大鼠糖尿病视网膜病与结缔组织生长因子的关联及血栓通的干预作用

目的：探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对大鼠糖尿病视网膜病变的影响及复方血栓通可能的保护机制。

方法：SD大鼠36只随机分为对照组(A组,n=12)和造模组(n=24),造模组注射链脲佐菌素(STZ)60mg/kg,造模成功后随即分为糖尿病组(B组,n=12)、复方血栓通干预组\〖C组,1g/(kg·d),n=12\〗,于实验第6、12wk分别在各组处死6只大鼠,RT-PCR方法检测视网膜组织中CTGF mRNA水平。

结果：与A组相比,B组、C组大鼠视网膜CTGF mRNA于第6、12wk表达均增加(均P<0.05),C组视网膜组织CTGF mRNA表达于第6、12wk均较B组明显下调(P<0.05); 电镜显示B组大鼠视网膜毛细血管内皮细胞肿胀,胞质内线粒体肿胀,吞饮小泡增多,毛细血管基底膜电子密度不均匀,有结节样增厚现象,C组视网膜病变较B组减轻。

结论：CTGF可能参与糖尿病视网膜病变发生,复方血栓通对糖尿病大鼠视网膜具有保护作用,可能通过下调CTGF mRNA产生作用。     

糖尿病视网膜病变血清miR-146a与核转录因子-κB和VEGF的相关性

目的：探讨糖尿病视网膜病变血清miR-146a与核转录因子-κB(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)的相关性。

方法：选取2016-07/2017-12我院收治的2型糖尿病患者100例为研究对象,合并DR患者32例(DR组),未合并DR患者68例(T2DM组)。选取同期体检的健康志愿者30例作为对照组。采用real-time PCR检测血清miR-146a,采用酶联免疫法检测NF-κB和VEGF,分析miR-146a与NF-κB和VEGF的相关性。

结果：与对照组比较,T2DM组和DR组HbA1c升高(t=6.822、5.709,均P<0.001),空腹血糖(FBG)升高(t=8.889、7.923,均P<0.001),餐后2h血糖(2h PBG)升高(t=6.646、5.514,均P<0.001)。与T2DM组比较,DR组糖尿病病程较长(t=2.431, P=0.017)。与对照组比较,T2DM组和DR组血清miR-146a明显降低(t=3.967、7.169,均P<0.001),且DR组低于T2DM组(t=4.444,P<0.001)。与对照组比较,T2DM组和DR组血清NF-κB明显增加(t=6.063、14.851,均P<0.001),VEGF明显增加(t=7.613、12.943,均P<0.001); 且DR组NF-κB和VEGF大于T2DM组(t=11.406、7.560,均P<0.001)。Pearson分析显示miR-146a与NF-κB和VEGF呈负相关(r=-0.503、-0.574,P<0.05)。

结论：DR患者血清miR-146a明显降低,NF-κB和VEGF明显增加,miR-146a有可能通过介导炎症反应和血管增生参与DR的发病。     

miR-373靶向VEGFA对糖尿病视网膜病变大鼠的作用

目的：探讨miR-373靶向血管内皮生长因子A(VEGFA)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠的作用。

方法：将40只大鼠随机分为对照组(n=10)和DR组(n=30),造模成功后的DR组大鼠分为模型组(n=10)、miR-373 agomir组(n=10)、agomir-NC组(n=10),右眼玻璃体腔分别注射200μL生理盐水、miR-373 agomir(200nmol)、agomir-NC(200nmol),每周1次,共处理12wk。通过RT-qPCR检测各组大鼠视网膜组织中miR-373和VEGFA mRNA表达水平,双荧光素酶实验验证miR-373与VEGFA靶向关系,Western-blot检测各组大鼠视网膜组织中VEGFA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化-丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达水平。

结果：与对照组比,模型组和agomir-NC组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著下降,VEGFA mRNA、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与agomir-NC组比,miR-373 agomir组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,VEGFA mRNA及蛋白、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著下降(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实VEGFA是miR-373的靶基因。

结论：miR-373通过靶向VEGFA抑制糖尿病视网膜病变,其机制可能与miR-373抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

中性粒细胞及血小板与淋巴细胞比值与2型糖尿病视网膜病变相关性

目的：探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)与2型糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。

方法：选择2型糖尿病(DM)患者200例, 按眼底检查结果分为眼底正常组(n=100)、非增殖期视网膜病变组(NPDR, n=62)和增殖期视网膜病变组(PDR, n=38)。同时选取100例健康体检者作为正常对照(n=100)组; 测定中性粒细胞、淋巴细胞及血小板计数等相关指标。

结果： PDR组患者NLR值(2.54)高于对照组(1.81)、DM组(1.76)及NPDR组(1.85),差异有统计学意义(P<0.05),PDR组患者PLR值(126.18)高于DM组(111.64),差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄(β=-0.047)是糖尿病视网膜病变的保护因素(P<0.05),病程(β=0.071)和收缩压(β=0.024)是危险因素(P<0.05),而NLR、PLR在回归分析中无统计学意义。

结论：NLR、PLR值在PDR组升高,但并非糖尿病视网膜病变发生的独立危险因素。     

斜视性弱视伴偏中心注视眼的多焦视网膜电图表现

目的：探究斜视性弱视伴偏中心注视眼的多焦视网膜电图(mfERG)特征性变化。

方法：收集2018-01/2020-12在我院就诊的斜视性弱视伴偏中心注视患者20例作为研究组(4例为外斜视,16例为内斜视),同时收集屈光不正性弱视患者20例作为对照组。散瞳状态下检查mfERG,记录P1波的振幅密度和潜伏期。

结果：斜视组弱视眼多焦视网膜电图P1波振幅密度与対侧眼相比第一环(P=0.001),第二环(P<0.001),第三环(P=0.001),第四环(P=0.009),第五环(P=0.026)明显降低; 与对照组相比第一环(P=0.033),第二环(P=0.002),第三环(P<0.001),第四环(P=0.014)明显降低; 斜视组弱视眼潜伏期与対侧眼相比第一环(P=0.017)、第二环(P=0.001)有明显缩短,与对照组相比第二环(P=0.007)明显缩短。

结论：斜视性弱视伴偏中心注视眼的多焦视网膜电图P1波振幅密度越靠近黄斑中心凹下降越多,且与屈光不正性弱视眼相比下降更多。     

半剂量PDT治疗45岁以上中心性浆液性脉络膜视网膜病变疗效观察

目的：观察半剂量维替泊芬光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗45岁以上中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinophathy,CSC)的有效性。

方法：收集2012-01/2016-12在我院就诊的45岁以上CSC患者30例32眼,平均年龄54.34±8.58岁; 病程1wk～48mo,中位数6mo。所有患眼均采用国际标准视力表行最佳矫正矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)检查,并转换为最小分辨角对数(LogMAR)视力; 采用光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)测量黄斑中心凹视网膜厚度(central macular thickness,CMT)及记录视网膜下液(subretinal fluids absorption,SRF)吸收情况; 采用荧光素钠血管造影(fluorescence fundus angiography,FFA)观察患眼脉络膜血管渗漏形态。所有患眼均行半剂量维替泊芬PDT,治疗后1、3、6mo随访观察BCVA和黄斑区OCT情况。对比分析治疗前后患眼BCVA、CMT及SRF吸收变化情况。

结果：所有患者经PDT治疗后1、3、6mo治愈率分别为44%、63%、75%,差异具有统计学意义(χ²=6.621,P=0.037)。将所有患者按病程分为两组,A组患者病程<6mo,B组病程≥6mo,两组患者治疗前BCVA分别为0.6149±0.4117、0.8167±0.4370; 治疗前CMT分别为409.47±129.422、395.82±153.756μm。经治疗后两组间BCVA值差异无统计学意义(F=0.303,P=0.823),但具有时间差异性(F=32.837,P<0.001)。A组患者的BCVA治疗后1mo与治疗前比较,差异具有统计学意义(t=3.347,P=0.005); 治疗后1、3mo比较,差异有统计学意义(t=4.768,P<0.001); 治疗后3、6mo相比,差异无统计学意义(t=2.024,P=0.063)。B组患者的BCVA治疗后1、3、6mo与治疗前两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组间患者CMT差异无统计学意义(F=0.064,P=0.978),但具有时间差异性(F=26.447,P<0.001),A组患者的CMT治疗后1、3、6mo与治疗前两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05); B组患者的CMT治疗后1、3、6mo与治疗前两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。

结论：半剂量PDT疗法可有效改善45岁以上CSC患者的视力,对视网膜下液的吸收仍有较好疗效。     

康柏西普联合激光治疗糖尿病性黄斑水肿的疗效

目的：探讨康柏西普眼用注射液(Conbercept ophthalmic injection,COI)玻璃体内注射联合激光治疗对糖尿病性黄斑水肿(diabetic macular edema,DME)患者的有效性及安全性。

方法：纳入2016-08/2018-06我院眼科收治的DME患者,依据患者施行激光治疗是否联合COI分为观察组(激光治疗联合COI)55例55眼和对照组(仅激光治疗)50例50眼,对比两组患者术后1mo的BCVA(LogMAR)、黄斑中心凹视网膜厚度(CMT)、眼压水平及视野、30°视野平均光阈值敏感度、视野平均缺损值水平变化。

结果：两组患者治疗前一般资料比较无差异(P>0.05),两组患者BCVA(0.63±0.13 vs 0.76±0.19; t=4.123,P<0.001)、CMT(305.89±58.76 vs 340.26±60.41μm; t=2.954,P=0.004)比较有差异,而两组患者眼压对比(12.11±1.82 vs 12.24±1.59mmHg; t=0.389,P=0.700)无差异; 观察组患者术后1mo视野灰度值、视野平均缺损值显著低于对照组(P<0.001); 观察组患者术后1mo 30°视野平均光阈值敏感度显著高于对照组(P<0.001)。

结论：玻璃体内注射康柏西普眼用注射液联合激光治疗糖尿病性黄斑水肿患者有效且安全。     

视网膜静脉阻塞视盘区量化OCTA的临床研究

目的：探讨量化光学相干断层扫描血管成像(OCTA)在视网膜静脉阻塞(RVO)患者中的临床应用价值。

方法：前瞻性病例资料研究。选取2018-01/2019-12在潍坊医学院附属医院眼科中心检查确诊的RVO患者40例40眼，选取年龄、性别与RVO患者相匹配的健康体检者40例42眼作为正常对照组。采用OCTA测量两组受检者视盘区血流密度，并评估各参数的差异。

结果：RVO患者患眼整个图像血管(t=-2.953，P<0.001)、视盘周血管(t=-3.533，P=0.001)、整个图像毛细血管(t=-3.192，P=0.003)、视盘周毛细血管(t=-3.930，P<0.001)、下方鼻侧(t=-2.854，P=0.007)、下方颞侧(t=-3.696，P=0.001)、颞下(t=-3.418，P=0.002)、颞上(t=-3.170，P=0.003)、上方颞侧(t=-3.082，P=0.004)、上方鼻侧(t=-2.912，P=0.006)区域内的血流密度均较对侧眼明显下降。RVO患者患眼各个区域内的血流密度均较正常对照组明显下降(P<0.05)。RVO患者对侧眼整个图像血管(t=-2.213，P=0.032)、视盘内血管(t=-2.270，P=0.028)、整个图像毛细血管(t=-2.192，P=0.033)、视盘内毛细血管(t=-2.449，P=0.018)、颞上(t=-2.147，P=0.037)区域内的血流密度均较正常对照组明显下降。

结论：量化OCTA揭示了RVO患者视盘区血流密度下降，提示视盘区量化OCTA对于RVO病情的评估及对侧眼的预防具有临床应用价值。     

不同类型近视牵引性黄斑病变的发病机制和手术疗效研究

目的：应用光学相干断层扫描(OCT)探讨不同类型近视牵引性黄斑病变(MTM)的发病机制及手术疗效。

方法：回顾性纳入MTM患者193例(210眼),其中74眼(35.2%)行玻璃体切除联合内界膜(ILM)剥离术。将患者分为三组：中央凹脱离组(FD)、中心凹劈裂(FS)、板层黄斑裂孔(LMH)。根据基线(M0)的中央视网膜厚度(CFT),将FD组分为两个亚组：广泛性FD和局限性FD。观察指标包括最佳矫正视力(BCVA)、CFT、后巩膜葡萄肿高度(PSH)、黄斑前膜(ERM)和ILM脱离。采用线性回归分析玻璃体切除术后6mo(M6)的BCVA相关因素。

结果：M0时,LMH组的ERM发生率更高(r_s=0.28,P<0.001),FD组和FS组的ILM脱离发生率更高(r_s=-0.25,P<0.001)。玻璃体切除术后,所有眼的CFT和BCVA均明显改善(P<0.001)。与局限性FD相比,广泛性FD组CFT更厚(r_s=0.56, P<0.001)、ILM脱离发生率更低(r_s=-0.25,P=0.034),鼻侧PSH更高(r_s =0.27,P=0.024)。与局限性FD相比,广泛性FD组在M0(P=0.013)和M6(P=0.030)时BCVA更差。M6时BCVA较差的相关因素包括广泛性FD(β=-0.295,P=0.042)和M0时BCVA(β=0.669,P<0.001)。

结论：MTM有多种发病机制,其中ILM脱离可能在FD和FS的发展中占主导,ERM可能在LMH的发展中占主导。玻璃体切除联合ILM剥离手术可改善MTM患者的功能和解剖疗效。广泛性FD的预后可能较差。     

骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植对大鼠青光眼模型视神经的保护作用

目的：探讨骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植对大鼠青光眼模型的神经保护作用。

方法：提取大鼠原代骨髓间充质干细胞并进行鉴定; Lewis大鼠分别随机分为3组：对照组、青光眼模型组和骨髓间充质干细胞组,并制作青光眼大鼠模型：左眼为实验眼(青光眼),右眼为对照眼,并进行鉴定; 然后进行骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植; HE染色观察视网膜组织形态; 免疫荧光法检测视网膜神经节细胞数量; TUNEL染色观察视网膜神经节细胞凋亡情况; Western blot检测视网膜组织中IGF1和BDNF蛋白表达情况。

结果：大鼠实验眼的眼内压均明显高于对照眼(P<0.01),表明青光眼大鼠模型均建造成功; 青光眼模型组大鼠视网膜神经纤维排列不整齐,视网膜神经节细胞数量和视网膜厚度显著低于对照组(P<0.01),视网膜神经节细胞凋亡数量显著高于对照组(P<0.001); 骨髓间充质干细胞组大鼠视网膜神经纤维细胞排列较整齐,视网膜神经节细胞数量和视网膜厚度明显高于青光眼模型组(P<0.05),视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于青光眼模型组(P<0.05); 青光眼模型组大鼠视网膜中IGF1和BDNF蛋白表达量明显低于对照组(P<0.01),骨髓间充质干细胞组大鼠的视网膜中IGF1和BDNF蛋白表达量高于青光眼模型组(P<0.05)。

结论：骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植能改善大鼠青光眼,可以保护视网膜神经节细胞。     

Influence of bone morphogenetic protein type IA receptor conditional knockout in lens on expression of bone morphogenetic protein 4 in lens

AIM: To investigate the influence of bone morphogenetic protein type IA receptor [BMPR-IA (ALK3)] conditional knockout in lens on expression of bone morphogenetic protein 4 (BMP4) in lens during the development of the vertebrate eye. METHODS: Cre-positive mice were mated with Cre-negative mice to generate 50% Cre-positive (conditional knockout, CKO) 4 embryos, 8 eyes and 50% Cre-negative offspring (wild type, WT) 4 embryos, 8 eyes. The embryos were fixed in 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin, and sectioned to a thickness of 4 μm. Removal of paraffin wax and dehydrating for sections, and then the procedure of in situ hybridization was processed, BMP4 MK1784-m (BOSTER) was used, and observed the expression of BMP4 in the lens in experimental group and control group. We selected SPSS11.0 software for statistical analysis, P<0.05 showed that the difference was statistically significant. RESULTS: Four embryos of each genotype were examined, totally we had 8 embryos, 16 eyes. We got the uniform outcomes in all the embryos. We found ALK3 was required during lens growing, but was not essential for the formation of lens. We observed that the expression of Bmp4 in the lens was significantly reduced in all 8 ALK3 CKO lens, BMP4 expression was normal in all the 8 WT lens, P<0.01. This phenomenon became increasingly visible in accordance with embryo development. The most apparent alteration was present at stage E15.5. CONCLUSION: ALK3 is essential for lens growth. The influence of ALK3 on the expression of BMP4 is present during the development of mice lens.     

槲皮素脂质体对视网膜组织血管生成素样蛋白2及其受体表达的影响

背景 糖尿病视网膜病变(DR)的特征性病理改变为微血管病变,血管生成素样蛋白2(Ang-2)是与血管发生密切相关的新蛋白,槲皮素具有多种药理作用,可改善微循环、降低毛细血管通透性,但其对DR的作用机制尚不清楚.目的 探讨槲皮索脂质体对视网膜组织Ang-2及其受体(Tie2)表达的影响.方法 选取60只清洁级雄性成年Wistar大鼠以随机数字表法分为6个组,其中10只大鼠作为空白对照组,其他60只大鼠采用链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg一次性腹腔内注射制作糖尿病模型.槲皮索分为50 mg/(kg·d)(低剂量)、150 mg/(kg·d)(中剂量)和250 mg/(kg·d)(高剂量),并用脂质体包裹,分别对模型鼠进行灌胃3 ～5 ml共12周,其他模型鼠分别用生理盐水和羟苯磺酸钙混悬液灌胃作为阴性对照和阳性对照.给药12周后处死各组大鼠并分离视网膜,用ELISA法检测视网膜组织中Ang-2的吸光度(A450)值,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测视网膜中Tie2 mRNA的A值(Tie2 mRNA/GAPDH mRNA).结果 ELISA检测表明,槲皮素中剂量组、高剂量组Ang-2的A450值分别为0.796±0.057和0.842±0.043,较生理盐水组的1.012±0.046明显下降,差异均有统计学意义(q=2.95、2.698,P＜0.05).RT-PCR检测表明,槲皮素中剂量组、高剂量组的Tie2 mRNA在视网膜中的表达量分别为0.712±0.092和0.821±0.087,均明显低于阴性对照组的1.182±0.098,差异均有统计学意义(q=3.497、2.852,P＜0.05).Ang-2蛋白及Tie2 mRNA表达量的下降均以中剂量组最为明显.结论 槲皮素脂质体对视网膜中Ang-2及其受体Tie2的表达有抑制作用,可对糖尿病大鼠的视网膜微循环异常有改善作用.     

激素性白内障的发病机制研究

糖皮质激素在许多生理过程中发挥重要作用,并被广泛应用于临床,在器官移植、战伤和免疫性疾病等救治过程中使用剂量更大。流行病学资料已证实长期全身、局部应用及吸入糖皮质激素治疗均可引起以晶状体后囊混浊为特征的激素性白内障。激素性白内障的发病机制复杂。主要形成了氧化损伤学说、蛋白加和物学说、激素通过受体途径而发挥作用的受体学说、离子转运障碍学说、晶状体结构蛋白和酶功能损害学说、细胞黏附分子异常学说。激素不仅可能直接攻击晶状体蛋白质,而且也可能通过受体、细胞调控、黏附调节等间接发挥作用。最近研究已证实晶状体上皮细胞中存在糖皮质激素受体,这将有助于阐明激素性白内障发生机制,为药物预防和治疗白内障提供新思路。     

干扰素诱导蛋白-10与新生血管性眼病关系的研究进展

干扰素诱导蛋白-10(IP-10)属于EL-CXC类趋化因子,是目前研究较多的一个分子,其唯一的受体是CXCR3.IP-10与其受体特异性结合后,可以发挥抑制新生血管的形成及抗纤维化的作用,该生物学功能也参与新生血管性眼病的发病进程.研究证实,IP-10与亚临床慢性炎症紧密相关,参与年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病过程,可能成为一项AMD发病的临床检测指标;表达于脉络膜新生血管内皮细胞上的IP-10/CXCR3信号通路有抑制脉络膜新生血管的作用;此外,IP-10在AMD患眼病灶内的高表达可能与血管内皮生长因子表达升高,反馈性诱导负性调控因子(IP-10等)生成相关.IP-10参与糖尿病视网膜病变(DR)的发病过程中,可用于临床检测DR病情的严重程度及预后评估的新指标,以及可能具有使增生性DR(PDR)患者活动期新生血管生成中止、促进新生血管纤维化的作用,从而抑制PDR的发展.IP-10可通过下调炎症细胞促血管生成因子表达的间接作用以及通过抑制血管内皮细胞迁移和管腔形成的作用直接减少角膜新生血管的生成.IP-10可能参与早产儿视网膜病变和脉络膜息肉样病变的发病过程.鉴于其独特的生物学功能,有望运用IP-10作为靶点进行临床靶向治疗达到抑制新生血管性眼病的目的.本文就近年来IP-10与几种常见新生血管性眼病关系的研究进展进行综述.     

SARS-CoV S240蛋白与眼部ACE2受体作用机制的研究

目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)S240蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(ACE2)作用的机制。方法:构建SARS-CoVS蛋白融合基因pS240-EGFP,并在哺乳动物细胞中表达;半定量RT-PCR和免疫组化鉴定ACE2在结膜、角膜中的表达;酶联免疫吸附实验、流式细胞仪检测法进行SARS-CoVS240蛋白与结膜、角膜细胞的体外结合研究。结果:构建了融合基因pS240-EGFP;证实ACE2在结膜、角膜有表达;结膜、角膜细胞与SARS-CoVS240蛋白能够结合。结论:结膜、角膜中存在SARS冠状病毒的功能性受体,SARS-CoVS240蛋白与结膜、角膜细胞能够结合。本研究对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。     

G蛋白偶联受体在糖尿病视网膜病变发病过程中的作用

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病微血管病变表现之一,也是全球范围内视力丧失的主要原因.目前,临床上主要通过玻璃体内注射抗血管内皮生长因子药物治疗DR,但是部分患者会出现耐受性和不良反应,寻找新的治疗靶点和药物迫在眉睫.G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCR)是人体内最大的膜受体...     

Ocular albinism 1 protein: trafficking and function when expressed in Saccharomyces cerevisiae

The ocular albinism 1 (Oa1) protein is believed to be involved in the biogenesis of melanosomes, but its cellular localization is controversial and its function is unknown. Based upon sequence homology, it has been predicted that Oa1 belongs to the G protein coupled receptor (GPCR) superfamily. We used the yeast Saccharomyces cerevisiae as a genetically amenable system to study the localization and function of Oa1. Sucrose gradient and immunofluorescence studies revealed that when expressed in yeast, Oa1 localizes to the prevacuolar compartment, the functional equivalent of the mammalian late endosome. Oa1 behaved as G protein coupled receptor in a yeast-based GPCR signalling assay. Extracts of cultured melanocytes, and, in particular, a particulate fraction from cultured melanocytes, stimulated Oa1-mediated GPCR signalling.     

Soluble endothelial protein C receptor levels in Behçet patients with and without ocular involvement

Background

The protein C system is an important natural anticoagulant mechanism. Endothelial cell-activated protein C receptor (EPCR), which was discovered at the surface of endothelial cells, binds protein C and enhances its activation. The soluble form of EPCR (sEPCR) has been detected in plasma. Behçet’s disease is a chronic inflammatory disorder affecting multiple organs. Arterial and venous thrombosis is a common clinical manifestation of Behçet’s disease and the pathogenic mechanism of thrombotic tendency in the disease is not well known. The aim of this study is to determine sEPCR concentrations in Behçet patients with and without ocular involvement as well as to investigate the association between sEPCR levels and clinical manifestations of Behçet’s disease.

Methods

Sixty patients with Behçet’s disease and 67 healthy control subjects were included in this study. A complete ophthalmic examination was performed by ophthalmologists with an interest in Behçet’s disease. Sixty patients with Behçet’s disease were divided into two groups. Group 1 consisted of 30 patients with ocular involvement and Group 2 consisted of 30 patients without ocular involvement. Soluble EPCR levels were determined in plasma by using sEPCR Asserachrom enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits according to the manufacturer’s instructions. Differences of the mean sEPCR levels between groups were evaluated using Mann-Whitney U-test. Pearson’s correlation analysis was used for evaluating the correlation between sEPCR levels and age, gender, duration of the disease as well as different clinical manifestations of Behçet’s disease.

Results

Age and gender ratio were not different between patients and controls. Plasma sEPCR concentrations were significantly higher in patients with Behçet’s disease than those in controls (p<0.05). There was no statistically significant difference in serum sEPCR levels between the patients with versus the ones without ocular involvement. There were no statistically significant correlations between sEPCR levels and age, gender, duration of the disease or clinical manifestations.

Conclusions

Our data suggests a possible role of soluble EPCR in the pathogenesis of Behçet’s disease. Further studies by possible mutations and polymorphisms in EPCR gene in patients with Behçet’s disease would be useful to bring to light the pathogenic mechanism of ocular and systemic vascular complications of the disease.     

实验性视网膜缺血-再灌注损伤中坏死性凋亡相关因子的表达变化

目的　建立视网膜缺血-再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）模型,观察坏死性凋亡是否参与其病理过程。方法　野生型Ｃ５７小鼠随机分为对照组及实验组。对照组不做任何处理,实验组采用前房灌注法建立ＲＩＲＩ模型,并于ＲＩＲＩ后１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ分别收集视网膜或眼球,行荧光定量ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫荧光染色检测受体相互作用蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＲＩＰ）３及ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的表达变化。结果　荧光定量ＰＣＲ检测ＲＩＰ３、ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的ｍＲＮＡ表达,与对照组比较,实验组在不同时间点均有显著升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＩＰ３及ＲＩＰ１表达以早期升高为主,后期逐渐下降。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。组织切片免疫荧光染色也发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。结论　实验性ＲＩＲＩ模型中,坏死性凋亡参与了其病理过程。坏死性凋亡特异性蛋白ＲＩＰ３表达以早期升高为主,后期逐渐下降。     

Toll样受体4对2型糖尿病小鼠视网膜病变的影响

目的　探讨Ｔｏｌｌ样受体４（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４,ＴＬＲ４）对２型糖尿病小鼠模型糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的影响。方法　取１６周龄的健康雄性ＴＬＲ４基因缺陷小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ（ｍｕｔａｔｉｏｎ,Ｍｕｔ）及相应野生型小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ｗｉｌｄｔｙｐｅ,ＷＴ）各１２只,用链脲佐菌素（ＳＴＺ）腹腔注射建立２型糖尿病动物模型,另取４只未处理小鼠做对照,分为Ｍｕｔ组、ＷＴ组与对照组。于模型建成后１个月、２个月、４个月分别取材,每个时间点模型组分别取材４只,对照组分别取１６周龄的两种小鼠各２只眼球。通过电镜观察小鼠视网膜组织超微结构的变化,并应用ＲＴ-ｑＰＣＲ检测视网膜ＴＬＲ４及巨噬细胞炎性蛋白２（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ-２,ＭＩＰ-２）的ｍＲＮＡ表达。结果　糖尿病模型造模后１个月的超微电镜显示,小鼠视网膜组织即有神经节细胞及神经纤维水肿,核周间隙增宽,核固缩,胞浆颜色变淡;模型造模后２个月时毛细血管内皮细胞胞浆线粒体水肿,嵴变短,周细胞水肿;模型造模后４个月时基底膜节段性增厚,微绒毛突起,管腔狭窄,各时间点的病变ＷＴ组均重于Ｍｕｔ组。视网膜组织ＲＴ-ｑＰＣＲ结果显示,ＷＴ组和Ｍｕｔ组ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达在糖尿病模型造模后１个月、２个月、４个月时依次上调（均为Ｐ＜０．００１）,各时间点ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达以ＷＴ组强于Ｍｕｔ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　２型糖尿病小鼠模型中,随病程发展出现视网膜病变并不断恶化,此过程中视网膜中ＴＬＲ４与ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ表达呈显著性上调趋势;ＴＬＲ４基因突变小鼠的视网膜ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的表达比野生型小鼠减弱,同时视网膜病变减轻。