慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的免疫组化检测及其意义

应用PAP和ABC法分别对54例慢性乙肝肝组织中HBaAg和HBcAg进行检测,分析了两种抗原在肝组织中的存在状态与肝脏病理变化及血清HBV复制指标间的关系。发现肝组织中HBV抗原检出率与肝炎病变程度呈负相关(P<0.05)。三种病理类型肝组织中,HBsAg均以胞浆型为主;膜型HBsAg主要见于CAH.ASH和CPH时,HBcAg以核型表达为主,面CAH时以浆膜型为主。膜型HBsAg和浆膜型HBcAg表达区易见到肝细胞坏死及炎性细胞浸润。还发现肝组织中HBcAg的检出与血清HBcAg和HBV-DNA密切相关(P<0.005)。上述结果提示:①肝细胞损伤可能并非HBV直接作用,而是机体针对HBV的免疫反应所致;膜型HBsAg和浆膜型HBcAg可能是肝细胞免疫损伤的靶抗原。②肝组织内HBcAg的存在是HBV复制标志。     

幼儿HBsAg携带者外周血单个核细胞中HBV-DNA及HB抗原的检测

本文对9例HBsAg阳性母亲所生,并于0、1、6月龄时接种乙肝疫苗免疫失败而形成HBV持续感染的小儿,进行外周血单个核细胞(PBMC)中有无HBV感染的研究.应用未标记酶抗酶免疫复合物法(PAP)检测HBsAg和HBcAg,原位核酸杂交检测HBV-DNA;10例抗HBs阳性幼儿作为对照.结果:9例血清HBsAg阳性幼儿的PBMC中有4例HBV-DNA阳性.其中3例HBsAg同时阳性.另有1例HBsAg阳性,但未测到HBV-DNA.HBc Ag均阴性.HBV-DNA分布于胞浆中,阳性细胞数约占细胞总数的1～2%.对照组PBMC中HBV-DNA、HBsAg和HBcAg均阴性.上述结果表明,HBV已感染PBMC,并在其内表达S抗原.     

血清和肝组织内HBV复制状态与肝脏病变活动性关系的研究

经病理确诊的47例乙型肝炎患者血清中HBV DNA、HBeAg的检出率在各型肝炎之间无显著性差异(P>0.05)。肝组织HBsAg检出率为76.6％,其形态呈包涵体型、弥漫型和膜型为主分布者分别是36.1％、55.6％和8.3％。HBsAg呈弥漫型分布者各类型肝炎之间无显著性差异(P>0.05),提示肝细胞内HBsAg的表达仅反映HBV复制,而与肝组织病变无关。肝组织HBcAg检出率为27.7％,其形态呈核型和浆型分布者分别占38.5％和61.5％,浆型主要见于炎症明显的肝细胞内,而核型刚见于病变较轻的肝细胞中,反映了HBcAg的表达与肝组织活动性病变有关。     

慢性肝炎肝组织HBsAg及HBcAg表达与肝血管病变的关系

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)肝组织HBsAg，HBcAg表达类型及分布部位与肝血管和肝窦病变的关系。方法 选160例HBsAg，HBcAg免疫组化阳性的肝组织及31例CHB首、末2次随访的肝活检样品进行观察。结果 肝组织HBsAg及HBcAg表达有以下特点：①肝细胞HBsAg阳性主要分布于近血管区域，而强阳性者多分布于小血管、血管束及扩张的肝窦周围；②肝窦壁、肝血管内皮细胞、胆管上皮细胞HBsAg阳性与纤维化及肝硬变有关；③血清HBeAg，HBV-DNA与肝组织HBcAg一致者占74％，血清HBeAg及肝组织HBcAg转阴者末次肝活检肝血管病变改善。结论 循环中HBV以配体形式与肝血管及肝窦内皮细胞膜受体结合并在其中复制，引起炎症反应，进而破坏其结构，致一系列肝组织的病变。     

317例慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝组织内HBsAg和HBcAg表达强度与临床的关系

目的 分析血清HBeAg阴性和阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织内的HBsAg、HBcAg表达强度与临床的关系.方法 31 7例CHB患者肝穿刺标本分成血清HBeAg阴性组和HBeAg阳性组两组,分析两组肝组织内HBsAg、HBcAg的表达强度及其与年龄、性别、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清HBV DNA载量、肝脏炎症活动度分级和纤维化分期的关系.结果 HBeAg阴性组患者的年龄、ALT、肝脏炎症活动度和纤维化程度大于HBeAg阳性组患者;但血清HBV DNA载量低于HBeAg阳性组患者(均P＜0.05).肝组织内HBsAg表达强度与年龄、ALT、肝脏炎症程度和纤维化程度均无相关性(P＞0.05).血清HBeAg转阴后,肝组织内HBcAg表达强度降低(t=12 349.0,P=0.00);HBcAg与血清HBV DNA载量出现正相关关系(r=0.251,P=0.007);与肝脏炎症活动度和纤维化负向相关性消失(P＞0.05).结论 血清HBeAg转阴后HBV其他抗原成分仍能与肝组织维持足够活跃的免疫状态.血清HBeAg转阴后,肝组织内HBcAg表达强度降低,与血清HBV DNA载量出现正相关关系,与肝脏炎症活动度和纤维化负向相关性关系弱化.     

胎儿乙型肝炎病毒感染的研究——胎盘组织HBVDNA、HBcAg的检测及其意义

用ELISA、RIA及DNA斑点杂交法检测30例HBsAg阳性母亲及7例HBsAg阴性但血清其他HBV感染指标阳性母亲的新生儿脐血Anti-HBclgM,HBV-DNA等指标,分别发现4例(4/30)及2例(2/7)胎儿HBV感染病例。1年后的随访结果表明,部分胎儿HBV感染病例对出生后的疫苗注射有反应,而部分则无。用DNA原位杂交及PAP法检测HBsAg阳性产妇胎盘组织HBV-DNA、HBcAg,阳性率分册为20/29,19/30。表明胎盘组织受HBV感染,可能导致胎儿HBV感染,但非胎儿感染HBV的唯一途径,其他途径如经生殖细胞传播也可能存在。HBsAg阴性但其他血清HBV感染指标阳性者及血清HBV感染指标全阴产妇的胎盘组织中也可检出HBV-DNA、HBcAg,表明组织HBV感染指标较敏感,以及HBV相关变型病毒感染等因素存在的可能性。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

肝细胞浆内HBV DNA与HBV感染状态关系的探讨

在原位杂交研究的基础上,本文对慢性乙肝患者胞浆型HBV DNA及肝内其它乙肝指标进行综合分析。发现胞浆型HBV DNA可分3种类型:①肝内同时有核衣壳蛋白(HBcAg)与包膜蛋白(HBsAg)表达,此与HBV复制的产物表达特征一致;②肝内仅有HBsAg表达,此与HBVDNA和宿主基因组整合后的表达特点相似;③肝内HBsAg、HBcAg表达均缺如,可能代表一种HBV非复制状态。由此表明在HBV非复制期,出现胞浆HBV DNA杂交信号可能系DNA RNA杂交体所致。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系。方法检测76例慢性乙型肝患者血清及肝组织外周血HBsAg，如BeAg和HBV DNA水平，常规病理和肝组织内的HBsAg，HBcAg。结果外周血中HBeAg阳性的患者中有91．49％HBV DNA阳性，而在如BeAg阴性的患者中，有58．62％的患者HBV DNA阳性，只有慢性乙型肝炎轻度患者的血清HBV DNA水平与其他各组差异有显著性（P〈0．05），而其余各组之间HBV DNA的复制水平均无明显差异，中度以上的血清HBV DNA多呈高水平分布。所有样本肝组织的HBsAg均为阳性，从肝组织不同HBsAg表达强度下，HBcAg表达的趋势来看，HBcAg有随着HBV DNA量的增加而表达增强的趋势。结论患者血清HBV DNA水平的变化可以反映HBV的复制水平而不能反应肝脏损伤程度。同时肝组织内的HBsAg检测更适合于低水平HBV感染的患者。     

慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达与血清HBV-DNA含量、肝组织中HBV-DNA含量、肝组织病理及临床之间的关系。方法选择慢性乙肝患者83例,检测血清HBV-DNA的含量,并行肝穿刺取肝组织,用免疫组化法检测乙肝患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达并检测肝组织中HBV-DNA的含量,同时行常规肝组织病理染色。结果在慢性乙型肝炎患者肝组织内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为81.9%和53%。HBsAg 98.5%是浆膜型;HBcAg浆膜型占62.8%、胞核型占37.2%,浆膜型的肝组织炎症、纤维化较胞核型明显。HBsAg表达强度与血清HBV-DNA定量、肝组织HBV-DNA定量及肝组织炎症和纤维化之间均无相关性。HBcAg表达强度随着血清HBV-DNA定量的增加而增加,呈正向关联（r=0.291,P=0.008）,与肝组织HBV-DNA定量呈现明显的正向关联（r=0.664,P〈0.001）,与肝组织炎症、纤维化分级也呈正相关（r=0.611,0.841,P〈0.001）。结论慢性乙肝患者肝组织免疫损伤发生的免疫应答的主要抗原是HBcAg。将肝组织中HBcAg的表达结合HBV-DNA载量作为抗病毒治疗指标更可靠。     

乙型肝炎病毒子宫内传播的研究

应用Southern blot杂交试验对39例流产的死胎,检测其肝细胞中HBV-DNA的存在状态。并用免疫组织化学酶标记ABC方法检测肝细胞中的HBcAg的存在状态。结果:23例HBeAg阳性孕妇胎儿中有3例,8例HBsAg单项阳性孕妇胎儿中有1例,在胎肝细胞基因组中检出整合型HBV-DNA顺序。经片断探针杂交:4例中有3例出现HBV-C基因及Pre-s基因整合型杂交带,其中2例胎肝细胞核内有HBcAg存在。证明HBV能在子宫中从HBsAg阳性携带者孕妇传给其胎儿。     

乙型肝炎病毒基因型B/C型患者血清和肝细胞内HBsAg表达水平的差异

目的 了解HBV基因型（B和C）对血清及肝内HBsAg表达的影响。方法 选择在广州南方医院感染内科住院的76例慢性乙型肝炎患者,具有同期对应的血清和肝组织切片。用PCR-RFLP方法行HBV基因分型;Abbott Architect法定量检测血清HBsAg;采用单克隆抗体或多克隆抗体对肝脏组织内的HBsAg和HBcAg分别进行免疫组织化学染色,计数阳性细胞数。并对6例基因型B和8例基因型C患者血清HBV HBsAg部分区段DNA进行序列测定。结果 共检测到4种基因型：B（47例）、C（21例）、D（3例）和B／C混合（5例）。血清HBsAg水平在基因型B和C之间无区别,但HBV基因C型患者肝内HBsAg的表达高于B型（P〈0．01）。在HBV基因B型患者中,HBsAg阳性肝细胞分布多为单个或散在几个（22／47）,C型中则多为广泛分布（8／21）（P〈0．01）。在基因B型的患者中,血清HBsAg和血清HBVDNA（r=0．674,P=0．000）,核心抗原核内（r=0．534,P0．000）以及细胞质表达水平（r=0．405,P=0．004）呈正相关关系;在基因c型的患者中,血清HBsAg仅与血清HBV DNA正相关（r=0．503,P=0．017）。肝内HBsAg水平仅在基因B型患者中与肝细胞质内HBcAg的表达水平呈正相关关系（r=0．318,P=0．029）,与血清HBsAg、HBV DNA、核心抗原核内表达水平无相关。序列分析显示基因型B和C表面抗原前20个氨基酸序列存在明显差异。结论 基因C型患者肝组织中HBsAg表达水平高于B型;而基因B型的血清HBsAg水平和病毒复制水平相关性明显。     

丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的：探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ与ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达及关系。方法：应用免疫组化双重染色和原位杂交,检测７９例丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例乙型肝炎作对照。结果：丁型肝炎ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ检出率（８１％、７１％）较乙型肝炎（９４％、９２％）低（Ｐ〈０．０５或０．０１）。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,ＨＢｓＡｇ以肝细胞浆表达     

乙型肝炎病毒宫内感染的发生率和机理

本文对乙型肝炎病毒宫内感染的发生率及机理进行了研究。24例HBsAg阳性母亲的新生儿中,5例脐血AntiHBc-IgM阳性,1例引产儿肝组织HBV-DNA阳性(斑点杂交法)。宫内感染率为6/24(25.0％)6例母亲全无先兆流产及/或先兆早产病史。斑点杂交法检测24例HBsAg阳性母亲胎盘组织HBV-DNA,阳性23例。实验结果表明宫内感染发生率较高。胎盘组织可受HBV感染。母血漏入并非宫内感染的唯一途径。     

乙型肝炎病毒宫内传播的分子生物学证据

采用病毒DNA分子杂交,Southern吸印及PAP等技术,从引产死婴心血及肝组织中发现HBV-DNA及HBsAg,从而为乙型肝炎病毒宫内传播提供了分子生物学证据。本研究还表明HBV宫内传播频率较低,为HBV母婴传播的产后立即特异性免疫预防提供了实践依据。     

Analysis of intrahepatic HBVDNA in serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis

Summary To explore HBV infection status in a group of serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis, in situ hybridization to hepatccellular HBVDNA was carried out in combination with detection of HBsAg and HBcAg in the liver tissues. It was found that prevalence of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg was 43 %, 39 % and 17 % respectively, and 15 out of 23 cases studied were sure to bear one or more positive marker (s) of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg. These findings suggest that more than half of the patients with chronic hepatitis were still undergoing HBV infection, despite serologic HBV markers or HBsAg negative. Furthermore, we found that hepatocytes containing HBV-DNA or surface or core antigen were often close to hepatic necrosis foci, indicating that HBV replication and its antigen(s) expression in hepatocytes could account for chronic, active and necrotic inflammation occurring in the liver of the patients mentioned above.     

血清HBV—DNA的检测在乙肝疫苗阻断HBV母婴传播中的意义

对42例HBsAg 阳性产妇的婴儿用国产乙肝血源疫苗按0、1、6月注射。每次20μg,在6月龄时的结果:20例HBeAg和HBV—DNA阳性母亲所生婴儿接受免疫注射后,11例免疫失败(55％),9例HBeAg阳性、HBV—DNA阴性母亲所生婴儿仅1例免疫失败(11.2％),p<0.001。2例HBeAg阴性而HBV—DNA阳性母亲的婴儿免疫保护均告失败,11例HBsAg阳性,HBeAg及HBV—DNA均阴性母亲所生婴儿,免疫保护均成功。4例婴儿出生时矢状窦血HBV—DNA阳性,而HBsAg、HBeAg、抗—HBcIgM均阴性,提示HBV母婴传播,也可发生于分娩过程中。     

乙肝病毒标志阴性慢性病毒性肝炎患者HBV-DNA及肝组织中HBsAg、HBcAg检测的临床意义

目的:探讨HDVM阴性慢性肝炎患者血清HBV-DNA及组织中HBsAg、HBcAg检测的临床意义。方法:对24例原因不明的慢性肝炎患者应用酶联免疫,吸附试验(ELISA法)检测血清HBV-M(HBsAG、抗HBS、HBcAg、抗HBc、抗HBc),抗HAV-IGM,抗HCV-IgMI、gG,抗HDV-IgMI、GG,抗HEV-IGMI、GG,抗EBV-IGM,抗CMV-IgM,抗TTV-IgM:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对患者进行血清中乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)定量检测;应用免疫组化法,通过肝组织活检测定患者肝组织中HBsAg、HBcAg的表达情况。结果:24例HBVM阴性肝病患者中,6例可检测到HBV-DNA,其中5例肝组织中HBsAG、HBcAg同时阳性,1例HBsAg(+)、HBcAg(-);18例血清HBV-DNA阴性患者中用肝组织活检者3例,其中1例肝组织中HBsAg、HBcAg同时阳性。结论:HBVM阴性不能排除乙型肝炎病毒感染,应结合血清HBV-DNA测定及肝组织中HBcAg、HBcAg的检测,以防漏诊、误诊。