雌激素受体β1和β2在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中雌激素受体(ER)β1、ERβ2基因和蛋白的表达及其临床意义。方法应用Western印迹法检测乳腺癌组织、癌旁组织及正常组织中ERβ1和ERβ2蛋白的表达情况,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测ERβ1、ERβ2mRNA的表达情况。结果乳腺癌组织和癌旁组织中的ERβ1mRNA、ERβ2mRNA检出率与蛋白检出率相同。乳腺癌组织中的ERβ1蛋白检出率显著低于癌旁组织(P=0.029)和正常组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1蛋白表达量为47.06±8.94,显著低于癌旁组织中的55.33±9.59及正常组织中的54.47±9.65(P=0.009及0.019)。乳腺癌组织中的ERβ1mRNA检出率显著低于癌旁组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1mRNA表达量为0.026±0.014,显著低于癌旁组织中的0.041±0.020(P=0.015)。乳腺癌组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.635(P=0.008),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.714(P=0.004);癌旁组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.506(P=0.012),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.926(P=0.000),ERβ1mRNA、ERβ2mRNA与蛋白水平之间存在相关性。结论全长野生型ERβ1可能是避免乳腺癌发生的保护性因子,ERβ1有助对乳腺癌预后的预测。     

β-arrestin基因表达对大鼠实验性急性胰腺炎重症化进程的影响

目的探讨急性胰腺炎重症化进程与β-arrestin基因抑制Tol 样受体-白介素1受体(TLR-IL-1R)系统作用的相关性.方法建立SD大鼠实验性急性胰腺炎模型,分为假手术组(SO)、实验组(SAP);以real-time PCR检测脾脏组织中β-ar-restin mRNA的表达,Western blot和免疫组化检测肝脏组织TRAF6蛋白和胰腺组织中NF-κBp65蛋白表达.结果与SO组比较,SAP组β-arrestin mRNA表达受到显著抑制;TRAF6蛋白表达下降;NF-κBp65转录活性增强(P<0.05或0.01).结论TLR-IL-1R系统可能参与急性胰腺炎重症化的病理过程.     

转化生长因子β1与雌激素在骨质疏松大鼠中的表达

目的:建立并完善骨质疏松症 (OP)动物模型,观察SD大鼠OP模型血清学中雌激素(E2)和关节骨组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)的表达,并观察它们之间的关系.方法:20只4个月龄雌性SD大鼠,随机分为空白组、OP模型组(采用摘除双侧卵巢法),每组10只.2个月后处死各组大鼠,取右股骨近端利用双能X线骨扫描仪进行骨密度检测,取左股骨髁关节骨组织行光镜组织形态学观察,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清中E2的含量,免疫组化即用二步法观察各组大鼠左股骨髁关节骨组织中TGF-β1的分布,采用图像分析仪比较TGF-β1在骨微量环境中积分光密度值(IOD值),将结果进行统计学分析.结果: OP模型组SD大鼠膝关节软骨退变程度较对照组明显加重,骨小梁局部区域变细,排列较紊乱,出现较多的断裂点.股骨近端骨密度较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).OP模型组血清中E2的含量较对照组明显降低,骨组织中TGF-β1的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05～0.01).结论:TGF-β1和E2在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用.     

β-arrestin 1在原发性胆汁性肝硬化患者PBMCs中的表达

目的探讨β-arrestin 1 mRNA在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中以及在各细胞亚群（CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞）中的表达情况。方法利用基于TaqMan-MGB探针建立的实时荧光定量RT-PCR技术,分别检测50例PBC患者、50例健康体检者和50例乙肝后肝硬化患者PBMCs中的表达;再利用磁珠分离PBC患者、健康体检者的CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、B细胞和单核细胞,经实时荧光定量PCR技术分析β-arrestin 1 mRNA在各细胞亚群中的表达情况。结果β-arrestin 1 mRNA在PBC患者PBMCs、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞中的表达明显高于健康对照组和疾病对照组（P〈0.01）,在B细胞,PBC组与健康对照组没有明显差异（P〉0.05）;疾病对照组与健康对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论β-arrestin 1可能参与PBC发病机制,其中涉及CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和单核细胞。     

β-arrestin2抗基因RNA表达载体的构建及其基因沉默效应鉴定

目的吗啡耐受与神经元μ阿片受体持续脱敏感化有关,而μ阿片受体调控蛋白β-arrestin2在其中起着关键性作用,因此β-arrestin2有可能成为抑制吗啡耐受状态的有效靶点。文中构建携带β-arrestin2抗基因RNA的表达载体pGPU6/GFP/agRNAs,并评价其用于基因沉默研究的可行性。方法根据β-arrestin2基因转录起始位点序列,从-14处开始至＋13处结束,每隔一个碱基,依次合成9条21个碱基长度的抗基因RNA片段,并分别构建入质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo。利用脂质体Lipofectamine介导的基因转染技术,分别将各个表达载体转染NG108-15细胞,于转染后第5天分别取转染不同抗基因RNA片段的细胞提取总RNA,应用realtime PCR和Western blot检测细胞β-arrestin2的表达,评价其基因沉默效应。结果筛选出1个表达具有基因沉默效应的抗基因RNA表达载体pGPU6/GFP/Arrb9。Realtime PCR结果显示NG108-15细胞转染该片段后,β-arrestin2 mRNA和蛋白表达水平均下降（P〈0.05）,下降程度达95%。结论携带β-arrestin2抗基因RNA的表达载体可有效下调NG108-15细胞β-arrestin2的表达,实现基因沉默效应。     

去卵巢大鼠雌激素替代后背根神经节P2Y1受体表达增加

目的考察痛觉敏感性与体内雌孕激素水平的可能关系。方法将大鼠分为去卵巢组(8只)和去卵巢后雌激素替代组(8只),去卵巢组通过去卵巢手术降低大鼠体内卵巢激素水平,去卵巢后雌激素替代组在去卵巢手术后1周给予外源性雌激素替代。分别在两组大鼠足底注射P2Y1选择性激动剂2-MeSADP,通过行为学实验观察对大鼠足底机械痛阈的影响,并通过实时定量PCR研究2组大鼠背根神经节(DRG)中P2Y1受体mRNA表达的差别。结果与去卵巢组大鼠相比,雌激素替代组大鼠机械痛阈增高(P=0.014);足底注射P2Y1选择性激动剂2-MeSADP后,去卵巢组大鼠在注射药物前后痛阈无统计学差异,而雌激素替代组大鼠出现痛觉增敏。实时定量PCR结果表明雌激素替代组大鼠DRG P2Y1受体mRNA的表达高于去卵巢组大鼠(P<0.05)。结论雌激素可能通过促进DRG上P2Y1受体的表达从而影响外周机械痛阈。     

儿童急性淋巴细胞白血病β-arrestin1表达升高的临床意义

目的探讨β-arrestin1在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及临床意义。方法收集155例初发ALL患儿的骨髓样本(ALL组),分离单个核细胞,以51例非恶性血液疾病患者作为对照(Ctrl组),将ALL患者分成高危、中危和标危组,采用实时荧光定量RT-PCR法检测β-arrestin1 mRNA的表达,采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测β-arrestin1蛋白表达的变化。用Spearman统计分析β-arrestin1表达与ALL患者临床和生物学特点之间的相关性。结果 ALL组β-arrestin1 mRNA和蛋白表达均高于Ctrl组(P值均<0.01)。高危组和中危组β-arrestin1 mRNA表达高于标危组,且高危组β-arrestin1 mRNA表达高于中危组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示,β-arrestin1表达与外周血白细胞数(r=0.458,P=0.002)和危险分级(r=0.344,P=0.022)正相关。结论儿童ALL患者骨髓β-arrestin1表达水平与患者的危险分级密切相关,对ALL诊断、治疗策略和预后具有重要意义。     

β-arrestin2抗基因RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法将线性化的慢病毒载体pGC-FU与抗基因RNA在In-Fusion交换酶作用下构建目的质粒pGC-agRNA,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞NG108-15细胞的转染效率。结果抗基因RNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-FU,病毒滴度为2×109TU/mL。用该慢病毒感染NG108-15细胞,当感染复数(MOI)为100时,感染效率大于95%。结论成功构建了携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体,为研究β-arrestin 2在μ阿片受体调控机制中的作用提供了有效的研究工具,而且为抗基因RNA技术应用于体内外实验研究奠定了基础。     

雌激素样作用中药复方对卵巢切除大鼠雌激素受体和β-内啡肽的影响

目的探讨以补骨脂和小茴香为主的雌激素样作用中药复方(CHF)对卵巢切除大鼠雌激素受体(ERs)和β-内啡肽(β-EP)的影响.方法体质量260～280 g雌性Wistar大鼠,卵巢切除(OVX)后4周,每天分别灌胃给予5、10、20g/kg的CHF提取物,同时设卵巢切除对照、雌激素对照(OVX,0.1g/kg 17β-雌二醇)和假手术对照(SHAM).测定血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、下丘脑视前区(HPO)和血浆的β-EP浓度以及HPO的.ERs含量.结果5、10、20g/kg的CHF提取物均可显著升高卵巢切除大鼠的E2浓度并降低LH浓度,显著增加HPO的ERs含量(P＜0.05);而CHF提取物可降低HPO的β-EP含量,并呈剂量反应关系;但20g/kg的CHF提取物可显著升高血浆β-EP浓度(P＜0.05).结论CHF提取物与17β-雌二醇相似,可改善由卵巢切除造成的ERs异常和β-EP紊乱.     

β-arrestin 2 shRNA慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建β-arrestin 2的shRNA慢病毒载体,获得稳定低表达β-arrestin 2的人非小细胞肺癌A549细胞并验证敲低效果。方法 查询4对可信的β-arrestin 2敲低序列,将载体质粒pSicoR-GFP线性化,构建目的质粒,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对阳性结果进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外三种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,导入人非小细胞肺癌细胞A549中,用qRT-PCR检测转染效率。结果 成功构建β-arrestin 2的shRNA慢病毒载体质粒,测序比对结果一致。qRT-PCR检测发现一组β-arrestin 2的mRNA表达只有对照组的56%。结论 成功构建β-arrestin 2的shRNA慢病毒载体,并验证其在人非小细胞肺癌细胞A549中敲低效果显著。     

芬太尼对慢性吗啡耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体与β-arrestin 2表达的影响

目的 观察芬太尼对慢性吗啡耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体与β-arrestin2表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重(230±20) g,随机分为5组(n=8):NS组(对照组):皮下注射生理盐水1 ml/kg 2次,间隔30 min;M组(慢性吗啡耐受组):皮下注射吗啡10 mg/kg,30 min后皮下注射生理盐水1 ml/kg;MF1、MF2、MF3组:吗啡用药同M组,注射吗啡30 min后分别皮下注射芬太尼3、6、12 μg /kg.各实验组每日给药2次,连续9 d,给药后进行痛阈测定.断头处死大鼠,取中脑导水管周围灰质组织(PAG),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测定μ受体、β-arrestin2的mRNA表达,免疫印迹(Western- blot)方法 测定μ受体、β-arrestin2的蛋白表达.结果 注射吗啡后,M组大鼠痛阈值明显高于NS组(P<0.01),连续给药9天后,痛阈值降至给药前水平.与M组比较,MF2组与MF3组大鼠痛阈值下降趋缓,第7、9天,MF2组与MF3组痛阈值均高于M组(P<0.05或0.01),MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,M组μ受体mRNA及其蛋白表达显著下调(P<0.01);与M组比较,MF2组和MF3组μ受体mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05或0.01),MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).M组β-arrestin2mRNA及其蛋白表达明显低于NS组(P< 0.01);MF2组和MF3组β-arrestin2 mRNA及其蛋白表达高于M组(P<0.05或0.01),而MF1组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 芬太尼6、12 μg/kg通过上调慢性吗啡耐受大鼠PAG 部位μ受体与β-arrestin2表达,可增强吗啡镇痛作用,部分延缓慢性吗啡耐受产生.     

雌激素受体α、β亚型在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义

目的:探讨雌激素受体αβ亚型(Estorgen receptor α、Estrogen receptor β,ER α、ERβ)在多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndraome,PCOS)大鼠子宫内膜中的表达.方法:应用脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)联合胰岛素构建PCOS 大鼠模型(30只);采用放射免疫法测定大鼠血清性激素水平;免疫组化和RT-PCR技术检测ERα、ER β蛋白及mRNA在PCOS 大鼠和正常大鼠子宫内膜上的表达.结果:PCOS大鼠子宫内膜ERα蛋白的表达高于对照组(P<0.01);ERβ蛋白的表达两组无明显差异(P>0.05);RT-PCR检测显示ERα、ERβ mRNA在子宫内膜中的表达与免疫组化结果一致.结论:ERα在PCOS 大鼠子宫内膜中的表达增高.     

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠大脑皮层5-HT1AR-β-arrestin2-akt信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 60只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、SRP(400、200、100 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用7种不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化;免疫组化法测定大脑皮层区5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)的表达;Western blot法分析大脑皮层区5-HT1AR、β-arrestin2、akt蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠体重降低、自主活动次数减少,处于抑郁状态。免疫组化法及Western blot法结果显示,与正常组相比,模型组大脑皮层5-HT1AR表达降低,β-arrestin2、akt表达升高(P<0.05),而SRP组可以逆转这种现象(P<0.05,P<0.01)。结论中药SRP的抗抑郁作用可能与调节5-HT1AR/β-arrestin2/akt信号通路有关。     

二仙汤加味对去卵巢大鼠主动脉雌激素受体β表达的影响

观察二仙汤加味对去卵巢大鼠雌激素受体β表达的影响.方法:采用5月龄雌性大鼠建立去卵巢模型,将48只大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、去卵巢加二仙汤组、去卵巢加替勃龙组,每组12只.二仙汤组用二仙汤7.5g/kg-1生药剂量给药;替勃龙组用0.25mg/kg-1给药;其余两组给予3mL生理盐水灌胃,各组持续灌胃60天.采用免疫组化法分析雌激素受体β的表达.结果:ERβ表达均明显高于对照组(P＜0.01).结论:二仙汤加味具有调高去卵巢大鼠主动脉ERβ表达的作用,其作用对绝经女性冠心病的防治提供了依据.     

雌激素受体β在乳腺癌中的表达价值分析

目的探讨分析ERβ在乳腺癌中的调控作用。方法选取2010年1月-2012年1月杭州市余杭区妇幼保健院收治的70例乳腺癌患者作为实验对象,从其乳腺组织中获取标本,对样本ERβ表达和相关临床参数进行检测。结果 70例样本中ERβ阳性表达率为65.7%。ERβ的表达和患者肿瘤大小、浸润范围、月经情况、临床分期、p 53等表达无明显关系(P>0.05);与病理分型、Ki 67有相关性(P<0.05)。结论 ERβ和乳腺癌细胞增殖存在一定关系。     

雌激素替代治疗对卵巢切除大鼠血清中一氧化氮水平的影响

骨质疏松症 (osteoporosis,OP)是以骨量减少、骨组织显微结构退化为特征 ,骨的脆性增高而骨折危险性增加的一种代谢性骨病 ,多发生于绝经后妇女和老年男性 [1 ]。随着人口老龄化 ,OP的发病人数逐年上升 ,约有 1/ 3的 OP患者经受着骨折的痛苦 ,其发病机制尚未完全明了 ,预防和治疗尚有困难。近年来 ,骨重建局部因子对骨量的影响及在 OP发生发展中的作用越来越受到重视。目前 ,一氧化氮 (NO)作为一种新认识的细胞因子越来越被应用于多门学科的研究中 ,本文用去卵巢制作大鼠 OP模型 ,并用雌激素替代疗法治疗OP,初步探讨 NO在其中的变化…     

雌激素替代治疗对大鼠心壁雌激素受体表达的影响

目的 :观察雌、孕激素替代治疗时去卵巢大鼠心脏雌激素受体 ( ERα)的表达。方法 :通过免疫组化方法 ,分别测定去势和雌激素替代治疗 ( ERT)组 SD大鼠心脏雌激素受体水平 ,并对血清雌激素及血脂水平进行了检测。结果 :1去势大鼠 ER(免疫阳性物质明显减少 ( P<0 .0 5 ) ,雌激素替代治疗 ( ERT) 8周后 ,ERα表达明显改善 ;2去势组雌性大鼠血清雌二醇水平较假手术组明显下降 ( P<0 .0 1 ) ,胆固醇 ( TC)、甘油三酯 ( TG)水平明显升高。结论 :ERα广泛存在于心肌组织中 ,且其表达受雌激素的调控     

雌激素受体β亚型在大鼠睾丸发育过程中的表达和定位

目的：研究雌激素受体β亚型（ERβ）在大鼠睾丸发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色和免疫荧光组织化学染色方法，观察在出生后3，7，16及28d的大鼠睾丸和成年大鼠睾丸中ERβ的表达和分布情况。结果：在出生后3，7d的大鼠睾丸中ERβ主要分布于睾丸间质细胞，在出生后，16，28d分布于睾丸间质细胞胞质，大鼠睾丸中ERβ的表达随出生天数增加而呈逐渐上升的趋势，成年大鼠睾丸间质细胞中ERβ分布较幼年大鼠密度增加。结论：ERβ可能作为一种特异性受体在大鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄性激素的分泌；进而调节生精过程和精子发育成熟。     

β-arrestin 2通过结合RIP1抑制TNFα诱导的IKKα/β活化

目的:探讨β-arrestin2对肿瘤坏死因子α(TNFα)信号转导的调控作用.方法:在HT-29细胞过表达β-arrestin2和干扰β-arrestin2表达后,用TNFα刺激相应时间点,用免疫共沉淀和Western印迹法观察TNFα诱导的下游信号转导分子IKKα/β(I-kappa-B kinaseα/β),IκBα,TAK1(TGF-betaacti-vated kinase1),JNK(c-junN-terminal kinase),p38的活化及可能机制.结果:β-arrestin2通过结合RIP1并抑制TNFα诱导的RIP1的多聚泛素化,抑制TNFα诱导的IKKα/β及下游信号通路活化,TAK1及其下游信号通路则活化增强.干扰β-arrestin2表达从反向说明β-arrestin2对TNFα的信号转导调控.结论:β-arrestin2通过结合并抑制RIP1多聚泛素化抑制TNFα诱导的IKKα/β活化,而促进TAK1活化.