宽体金线蛭抗凝血有效成分分离研究

目的从宽体金线蛭中分离纯化抗凝血活性成分。方法以抗凝血活性为筛选指标,以Sephadex G50、DEAE Cellulose-52、Sephadex LH-20等凝胶进行分离,利用HPLC进行纯化。结果从宽体金线蛭加热提取液中分离纯化得到一个肽类物质。结论宽体金线蛭中存在热稳定的抗凝血肽类物质。     

宽体金线蛭的特异性PCR分子鉴定

[目的] 实验旨在通过寻找宽体金线蛭单核苷酸多态性（SNP）位点,设计宽体金线蛭的特异性鉴别引物,建立宽体金线蛭特异性聚合酶链式反应（PCR）检测方法,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别。[方法] 通过比对宽体金线蛭与其常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）序列,寻找宽体金线蛭COI基因序列内SNP位点,设计特异性鉴别引物。[结果] 进行PCR后仅宽体金线蛭能够扩增得到149 bp的条带,混伪品不能扩增出明显目的条带。向扩增产物中加入SYBR Green I核酸染料染色,宽体金线蛭样品在紫外灯下显黄绿色荧光,混伪品不显荧光。[结论] 该方法能够准确快速鉴别宽体金线蛭与其常见混伪品,为中药材市场上宽体金线蛭的快速鉴别提供技术支持。     

宽体金线蛭越冬保种技术研究和越冬蛭生产性能测定

目的:研究宽体金线蛭在土质和水质环境下越冬情况,为宽体金线蛭成蛭越冬提供方案,促进宽体金线蛭人工养殖持续发展。方法:将收集的野生宽体金线蛭成蛭分成带土越冬组和带水越冬组,每组设三个平行试验,统计越冬成活率及越冬产茧率,比较越冬蛭子代生长差异。结果:带土越冬组和带水越冬组越冬繁殖成活率分别为69.45%和78.73%,相对产茧率分别为11.37%和12.94%,二组之间无显著差异(P0.05);带土越冬组和带水越冬组产茧后亲蛭平均体重分别为6.46 g/尾和8.79 g/尾,0.5 kg蛭茧分别有593枚和518枚,二者之间差异显著(P0.05);带土越冬组宽体金线蛭子代生长速度快,与带水越冬组子代之间差异极显著(P0.01)。结论:宽体金线蛭在土质和水质环境下均能安全越冬,越冬后亲蛭均能正常繁殖,带土越冬宽体金线蛭子代生长性能更优。     

宽体金线蛭5种提取方法的比较

宽体金线蛭５种提取方法的比较中国中医研究院基础理论研究所（北京１００７００）丁家欣，欧兴长，张秋海，张玲，刘振丽ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｍｏｎｇＦｉｖｅＤｉｆｆｅｒｅｎｔＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｆＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｒａＷｈｉｔｍａｎ￥...     

宽体金线蛭仿生酶解液物质基础分析

目的 对宽体金线蛭仿生酶解液进行物质基础分析。方法 采用化学定性和定量的方法,对固形物、无机盐、肽、氨基酸等物质进行含量测定,并进行核苷特征图谱及肽特征图谱研究。结果 通过对15批宽体金线蛭仿生酶解液中各物质含量测定及特征图谱研究,确定固形物、无机盐、肽、游离氨基酸、总氨基酸的质量浓度分别为75.5～79.7、10.7～12.7、42.6～49.4、1.9～3.1、49.4～51.6 mg·mL^–1。建立宽体金线蛭仿生酶解液核苷特征图谱,共标定和归属了4个特征峰;建立宽体金线蛭仿生酶解液肽特征图谱,共标定6个特征峰。结论 建立了宽体金线蛭仿生酶解液中各物质含量测定及特征图谱的研究方法,简便快捷、重复性好,可用于对其进行质量控制。     

微山湖地区宽体金线蛭的群体考察与产茧后药材质量评价

目的:建立科学的宽体金线蛭种蛭筛选原则,并对产茧后药材进行质量评价。方法:从微山湖地区采集野生宽体金线蛭1193条,对体质量和生殖环带发育等群体特征进行考察。将种蛭分为10、15、20 g 3个试验组,建立卵茧成熟度观察方法以判断适宜的挖茧时机,通过产茧数、茧体积、出苗数等指标考察体质量对宽体金线蛭繁殖性能的影响。依照2015年版《中华人民共和国药典》对产茧后水蛭药材的性状和抗凝血酶活性进行质量评价。结果:微山湖地区宽体金线蛭野生种群的体质量普遍较小,15 g及以上的种蛭仅占样本群体的19.53%;宽体金线蛭的繁殖性能随种蛭体质量的增加而显著提高,20 g试验组的产茧数(5.9个)和出苗数(37.3条)分别是10 g试验组的1.59倍和1.45倍。产茧后种蛭的死亡率和体质量损失率可高达37%和59%,药材厚度仅为产茧前的49%～72%,腥味散失严重、脆度下降,但产茧前后抗凝血酶活性变化不大,均为3～5 U·g~(-1)。结论:微山湖地区野生宽体金线蛭的种群有退化趋势,建议使用15 g及以上的种蛭进行繁殖生产。产茧后药材的商品规格和等级较低,不适宜作为饮片直接用于临床。     

宽体金线蛭室内产茧、孵化及仔蛭饥饿研究

目的：建立宽体金线蛭室内网箱湿土养殖新模式,为中药材生产质量管理规范及规模化繁养殖提供参考依据。方法：以野外采捕的具有生殖环带的宽体金线蛭为试验材料,在室内采用网箱湿土法养殖,进行宽体金线蛭产茧、卵茧孵化及仔蛭饥饿试验研究。结果：亲蛭采用网箱湿土法养殖17d,其平均成活率为90％;产茧前具有生殖环带（土黄色）,产茧后生殖环带消失;亲蛭产卵茧后平均体重下降率达（29．94±0．01）％;产卵茧期间共收获卵茧79枚,平均产茧量为1．8枚／条,卯茧平均重量为（0．50±0．21）g／枚,平均长径和短径分别为（1．75±0．31）cm／枚和（1．10±0．18）cm／枚;卵茧在室温下（14—33℃）孵育34d,共孵出仔蛭865条,每枚卵茧孵出（11．4±2．0）条仔蛭,卵茧孵化率达92．57％。初孵仔蛭平均个体体重为（0．0205±0．0084）g。饥饿试验表明,在140d时,对照组存活11条水蛭,成活率仅22％,其平均个体体重为（0．1084±0．0877）g,仔蛭个体体重有随日龄的增加而增加趋势;饥饿组仔蛭在140d时全部死亡。结论：在适宜的条件下,采用网箱湿土养殖法,宽体金线蛭可在室内产茧,卵茧集中孵育及亲蛭和仔蛭分开饲养。     

饥饿胁迫下宽体金线蛭苗生长特性研究

目的:研究饥饿胁迫后宽体金线蛭苗生长特性。方法:将孵出的宽体金线蛭幼苗进行饥饿处理,测定了其在饥饿胁迫下体重变化规律;并在不同饥饿时间点给予足量适口饵料,观察其摄食后的生长特性。结果:持续饥饿胁迫下,宽体金线蛭苗体重逐渐下降,和饥饿胁迫时间成负相关关系,相对负增重率呈现出阶段性增大的规律。饥饿12天内投饵后,幼苗会以高于正常投喂组的生长速度补偿生长,但饥饿14天以后补偿生长基本消失,仍可以正常速度生长,但生长过程中晚投喂组体重无法赶上或超过正常摄食组。结论:宽体金线蛭耐饥饿能力较强,解除饿胁迫后可以部分补偿生长形式继续生长。     

宽体金线蛭有效成分分子量分布和纯化工艺考察

目的:采用不同方法对宽体金线蛭活性溶液进行不同分子量的含量测定和物质分离,获得最优条件。方法:采用不同分子通透性的透析膜对宽体金线蛭活性溶液进行分子量的含量测定。再分别采用大孔树脂、Q Sepharose FF、SP Sepharose FF对宽体金线蛭活性溶液进行纯化。通过考察不同纯化条件以达到分离有效物质的目的,并结合体外抗凝实验对最佳组分进行活性检测。结果:分别采用500 Da、1000 Da、3000 Da的透析膜对活性溶液进行分子量含量测定,得出500 Da的物质占37.6%;500 Da~1000 Da的物质占到18.5%;1000 Da~3000 Da的物质占28.1%;3000 Da物质占到15.7%。采用大孔树脂DA201-C处理得出50%乙醇洗脱液具有很好的活性。再采用Q Sepharose FF、SP Sepharose FF分别对宽体金线蛭活性溶液进行处理,采用不同洗脱剂进行洗脱然后进行活性验证得出1.0%Na Cl的p H值=8.5的Tris缓冲溶液洗脱组分活性比较强。结论:采用不同方法对宽体金线蛭活性溶液进行研究,获得较纯的活性组分,为后期的继续研究做好基础。     

江苏省不同地区宽体金线蛭青年苗养殖性能研究

目的研究江苏省不同地区宽体金线蛭养殖性能。方法收集苏州张家港市、泰州海陵区、扬州高邮市和盐城建湖县共四个地区野生宽体金线蛭青年苗,在室外水泥池进行人工养殖实验。结果苏州张家港和泰州海陵地区宽体金线蛭青年苗平均增重倍数为4.67和4.72,扬州高邮和盐城建湖地区青年苗平均增重倍数分别为3.63和3.26,前二个地区青年苗平均增重倍数显著高于后二个地区平均增重倍数(P0.05);苏州张家港、泰州海陵、扬州高邮和盐城建湖四个地区青年苗平均成活率分别为85.20%、94.85%、91.58%和91.15%,苏州张家港地区青年苗养殖成活率显著低于其它三个群体(P0.05)。结论泰州海陵地区青年苗最适合在泰州地区养殖,苏州张家港地区青年苗次之。     

基于分子模拟技术筛选宽体金线蛭抗凝活性肽

目的：采用分子模拟技术从宽体金线蛭来源多肽库中筛选抗凝活性多肽,结合分子对接初筛及分子动力学模拟复筛,最终通过抗凝实验验证得到宽体金线蛭抗凝活性多肽。方法：利用虚拟酶切技术对宽体金线蛭蛋白库进行酶切,得到宽体金线蛭多肽候选库;选择凝血酶为凝血活性靶点,采用HPEPDOCK及Discovery Studio CDOCKER两种方法进行分子对接,并利用分子动力学模拟技术对分子对接初筛结果中对接结合能高的复合物进行动力学模拟复筛,通过MM-PBSA模块分析计算凝血酶-多肽复合物结合自由能;最后采用固相合成法化学合成复筛中稳定结合的宽体金线蛭多肽并进行体外抗凝活性测定。结果：经过虚拟酶切共得到3317条无毒多肽,通过分子对接进行初筛,结合分子动力学模拟复筛,得到1条结合凝血酶效果最好的目标抗凝肽,该多肽序列为QNTVGLDDFFSSYER,结合自由能为–427.506 kJ·mol^–1。凝血酶Arg233残基是该凝血酶-多肽复合物中介导结合相互作用的关键氨基酸。该宽体金线蛭抗凝肽在体外活性测定中确能延长凝血酶时间。结论：利用分子模拟技术有效筛选出1条宽体金线蛭抗凝活性肽,...     

宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研究

目的:研究宽体金线蛭的耗氧率和窒息点。方法:应用呼吸室法进行研究。结果:平均体重为10 g的宽体金线蛭,15~35℃变温下耗氧率为0.049~0.094 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.44~0.67 mg.p^-1.h^-1,窒息点为0.9~1.51 mg.L^-1;20℃条件下耗氧率为0.044~0.058 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.19~0.77 mg.p^-1.h^-1,窒息点为1.4~1.57 mg.L^-1。结论:宽体金线蛭的耗氧率随水温的升高而上升;窒息点与温度和体重呈负相关;体重与耗氧率呈负相关,与耗氧量呈正相关;耗氧率白天和夜晚的差异不大。     

宽体金线蛭不同炮制品抗炎作用及使用方法的药理研究

比较了宽体金线蛭3种炮制品,对小鼠急性炎症模型的抗炎作用、免疫吞噬能力。以体内、外抗凝及体内抗栓作用为指标,比较了供试品不同使用方法的活血作用,为全面认识宽体金线蛭的药理作用及合理使用方法,提供了初步实验依据。     

宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性研究

目的:研究宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性,为产茧后亲蛭处理提供理论依据。方法:选择性成熟宽体金线蛭利用网箱进行人工繁殖,繁殖结束后在室内条件下开展为期20 d的养殖实验,实验分饥饿组和对照组,养殖期间定期测量体重和统计成活率,养殖结束后测定出干率和主要消化酶活性。结果:饥饿组在实验期间不断死亡,最后平均成活率为51.67%;对照组前期亲蛭少量死亡,实验中后期持续死亡,养殖平均成活率为65.00%,与饥饿组之间差异显著。饥饿组实验初期体重迅速增长,之后逐渐下降,最后基本恢复到实验前水平,实验期间体重平均增长率为-0.53%;对照组在实验前期体重增加后出现小幅下降,之后体重持续增加,最后恢复到产茧前水平,实验期间体重平均增长率为40.23%。产茧结束后亲蛭出干率为22.14%,饥饿实验结束后饥饿组和对照组出干率分别为13.30%和12.75%,二者之间差异不显著,但与亲蛭产茧结束时出干率之间差异极显著。宽体金线蛭胰蛋白酶活性高于淀粉酶和脂肪酶活性,饥饿处理引起宽体金线蛭胰蛋白酶活性增强、淀粉酶活性下降,二者在饥饿组和对照组中差异显著。结论:宽体金线蛭产茧后短期养殖体重可以恢复到产茧前水平。     

不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响北大核心

目的:探明不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响,为促进宽体金线蛭规模化人工繁殖提供参考依据。方法:分别设置5种基质处理组:土壤组(A)、稻草组(B)、牛粪组(C)、土壤与稻草混合组(体积1∶1,D)、土壤与牛粪混合组(体积1∶1,E)和6个亲本密度处理组:30、60、90、120、150、180尾/m^(2),经过25 d的繁殖以及15 d的卵茧孵化后,观察其亲本存活率、产茧率、卵茧规格、卵茧的孵化率和孵化量等指标的变化。结果:不同基质对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率、卵茧的孵化量有显著性影响(P<0.05),但对卵茧规格和卵茧的孵化率无显著性影响(P>0.05),其中基质D组亲本存活率(100.00%)和产茧率(3.70枚/尾)最高,基质B组卵茧的孵化量(32.2尾)最高。不同亲本密度对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率有显著性影响,但对卵茧规格无显著性影响,其中,亲本密度30、60尾/m^(2)时,亲本存活率、产茧率最高(P<0.05)。结论:土壤与稻草(体积1∶1)混合基质是宽体金线蛭最适合的繁殖基质,稻草是其卵茧最适合的孵化基质。从经济效益角度考虑,宽体金线蛭亲本放养密度应以60尾/m^(2)较为适宜其人工繁殖。     

宽体金线蛭苗对萝卜螺和方形环棱螺仔螺摄食及生长特征研究

目的:弄清宽体金线蛭(Whitmania pigra)苗期最适饵料。方法:以宽体金线蛭苗(体质量0.1140±0.0424 g)作为研究对象,实验时间为20 d,分别投喂耳萝卜螺(Radix auricularia)(体质量0.1981±0.1113 g)和方形环棱螺(Bellamya quadrata)仔螺(体质量0.0356±0.0181 g),记录蛭苗对两种饵料的摄食数量,体重变化,水质变化等特征。结果:宽体金线蛭苗会积极采食萝卜螺和方形环棱螺仔螺,方形环棱螺仔螺组几乎无残饵,但萝卜螺组残饵较多;萝卜螺组体质量是方形环棱螺仔螺组的1.7倍;萝卜螺组饲养6 d内氨氮、亚硝酸盐、硫化物指标在第6天分别达到7.81±2.33 mg/L、2.11±0.81 mg/L、0.13±0.03 mg/L,显著高于方形环棱螺仔螺组。结论:萝卜螺和方形环棱螺仔螺两种饵料均是宽体金线蛭苗适口饵料,萝卜螺作为饵料生长速度更快,但残饵较多,水质容易败坏。     

荆芥品种选育产量性状选择方法研究

目的为荆芥品种选育中产量性状选择提供依据。方法采用自交纯化的荆芥品系进行单株性状相关、多元回归和通径分析。结果荆芥性状在品系间达显著或极显著差异水平;单株穗重和单株草重的主要影响因素包括顶穗粗、顶穗长和单株穗数等;通径分析表明顶穗长、顶穗轮数和顶穗粗对单株穗重和单株草重有较大的直接效应;有无复穗品系的顶穗性状达极显著差异水平,但产量性状差异不显著。结论通过选择顶穗性状可以有效简化荆芥育种程序,加快育种进程;选育出的有无复穗性状可作为新品系的鉴定根据,但不能作为产量性状的间接选择依据。     

轮作周期及新型肥料对蒙古黄芪主要农艺性状及生产效应研究

目的:通过试验获得轮作周期及新型肥料对蒙古黄芪主要农艺性状[1]及生产效应[2]之影响。方法:采用单因素随机区组一年多点法设计,处理内容6个,重复次数3次,小区面积3 m×7 m。结果:新型肥料在不同轮作制条件下黄芪鲜根平均产量分别为6765 kg·hm-2和4431 kg·hm-2,在3a轮作制土壤条件下施用新型肥料较重茬土壤条件下施用新型肥料可增产52.7%。在3a轮作制土壤条件下建议选择25%凹凸棒矿化复合肥3000 kg·hm-2,在重茬土壤栽培条件下选择25%凹凸棒矿化复混肥3000 kg·hm-2为宜。施30%凹凸棒矿化复合肥3000 kg·hm-2的处理其经济纯收益最高,收益率为9.99元/元,且黄芪甲苷含量最高0.118%,较对照常规化肥0.076%提高了55.3%。结论:蒙古黄芪高产、优质、高效及抗病性好的技术方案是,在3a轮作制土壤条件下选择凹凸棒矿化复合肥25%,在重茬土壤栽培条件下选择凹凸棒矿化复混肥25%为宜。     

日光温室栽参农艺性状的遗传变异及选育研究

目的为新品系、新栽培模式人参的选优选育提供理论依据。方法对首次采用日光温室栽培模式的6个种质人参的8个主要农艺性状进行数量遗传学相关研究,为吉林地区日光温室栽培人参的群体选择、单株选择提供理论依据。结果在该地区进行育种群体选择时,地上部分应在保证总叶面积较大的前提下,提高茎粗植株的选择,地下部分则应在选择主根较长植株的同时,提高主根粗植株的选择。结论在各品系优质单株的选择中,野参Ⅰ、Ⅱ呈现出较高的育种值和遗传增益,是两个较有前途的品系。     

晚播对怀牛膝群体的调节效应研究

目的:分析晚播对怀牛膝群体的调节效应,考察不同密度对牛膝农艺性状、生物量和根解剖结构的影响。方法:采用完全随机区组实验设计,以地方品种风筝棵为材料,设置5种密度处理。结果:适当密植有利于牛膝株高的增加,稀植利于牛膝根系生物量所占的比重。随着密度的增加,单株根、茎和叶的生物量均逐渐降低,单位面积根、茎、叶生物量有增加的趋势。密度为1 080 000株·hm~(-2)的处理单位面积牛膝根生物量最大,为125.67 g·m~(-2)。主根长度和直径随密度的增加而降低,侧根数随着密度的增加逐渐减少,主根质量比则随密度的增加逐渐增加。5种处理的牛膝主根次生木质部和次生韧皮部差异不明显,密度小的牛膝主根三生维管束圈数较多。结论:在大田生产上晚播时应适当提高种植密度以利于主根产量的增加。