P0.01)。感染后7d,C3H/HeN小鼠的HE染色切片上可见嗜酸性粒细胞,4W达高峰,此后明显减少。感染后2W、4W、8W,C3H/HeJ小鼠嗜酸性粒细胞较C3H/HeN小鼠少(P0.05)。结论 TLR4基因缺失可能在华支睾吸虫感染致肝纤维化过程起一定的阻制作用,从而减缓肝纤维化的进程。     

实验感染华支睾吸虫家兔血清抗体动态的初步观察

我们曾应用竦根过氧化物酶联葡萄球菌A蛋白(HRP—SPA)为第二抗体做酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染华支睾吸虫病人及感染动物血清的特异性抗体,已经取得较好效果。但对于感染华支睾吸虫后抗体水平的变化尚不了解。本文采用此法对家兔感染华支睾吸虫后血清抗体消长动态进行了初步观察,现将结果报告如下: