丙型肝炎病毒的垂直传播研究

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)的垂直传播机制。方法 选择6对抗-HCV与HCVRNA均阳性的母亲与胎儿，2对父亲抗-HCV与HCVRNA阳性、母亲阴性的胎儿为研究对象，检测父、母亲与子代HCV的感染标志，同时比较两代问所携HCV的基因型别与HCVC／E1区的序列同源性。结果 6对母亲与胎儿HCVRNA阳性，基因型均一致，其中5对基因型别属Ⅱ型，1对属Ⅲ型。母亲与子代间所携HCVC／E1区的序列同源性极高，与其他母亲间、胎儿间的HCV同源性显著差异。2对父亲HCVRNA阳性其胎儿未检测到HCVRNA。结论 母亲与子代间存在出生前期的HCV的垂直传播。     

丙型肝炎病毒母婴传播的研究

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)母婴传播机率及感染方式.方法:用ELISA和RT-PCR法检测母婴血清及母亲乳汁、羊水、唾液的抗-HCV IgG及HCV-RNA,循环测序法测定母婴HCV-cDNA序列.结果:对1 521例孕妇筛查,其中15例抗-HCV IgG阳性(12例HCV-RNA阳性).所生15例婴儿,随访结果仅1例抗-HCV IgG持续阳性,出生时2例血清HCV-RNA阳性者中的1例抗-HCV IgG及HCV-RNA持续阳性.HCV母婴传播率为16.7%(2/12).其中一对母婴间HCV-cDNA序列同源性为100%.羊水、乳汁、唾液抗-HCV及HCV-RNA检出率分别为100%和25.0%,53.5%和16.7%,100%和0.0%.结论:HCV母婴传播可能发生于宫内或分娩时,羊水可能是引起HCV母婴传播的重要因素,乳汁、唾液引起传播可能性较小.     

RT—PCR检测HCV—RNA及基因分型的研究

目的研究HCV基因分型的临床意义。方法应用RT－PCR方法检测HCV－RNA。结果150例献血员中抗-HCV6例阳性占40％，应用RT－PCR方法检测HCV－RNA10例阳性占6．6％，对其进行基因分型，其中HCV－Ⅱ型占89％，HCV-Ⅲ型占11％。结论说明我国人群HCV感染以Ⅱ型为主。12例抗-HCV阳性母亲及新生儿的HCV基因分型同属Ⅱ型，证明HCV母婴垂直传播存在。基因分型诊断为选择药物治疗提供科学依据。     

丙型肝炎病毒HCV E1区基因的真核表达载体构建及序列分析

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性.方法:经常规RT-PCR法从HCV RNA阳性病人的血清中扩增出HCV E1区的基因片段,经EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体P cDNA3中,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析.结果:RT-PCR扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3连接,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切后产生了预期大小的144bp的片段 .测序后其核苷酸序列与已经报道的HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为72.8%、93.25% 、61.96%和56.44%;其推定的氨基酸序列的同源性分别为77.3%、95.7%、54.6%和51.35%;与已经报道的中国株的同源性为95.06%和93.25%;属HCV Ⅱ型; 经计算机辅助分析表明该片段内含有4个可能的糖基化位点,1个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有2个和1个抗原决定簇, 而每一个抗原决定簇内均含有1个糖基化位点,该片段内还含有2个T细胞识别位点.结论:本实验克隆的HCV E1基因属Ⅱ型,为我国流行的基因型,其基因的一级结构具备进行有关HCV核酸免疫的研究条件,其真核表达载体的构建,为进一步研究HCV E1基因的功能及HCV基因免疫的研究创造了条件.     

丙型肝炎夫妻间水平感染及母乳喂养传播的可能性

目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)夫妻间水平感染及母子间母乳喂养传播的可能性。方法 筛查健康孕妇的HCV抗体，检测抗体阳性孕妇的血液HCV—RNA，追踪调查HCV—RNA阳性孕妇及其配偶的血液HCV—RNA是否阳性及其肝功能情况。结果 1941例孕妇中，HCV抗体阳性率为3．7％；在HCV抗体阳性孕妇中，HCV—RNA阳性率为3．5％。HCV夫妻间水平感染率为7．1％。27例接受1～6个月HCV—RNA阳性母亲母乳喂养的新生儿中，没有出现HCV携带者的病例。结论 HCV可以发生夫妻间水平感染，夫妻间水平感染并不是HCV感染的重要途径，母乳喂养与HCV垂直传播无相关。     

丙型肝炎病毒母婴垂直传播的研究

目的了解丙型肝炎病毒(HCV)母婴垂直传播情况.方法采用酶联免疫法(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)检测1047例肝病孕产妇血清丙型肝炎病毒抗体(抗～HCV)和丙型肝炎病毒基因(HCV～RNA),对HCV感染产妇血清进行HCV分型及半定量分析.再对HCV感染产妇的丈夫静脉血及新生儿脐血、出生后24小时内、1、6、12个月股静脉血进行抗-HCV、HCV-RNA和HCV分型的检测.结果1047例肝病孕产妇中有12例(1.15%)HCV感染,其丈夫血清抗-HCV、HCVRNA均为阴性,而12名新生儿中有3例脐血及出生后24小时内外周血均抗-HCV阳性,其中2例HCV-RNA同时阳性,仅1例婴儿在出生后1、6、12个月时检测抗-HCV与HCV-RNA均阳性,且与其母所感染的HCV基因型相同,其余2例婴儿出生后1个月均阴转.本组HCV母婴传播率为8.3%.结论支持我国存在HCV母婴垂直传播.     

不同基因型的丙型肝炎病毒E2蛋白生物信息学分析

目的对不同基因型的丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白进行生物信息学比较分析。方法从GeneBank中获取不同基因型HCV的E2蛋白核苷酸与氨基酸序列,运用DNA Star,Clustal X,BioEdit等国际通用软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性,应用AntheProt5.0软件分析HCV E2蛋白二级结构。结果不同基因型E2蛋白氨基酸数在HCV蛋白中所占比例为10.93%~11.65%。不同基因型间E2蛋白基因核苷酸同源性为61.1%~74.8%,氨基酸同源性为64.0%~82.2%;不同基因型E2蛋白氨基酸序列比对显示3个高变异区域,分别为aa1~aa28(突变率为71.4%)、aa74~aa101(突变率为71.4%)和aa189~aa205(突变率为88.2%);不同基因型E2蛋白均富含潜在α螺旋(11%~21%)、β折叠(29%~43%)和卷曲结构(43%~51%)。结论不同基因型的HCV E2蛋白存在较大异质性。 更多还原     

不同基因型丙型肝炎病毒E1、E2蛋白生物信息学分析

目的对不同基因型的丙型肝炎病毒(HCV)的E1、E2蛋白进行生物信息学比较分析,以找出重要的生物信息学数据。方法从Gene Bank中获取不同基因型HCV的E1、E2蛋白核苷酸与氨基酸序列,运用DNA Star,ClustalX,Bio Edit等国际通用的软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性。在线软件TMHMM v2.0分析E1、E2蛋白跨膜区。AntheProt5.0软件分析二级结构。结果 E1氨基酸起始于aa 193—aa196和终止于aa 382—aa 383,E2蛋白氨基酸起始于aa 384和终止于aa 744—aa 754。不同基因型间E1、E2蛋白基因核苷酸同源性为59.7%~77.0%,氨基酸同源性为60.6%~82.8%。E1、E2蛋白存在3个跨膜区:E1存在2个跨膜区,位于aa 273—aa 293和aa 363—aa 383;E2蛋白存在1个跨膜区,位于aa 723—aa 744。二级结构分析发现不同型HCV E1、E2蛋白富含α螺旋(21%~30%),β折叠(26%~36%)和卷曲结构(43%~48%)。结论HCV E1、E2核苷酸和氨基酸序列表现为较大的异质性,其蛋白跨膜区富含α螺旋,胞外区以β折叠为主。     

不同人群TTV感染的检测及部分基因序列分析

目的探讨湛江地区不同人群中TTV的感染状况及部分TTV的基因序列. 方法应用PCR检测512份正常献血员血清标本、60份HBsAg阳性血清标本和48份抗-HCV阳性血清标本的TTV感染状况,并对部分扩增出的阳性片段进行克隆测序,与国内外报道的序列进行同源性比较. 结果正常献血员、HBsAg阳性、抗-HCV阳性标本的TTV DNA阳性率分别为10.94%、13.33%和16.67%,不同人群间结果无显著性差异（P＞0.05）;随机选出的5例TTV DNA阳性片段,其序列显示与日本株（AB008394）和中国株（TTV CH1）相应位置核苷酸序列的同源性大于97%,可能属同一基因型. 结论湛江地区不同人群TTV DNA与HBsAg阳性、抗-HCV阳性无明显相关.     

丙型肝炎病毒NS5B区基因的扩增、克隆及序列分析

目的 对丙型肝炎病毒(HCV)NSSB区基因克隆并测序，研究其变异状况。方法 从HCV RNA阳性血清中抽提病毒RNA，利用巢式RT-PCR对NS5B区基因进行扩增，将扩增获得的靶cDNA克隆至P^KPL-3a质粒载体中，并以内引物为测序引物进行序列测定分析。结果 构建了已克隆HCVNS5B区基因的重组质粒KHC5—1；序列分析表明，与HCV-BDS株同源性最高，属于主要流行于我国的HCV 1b基因亚型。结论 证实了在NS5B区，与RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性密切相关的基元结构Gly-Asp-Asp及其相邻序列的同源性非常高。     

Hepatitis C virus RNA (HCV-RNA) in blood donors and family members seropositive for anti-HCV antibodies

BACKGROUND: Non-A, non-B virus is responsible for 75-90% of all cases of blood transfusion-related hepatitis. The aim of this work was to determine hepatitis C virus RNA (HCV-RNA) in a group of blood donors and their household contacts. Serotype and genotype of the isolates were also studied. METHODS: HCV antibodies were investigated in 44,588 blood donors with a commercial immunoassay. Forty-four seropositive donors and 72 household members were further studied. Quantitative analysis of viral RNA was performed with Amplicor HCV 2.0 test, while genotype was determined by INNO-LiPA test and serotype with Murex HCV test. RESULTS: Among the 44,588 donors studied, 333 (0.74%) were positive for anti-HCV. Viral RNA was found in 35 (80%) of the 44 seropositive cases studied. Among the 72 household members, HCV antibodies were detected in six (8.3%) and HCV-RNA in four of these individuals. Serotype 1 and genotype 1 were the most frequent types detected (48 and 64%, respectively). The genotype in the blood donor matched that of his seropositive family member in four of six cases. CONCLUSIONS: Our results suggest that intrafamilial transmission of HCV may occur and we stress the need to study household members of seropositive blood donors, as they have a high risk of infection. In this community, genotype 1 is the most prevalent type in blood donors and family members.     

丙型肝炎病毒母婴传播研究

目的：探讨HCV母婴传播的可能性及其在流行病学中的意义。方法：应用ELISA方法对2136名产前检查的孕妇进行了抗－HCV检测,抗－HCV阳性者进一步应用PCR检测其HCV－RNA并收集其婴儿脐血进行抗－HCV和HCV－RNA检测。结果：孕妇的抗－HCV阳性率为1.59%(34/2136),抗－HCV阳性母亲的HCV－RNA阳性率为47.06%(16/34),母亲HCV－RNA阳性者发生垂直传播率为53.3%。结论 ：应用抗－HCV评价母婴传播并不合和达,只有通过检测HCV－RNA方能证实感染的存在。HCV确实存在母婴传播,但在人群HCV流行中并非主要传播途径。母新肝功能异常是影响HCV母婴传播的一个重要因素。     

母婴间TTV、HBV和HCV的重叠感染

目的 :探讨母婴间 TTV、HBV和 HCV重叠感染的分布及感染率。方法 :对 1 40例产妇及新生儿血清应用聚合酶链反应 ( PCR)、反转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)检测 TTV、HBV和 HCV感染的阳性率。结果 :HBV- DNA及 HCV- RNA双重阳性产妇的新生儿双重阳性率为 1 0 0 % ,HBe Ag阳性产妇的新生儿 HBe Ag阳性率为 82 % ,抗 - HCV阳性产妇的新生儿阳性率为 75 % ,HBe Ag阳性并发 TTV阳性产妇的新生儿阳性率为 73% ,HCV并发 TTV阳性产妇的新生儿阳性率为 66.6%。结论 :母婴间存在 TTV并发 HCV、HCV双重感染     

Study of hepatitis C virus genotype in Guizhou area of southwestern China

OBJECTIVE: To determine the concordance in various hepatitis C (HCV) genotyping methods and to investigate the distribution of HCV genotypes in Guizhou area of Southwest China. METHODS: Serum samples from 206 patients (100 with chronic hepatitis and 106 with hemopathy) were detected for antibody of HCV by second generation enzyme-labelled immunosorbent assay (ELISA). Thirty-five anti-HCV positive samples were detected for HCV RNA by RT-polymerase chain reaction (PCR) and 30 HCV RNA positive samples were determined for their genotypes by three various genotyping methods [PCR with type-specific primers at the core region (primer-set), slot-blot hybridization with type-specific probes at NS5B region (blotting) and the restric fragment length polymorphism analysis of PCR products of 5' NC region (RFLP)]. Ten samples with the known genotype were analysed by the direct sequencing. RESULTS: Of 30 samples with positive HCV RNA, the types of 22 could be classified by three methods, and the genotypes determined by various methods had complete concordance. The types of 6 samples could be classified by two methods and 5 had agreement subtypes. The types of two samples could be classified only by RFLP. Overall, 27 (90.0%) had subtype 1b infection and 3 (10.0%) had subtype 2a infection. The nucleotide sequence of 8 samples with subtype 1b and one with subtype 2a were analysed by the direct sequencing. The subtypes determined by sequence analysis were in complete concordance with those decided by various genotyping methods. CONCLUSIONS: Subtype 1b is the predominent HCV genotype in Guizhou area, while subtype 2a is less common. There was a good concordance with the genotyping results obtained by various HCV genotyping methods.     

天津地区丙型肝炎病毒基因型与临床的相关性研究

目的：研究丙型肝炎病毒（HCV）基因型,了解天津地区丙型肝炎的分布情况。方法：收集252例丙型肝炎患者的血清标本,采用基因测序法进行HCV基因型的检测,并对基因型与其他临床指标进行分析。结果：252例丙型肝炎患者分别感染1b、1a、1c、2a、2i、3a、3b、4a和6a共9种基因亚型,其中1b型占59．9％,其次是3a型,占12．7％。对1型、2型、3型和4型4种基因型进行肝功能、HCVRNA病毒载量比较,经单因素方差分析有明显统计学差异（P〈0．05）;对HCV感染的不同肝病程度患者的基因型分布进行分析,无显著性差异（P〉0．05）。结论：天津地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,其次为3a型。HCV基因型与HCVRNA病毒载量、肝脏损伤指标有明显统计学差异。     

青岛地区丙型肝炎基因分型的研究

目的 探讨青岛地区丙型肝炎基因型的分布状况,发现丙型肝炎病毒（HCV）流行优势株,分析丙型肝炎基因型与病人性别、感染途径、炎症活动度、病毒载量等的相关性。方法 应用RT-PCR方法,对46例青岛地区丙型肝炎病人的血清RNA提取物NS5B区和（或）CORE-E1区进行扩增,扩增片段进行基因测序,根据测序结果在PUBMED网站中获得基因分型结果,分析不同丙型肝炎基因型与病人性别、感染途径、肝病程度、HCV RNA含量及谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平的关系。结果 46例血清标本,HCV RNA均为阳性,44例可以分型,分型率为95.65%,其中基因1b型28例（63.64％）,2a型14例（31.81％）,3b型2例（4.55％）。丙型肝炎基因型的分布与病人性别、感染途径、肝病程度、HCV RNA含量及ALT、AST水平均无关（P〉0.05）。结论 青岛地区HCV流行株为基因 1b型和2a型,基因1b型为优势株,同时发现3b基因型。基因型与丙型肝炎的疾病进展程度及炎症活动度无关。     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV) RNA定量检测结果的影响.方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息.分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCVRNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异.结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2 =0.973).Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P＞0.05).基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测.